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Discutindo a educação ambiental no cotidiano escolar: desenvolvimento de projetos na escola formação inicial e continuada de professores
A presente pesquisa buscou discutir como a Educação Ambiental (EA) vem sendo trabalhada, no Ensino Fundamental e como os docentes desta escola compreendem e vem inserindo a EA no cotidiano escolar., em uma escola estadual do municĂpio de TangarĂĄ da Serra/MT, Brasil. Para tanto, realizou-se entrevistas com os professores que fazem parte de um projeto interdisciplinar de EA na escola pesquisada. Verificou-se que o projeto da escola nĂŁo vem conseguindo alcançar os objetivos propostos por: desconhecimento do mesmo, pelos professores; formação deficiente dos professores, nĂŁo entendimento da EA como processo de ensino-aprendizagem, falta de recursos didĂĄticos, planejamento inadequado das atividades. A partir dessa constatação, procurou-se debater a impossibilidade de tratar do tema fora do trabalho interdisciplinar, bem como, e principalmente, a importĂąncia de um estudo mais aprofundado de EA, vinculando teoria e prĂĄtica, tanto na formação docente, como em projetos escolares, a fim de fugir do tradicional vĂnculo âEA e ecologia, lixo e hortaâ.Facultad de Humanidades y Ciencias de la EducaciĂł
Untersuchung der biologischen AktivitÀt von Nanopartikeln in Tumorschnittkulturen
Die Entdeckung der RNAâInterferenz (RNAâi) als ein natĂŒrlicher Prozess der Genregulation sorgte auf Grund des möglichen Einsatzes fĂŒr therapeutische Zwecke fĂŒr groĂes Interesse. Probleme beim Transport der RNAâiâinduzierenden kleinen RNAâMolekĂŒle (siRNAs) traten vor allem hinsichtlich LadungsverhĂ€ltnissen, InstabilitĂ€t und Molekulargewicht auf. Um diese Probleme zu lösen, wurden zunehmend Transportsysteme aus Nanopartikeln untersucht. Die verwendeten Polyethylenimine (PEIs) sind positiv geladene, verzweigt oder linear aufgebaute Polymere, welche mit RNAs (siRNA, miRNA) Komplexe bilden. Modifikationen der PEIâKomâ plexe können zu einem effektiveren Transport der RNA, zu verĂ€nderten pharmakokinetischen Eigenschaften und zu einer verbesserten BiokompatibilitĂ€t fĂŒhren. Der Erfolg dieser therapeuâ tischen Nanopartikel ist insbesondere von der effizienten zellulĂ€ren Aufnahme, der FĂ€higkeit der Gewebepenetration und vom Erreichen der Zielzellen abhĂ€ngig. Der GroĂteil der bisheriâ gen Untersuchungen von PEIs wurde an Zellkulturen durchgefĂŒhrt. Die hier erzielten Ergebâ nisse lassen sich jedoch nur schwer auf komplexe inâvivoâSysteme ĂŒbertragen.
Aus diesem Grund wurde in der vorliegenden Arbeit die Anwendung der PEIs an Tumorschnittâ kulturen untersucht. DafĂŒr wurde zuerst die Kultivierung von 350 ÎŒm durchmessenden DĂŒnnâ schichtâPrĂ€paraten von XenotransplantatâTumoren aus PC3 und U87 Zelllinien etabliert. Eine erfolgreiche Kultivierung konnte ĂŒber 14 Tage durchgefĂŒhrt werden. An bestimmten Zeitâ punkten nach Kultivierungsbeginn (Tag 1, 3, 5, 7 und 14) wurden die Morphologie und die VitalitĂ€t (Apoptose, Proliferation) durch eine HEâ oder immunhistochemische FĂ€rbung beâ stimmt. Es konnte gezeigt werden, dass die Morphologie der Tumorzellen sowie die Proliferaâ tion und Apoptose ĂŒber den gesamten Kultivierungszeitraum erhalten blieben.
Im nĂ€chsten Schritt wurde sowohl der Transport der siRNA von nichtâmodifizierten und modiâ fizierten PEIs als auch der Transport durch deren LipopolyplexâDerivate (PEIâsiRNAâKomplexe mit LiposomenhĂŒlle) analysiert. FĂŒr die Visualisierung der Komplexe wurde fluoreszenzmarâ kierte siRNA verwendet. Die PEIâsiRNAâKomplexe wurden auf die Schnittkulturen gegeben und ĂŒber 24 Stunden kultiviert. In der mikroskopischen Analyse und ihrer Quantifizierung erfolgte die erste EinschĂ€tzung der Gewebepenetration. Es zeigten sich Unterschiede in der Gewebeâ penetration der verschiedenen Nanopartikel, abhĂ€ngig von deren OberflĂ€chenladung.
Um die biologische AktivitĂ€t der Nanopartikel in lebenden Zellen besser evaluieren zu können, wurde im dritten Schritt der Knockdown eines endogenen Genproduktes untersucht. Zielgen war hier das Onkogen Survivin, welches ein wichtiger endogener Ăberlebensfaktor der Tuâ morzellen darstellt. Es gelang der Nachweis eines durch PEIâsiRNAâKomplexe vermittelten Knockdowns des SurvivinâGens.
Insgesamt konnten somit Gewebeschnittkulturen als Grundlage fĂŒr die exâvivo Untersuchung von Nanopartikeln etabliert werden. Es konnten nicht nur Aussagen ĂŒber die Gewebepenetâ ration der Nanopartikel, sondern auch ĂŒber ihre biologischen AktivitĂ€ten in einer intakten Geâ webestruktur getroffen werden.:Bibliographische Beschreibung 3
1 Einleitung 5
1.1 Der Einsatz der RNA-Interferenz (RNA-i) und von Nanopartikeln in der Medizin 5
1.2 Die RNA-Interferenz 6
1.2.1 Der Prozess der RNA-Interferenz 6
1.2.2 Vor- und Nachteile der RNA-Interferenz 9
1.3 Nanopartikel als Transportsysteme der siRNA: Polyethylenimine 10
1.4 Die TransportfÀhigkeit von Polyethyleniminen und ihre Optimierung 12
1.5 Anwendung der Polyethylenimine in in-vivo-Systemen 14
1.6 PrÀklinische Tumormodelle 15
1.6.1 Zellkulturen 15
1.6.2 Xenograft-Modelle und Gewebeschnittkulturen 16
2 Fragestellung 18
3 Literatur 19
4 Publikationen 24
5 Anlagen 32
6 Zusammenfassung und Ausblick 33
7 ErklĂ€rung ĂŒber die eigenstĂ€ndige Abfassung der Arbeit 36
8 Lebenslauf 37
9 Danksagung 40
10 ErklĂ€rung ĂŒber den wissenschaftlichen Beitrag 41
11 TeilnahmebestĂ€tigung: Vorlesung zur âGuten Wissenschaftlichen Praxisâ 4
Untersuchung der biologischen AktivitÀt von Nanopartikeln in Tumorschnittkulturen
Die Entdeckung der RNAâInterferenz (RNAâi) als ein natĂŒrlicher Prozess der Genregulation sorgte auf Grund des möglichen Einsatzes fĂŒr therapeutische Zwecke fĂŒr groĂes Interesse. Probleme beim Transport der RNAâiâinduzierenden kleinen RNAâMolekĂŒle (siRNAs) traten vor allem hinsichtlich LadungsverhĂ€ltnissen, InstabilitĂ€t und Molekulargewicht auf. Um diese Probleme zu lösen, wurden zunehmend Transportsysteme aus Nanopartikeln untersucht. Die verwendeten Polyethylenimine (PEIs) sind positiv geladene, verzweigt oder linear aufgebaute Polymere, welche mit RNAs (siRNA, miRNA) Komplexe bilden. Modifikationen der PEIâKomâ plexe können zu einem effektiveren Transport der RNA, zu verĂ€nderten pharmakokinetischen Eigenschaften und zu einer verbesserten BiokompatibilitĂ€t fĂŒhren. Der Erfolg dieser therapeuâ tischen Nanopartikel ist insbesondere von der effizienten zellulĂ€ren Aufnahme, der FĂ€higkeit der Gewebepenetration und vom Erreichen der Zielzellen abhĂ€ngig. Der GroĂteil der bisheriâ gen Untersuchungen von PEIs wurde an Zellkulturen durchgefĂŒhrt. Die hier erzielten Ergebâ nisse lassen sich jedoch nur schwer auf komplexe inâvivoâSysteme ĂŒbertragen.
Aus diesem Grund wurde in der vorliegenden Arbeit die Anwendung der PEIs an Tumorschnittâ kulturen untersucht. DafĂŒr wurde zuerst die Kultivierung von 350 ÎŒm durchmessenden DĂŒnnâ schichtâPrĂ€paraten von XenotransplantatâTumoren aus PC3 und U87 Zelllinien etabliert. Eine erfolgreiche Kultivierung konnte ĂŒber 14 Tage durchgefĂŒhrt werden. An bestimmten Zeitâ punkten nach Kultivierungsbeginn (Tag 1, 3, 5, 7 und 14) wurden die Morphologie und die VitalitĂ€t (Apoptose, Proliferation) durch eine HEâ oder immunhistochemische FĂ€rbung beâ stimmt. Es konnte gezeigt werden, dass die Morphologie der Tumorzellen sowie die Proliferaâ tion und Apoptose ĂŒber den gesamten Kultivierungszeitraum erhalten blieben.
Im nĂ€chsten Schritt wurde sowohl der Transport der siRNA von nichtâmodifizierten und modiâ fizierten PEIs als auch der Transport durch deren LipopolyplexâDerivate (PEIâsiRNAâKomplexe mit LiposomenhĂŒlle) analysiert. FĂŒr die Visualisierung der Komplexe wurde fluoreszenzmarâ kierte siRNA verwendet. Die PEIâsiRNAâKomplexe wurden auf die Schnittkulturen gegeben und ĂŒber 24 Stunden kultiviert. In der mikroskopischen Analyse und ihrer Quantifizierung erfolgte die erste EinschĂ€tzung der Gewebepenetration. Es zeigten sich Unterschiede in der Gewebeâ penetration der verschiedenen Nanopartikel, abhĂ€ngig von deren OberflĂ€chenladung.
Um die biologische AktivitĂ€t der Nanopartikel in lebenden Zellen besser evaluieren zu können, wurde im dritten Schritt der Knockdown eines endogenen Genproduktes untersucht. Zielgen war hier das Onkogen Survivin, welches ein wichtiger endogener Ăberlebensfaktor der Tuâ morzellen darstellt. Es gelang der Nachweis eines durch PEIâsiRNAâKomplexe vermittelten Knockdowns des SurvivinâGens.
Insgesamt konnten somit Gewebeschnittkulturen als Grundlage fĂŒr die exâvivo Untersuchung von Nanopartikeln etabliert werden. Es konnten nicht nur Aussagen ĂŒber die Gewebepenetâ ration der Nanopartikel, sondern auch ĂŒber ihre biologischen AktivitĂ€ten in einer intakten Geâ webestruktur getroffen werden.:Bibliographische Beschreibung 3
1 Einleitung 5
1.1 Der Einsatz der RNA-Interferenz (RNA-i) und von Nanopartikeln in der Medizin 5
1.2 Die RNA-Interferenz 6
1.2.1 Der Prozess der RNA-Interferenz 6
1.2.2 Vor- und Nachteile der RNA-Interferenz 9
1.3 Nanopartikel als Transportsysteme der siRNA: Polyethylenimine 10
1.4 Die TransportfÀhigkeit von Polyethyleniminen und ihre Optimierung 12
1.5 Anwendung der Polyethylenimine in in-vivo-Systemen 14
1.6 PrÀklinische Tumormodelle 15
1.6.1 Zellkulturen 15
1.6.2 Xenograft-Modelle und Gewebeschnittkulturen 16
2 Fragestellung 18
3 Literatur 19
4 Publikationen 24
5 Anlagen 32
6 Zusammenfassung und Ausblick 33
7 ErklĂ€rung ĂŒber die eigenstĂ€ndige Abfassung der Arbeit 36
8 Lebenslauf 37
9 Danksagung 40
10 ErklĂ€rung ĂŒber den wissenschaftlichen Beitrag 41
11 TeilnahmebestĂ€tigung: Vorlesung zur âGuten Wissenschaftlichen Praxisâ 4
Optimized polyethylenimine (PEI)-based nanoparticles for siRNA delivery, analyzed in vitro and in an ex vivo tumor tissue slice culture model
A Case Report: First Long-Term Treatment With Burosumab in a Patient With Cutaneous-Skeletal Hypophosphatemia Syndrome
Epidermal nevus syndromes encompass a highly heterogeneous group of systemic
disorders, characterized by epidermal nevi, and a spectrum of neuromuscular, ocular,
and bone abnormalities. Cutaneous-skeletal hypophosphatemia syndrome (CSHS)
constitutes a specific sub-entity in which elevated levels of fibroblast growth factor-23
cause hypophosphatemic rickets that are, to date, not amenable to causal therapy. Here,
we report the first long-term follow-up of causal treatment with burosumab in a 3-year-old
female patient with CSHS. 4 weeks after initiation of burosumab treatment, serum
phosphate normalized to age-appropriate levels. Furthermore, long-term follow-up of
42 months revealed significant improvement of linear growth and gross physical functions,
including respiratory insufficiency. Radiographic rickets severity as well as subjective bone
pain were strongly reduced, and no side effects were observed over the course of
treatment. In summary, we, here, report about a successful treatment of
hypophosphatemic rickets in CSHS with burosumab over the time course of 42
months. In our patient, burosumab showed convincing efficacy and safety profile,
without any loss of effect or increase of dose
Intergenerational Relations Across 4 Years: Well-being Is Affected by Quality, Not by Support Exchange
Serum apolipoprotein A1 and haptoglobin, in patients with suspected drug-induced liver injury (DILI) as biomarkers of recovery
BACKGROUND: There is a clear need for better biomarkers of drug-induced-liver-injury (DILI).
AIMS: We aimed to evaluate the possible prognostic value of ActiTest and FibroTest proteins apoliprotein-A1, haptoglobin and alpha-2-macroglobulin, in patients with DILI.
METHODS: We analyzed cases and controls included in the IMI-SAFE-T-DILI European project, from which serum samples had been stored in a dedicated biobank. The analyses of ActiTest and FibroTest had been prospectively scheduled. The primary objective was to analyze the performance (AUROC) of ActiTest components as predictors of recovery outcome defined as an ALT <2x the upper limit of normal (ULN), and BILI <2x ULN.
RESULTS: After adjudication, 154 patients were considered to have DILI and 22 were considered to have acute liver injury without DILI. A multivariate regression analysis (ActiTest-DILI patent pending) combining the ActiTest components without BILI and ALT (used as references), apolipoprotein-A1, haptoglobin, alpha-2-macroglobulin and GGT, age and gender, resulted in a significant prediction of recovery with 67.0% accuracy (77/115) and an AUROC of 0.724 (P<0.001 vs. no prediction 0.500). Repeated apolipoprotein-A1 and haptoglobin remained significantly higher in the DILI cases that recovered (n = 65) versus those that did not (n = 16), at inclusion, at 4-8 weeks and at 8-12 weeks. The same results were observed after stratification on APAP cases and non-APAP cases.
CONCLUSIONS: We identified that apolipoprotein-A1 and haptoglobin had significant predictive values for the prediction of recovery at 12 weeks in DILI, enabling the construction of a new prognostic panel, the DILI-ActiTest, which needs to be independently validated
Attitude change in face-to-face and computer-mediated communication: private self-awareness as mediator and moderator
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