Optimización de la secuencia señal para la producción de proteínas recombinantes en el periplasma de Escherichia coli marcadas con SMBP.

Propósito y Método de Estudio: El uso de proteínas de fusión ha facilitado la producción de proteínas recombinantes ya que le confieren ciertas características a la proteína de interés para producir proteínas solubles, biológicamente activas y facilitar los procesos de purificación. SmbP es una proteína de 9.9 kDa aislada del periplasma de Nitrosomonas europea que ha sido utilizada como proteína de fusión para la expresión de diversas proteínas en el citoplasma y periplasma de Escherichia coli, sin embargo, los niveles de expresión periplásmica han sido bajos comparados con la proteína de fusión CusF. Buscando mejorar los niveles de expresión en el periplásmica de SmbP se planteó intercambiar su secuencia señal nativa por la de las proteínas CusF y PelB con la finalidad de mejorar el transporte al periplasma de E. coli. La metodología consistió en: 1) Amplificación de los genes de interés con sus modificaciones, 2) Construcción de plásmidos, 3) Transformación de E. coli DH5α, 4) Extracción del ADN plasmídico, 5) Análisis confirmatorio por PCR, 6) Transformación de E. coli BL21(DE3), 7) Expresión de proteínas, 8) Purificación por cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados, 9) Cuantificación de la proteína reportera RFP. Contribuciones y conclusiones: en este estudio se obtuvieron las diferentes construcciones de plásmidos conteniendo los genes de interés, entre ellos el de las proteínas CusFps-SmbP y PelBps-SmbP como proteínas de fusión y RFP como proteína reportera. Así mismo se utilizó un plásmido conteniendo el gen de SmbPp nativa con RFP para comparar los niveles de expresión periplásmica. Se realizó el análisis de la expresión mediante microscopía de fluorescencia mostrando que CusFps-SmbP-RFP y PelBps-SmbP-RFP mostraron mayor intensidad de fluorescencia que SmbPp-RFP. Además, se pudo observar una tendencia de acumulación de la proteína en los polos de la bacteria lo cual nos indica que nuestra proteína se encuentra localizada en el espacio periplásmico, sin embargo, debido a la baja intensidad de fluorescencia de SmbPp-RFP no se pudo apreciar este fenómeno. Se cuantificaron los niveles de RFP utilizando espectroscopía de fluorescencia realizando una curva de calibración obteniendo mayor rendimiento utilizando PelBps- SmbP (7.93 mg por 1 L de cultivo) comparado con CusFps-SmbP (6.72 mg por 1 L de cultivo) y SmbPp (0.0068 mg por 1 L de cultivo). Por último, se utilizó la proteína PelBps-SmbP para expresar el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos obteniendo buenos niveles de expresión y pureza

Producción recombinante de la enteroquinasa de cadena ligera bovina en el periplasma de Escherichia coli.

La enteroquinasa es una peptidasa que se produce en la mucosa duodenal bovina, la cual consiste de dos cadenas: una pesada (115 kDa) y una ligera (35 kDa) la cual posee la actividad catilítica. Esta enzima activa el tripsinógeno reconociendo la secuencia (Asp)4-Lis y cortando en el extremo C-terminal de esta secuencia. Esto la convierte en un reactivo esencial en la producción de proteínas recombinantes en Escherichia coli ya que colocando esta secuencia entre una proteína de fusión y la proteína de interés permitiría la separación de ambas. Para producir la enteroquinasa se utilizará la secuencia de amioácidos del péptido señal de la enzima PelB, una pectato liasa de la bacteria Erwinia carotovora, la cual se encargará de dirigir la expresión al periplasma de Escherichia coli. Se produce aquí ya que es rara la formación de cuerpos de inclusión, favorece la formación de puentes disulfuro para el correcto plegamiento, además hay menos proteínas y esto hace que la fracción sea más pura. Esta proteína se usará en el Laboratorio de Biotecnología de la FCQ para separar proteínas de fusión de las proteínas recombinantes de interé

Penilaian Kinerja Keuangan Koperasi di Kabupaten Pelalawan

This paper describe development and financial performance of cooperative in District Pelalawan among 2007 - 2008. Studies on primary and secondary cooperative in 12 sub-districts. Method in this stady use performance measuring of productivity, efficiency, growth, liquidity, and solvability of cooperative. Productivity of cooperative in Pelalawan was highly but efficiency still low. Profit and income were highly, even liquidity of cooperative very high, and solvability was good

The James Webb Space Telescope Mission

Twenty-six years ago a small committee report, building on earlier studies, expounded a compelling and poetic vision for the future of astronomy, calling for an infrared-optimized space telescope with an aperture of at least $4m$. With the support of their governments in the US, Europe, and Canada, 20,000 people realized that vision as the $6.5m$ James Webb Space Telescope. A generation of astronomers will celebrate their accomplishments for the life of the mission, potentially as long as 20 years, and beyond. This report and the scientific discoveries that follow are extended thank-you notes to the 20,000 team members. The telescope is working perfectly, with much better image quality than expected. In this and accompanying papers, we give a brief history, describe the observatory, outline its objectives and current observing program, and discuss the inventions and people who made it possible. We cite detailed reports on the design and the measured performance on orbit.Comment: Accepted by PASP for the special issue on The James Webb Space Telescope Overview, 29 pages, 4 figure

Severe early onset preeclampsia: short and long term clinical, psychosocial and biochemical aspects

Preeclampsia is a pregnancy specific disorder commonly defined as de novo hypertension and proteinuria after 20 weeks gestational age. It occurs in approximately 3-5% of pregnancies and it is still a major cause of both foetal and maternal morbidity and mortality worldwide1. As extensive research has not yet elucidated the aetiology of preeclampsia, there are no rational preventive or therapeutic interventions available. The only rational treatment is delivery, which benefits the mother but is not in the interest of the foetus, if remote from term. Early onset preeclampsia (<32 weeks’ gestational age) occurs in less than 1% of pregnancies. It is, however often associated with maternal morbidity as the risk of progression to severe maternal disease is inversely related with gestational age at onset2. Resulting prematurity is therefore the main cause of neonatal mortality and morbidity in patients with severe preeclampsia3. Although the discussion is ongoing, perinatal survival is suggested to be increased in patients with preterm preeclampsia by expectant, non-interventional management. This temporising treatment option to lengthen pregnancy includes the use of antihypertensive medication to control hypertension, magnesium sulphate to prevent eclampsia and corticosteroids to enhance foetal lung maturity4. With optimal maternal haemodynamic status and reassuring foetal condition this results on average in an extension of 2 weeks. Prolongation of these pregnancies is a great challenge for clinicians to balance between potential maternal risks on one the eve hand and possible foetal benefits on the other. Clinical controversies regarding prolongation of preterm preeclamptic pregnancies still exist – also taking into account that preeclampsia is the leading cause of maternal mortality in the Netherlands5 - a debate which is even more pronounced in very preterm pregnancies with questionable foetal viability6-9. Do maternal risks of prolongation of these very early pregnancies outweigh the chances of neonatal survival? Counselling of women with very early onset preeclampsia not only comprises of knowledge of the outcome of those particular pregnancies, but also knowledge of outcomes of future pregnancies of these women is of major clinical importance. This thesis opens with a review of the literature on identifiable risk factors of preeclampsia

Search for heavy resonances decaying to two Higgs bosons in final states containing four b quarks

A search is presented for narrow heavy resonances X decaying into pairs of Higgs bosons (H) in proton-proton collisions collected by the CMS experiment at the LHC at root s = 8 TeV. The data correspond to an integrated luminosity of 19.7 fb(-1). The search considers HH resonances with masses between 1 and 3 TeV, having final states of two b quark pairs. Each Higgs boson is produced with large momentum, and the hadronization products of the pair of b quarks can usually be reconstructed as single large jets. The background from multijet and t (t) over bar events is significantly reduced by applying requirements related to the flavor of the jet, its mass, and its substructure. The signal would be identified as a peak on top of the dijet invariant mass spectrum of the remaining background events. No evidence is observed for such a signal. Upper limits obtained at 95 confidence level for the product of the production cross section and branching fraction sigma(gg -> X) B(X -> HH -> b (b) over barb (b) over bar) range from 10 to 1.5 fb for the mass of X from 1.15 to 2.0 TeV, significantly extending previous searches. For a warped extra dimension theory with amass scale Lambda(R) = 1 TeV, the data exclude radion scalar masses between 1.15 and 1.55 TeV

Measurement of the top quark mass using charged particles in pp collisions at root s=8 TeV

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Measurement of associated W plus charm production in pp collisions at √s=7 TeV

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