Discutindo a educação ambiental no cotidiano escolar: desenvolvimento de projetos na escola formação inicial e continuada de professores

A presente pesquisa buscou discutir como a Educação Ambiental (EA) vem sendo trabalhada, no Ensino Fundamental e como os docentes desta escola compreendem e vem inserindo a EA no cotidiano escolar., em uma escola estadual do município de Tangará da Serra/MT, Brasil. Para tanto, realizou-se entrevistas com os professores que fazem parte de um projeto interdisciplinar de EA na escola pesquisada. Verificou-se que o projeto da escola não vem conseguindo alcançar os objetivos propostos por: desconhecimento do mesmo, pelos professores; formação deficiente dos professores, não entendimento da EA como processo de ensino-aprendizagem, falta de recursos didáticos, planejamento inadequado das atividades. A partir dessa constatação, procurou-se debater a impossibilidade de tratar do tema fora do trabalho interdisciplinar, bem como, e principalmente, a importância de um estudo mais aprofundado de EA, vinculando teoria e prática, tanto na formação docente, como em projetos escolares, a fim de fugir do tradicional vínculo “EA e ecologia, lixo e horta”.Facultad de Humanidades y Ciencias de la Educació

Untersuchung der biologischen Aktivität von Nanopartikeln in Tumorschnittkulturen

Die Entdeckung der RNA‐Interferenz (RNA‐i) als ein natürlicher Prozess der Genregulation sorgte auf Grund des möglichen Einsatzes für therapeutische Zwecke für großes Interesse. Probleme beim Transport der RNA‐i‐induzierenden kleinen RNA‐Moleküle (siRNAs) traten vor allem hinsichtlich Ladungsverhältnissen, Instabilität und Molekulargewicht auf. Um diese Probleme zu lösen, wurden zunehmend Transportsysteme aus Nanopartikeln untersucht. Die verwendeten Polyethylenimine (PEIs) sind positiv geladene, verzweigt oder linear aufgebaute Polymere, welche mit RNAs (siRNA, miRNA) Komplexe bilden. Modifikationen der PEI‐Kom‐ plexe können zu einem effektiveren Transport der RNA, zu veränderten pharmakokinetischen Eigenschaften und zu einer verbesserten Biokompatibilität führen. Der Erfolg dieser therapeu‐ tischen Nanopartikel ist insbesondere von der effizienten zellulären Aufnahme, der Fähigkeit der Gewebepenetration und vom Erreichen der Zielzellen abhängig. Der Großteil der bisheri‐ gen Untersuchungen von PEIs wurde an Zellkulturen durchgeführt. Die hier erzielten Ergeb‐ nisse lassen sich jedoch nur schwer auf komplexe in‐vivo‐Systeme übertragen. Aus diesem Grund wurde in der vorliegenden Arbeit die Anwendung der PEIs an Tumorschnitt‐ kulturen untersucht. Dafür wurde zuerst die Kultivierung von 350 μm durchmessenden Dünn‐ schicht‐Präparaten von Xenotransplantat‐Tumoren aus PC3 und U87 Zelllinien etabliert. Eine erfolgreiche Kultivierung konnte über 14 Tage durchgeführt werden. An bestimmten Zeit‐ punkten nach Kultivierungsbeginn (Tag 1, 3, 5, 7 und 14) wurden die Morphologie und die Vitalität (Apoptose, Proliferation) durch eine HE‐ oder immunhistochemische Färbung be‐ stimmt. Es konnte gezeigt werden, dass die Morphologie der Tumorzellen sowie die Prolifera‐ tion und Apoptose über den gesamten Kultivierungszeitraum erhalten blieben. Im nächsten Schritt wurde sowohl der Transport der siRNA von nicht‐modifizierten und modi‐ fizierten PEIs als auch der Transport durch deren Lipopolyplex‐Derivate (PEI‐siRNA‐Komplexe mit Liposomenhülle) analysiert. Für die Visualisierung der Komplexe wurde fluoreszenzmar‐ kierte siRNA verwendet. Die PEI‐siRNA‐Komplexe wurden auf die Schnittkulturen gegeben und über 24 Stunden kultiviert. In der mikroskopischen Analyse und ihrer Quantifizierung erfolgte die erste Einschätzung der Gewebepenetration. Es zeigten sich Unterschiede in der Gewebe‐ penetration der verschiedenen Nanopartikel, abhängig von deren Oberflächenladung. Um die biologische Aktivität der Nanopartikel in lebenden Zellen besser evaluieren zu können, wurde im dritten Schritt der Knockdown eines endogenen Genproduktes untersucht. Zielgen war hier das Onkogen Survivin, welches ein wichtiger endogener Überlebensfaktor der Tu‐ morzellen darstellt. Es gelang der Nachweis eines durch PEI‐siRNA‐Komplexe vermittelten Knockdowns des Survivin‐Gens. Insgesamt konnten somit Gewebeschnittkulturen als Grundlage für die ex‐vivo Untersuchung von Nanopartikeln etabliert werden. Es konnten nicht nur Aussagen über die Gewebepenet‐ ration der Nanopartikel, sondern auch über ihre biologischen Aktivitäten in einer intakten Ge‐ webestruktur getroffen werden.:Bibliographische Beschreibung 3 1 Einleitung 5 1.1 Der Einsatz der RNA-Interferenz (RNA-i) und von Nanopartikeln in der Medizin 5 1.2 Die RNA-Interferenz 6 1.2.1 Der Prozess der RNA-Interferenz 6 1.2.2 Vor- und Nachteile der RNA-Interferenz 9 1.3 Nanopartikel als Transportsysteme der siRNA: Polyethylenimine 10 1.4 Die Transportfähigkeit von Polyethyleniminen und ihre Optimierung 12 1.5 Anwendung der Polyethylenimine in in-vivo-Systemen 14 1.6 Präklinische Tumormodelle 15 1.6.1 Zellkulturen 15 1.6.2 Xenograft-Modelle und Gewebeschnittkulturen 16 2 Fragestellung 18 3 Literatur 19 4 Publikationen 24 5 Anlagen 32 6 Zusammenfassung und Ausblick 33 7 Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit 36 8 Lebenslauf 37 9 Danksagung 40 10 Erklärung über den wissenschaftlichen Beitrag 41 11 Teilnahmebestätigung: Vorlesung zur „Guten Wissenschaftlichen Praxis“ 4

Untersuchung der biologischen Aktivität von Nanopartikeln in Tumorschnittkulturen

Die Entdeckung der RNA‐Interferenz (RNA‐i) als ein natürlicher Prozess der Genregulation sorgte auf Grund des möglichen Einsatzes für therapeutische Zwecke für großes Interesse. Probleme beim Transport der RNA‐i‐induzierenden kleinen RNA‐Moleküle (siRNAs) traten vor allem hinsichtlich Ladungsverhältnissen, Instabilität und Molekulargewicht auf. Um diese Probleme zu lösen, wurden zunehmend Transportsysteme aus Nanopartikeln untersucht. Die verwendeten Polyethylenimine (PEIs) sind positiv geladene, verzweigt oder linear aufgebaute Polymere, welche mit RNAs (siRNA, miRNA) Komplexe bilden. Modifikationen der PEI‐Kom‐ plexe können zu einem effektiveren Transport der RNA, zu veränderten pharmakokinetischen Eigenschaften und zu einer verbesserten Biokompatibilität führen. Der Erfolg dieser therapeu‐ tischen Nanopartikel ist insbesondere von der effizienten zellulären Aufnahme, der Fähigkeit der Gewebepenetration und vom Erreichen der Zielzellen abhängig. Der Großteil der bisheri‐ gen Untersuchungen von PEIs wurde an Zellkulturen durchgeführt. Die hier erzielten Ergeb‐ nisse lassen sich jedoch nur schwer auf komplexe in‐vivo‐Systeme übertragen. Aus diesem Grund wurde in der vorliegenden Arbeit die Anwendung der PEIs an Tumorschnitt‐ kulturen untersucht. Dafür wurde zuerst die Kultivierung von 350 μm durchmessenden Dünn‐ schicht‐Präparaten von Xenotransplantat‐Tumoren aus PC3 und U87 Zelllinien etabliert. Eine erfolgreiche Kultivierung konnte über 14 Tage durchgeführt werden. An bestimmten Zeit‐ punkten nach Kultivierungsbeginn (Tag 1, 3, 5, 7 und 14) wurden die Morphologie und die Vitalität (Apoptose, Proliferation) durch eine HE‐ oder immunhistochemische Färbung be‐ stimmt. Es konnte gezeigt werden, dass die Morphologie der Tumorzellen sowie die Prolifera‐ tion und Apoptose über den gesamten Kultivierungszeitraum erhalten blieben. Im nächsten Schritt wurde sowohl der Transport der siRNA von nicht‐modifizierten und modi‐ fizierten PEIs als auch der Transport durch deren Lipopolyplex‐Derivate (PEI‐siRNA‐Komplexe mit Liposomenhülle) analysiert. Für die Visualisierung der Komplexe wurde fluoreszenzmar‐ kierte siRNA verwendet. Die PEI‐siRNA‐Komplexe wurden auf die Schnittkulturen gegeben und über 24 Stunden kultiviert. In der mikroskopischen Analyse und ihrer Quantifizierung erfolgte die erste Einschätzung der Gewebepenetration. Es zeigten sich Unterschiede in der Gewebe‐ penetration der verschiedenen Nanopartikel, abhängig von deren Oberflächenladung. Um die biologische Aktivität der Nanopartikel in lebenden Zellen besser evaluieren zu können, wurde im dritten Schritt der Knockdown eines endogenen Genproduktes untersucht. Zielgen war hier das Onkogen Survivin, welches ein wichtiger endogener Überlebensfaktor der Tu‐ morzellen darstellt. Es gelang der Nachweis eines durch PEI‐siRNA‐Komplexe vermittelten Knockdowns des Survivin‐Gens. Insgesamt konnten somit Gewebeschnittkulturen als Grundlage für die ex‐vivo Untersuchung von Nanopartikeln etabliert werden. Es konnten nicht nur Aussagen über die Gewebepenet‐ ration der Nanopartikel, sondern auch über ihre biologischen Aktivitäten in einer intakten Ge‐ webestruktur getroffen werden.:Bibliographische Beschreibung 3 1 Einleitung 5 1.1 Der Einsatz der RNA-Interferenz (RNA-i) und von Nanopartikeln in der Medizin 5 1.2 Die RNA-Interferenz 6 1.2.1 Der Prozess der RNA-Interferenz 6 1.2.2 Vor- und Nachteile der RNA-Interferenz 9 1.3 Nanopartikel als Transportsysteme der siRNA: Polyethylenimine 10 1.4 Die Transportfähigkeit von Polyethyleniminen und ihre Optimierung 12 1.5 Anwendung der Polyethylenimine in in-vivo-Systemen 14 1.6 Präklinische Tumormodelle 15 1.6.1 Zellkulturen 15 1.6.2 Xenograft-Modelle und Gewebeschnittkulturen 16 2 Fragestellung 18 3 Literatur 19 4 Publikationen 24 5 Anlagen 32 6 Zusammenfassung und Ausblick 33 7 Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit 36 8 Lebenslauf 37 9 Danksagung 40 10 Erklärung über den wissenschaftlichen Beitrag 41 11 Teilnahmebestätigung: Vorlesung zur „Guten Wissenschaftlichen Praxis“ 4

A Case Report: First Long-Term Treatment With Burosumab in a Patient With Cutaneous-Skeletal Hypophosphatemia Syndrome

Epidermal nevus syndromes encompass a highly heterogeneous group of systemic disorders, characterized by epidermal nevi, and a spectrum of neuromuscular, ocular, and bone abnormalities. Cutaneous-skeletal hypophosphatemia syndrome (CSHS) constitutes a specific sub-entity in which elevated levels of fibroblast growth factor-23 cause hypophosphatemic rickets that are, to date, not amenable to causal therapy. Here, we report the first long-term follow-up of causal treatment with burosumab in a 3-year-old female patient with CSHS. 4 weeks after initiation of burosumab treatment, serum phosphate normalized to age-appropriate levels. Furthermore, long-term follow-up of 42 months revealed significant improvement of linear growth and gross physical functions, including respiratory insufficiency. Radiographic rickets severity as well as subjective bone pain were strongly reduced, and no side effects were observed over the course of treatment. In summary, we, here, report about a successful treatment of hypophosphatemic rickets in CSHS with burosumab over the time course of 42 months. In our patient, burosumab showed convincing efficacy and safety profile, without any loss of effect or increase of dose

Serum apolipoprotein A1 and haptoglobin, in patients with suspected drug-induced liver injury (DILI) as biomarkers of recovery

BACKGROUND: There is a clear need for better biomarkers of drug-induced-liver-injury (DILI). AIMS: We aimed to evaluate the possible prognostic value of ActiTest and FibroTest proteins apoliprotein-A1, haptoglobin and alpha-2-macroglobulin, in patients with DILI. METHODS: We analyzed cases and controls included in the IMI-SAFE-T-DILI European project, from which serum samples had been stored in a dedicated biobank. The analyses of ActiTest and FibroTest had been prospectively scheduled. The primary objective was to analyze the performance (AUROC) of ActiTest components as predictors of recovery outcome defined as an ALT <2x the upper limit of normal (ULN), and BILI <2x ULN. RESULTS: After adjudication, 154 patients were considered to have DILI and 22 were considered to have acute liver injury without DILI. A multivariate regression analysis (ActiTest-DILI patent pending) combining the ActiTest components without BILI and ALT (used as references), apolipoprotein-A1, haptoglobin, alpha-2-macroglobulin and GGT, age and gender, resulted in a significant prediction of recovery with 67.0% accuracy (77/115) and an AUROC of 0.724 (P<0.001 vs. no prediction 0.500). Repeated apolipoprotein-A1 and haptoglobin remained significantly higher in the DILI cases that recovered (n = 65) versus those that did not (n = 16), at inclusion, at 4-8 weeks and at 8-12 weeks. The same results were observed after stratification on APAP cases and non-APAP cases. CONCLUSIONS: We identified that apolipoprotein-A1 and haptoglobin had significant predictive values for the prediction of recovery at 12 weeks in DILI, enabling the construction of a new prognostic panel, the DILI-ActiTest, which needs to be independently validated