Prevalence of blaSHV genes in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae at Saint Camille medical Center in Ouagadougou. Isolation of blaSHV11-like gene

Five bacterial strains (4 Klebsiella pneumoniae and 1 Escherichia coli) representative of pathogenic species and resistant to β-lactam antibiotics are investigated to isolate the genes responsible of β--lactamase activity. The use of engineering techniques enables us to show the widespread of blaSHV genes particularly in clinical isolates of K. pneumoniae. Our results highlighted an atypical blaSHV-11 gene. Key words: β--Lactamases, Klebsiella pneuminiae, blaSHV gene, Saint Camille medical centre, Ouagadougou. African Journal of Biotechnology Vol.3(9) 2004: 477-48

001 Predictive Value of Post Treatment Platelet Reactivity for Occurrence of Post-discharge Bleeding After Non ST Elevation Acute Coronary Syndrome

AimsWe assessed prospectively the association between occurrence of post-discharge non–CABG-related TIMI major and minor bleedings and post treatment platelet reactivity in patients with Non ST Elevation Acute Coronary Syndrome (NSTE ACS).Methods and Results597 consecutive patients admitted with NSTE ACS were prospectively included. Between hospital discharge and one month follow-up, we observed 16 (2.7%) non–CABG-related TIMI hemorrhagic complications including 5 (0.84%) major and 11 (1.8%) minor bleeds. Patients with bleeding had significantly lower post treatment values of ADP-induced aggregation (43±14% versus. 56±19%, P=0.002) and platelet reactivity index VASP (43±14% versus 54±23%; P=0.04) and a trend for lower values of arachidonic acid-induced aggregation (2.4±5.4 versus 13±21; P=0.27). After stratification by quartiles based on post treatment ADP-induced platelet aggregation, we identified patients in the first quartile as hyper-responders with very low post treatment platelet reactivity, below <40%. The risk of TIMI major and minor bleeding was significantly higher in the first quartile of hyper-responders than in the others quartiles: 10 (6.6%) versus 6 (1.4%), p=0.001.ConclusionOur results suggest that assessment of post treatment platelet reactivity might be used to detect hyper responders to antiplatelet therapy with higher risk of non-CABG related bleedings and tailor antiplatelet therapy according to both ischemic and bleeding risk

Writing in Britain and Ireland, c. 400 to c. 800

No abstract available

Etude de l'état viable non cultivable (VBNC) chez Legionella pneumophila Lens après traitements monochloramine et thermique

Legionella pneumophila, l agent responsable d une pneumonie sévère atypique chez l homme, appelée maladie du légionnaire, est ubiquitaire dans les environnements aquatiques. Les traitements généralement appliqués dans les réseaux d eau afin d éradiquer cette bactérie sont souvent suivis d une recolonisation rapide de cette bactérie. Un des facteurs pouvant expliquer cette recolonisation peut être l état Viable Non Cultivable (VBNC).L objectif de nos travaux a été d étudier la survie de L.pneumophila après des traitements oxydant et thermique et notamment d étudier l état VBNC. Dans un premier temps nous avons réalisé un traitement monochloramine et un traitement thermique sur une suspension de légionelles. Nous avons observé que le traitement par 20 mg/L de monochloramine ainsi que celui à 57,5C, conduisaient à la formation de VBNC chez L. pneumophila. De plus ces bactéries peuvent persister dans cet état pendant au moins 169 jours après traitement.Dans un second temps, une étude partielle des protéines exprimées à l état VBNC a été menée. Nous avons montré que l expression de plusieurs protéines, impliquées dans les voies de production d énergie, de synthèse protéique et dans la virulence, était augmentée d un facteur supérieur ou égale à deux par comparaison avec des bactéries ayant subies un stress monochloramine ou une carence en nutriments.Dans un troisième temps, la recherche d un facteur de ressuscitation Rpf a été entreprise chez L. pneumophila. Un gène Rpf-like, possédant 33% d identité et 51% de similarité avec celui de Salmonella, a été découvert. Ce gène a été cloné mais la protéine recombinante obtenue n a pas conduit à un retour à la cultivabilité des cellules.Legionella pneumophila , the causative agent of an atypical severe pneumonia in human called Legionnaires disease, is ubiquitous in aquatic environments. The treatments usually applied to eradicate this bacterium are often followed by a quick new contamination. One of the causes that could explain this colonisation could be the Viable But NonCulturable state (VBNC).The aim of this work was to study the survival of L. pneumophila after oxidative and heat treatments and then to study the VBNC. First, we have treated Legionella suspension with monochloramine and heat. We have observed that 20 mg/L monochloramine treatment and 57.5C treatment lead to the VBNC state. Moreover, these bacteria could persist in this state during at least 169 days. Secondly, we have realised a partial study of Legionella proteins expressed in the VBNC state. Several proteinsexpressions, implicated in energy production, protein synthesis and virulence, were induced more than 2-fold in comparison with bacteria stressed by monochloramine or in starvation.Finally, we have search for a Resuscitation-promoting-factor Rpf in L. pneumophila genome.An rpf-like gene, showing 33% of identity and 51% similarity with Salmonella rpf was found. This gene has been cloned but the recombinant protein obtained didn t lead to a recovery of legionella culturability.POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Etude des relations structure / fonction d'une bactériocine anti-listeria, la mésentéricine Y105

La mésentéricine Y105 est une bactériocine de sous-classe IIa produite par Leuconostoc mesenteroides Y105. Pour comprendre le mécanisme de l'activité anti-Listeria de ce peptide, l'étude structure-fonction de ce peptide a été envisagée. Dans ce but, une collection de mésentéricines Y105 modifiées a été produite. Afin d'obtenir ces dérivés, une méthode de mutagenèse aléatoire par PCR a été mise en place. Puis, une méthode de production hétérologue de ces peptides mutés par un système à deux plasmides a été développée. L'étude de l'impact des mutations sur l'activité antagoniste, la structure secondaire (analysée par dichroïsme), la structure tridimensionnelle et l'interaction de la mésentéricine Y105 avec des environnements mimant les membranes cibles (fluorescence intrinsèque du tryptophane) a été réalisée. Enfin, une analyse par résonance magnétique nucléaire a été effectuée sur la bactériocine native pour déterminer sa structure tridimensionnelle. De l'ensemble de ces données, un modèle d'action est proposé pour la mésentéricine Y105, ce modèle peut être étendu aux bactériocines de structure proche.Mesentericin Y105 is a sub-class IIa bacteriocin produced by Leuconostoc mesenteroides Y105. In an attempt to understand the mecanism of its anti-listerial activity, we investigated the peptide structure-function relationship. For this purpose, a bank of mesentericins Y105 peptide derivates was created. Peptide derivatives were generated using, randomly primed PCR mutagenesis. A method for heterologous production based on a two componant system was optimized. The impact of mutations was studied for the mesentericin Y105 derivatives, by accessing there; activity, secondary structure (obtained by circular dichroism), predicted tertiary structure and interaction with anisotropic environment (tryptophan blue shift). Finally, a nuclear magnetic resonance analysis was used to determinate the native bacteriocin structure. A general model for the mechanism of action of mesentericin Y105 and its related bacteriocins is proposed.POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Etude de nouvelles batériocines produites par des bactéries lactiques isolées de "rigouta", un fromage tunisien

POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Etude du transport et de la régulation de la mésentéricine Y105

POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Impact des facteurs environnementaux sur l'état physiologique et l'infectiosité de Legionella pneumophila Lens

Nous avons étudié l'impact des différents facteurs environnementaux tel que la présence de matières minérales ou organiques sur le comportement de L. pneumophila dans le milieu hydrique. Nous n'avons pas observé d'influence importante de la présence des matières minérales ou organiques sur la survie des légionelles dans l'eau. Cependant, la présence de matières minérales, notamment le calcium, favorise l'adhérence de L. pneumophila aux surfaces. Nous observons que le maintien de la bactérie dans une solution de chlorure de calcium, par rapport à de l'eau distillée, provoque des modifications du profil protéique. Nous avons également étudié l'impact du passage de Legionella à travers Tetrahymena tropicalis, un cilié d'eau douce isolé dans les mêmes niches écologiques de Legionella. Le travail réalisé montre que les légionelles post-Tetrahymena deviennent plus résistantes à différentes conditions de stress (antibiotiques, carence nutritionelle) et plus infectieuses pour les pneumocytes humains par rapport à des légionelles cultivées en phase stationnaire. L'impact important que semble jouer ces protozoaires sur le risque légionelle devrait donc être pris en compte et la relation légionelles-Tétrahymena être étudiée de façon plus intensive. Nous avons également évalué l'infectiosité de différents phénotypes de L. pneumophila sur cellules humaines (macraphages, pneumocytes) et sur modèle murin (souris A/J, expérimentations réalisées dans l'Unité INSERM U151 sous la direction du Dr Florence Ader), en utilisant des bactéries ayant séjournées dans l'eau distillée ou dans l'eau minérale et des bactéries post-amibies, répliquées dans l'amibe Acanthamoeba castellanii. Nos résultats montrent que les bactéries post-amibies infectent mieux les cellules humaines que les autres phénotypes. En ce qui concerne le modèle murin, les suspensions en eau distillée n'ont pas été testées et deux méthodes d'infection différentes ont été utilisées, la voie intra-nasale et l'exposition aux aérosols. Nos résultats semblent montrer que les légionelles post-amibes ont tendance à plus facilement infecter les souris et à mieux se disséminer à partir des poumons vers le foie et la rate. Notre travail confirme le rôle important du passage dans les amibes sur l'infectiosité des légionelles pour des cellules humaines ainsi que pour le modèle murin. L'infection des souris avec des aérosols a montré que la forme aérosol est plus efficace pour infecter les souris que la forme intra-nasale et que le phénotype post-amibes est le plus infectieux parmi les phénotypes aérosolisés testés.We studied the impact of various environmental factors such as presence of minerals or organics matters on the behavior of L. pneumophila in water. We did not observe any significant influence of the presence of organic or minerals matters on the survival of Legionella in water. However, the presence of minerals, especially calcium, promotes adhesion of L. pneumophila to surfaces. We observed that the sustenance of the bacteria in a calcium chloride solution, compared with distilled water, causes changes in the protein profile. We also studied the impact of the passage of Legionella through Tetrahymena tropicalis, a freshwater ciliate isolated from the same ecological niche of Legionella. The work done indicates that Legionella post-Tetrahymena become more resistant to various stress conditions (antibiotics, nutritional deficiency) and more infectious to human pneumocytes with respect to stationary form. The role that these protozoa appear to play in Legionella risk should be investigated and the Legionella-Tetrahymena relationship needs to be further extented. Using bacteria cultered in either distilled or mineral water and post-amoebae bacteria replicated in Acanthamoeba castellanii, we evaluated the infectivity of various phenotypes of L. pneumophila on human cells (macrophages, pneumocytes) and in a mouse model (A/J mice, experiments performed at the INSERM Unit U151 under the direction of Dr. Florence Ader). Our results show that bacteria post-amoebae infect human cells better than other phenotypes. Regardind the mouse model, two different infection methods were used : the intra-nasal infection and aerosol exposure. Bacterial suspensions cultured in distilled water were not tested. Our results suggest that post-amoebae Legionella tend to more easily infect mice and to better disseminate from lungs to liver and spleen. Our works confirm the important role of the passage through amoebae on Legionella infectivity on human cells as well as in the murine model. Infection of mice with aerosols showed that aerosolized form of the bacteria infects mice more efficiently than the intra-nasal form and the post-amoeba phenotype is most infectious among the aerosolized phenotypes tested.POITIERS-BU Sciences (861942102) / SudocSudocFranceF

Intra-amoeba multiplication induces chemotaxis and biofilm colonization and formation for Legionella.

Legionella pneumophila, a facultative intracellular bacterium, is the causative agent of legionellosis. In the environment this pathogenic bacterium colonizes the biofilms as well as amoebae, which provide a rich environment for the replication of Legionella. When seeded on pre-formed biofilms, L. pneumophila was able to establish and survive and was only found at the surface of the biofilms. Different phenotypes were observed when the L. pneumophila, used to implement pre-formed biofilms or to form mono-species biofilms, were cultivated in a laboratory culture broth or had grown intracellulary within the amoeba. Indeed, the bacteria, which developed within the amoeba, formed clusters when deposited on a solid surface. Moreover, our results demonstrate that multiplication inside the amoeba increased the capacity of L. pneumophila to produce polysaccharides and therefore enhanced its capacity to establish biofilms. Finally, it was shown that the clusters formed by L. pneumophila were probably related to the secretion of a chemotaxis molecular agent