Small changes in enzyme function can lead to surprisingly large fitness effects during adaptive evolution of antibiotic resistance

In principle, evolutionary outcomes could be largely predicted if all of the relevant physicochemical variants of a particular protein function under selection were known and integrated into an appropriate physiological model. We have tested this principle by generating a family of variants of the tetracycline resistance protein TetX2 and identified the physicochemical properties most correlated with organismal fitness. Surprisingly, small changes in the Km(MCN), less than twofold, were sufficient to produce highly successful adaptive mutants over clinically relevant drug concentrations. We then built a quantitative model directly relating the in vitro physicochemical properties of the mutant enzymes to the growth rates of bacteria carrying a single chromosomal copy of the tet(X2) variants over a wide range of minocycline (MCN) concentrations. Importantly, this model allows the prediction of enzymatic properties directly from cellular growth rates as well as the physicochemical-fitness landscape of TetX2. Using experimental evolution and deep sequencing to monitor the allelic frequencies of the seven most biochemically efficient TetX2 mutants in 10 independently evolving populations, we showed that the model correctly predicted the success of the two most beneficial variants tet(X2)T280A and tet(X2)N371I. The structure of the most efficient variant, TetX2T280A, in complex with MCN at 2.7 Å resolution suggests an indirect effect on enzyme kinetics. Taken together, these findings support an important role for readily accessible small steps in protein evolution that can, in turn, greatly increase the fitness of an organism during natural selection

Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition)1.

In 2008, we published the first set of guidelines for standardizing research in autophagy. Since then, this topic has received increasing attention, and many scientists have entered the field. Our knowledge base and relevant new technologies have also been expanding. Thus, it is important to formulate on a regular basis updated guidelines for monitoring autophagy in different organisms. Despite numerous reviews, there continues to be confusion regarding acceptable methods to evaluate autophagy, especially in multicellular eukaryotes. Here, we present a set of guidelines for investigators to select and interpret methods to examine autophagy and related processes, and for reviewers to provide realistic and reasonable critiques of reports that are focused on these processes. These guidelines are not meant to be a dogmatic set of rules, because the appropriateness of any assay largely depends on the question being asked and the system being used. Moreover, no individual assay is perfect for every situation, calling for the use of multiple techniques to properly monitor autophagy in each experimental setting. Finally, several core components of the autophagy machinery have been implicated in distinct autophagic processes (canonical and noncanonical autophagy), implying that genetic approaches to block autophagy should rely on targeting two or more autophagy-related genes that ideally participate in distinct steps of the pathway. Along similar lines, because multiple proteins involved in autophagy also regulate other cellular pathways including apoptosis, not all of them can be used as a specific marker for bona fide autophagic responses. Here, we critically discuss current methods of assessing autophagy and the information they can, or cannot, provide. Our ultimate goal is to encourage intellectual and technical innovation in the field

Inequalities in screening policies and perioperative protection for patients with acute appendicitis during the pandemic: Subanalysis of the ACIE Appy study

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Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition)

International audienceIn 2008, we published the first set of guidelines for standardizing research in autophagy. Since then, this topic has received increasing attention, and many scientists have entered the field. Our knowledge base and relevant new technologies have also been expanding. Thus, it is important to formulate on a regular basis updated guidelines for monitoring autophagy in different organisms. Despite numerous reviews, there continues to be confusion regarding acceptable methods to evaluate autophagy, especially in multicellular eukaryotes. Here, we present a set of guidelines for investigators to select and interpret methods to examine autophagy and related processes, and for reviewers to provide realistic and reasonable critiques of reports that are focused on these processes. These guidelines are not meant to be a dogmatic set of rules, because the appropriateness of any assay largely depends on the question being asked and the system being used. Moreover, no individual assay is perfect for every situation, calling for the use of multiple techniques to properly monitor autophagy in each experimental setting. Finally, several core components of the autophagy machinery have been implicated in distinct autophagic processes (canonical and noncanonical autophagy), implying that genetic approaches to block autophagy should rely on targeting two or more autophagy-related genes that ideally participate in distinct steps of the pathway. Along similar lines, because multiple proteins involved in autophagy also regulate other cellular pathways including apoptosis, not all of them can be used as a specific marker for bona fide autophagic responses. Here, we critically discuss current methods of assessing autophagy and the information they can, or cannot, provide. Our ultimate goal is to encourage intellectual and technical innovation in the field

Global attitudes in the management of acute appendicitis during COVID-19 pandemic: ACIE Appy Study

676sinoneBackground: Surgical strategies are being adapted to face the COVID-19 pandemic. Recommendations on the management of acute appendicitis have been based on expert opinion, but very little evidence is available. This study addressed that dearth with a snapshot of worldwide approaches to appendicitis. Methods: The Association of Italian Surgeons in Europe designed an online survey to assess the current attitude of surgeons globally regarding the management of patients with acute appendicitis during the pandemic. Questions were divided into baseline information, hospital organization and screening, personal protective equipment, management and surgical approach, and patient presentation before versus during the pandemic. Results: Of 744 answers, 709 (from 66 countries) were complete and were included in the analysis. Most hospitals were treating both patients with and those without COVID. There was variation in screening indications and modality used, with chest X-ray plus molecular testing (PCR) being the commonest (19·8 per cent). Conservative management of complicated and uncomplicated appendicitis was used by 6·6 and 2·4 per cent respectively before, but 23·7 and 5·3 per cent, during the pandemic (both P < 0·001). One-third changed their approach from laparoscopic to open surgery owing to the popular (but evidence-lacking) advice from expert groups during the initial phase of the pandemic. No agreement on how to filter surgical smoke plume during laparoscopy was identified. There was an overall reduction in the number of patients admitted with appendicitis and one-third felt that patients who did present had more severe appendicitis than they usually observe. Conclusion: Conservative management of mild appendicitis has been possible during the pandemic. The fact that some surgeons switched to open appendicectomy may reflect the poor guidelines that emanated in the early phase of SARS-CoV-2.noneIelpo B.; Podda M.; Pellino G.; Pata F.; Caruso R.; Gravante G.; Di Saverio S.; Ielpo B.; Podda M.; Pellino G.; Pata F.; Caruso R.; Gravante G.; Di Saverio S.; Gallo G.; Lui R.; Orengia A.; Chowdary A.; Kulkarni A.; Kuvvetli A.; Navarro A.; Pisanu A.; Smith A.; Ibiricu A.C.; Nacion A.J.D.; Alsaleh A.; Alhazmi A.; Elmabri A.; Wani A.; Rencuzogullari A.; Lasarte A.S.; Rubio A.V.; Bavikatte A.; Kumar A.; Jamiri A.-R.; Padilla A.M.A.; Cacurri A.; de San Ildefonso A.; Porcu A.; Sartori A.; Rocca A.; Yanez A.P.; Becaria A.; Solis-Pena A.; Sretenovic A.; Urbistondo A.; Bandin A.; Najar A.; De Luca A.; Boddy A.; Charalabopoulos A.; Tzivanakis A.; Amendola A.; de Velasco A.R.-G.; Yildirim A.C.; Frontali A.; Toure A.O.; Garcia-Granero A.; Roldan A.M.; Larrainzar A.S.; Ratnayake A.S.; Gonzalez-Ganso A.M.; Minaya-Bravo A.M.; Das A.; Bondurri A.; Costanzi A.; Lucchi A.; Mazzari A.; Musig A.; Peloso A.; Piano A.; Police A.; Mihailescu A.; Pouy A.; Romano A.; Iossa A.; Leonetti A.C.; Guariniello A.; Isaac A.; Bovi A.P.D.; Chessa A.; Tromba A.; Martinez A.A.; Brillantino A.; Caira A.; Castaldi A.; Ferronetti A.; Giuliani A.; Prestera A.; la Medina A.R.-D.; Tarasconi A.; Tornambe A.; Picciariello A.; Ioannidis A.; Leppaniemi A.; Khan A.; Rashid A.; Perez-Sanchez A.L.E.; Mittal A.; Mitul A.R.; Mehraj A.; Laharwal A.; Dorisme A.; Marinis A.; Iqbal A.; Moncada A.; Braccio B.; Alkhafaji B.; de Andres Asenjo B.; Martin-Perez B.; Perez B.S.; Creavin B.; Cali B.; Cali B.; Pascotto B.; Stubbs B.; Retes B.Z.; Jovanovic B.; Goh B.K.P.; Sensi B.; Biddau C.; Gazia C.; Vallicelli C.; Fagundes C.A.; Santacruz C.C.; Chirico C.; Diaz C.J.G.; Petrola C.; Rodriguez C.S.; Benitez C.Y.; Dammaro C.; Faro C.L.; Reinke C.; Paez C.D.; Oliva C.; Paranjape C.; Thomas C.; Chia C.F.; Kong C.K.; De Lucia C.; Chao C.O.; Arcudi C.; Guerci C.; Chia C.; Parise C.; Folliero C.; Varela C.; Ferguson D.M.; Camacho D.; Popowich D.; Lima D.S.; Rega D.; Delogu D.; Zigiotto D.; Vinci D.; D'Antonio D.; Parini D.; Merlini D.A.; Zimmerman D.D.E.; Moro-Valdezate D.; Pertile D.; Giusti D.M.; Keller D.S.; Tarik D.; Kalivaci D.; Mazingi D.; Maldonado-Pintado D.G.; Sasia D.; Linardoutsos D.; Osilli D.; Murrone D.; Russello D.; Rodas E.; Roa E.A.A.; Ricciardi E.; Rosso E.; Saladino E.; Flores-Villalba E.; Ajs E.R.; Smith-Singares E.; Baili E.; Kouroumpas E.; Bourmpouteli E.; Douka E.; Martin-Perez E.; Guaitoli E.; Samadov E.; Francone E.; Vaterlini E.; Morales E.; Pena E.; Zhao E.; Andres E.D.P.; Benzoni E.; Erdas E.; Pinotti E.; Colas-Ruiz E.; Aytac E.; Laterza E.; Agastra E.; Foianini E.; Moscoso E.; Laviano E.; Marra E.; Cardamone E.; Licardie E.; Mpaili E.; Pinna E.; Varo E.; Navarro F.M.; Marino F.; Medas F.; Romano F.; Maraska F.; Saliu F.; Madrid F.; Rosa F.; Mastella F.; Gheza F.; Luvisetto F.; Alconchel F.; Vieira F.M.; Pareja F.; Agresta F.; Luna F.; Bonilla F.; Cordera F.; Burdio F.; Mendoza-Moreno F.; Flores F.M.; Aranda F.P.; Taylor F.; Ramos F.L.; Fernandes F.; Tropeano F.P.; Balestra F.; Bianco F.; Ceci F.; Colombo F.; Di Marzo F.; Ferrara F.; Lancellotti F.; Lazzarin F.; Litta F.; Martini F.; Pizza F.; Roscio F.; Virdis F.; Antona F.B.; Ramirez F.C.; Fernandez F.M.; Llinares F.O.; Quezada F.; Schlottmann F.; Quezada F.; Herrera-Almario G.; Massaferro G.; Bislenghi G.; van Ramshorst G.; Gallo G.; Luglio G.; Bointas G.; Kampouroglou G.; Papadopoulos G.; Manrique G.A.; Calini G.; Nastri G.; Formisano G.; Galiffa G.; Palini G.M.; Colucci G.; Pagano G.; Pellino G.; Vanni G.; Pattacini G.C.; Gravante G.; De Paola G.; Lisi G.; Partida G.; Bellanova G.; De Nobili G.; Necchi G.S.; Sinibaldi G.; Tebala G.; Bagaglini G.; Izzo G.; Argenio G.; Brisinda G.; Candilio G.; Di Grezia G.; Esposito G.; Faillace G.; Frazzetta G.; La Gumina G.; Nigri G.; Romeo G.; Amatriain G.C.; Ortega G.; Martin-Martin G.; Stavrou G.A.; Gunadi; Ugon G.A.; Machain G.; Marcucci G.; Martinez-Mier G.; Machain G.M.; Nari G.; Calvo H.; Fathy H.; Hamilto; Ahmed H.; Faraj H.; Nava H.; Macias H.O.; Nikaj H.; Solano H.; Khan H.A.; Alarcon H.S.; Ebied H.; Giani I.; Ateca I.V.; Neri I.; Roman I.A.S.; Fidoshev I.; Rodriguez I.M.; Negoi I.; Ortega I.; Bernescu I.; Russo I.S.; Rodriguez I.V.; Palomares I.; Baltazar I.; Torrejimeno I.J.; Jurado I.M.C.; Reccia I.; Hussain I.; Toledo I.B.; Mora-Guzman I.; Dogaru I.; Romic I.; Balciscueta I.; Kenington J.C.; Sagolsem J.; Jang J.Y.; Olivier J.; Lammel-Lindemann J.; Dziakova J.; Villavicencio J.I.R.; Salinas J.; Parreira J.P.J.G.; Jovanovic; Perez J.R.; Reyes J.A.S.; Luque J.A.M.; Mak J.; Rodriguez J.S.; Kok J.H.H.; Krook J.; Diaz-Elizondo J.A.; Castell J.; Garcia-Flores J.E.; Navalon J.M.J.; Rodrigues J.M.S.; Pereira J.; Gomez J.T.C.; Luque J.B.; del Olmo J.C.M.; Salamea J.C.; Olivier J.F.C.; Laina J.L.B.; Ordonez J.M.; Gutierrez J.; Abba J.; Sofi J.A.; Sherafgan K.; Sahnan K.; Yanaga K.; Beatson K.; Asim L.; Alvarez L.; Siragusa L.; Farber L.; Ong L.; Athanasios L.; Garcia-Bruna L.; De Martino L.; Ferrario L.; Giordano L.; Gordini L.; Pio L.; Ponchietti L.; Moletta L.; Curella L.; Poggi L.; Taglietti L.; Bonavina L.; Conti L.; Goffredi L.; Ruiz L.A.G.; Barrionuevo L.; Fregoso L.E.; Cabrera L.F.; Rodriguez L.G.; Grande L.; Osoria L.G.; Gonzalez L.J.K.; Sanchez-Guillen L.; Tallon-Aguilar L.; Tresierra L.; Giavarini L.; Hasabelnabi M.; Odovic M.; Uemura M.; Khan M.; Artiles-Armas M.; David M.; Di Martino M.; Spampinato M.G.; Ribeiro M.A.F.; Viola M.; Angrisani M.; Calussi M.; Cannistra M.; Catarci M.; Cereda M.; Conte M.; Giordano M.; Pellicciaro M.; Marino M.V.; Vaterlini M.E.; Jimenez M.F.; Lolli M.G.; Bellini M.I.; Lemma M.; Chiarello M.M.; Nicola M.; Arrigo M.; Mejia M.C.; Manrique M.M.; Rodriguez-Lopez M.; Serradilla-Martin M.; Lara M.Z.; Martinez M.; Bagnall M.; Peter M.; Lara M.C.; Gomez M.J.; Paniagua-Garcia-Senorans M.; Gonzalez M.P.; Rutegard M.; Salo M.; Franceschilli M.; Silveri M.; Veroux M.; Pezzulo M.; Nardi M.; Rottoli M.; Tolonen M.; Ciro M.P.; Zuluagua M.; Cannavo M.; Cervellera M.; Iacobone M.; Montuori M.; Podda M.; Dominguez M.G.; Bingol-Kologlu M.; Tahir M.; Lim M.; Wilson M.S.; Wilson M.; Campanelli M.; Bisaccia M.; De Rosa M.; Maruccia M.; Paterno M.; Pisano M.; Torre M.; Trevino M.; Zuolo M.; Hernandez Bartolome M.A.; Farina M.; Pera M.; Calvo M.P.; Sotelo M.; Thway M.M.; Hassan M.; Hassan M.S.E.; Azfar M.; Bouhuwaish M.; Taha M.; Zaieem M.; Korkoman M.; Guraieb M.; Shalaby M.; Raza M.A.; Younis M.U.; Elhadi M.; Ali M.Z.; Quazi N.; Dudi-Venkata N.N.; Alselaim N.; Loria N.; Ramirez N.V.; Than N.W.; Smart N.; Trelles N.; Pinto N.; Allievi N.; Petrucciani N.; Antonacci N.; Cillara N.; Gica N.; Cristiana N.D.; Krystek N.; Falco N.; Pecorelli N.; Tamini N.; Dallas N.A.; Machairas N.; Brito N.; Fieturi N.A.; Ortega N.; Mercado O.A.; Irkorucu O.; Alsherif O.; Valles O.; Ioannidis O.; Palmas O.H.; Palmas O.I.H.; Guadarrama O.S.; Bozbiyik O.; Omelanczuk P.; Ottolino P.; Rodrigues P.; Ruiz P.; Campenni P.; Chiarade P.; Olivares P.P.; Baroffio P.; Panaccio P.; Wintringer P.; Di Fronzo P.; Talento P.; Favoriti P.; Sendino P.; Marsanic P.; Mifsut P.; Andrade P.; Ajawin P.; Abadia-Barno P.; Castaneda P.A.N.; Arevalos P.O.S.; Bellver P.P.; Koh P.S.; Souza P.; Major P.; Bali R.S.; Khattar R.M.; Melo R.B.; Ebrahiminia R.; Azar R.; Murga R.L.; Caruso R.; Pirolo R.; Brady R.; Davies R.J.; Dholakia R.; Rattan R.; Singhal R.; Lim R.; Angelico R.; Isernia R.M.; Tutino R.; Faccincani R.; Peltrini R.; Carrera-Ceron R.; Tejos R.; Kashyap R.; Fajardo R.; Lozito R.; Pareja R.M.; Garbarino S.; Di Saverio S.; Morales-Conde S.; Benli S.; Mansour S.; Flores S.; Suarez S.L.; Ben S.L.; Fuentes S.; Napetti S.; de Guzman S.O.; Awad S.; Weckmann Lujan S.A.; Gentilli S.; Grimaldi S.; Pizarro S.O.; Tayar S.; Nabi S.; Chan S.M.; Junaid S.; Rojas S.; Monetti S.; Garcia S.; Salvans S.; Tenconi S.; Shaw S.; Santoni S.; Parra S.A.; Cardenas S.; Perez-Bertolez S.; Chiappetta S.; Dessureault S.; Delis S.; Bonapasta S.A.; Rausei S.; Scaringi S.; Keswani S.; Ali S.M.; Cetinkunar S.; Fung T.L.D.; Rawashdeh T.; Lopez T.N.; De Campos T.; Duque T.C.; Perra T.; Liakakos T.; Daskalakis T.; Liakakos T.; Barnes T.; Koeter T.; Zalla T.; Gonzalez T.E.; Elosua T.; Campagnaro T.; Brown T.; Luoto T.; Oumar T.A.; Giustizieri U.; Grossi U.; Bracale U.; Rivas U.; Sosa V.; Testa V.; Andriola V.; Tonini V.; Balassone V.; Celentano V.; Progno V.; Raju V.; Carroni V.; Cavallaro V.; Katta V.R.; De Simone V.; Romaguera V.P.; Orozco V.H.G.; Luraschi V.; Rachkov V.; Turrado-L V.; Visag-Castillo V.; Dowling V.; Graham V.; Papagni V.; Vigorita V.; Fonseca V.C.; Carneros V.J.; Bellato V.; Goncalves W.; Powers W.F.; Grigg W.; Bechstein W.O.; Lim Y.B.; Altinel Y.; Golubovic Z.; Balciscueta Z.Ielpo, B.; Podda, M.; Pellino, G.; Pata, F.; Caruso, R.; Gravante, G.; Di Saverio, S.; Ielpo, B.; Podda, M.; Pellino, G.; Pata, F.; Caruso, R.; Gravante, G.; Di Saverio, S.; Gallo, G.; Lui, R.; Orengia, A.; Chowdary, A.; Kulkarni, A.; Kuvvetli, A.; Navarro, A.; Pisanu, A.; Smith, A.; Ibiricu, A. C.; Nacion, A. J. D.; Alsaleh, A.; Alhazmi, A.; Elmabri, A.; Wani, A.; Rencuzogullari, A.; Lasarte, A. S.; Rubio, A. V.; Bavikatte, A.; Kumar, A.; Jamiri, A. -R.; Padilla, A. M. A.; Cacurri, A.; de San Ildefonso, A.; Porcu, A.; Sartori, A.; Rocca, A.; Yanez, A. P.; Becaria, A.; Solis-Pena, A.; Sretenovic, A.; Urbistondo, A.; Bandin, A.; Najar, A.; De Luca, A.; Boddy, A.; Charalabopoulos, A.; Tzivanakis, A.; Amendola, A.; de Velasco, A. R. -G.; Yildirim, A. C.; Frontali, A.; Toure, A. O.; Garcia-Granero, A.; Roldan, A. M.; Larrainzar, A. S.; Ratnayake, A. S.; Gonzalez-Ganso, A. M.; Minaya-Bravo, A. M.; Das, A.; Bondurri, A.; Costanzi, A.; Lucchi, A.; Mazzari, A.; Musig, A.; Peloso, A.; Piano, A.; Police, A.; Mihailescu, A.; Pouy, A.; Romano, A.; Iossa, A.; Leonetti, A. C.; Guariniello, A.; Isaac, A.; Bovi, A. P. D.; Chessa, A.; Tromba, A.; Martinez, A. A.; Brillantino, A.; Caira, A.; Castaldi, A.; Ferronetti, A.; Giuliani, A.; Prestera, A.; la Medina, A. R. -D.; Tarasconi, A.; Tornambe, A.; Picciariello, A.; Ioannidis, A.; Leppaniemi, A.; Khan, A.; Rashid, A.; Perez-Sanchez, A. L. E.; Mittal, A.; Mitul, A. R.; Mehraj, A.; Laharwal, A.; Dorisme, A.; Marinis, A.; Iqbal, A.; Moncada, A.; Braccio, B.; Alkhafaji, B.; de Andres Asenjo, B.; Martin-Perez, B.; Perez, B. S.; Creavin, B.; Cali, B.; Cali, B.; Pascotto, B.; Stubbs, B.; Retes, B. Z.; Jovanovic, B.; Goh, B. K. P.; Sensi, B.; Biddau, C.; Gazia, C.; Vallicelli, C.; Fagundes, C. A.; Santacruz, C. C.; Chirico, C.; Diaz, C. J. G.; Petrola, C.; Rodriguez, C. S.; Benitez, C. Y.; Dammaro, C.; Faro, C. L.; Reinke, C.; Paez, C. D.; Oliva, C.; Paranjape, C.; Thomas, C.; Chia, C. F.; Kong, C. K.; De Lucia, C.; Chao, C. O.; Arcudi, C.; Guerci, C.; Chia, C.; Parise, C.; Folliero, C.; Varela, C.; Ferguson, D. M.; Camacho, D.; Popowich, D.; Lima, D. S.; Rega, D.; Delogu, D.; Zigiotto, D.; Vinci, D.; D'Antonio, D.; Parini, D.; Merlini, D. A.; Zimmerman, D. D. E.; Moro-Valdezate, D.; Pertile, D.; Giusti, D. M.; Keller, D. S.; Tarik, D.; Kalivaci, D.; Mazingi, D.; Maldonado-Pintado, D. G.; Sasia, D.; Linardoutsos, D.; Osilli, D.; Murrone, D.; Russello, D.; Rodas, E.; Roa, E. A. A.; Ricciardi, E.; Rosso, E.; Saladino, E.; Flores-Villalba, E.; Ajs, E. R.; Smith-Singares, E.; Baili, E.; Kouroumpas, E.; Bourmpouteli, E.; Douka, E.; Martin-Perez, E.; Guaitoli, E.; Samadov, E.; Francone, E.; Vaterlini, E.; Morales, E.; Pena, E.; Zhao, E.; Andres, E. D. P.; Benzoni, E.; Erdas, E.; Pinotti, E.; Colas-Ruiz, E.; Aytac, E.; Laterza, E.; Agastra, E.; Foianini, E.; Moscoso, E.; Laviano, E.; Marra, E.; Cardamone, E.; Licardie, E.; Mpaili, E.; Pinna, E.; Varo, E.; Navarro, F. M.; Marino, F.; Medas, F.; Romano, F.; Maraska, F.; Saliu, F.; Madrid, F.; Rosa, F.; Mastella, F.; Gheza, F.; Luvisetto, F.; Alconchel, F.; Vieira, F. M.; Pareja, F.; Agresta, F.; Luna, F.; Bonilla, F.; Cordera, F.; Burdio, F.; Mendoza-Moreno, F.; Flores, F. M.; Aranda, F. P.; Taylor, F.; Ramos, F. L.; Fernandes, F.; Tropeano, F. P.; Balestra, F.; Bianco, F.; Ceci, F.; Colombo, F.; Di Marzo, F.; Ferrara, F.; Lancellotti, F.; Lazzarin, F.; Litta, F.; Martini, F.; Pizza, F.; Roscio, F.; Virdis, F.; Antona, F. B.; Ramirez, F. C.; Fernandez, F. M.; Llinares, F. O.; Quezada, F.; Schlottmann, F.; Quezada, F.; Herrera-Almario, G.; Massaferro, G.; Bislenghi, G.; van Ramshorst, G.; Gallo, G.; Luglio, G.; Bointas, G.; Kampouroglou, G.; Papadopoulos, G.; Manrique, G. A.; Calini, G.; Nastri, G.; Formisano, G.; Galiffa, G.; Palini, G. M.; Colucci, G.; Pagano, G.; Pellino, G.; Vanni, G.; Pattacini, G. C.; Gravante, G.; De Paola, G.; Lisi, G.; Partida, G.; Bellanova, G.; De Nobili, G.; Necchi, G. S.; Sinibaldi, G.; Tebala, G.; Bagaglini, G.; Izzo, G.; Argenio, G.; Brisinda, G.; Candilio, G.; Di Grezia, G.; Esposito, G.; Faillace, G.; Frazzetta, G.; La Gumina, G.; Nigri, G.; Romeo, G.; Amatriain, G. C.; Ortega, G.; Martin-Martin, G.; Stavrou, G. A.; Gunadi, ; Ugon, G. A.; Machain, G.; Marcucci, G.; Martinez-Mier, G.; Machain, G. M.; Nari, G.; Calvo, H.; Fathy, H.; Hamilto, ; Ahmed, H.; Faraj, H.; Nava, H.; Macias, H. O.; Nikaj, H.; Solano, H.; Khan, H. A.; Alarcon, H. S.; Ebied, H.; Giani, I.; Ateca, I. V.; Neri, I.; Roman, I. A. S.; Fidoshev, I.; Rodriguez, I. M.; Negoi, I.; Ortega, I.; Bernescu, I.; Russo, I. S.; Rodriguez, I. V.; Palomares, I.; Baltazar, I.; Torrejimeno, I. J.; Jurado, I. M. C.; Reccia, I.; Hussain, I.; Toledo, I. B.; Mora-Guzman, I.; Dogaru, I.; Romic, I.; Balciscueta, I.; Kenington, J. C.; Sagolsem, J.; Jang, J. Y.; Olivier, J.; Lammel-Lindemann, J.; Dziakova, J.; Villavicencio, J. I. R.; Salinas, J.; Parreira, J. P. J. G.; Jovanovic, ; Perez, J. R.; Reyes, J. A. S.; Luque, J. A. M.; Mak, J.; Rodriguez, J. S.; Kok, J. H. H.; Krook, J.; Diaz-Elizondo, J. A.; Castell, J.; Garcia-Flores, J. E.; Navalon, J. M. J.; Rodrigues, J. M. S.; Pereira, J.; Gomez, J. T. C.; Luque, J. B.; del Olmo, J. C. M.; Salamea, J. C.; Olivier, J. F. C.; Laina, J. L. B.; Ordonez, J. M.; Gutierrez, J.; Abba, J.; Sofi, J. A.; Sherafgan, K.; Sahnan, K.; Yanaga, K.; Beatson, K.; Asim, L.; Alvarez, L.; Siragusa, L.; Farber, L.; Ong, L.; Athanasios, L.; Garcia-Bruna, L.; De Martino, L.; Ferrario, L.; Giordano, L.; Gordini, L.; Pio, L.; Ponchietti, L.; Moletta, L.; Curella, L.; Poggi, L.; Taglietti, L.; Bonavina, L.; Conti, L.; Goffredi, L.; Ruiz, L. A. G.; Barrionuevo, L.; Fregoso, L. E.; Cabrera, L. F.; Rodriguez, L. G.; Grande, L.; Osoria, L. G.; Gonzalez, L. J. K.; Sanchez-Guillen, L.; Tallon-Aguilar, L.; Tresierra, L.; Giavarini, L.; Hasabelnabi, M.; Odovic, M.; Uemura, M.; Khan, M.; Artiles-Armas, M.; David, M.; Di Martino, M.; Spampinato, M. G.; Ribeiro, M. A. F.; Viola, M.; Angrisani, M.; Calussi, M.; Cannistra, M.; Catarci, M.; Cereda, M.; Conte, M.; Giordano, M.; Pellicciaro, M.; Marino, M. V.; Vaterlini, M. E.; Jimenez, M. F.; Lolli, M. G.; Bellini, M. I.; Lemma, M.; Chiarello, M. M.; Nicola, M.; Arrigo, M.; Mejia, M. C.; Manrique, M. M.; Rodriguez-Lopez, M.; Serradilla-Martin, M.; Lara, M. Z.; Martinez, M.; Bagnall, M.; Peter, M.; Lara, M. C.; Gomez, M. J.; Paniagua-Garcia-Senorans, M.; Gonzalez, M. P.; Rutegard, M.; Salo, M.; Franceschilli, M.; Silveri, M.; Veroux, M.; Pezzulo, M.; Nardi, M.; Rottoli, M.; Tolonen, M.; Ciro, M. P.; Zuluagua, M.; Cannavo, M.; Cervellera, M.; Iacobone, M.; Montuori, M.; Podda, M.; Dominguez, M. G.; Bingol-Kologlu, M.; Tahir, M.; Lim, M.; Wilson, M. S.; Wilson, M.; Campanelli, M.; Bisaccia, M.; De Rosa, M.; Maruccia, M.; Paterno, M.; Pisano, M.; Torre, M.; Trevino, M.; Zuolo, M.; Hernandez Bartolome, M. A.; Farina, M.; Pera, M.; Calvo, M. P.; Sotelo, M.; Thway, M. M.; Hassan, M.; Hassan, M. S. E.; Azfar, M.; Bouhuwaish, M.; Taha, M.; Zaieem, M.; Korkoman, M.; Guraieb, M.; Shalaby, M.; Raza, M. A.; Younis, M. U.; Elhadi, M.; Ali, M. Z.; Quazi, N.; Dudi-Venkata, N. N.; Alselaim, N.; Loria, N.; Ramirez, N. V.; Than, N. W.; Smart, N.; Trelles, N.; Pinto, N.; Allievi, N.; Petrucciani, N.; Antonacci, N.; Cillara, N.; Gica, N.; Cristiana, N. D.; Krystek, N.; Falco, N.; Pecorelli, N.; Tamini, N.; Dallas, N. A.; Machairas, N.; Brito, N.; Fieturi, N. A.; Ortega, N.; Mercado, O. A.; Irkorucu, O.; Alsherif, O.; Valles, O.; Ioannidis, O.; Palmas, O. H.; Palmas, O. I. H.; Guadarrama, O. S.; Bozbiyik, O.; Omelanczuk, P.; Ottolino, P.; Rodrigues, P.; Ruiz, P.; Campenni, P.; Chiarade, P.; Olivares, P. P.; Baroffio, P.; Panaccio, P.; Wintringer, P.; Di Fronzo, P.; Talento, P.; Favoriti, P.; Sendino, P.; Marsanic, P.; Mifsut, P.; Andrade, P.; Ajawin, P.; Abadia-Barno, P.; Castaneda, P. A. N.; Arevalos, P. O. S.; Bellver, P. P.; Koh, P. S.; Souza, P.; Major, P.; Bali, R. S.; Khattar, R. M.; Melo, R. B.; Ebrahiminia, R.; Azar, R.; Murga, R. L.; Caruso, R.; Pirolo, R.; Brady, R.; Davies, R. J.; Dholakia, R.; Rattan, R.; Singhal, R.; Lim, R.; Angelico, R.; Isernia, R. M.; Tutino, R.; Faccincani, R.; Peltrini, R.; Carrera-Ceron, R.; Tejos, R.; Kashyap, R.; Fajardo, R.; Lozito, R.; Pareja, R. M.; Garbarino, S.; Di Saverio, S.; Morales-Conde, S.; Benli, S.; Mansour, S.; Flores, S.; Suarez, S. L.; Ben, S. L.; Fuentes, S.; Napetti, S.; de Guzman, S. O.; Awad, S.; Weckmann Lujan, S. A.; Gentilli, S.; Grimaldi, S.; Pizarro, S. O.; Tayar, S.; Nabi, S.; Chan, S. M.; Junaid, S.; Rojas, S.; Monetti, S.; Garcia, S.; Salvans, S.; Tenconi, S.; Shaw, S.; Santoni, S.; Parra, S. A.; Cardenas, S.; Perez-Bertolez, S.; Chiappetta, S.; Dessureault, S.; Delis, S.; Bonapasta, S. A.; Rausei, S.; Scaringi, S.; Keswani, S.; Ali, S. M.; Cetinkunar, S.; Fung, T. L. D.; Rawashdeh, T.; Lopez, T. N.; De Campos, T.; Duque, T. C.; Perra, T.; Liakakos, T.; Daskalakis, T.; Liakakos, T.; Barnes, T.; Koeter, T.; Zalla, T.; Gonzalez, T. E.; Elosua, T.; Campagnaro, T.; Brown, T.; Luoto, T.; Oumar, T. A.; Giustizieri, U.; Grossi, U.; Bracale, U.; Rivas, U.; Sosa, V.; Testa, V.; Andriola, V.; Tonini, V.; Balassone, V.; Celentano, V.; Progno, V.; Raju, V.; Carroni, V.; Cavallaro, V.; Katta, V. R.; De Simone, V.; Romaguera, V. P.; Orozco, V. H. G.; Luraschi, V.; Rachkov, V.; Turrado-L, V.; Visag-Castillo, V.; Dowling, V.; Graham, V.; Papagni, V.; Vigorita, V.; Fonseca, V. C.; Carneros, V. J.; Bellato, V.; Goncalves, W.; Powers, W. F.; Grigg, W.; Bechstein, W. O.; Lim, Y. B.; Altinel, Y.; Golubovic, Z.; Balciscueta, Z