Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent TGF-β1 epithelial mesenchymal transition

An altered liver microenvironment characterized by a dysregulated extracellular matrix (ECM) supports the development and progression of hepatocellular carcinoma (HCC). The development of experimental platforms able to reproduce these physio-pathological conditions is essential in order to identify and validate new therapeutic targets for HCC. The aim of this work was to validate a new in vitro model based on engineering three-dimensional (3D) healthy and cirrhotic human liver scaffolds with HCC cells recreating the micro-environmental features favoring HCC. Healthy and cirrhotic human livers ECM scaffolds were developed using a high shear stress oscillation-decellularization procedure. The scaffolds bio-physical/bio-chemical properties were analyzed by qualitative and quantitative approaches. Cirrhotic 3D scaffolds were characterized by biomechanical properties and microarchitecture typical of the native cirrhotic tissue. Proteomic analysis was employed on decellularized 3D scaffolds and showed specific enriched proteins in cirrhotic ECM in comparison to healthy ECM proteins. Cell repopulation of cirrhotic scaffolds highlighted a unique up-regulation in genes related to epithelial to mesenchymal transition (EMT) and TGFβ signaling. This was also supported by the presence and release of higher concentration of endogenous TGFβ1 in cirrhotic scaffolds in comparison to healthy scaffolds. Fibronectin secretion was significantly upregulated in cells grown in cirrhotic scaffolds in comparison to cells engrafted in healthy scaffolds. TGFβ1 induced the phosphorylation of canonical proteins Smad2/3, which was ECM scaffold-dependent. Important, TGFβ1-induced phosphorylation of Smad2/3 was significantly reduced and ECM scaffold-independent when pre/simultaneously treated with the TGFβ-R1 kinase inhibitor Galunisertib. In conclusion, the inherent features of cirrhotic human liver ECM micro-environment were dissected and characterized for the first time as key pro-carcinogenic components in HCC development

Shared polygenic risk and causal inferences in amyotrophic lateral sclerosis

Objective To identify shared polygenic risk and causal associations in amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Methods Linkage disequilibrium score regression and Mendelian randomization were applied in a large-scale, data-driven manner to explore genetic correlations and causal relationships between >700 phenotypic traits and ALS. Exposures consisted of publicly available genome-wide association studies (GWASes) summary statistics from MR Base and LD-hub. The outcome data came from the recently published ALS GWAS involving 20,806 cases and 59,804 controls. Multivariate analyses, genetic risk profiling, and Bayesian colocalization analyses were also performed. Results We have shown, by linkage disequilibrium score regression, that ALS shares polygenic risk genetic factors with a number of traits and conditions, including positive correlations with smoking status and moderate levels of physical activity, and negative correlations with higher cognitive performance, higher educational attainment, and light levels of physical activity. Using Mendelian randomization, we found evidence that hyperlipidemia is a causal risk factor for ALS and localized putative functional signals within loci of interest. Interpretation Here, we have developed a public resource () which we hope will become a valuable tool for the ALS community, and that will be expanded and updated as new data become available. Shared polygenic risk exists between ALS and educational attainment, physical activity, smoking, and tenseness/restlessness. We also found evidence that elevated low-desnity lipoprotein cholesterol is a causal risk factor for ALS. Future randomized controlled trials should be considered as a proof of causality. Ann Neurol 2019;85:470-481Peer reviewe

Genome-wide Analyses Identify KIF5A as a Novel ALS Gene

To identify novel genes associated with ALS, we undertook two lines of investigation. We carried out a genome-wide association study comparing 20,806 ALS cases and 59,804 controls. Independently, we performed a rare variant burden analysis comparing 1,138 index familial ALS cases and 19,494 controls. Through both approaches, we identified kinesin family member 5A (KIF5A) as a novel gene associated with ALS. Interestingly, mutations predominantly in the N-terminal motor domain of KIF5A are causative for two neurodegenerative diseases: hereditary spastic paraplegia (SPG10) and Charcot-Marie-Tooth type 2 (CMT2). In contrast, ALS-associated mutations are primarily located at the C-terminal cargo-binding tail domain and patients harboring loss-of-function mutations displayed an extended survival relative to typical ALS cases. Taken together, these results broaden the phenotype spectrum resulting from mutations in KIF5A and strengthen the role of cytoskeletal defects in the pathogenesis of ALS.Peer reviewe

Advances and Insights into Neurological Practice 2016-17

Papers published by the European Journal of Neurology reflect the broad interest of practicing neurologists in advances in the aetiology, diagnosis and management of neurological disorders. As a general journal, the proportion of papers in the different subject areas reasonably reflects the case load of a practising neurologist. Stroke represents the largest proportion of papers published, including those on pathophysiology (1-23), acute stroke management (24-47) and the outcome of patients who have suffered stroke (48-72). This article is protected by copyright. All rights reserved

Analisi del polimorfismo -181A/C nel promotore del gene codificante per il trasportatore del glutammato EAAT2 come possibile fattore di rischio per la forma sporadica di Sclerosi Laterale Amiotrofica

La Sclerosi Laterale Amiotrofica (SLA), nota anche come malattia del motoneurone (MND) è una patologia progressiva con decorso fatale, caratterizzata dalla degenerazione del primo e del secondo motoneurone. La SLA è una patologia a carattere prevalentemente sporadico anche se il 10-15% dei casi mostra un’origine familiare. I meccanismi patogenetici alla base della perdita dei neuroni motori nella SLA sono ancora poco chiari, anche se l’irregolare quadro patologico è probabilmente il risultato dell’interazione di fattori ambientali e genetici. Le conoscenze attuali indirizzano verso l’ipotesi che l’eccitotossicità possa contribuire alla selettiva perdita dei motoneuroni, principalmente attraverso l’alterazione dei meccanismi del turnover del glutammato a livello sinaptico. Il glutammato è il neurotrasmettitore eccitatorio per eccellenza del sistema nervoso centrale, dove, una volta rilasciato dal terminale presinaptico è in grado di legare e, quindi, attivare recettori sia metabotropi che ionotropi (recettori AMPA, NMDA, recettori per il Kainato). L’iperattività del recettore del glutammato si traduce in una prolungata apertura dei canali ionici associati. In pazienti affetti da SLA è stato osservato un aumento dei livelli di glutammato nel plasma e nel liquido cerebrospinale. Altri studi hanno evidenziato nella corteccia motoria e nel midollo spinale di pazienti SLA, un difetto nel trasportatore del glutammato EAAT2 che potrebbe essere correlato con l’aumento dei livelli extracellulari del neurotrasmettitore. Inoltre, recenti evidenze indicano che nei motoneuroni un difetto di espressione della subunità GluR2 dei recettori ionotropici glutammatergici provocherebbe una prevalenza di attività dei recettori AMPA e quindi un eccessivo influsso di ioni calcio all’interno della cellula con effetti tossici. Tale condizione, insieme ad un difetto delle proteine leganti il calcio intracellulare, sarebbe responsabile del danno eccitotossico al motoneurone stesso. La terapia farmacologica attualmente utilizzata in pazienti SLA prevede infatti la somministrazione dell’agente anti – glutammatergico Riluzolo. Un recente studio ha dimostrato che il polimorfismo -181 A/C nel promotore del gene che codifica per il trasportatore del glutammato EAAT2 risulta essere associato ad un’elevata concentrazione di glutammato extracellulare. Lo scopo di questo lavoro di tesi è stato valutare se il polimorfismo -181A/C costituisca o meno un fattore di rischio per le forme sporadiche di SLA. Tale possibile associazione è stata verificata in un gruppo di pazienti con diagnosi di SLA rispetto ad un gruppo di controlli. Le analisi di biologia molecolare previste in questo lavoro di tesi sono state condotte con l’applicazione della tecnica “Restriction Fragment Lenght Polymorphism” (RFLP). I risultati ottenuti finora indicano che il polimorfismo -181A/C nel promotore del gene EAAT2 potrebbe rappresentare, nella SLA, un fattore di suscettibilità per lo sviluppo della malattia

Il delitto di tortura: profili storici, dogmatici e politico criminali

Questa tesi ha ad oggetto il delitto di tortura esaminato da prospettive differenti. Prima di tutto, è stata effettuata un’analisi dell’evoluzione storica dell’istituto, dall’antica Roma alla sua abolizione grazie alla profonda opera rinnovatrice operata dalla rivoluzione illuministica, passando successivamente alla sua permanenza negli ordinamenti sotto altre vesti, come ad esempio un obbligo giuridico di rispondere, ovvero come pratica illecita e sotterranea; e giungendo a forme di tortura moderne e legalizzate dagli stati, come il regime detentivo speciale del 41 bis, o le situazioni di sovraffollamento carcerario. Una seconda prospettiva, è quella comparatistica, sono state, infatti, analizzate le legislazioni in materia di tortura di alcuni paesi, quali: Francia, Germania, Inghilterra, Spagna e Belgio. In terzo luogo, si è passati all’esame dell’art 3 della CEDU e della rispettiva giurisprudenza in materia, sia esaminando i principi generali fissati dalla Corte, sia concentrandosi specificatamente sulle condanne rese nei confronti dell’Italia. Presa coscienza del percorso storico e dell’odierna cultura giuridica in materia in Europa, si è giunti, infine, allo studio degli articoli 613 bis e ter, concentrandosi specificatamente sulla struttura del reato, sulla possibilità di applicazione eventuale di cause di giustificazione e sulla loro effettività