Cinética das alterações na membrana plasmática relacionadas com a apoptose e necrose em espermatozóides bovinos em diferentes tempos de incubação

O tempo de incubação causa danos nas células espermáticas relacionados a necrose e/ou apoptose. O objetivo deste estudo foi avaliar as mudanças na membrana plasmática relacionadas a apoptose e necrose em espermatozóides bovinos durante 2 horas de incubação. Os espermatozóides foram incubados a 5% (v/v) CO2 em ar por 0, 30, 60, 90 e 120 minutes. Depois de cada periodo, as células espermáticas foram incubadas com as sondas fluorescentes Yo-pro e iodito de propideo (PI) para detectar mudanças na membrana plasmática relacionadas a apoptose e a necrose, respectivamente. Usando Yo-pro/PI assay, três subpopulações diferentes de células espermáticas são detectadas pelo citômetro de fluxo: a) células espermáticas em necrose (PI+ and Yo-pro-/+); b) células espermáticas em apoptose (Yo-pro+ and PI-) e c) células espermáticas vivas (Yo-pro- and PI-). A porcentagem de células vivas (membrana plasmática integra) significativamente diminui durante 2 horas de incubação, por outro lado, a porcentagem de espermatozóides em necrose e apoptose aumentaram durante a incubação. As mudanças na integridade da membrana plasmática foram correlacionadas com o tempo de incubação. Enquanto as células vivas foram correlacionadas negativamente com o aumento do tempo de incubação, necrose e apoptose foram correlacionadas positivamente. Também foi observado que necrose foi o principal dano causado pelo tempo de incubação nas células espermáticas. Conclui-se que o tempo de incubação causa alteração na integridade da membrana plasmática relacionadas a necrose e apoptose nas células espermáticas, sendo que necrose foi observada em maior quantidade em todos os tempos de incubação.Incubation time induce damages in sperm cells by necrosis and/or apoptosis. The aim of this study was the evaluation of changes in plasma membrane related to apoptosis and necrosis in bovine sperm cells through 2 hours of incubation. Sperm cells were incubated at 5% (v/v) CO2 in air for 0, 30, 60, 90 and 120 minutes. After each period, sperm cells were incubated with fluorescent probes Yo-pro and propidium iodide (PI) to detect change in plasma membrane related to apoptosis and necrosis respectively. Using Yo-pro/PI assay, three different subpopulations of sperm cells were detected by flow cytometry: a) necrotic sperm cells (PI+ and Yo-pro-/+); b) apoptotic sperm cells (Yo-pro+ and PI-) and c) living cells (Yo-pro- and PI-). The percentage of live cells (plasma membrane integrity) significantly decreases over 2 hour of incubation, on the other hand, the percentage of necrotic and apoptotic cells increase during incubation. Changes in plasma membrane integrity were correlated to incubation time. While live cells were negatively correlated with the increase of incubation time, necrosis and apoptosis were positively correlated. It was also observed that necrosis was the main damage in sperm cells in all incubation times. In conclusion, incubation time induces changes in plasma membrane integrity related to necrosis and apoptosis, whether necrosis is present in higher quantity in all incubation times

In vitro culture of ovine mammary gland cells expressing beta-lactoglobulin and beta-casein

The expression of milk proteins in vitro is essential to exploit the mammary gland cells as a biological model. Enzymatic tissue disaggregation has been widely used to establish mammary cell culture, but its effect in long-term ovine mammary cell culture is not completely elucidated. This study aimed at comparing mechanical/enzymatic and mechanical dissociation methods to establish ovine mammary cell culture. We compared cellular differentiation induced by lactating ewe sérum or fetal bovine serum based on the gene expression levels of milk proteins (beta-lactoglobulin, alpha s1-casein, and betacasein). Mechanically dissociated cells were positive immunostaining for cytokeratin 8.13, such as mammary epithelial cells. These cells are responsible for milk protein expression and they are low immunostaining for vimentin, mesenchymal marker. Mechanical/enzymatic dissociation cells were positive for vimentin. The fastest cell growth (cell/hour) was observed in the mechanical dissociation group cultured with 10% fetal bovine serum medium. Mechanically and mechanically/enzymatically derived cells were able to express beta-casein and beta-lactoglobulin, but not alpha s1-casein. The relative expression of beta-lactoglobulin was not affected by the tissue dissociation method or culture media, beta-casein relative expression was down regulated in mechanically dissociated cells cultured in the presence of lactating ewe serum, (P = 0.019). Beta-casein relative expression was also down regulated in mechanically/enzymatically dissociated cells cultured with fetal bovine sérum (P = 0.021). In the present conditions, we conclude that mechanical dissociation followed by culture with 10% of fetal bovine serum was the most efficient method to induce milk proteins’ mRNA expression by ovine mammary epithelial cells in vitro.A expressão in vitro de proteínas do leite e essencial para explorar as células da glândula mamaria como um modelo biológico. A desagregação tecidual via enzimática e amplamente utilizada para o estabelecimento cultivo de células mamarias. No entanto, seu efeito a longo prazo no cultivo de células da glândula mamaria ovina ainda não e bem elucidado. Este estudo tem como objetivo comparar dois métodos de dissociação tecidual, mecânico/enzimático e mecânico, para estabelecer cultivo celular de glândula mamaria ovina. A indução da diferenciação celular, por adição de soro de ovelha lactante ou soro fetal bovino, foi avaliada pelos níveis de expressão de proteínas do leite (beta-lactoglobulina, alpha s1-caseina e beta-caseína). Células mecanicamente dissociadas foram positivamente marcadas para a presença de citoqueratina 8.13, marcador para células epiteliais mamarias. Essas células são as responsáveis pela produção das proteínas do leite e são pouco marcadas para a presença de vimentina, marcador para células de origem mesenquimal. Já as células obtidas da dissociação mecânica/ enzimática foram positivamente marcadas para presença de vimentina. A maior velocidade de crescimento (células/hora) foi observado para o grupo com dissociação mecânica cultivado em meio com 10% de soro fetal bovino. As células obtidas tanto da dissociação mecânica quanto mecânica/enzimática foram capazes de expressar beta-lactoglobulina e beta-caseína, mas não alfa s1-caseina. A expressão relativa de beta-lactoglobulina não foi afetada pelo método de dissociação ou meio de cultivo. A expressão relativa da beta-caseína foi negativamente regulada para células mecanicamente dissociadas e cultivadas na presença de soro de ovelha lactante (P = 0,019). A expressão relativa da beta-caseína também foi negativamente regulada para células dissociadas de forma mecânica/enzimática e cultivadas com soro fetal bovino (P = 0,021). Nas condições do presente estudo, concluímos que o método de dissociação mecânica seguido pelo cultivo em meio com 10% de soro fetal bovino foi o método mais eficiente para induzir a expressão mRNA de proteínas do leite por células epiteliais mamarias ovinas in vitro

DELETERIOUS EFFECT OF HIGH CARNOSINE CONCENTRATIONS IN EXTENDERS DURING SPERM CRYOPRESERVATION IN DOGS / EFECTO DELETÉREO DE ALTAS CONCENTRACIONES DE CARNOSINA EN DILUYENTES DURANTE LA CRIOPRESERVACIÓN ESPERMÁTICA EN PERROS

Cryopreservation is a key process among the canine reproductive biotechnologies. However, during sperm cryopreservation an excessive reactive oxygen species (ROS) generation occurs, leading to decrease in sperm quality. Therefore, several antioxidants were tested during sperm cryopreservation to prevent such effects, however the carnosine it has not used. Carnosine is a protein present in the seminal plasma, and unlike other antioxidants has the ability to remove products of lipid peroxidation (malondialdehyde), which are as harmful as ROS. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of different carnosine concentrations, during sperm cryopreservation in dogs. For this purpose, six dogs in reproductive age were used, and after sperm collection the samples were cryopreserved in Control (tris-citrate egg yolk extender), Carnosine 1mM, 50mM and 100mM groups. After thawing samples were analyzed by computer-assisted analysis of sperm motility, plasma membrane (eosin/nigrosin), acrosome integrity (fast green/rose Bengal), mitochondrial activity, DNA integrity and sperm resistance to oxidative stress (by TBARS). Decrease was observed in motility sperm kinetics (total and progressive motility) and reduced lipid peroxidation products in the group treated with 50mM and 100mM. On the other hand, 1mM was similar to control group. In conclusion, higher carnosine concentration (50 and 100mM) apparently promoted impairment in energy production and consequently was harmful to sperm kinetics. Thus, future studies must be performed using different carnosine concentrations and in association with substrates for glycolysis and oxidative phosphorylation.RESUMENLa criopreservación es un proceso clave entre las biotecnologías reproductivas en caninos. Sin embargo, durante la criopreservación espermática se da una generación excesiva de especies reactivas de oxígeno (ROS), lo que lleva a una disminución en la calidad espermática. Por lo tanto, varios medios de congelación utilizando antioxidantes para evitar tales efectos han sido evaluados, aunque la carnosina todavía no se ha utilizada. La carnosina es una proteína presente en el plasma seminal que a diferencia de otros antioxidantes tiene la habilidad de remover productos de la peroxidación lipídica (malondialdehído), que son tan dañinos como los ROS. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de diferentes concentraciones de carnosina durante la congelación espermática en perros. Para este propósito se utilizaron seis perros en edad reproductiva y después de la colectar los eyaculados, las muestras fueron criopreservadas en un diluyente Control (tris, citrato, yema de huevo), Carnosina 1mM, 50mM y 100 mM. Después del descongelado, las muestras fueron evaluadas mediante el análisis computerizado de la motilidad, integridad de membrana plasmática (eosina / nigrosina), integridad del acrosoma (Fast - green / rosa de Bengala), la actividad mitocondrial (3’3 Diaminobenzidina), la integridad del ADN (SCSA) y la evaluación de la resistencia al estrés oxidativo (TBARS). Se observó una disminución en la cinética de los espermatozoides (motilidad total y progresiva) y una reducción de los productos de la peroxidación lipídica en los grupos tratados con 50 mM y 100mM de carnosina. Por otro lado, el grupo con 1 mM de carnosina fue similar al control. En conclusión, una alta concentración de carnosina (50 y 100mM) parece afectar la producción de energía del espermatozoide y por lo tanto es perjudicial para la cinética del espermatozoide. Por lo tanto, futuros estudios deben realizarse utilizando diferentes concentraciones de carnosina y en asociación con sustratos para la glucólisis y la fosforilación oxidativa

Complicações bucais da radioterapia em cabeça e pescoço: Oral complications of head neck radiotherapy

O câncer corresponde a um conjunto de doenças malignas que caracterizam-se pela multiplicação desordenada de células capazes de disseminar e invadir tecidos e órgãos. Dentre esse grupo de neoplasias, enquadram-se aqueles que acometem o trato aerodigestivo superior, sendo denominados de tumores em cabeça e pescoço. A presente revisão busca descrever as principais complicações imediatas e tardias inerentes ao tratamento radioterápico em cabeça e pescoço. Trata-se de uma revisão de literatura do tipo narrativa nas bases de dados da PubMed e BVS (Biblioteca Virtual em Saúde). Para a busca de artigos foram utilizados os descritores “Neoplasia oral”, “Radioterapia localizada”, “complicações” e cruzados através do operador booleano AND. Dentre as complicações imediatas ao tratamento radioterápico em cabeça e pescoço pode-se citar as mucosites, infecções fúngicas, disgeusia, trismo e xerostomia. Em contrapartida, outras alterações podem ser presentes com o decorrer do tempo, como a cárie de radiação e a osteorradionecrose (ORNM). A prevenção do câncer é uma tarefa fundamental, contudo, uma vez instalado, é de extrema importância o início da terapêutica antineoplásica o quanto antes. Inerente a este tratamento, o cirurgião-dentista é um profissional indispensável para o acompanhamento das ocorrências em cabeça e pescoço

Análise por OCT da integridade de margens restauradoras após desafio térmico

A adaptação marginal é um fator extremamente relevante na determinação da longevidade das restaurações dentárias. A vedação inadequada pode levar a inúmeras consequências. Sendo assim, o presente trabalho busca avaliar a integridade das margens de restaurações mésio-ocluso-distais em resina composta após envelhecimento por ciclagem térmica através da tomografia por coerência óptica (OCT). Foram confeccionadas cavidades mésio-ocluso-distais em 30 pré-molares humanos extraídos, distribuídos em 3 grupos para restauração em resina composta: Zirconfill (Technew), Luna (SDI) e Aura Bulk Fill (SDI). Após 24h de armazenamento em água destilada, foi realizado acabamento nas restaurações, polimento e seguiram mais 24h na água. A ciclagem foi realizada com 2.000 ciclos de imersão em água com temperatura de 5°C (± 3°C) e 55°C (± 3°C), por 15 segundos cada. Os espécimes foram analisados em OCT (OQ Labscope, Lumedica), com obtenção de imagens a cada 250 m, antes e após a ciclagem. Todos os grupos sofreram aumento e agravamento das falhas de interface dente/restauração após o estresse térmico; esses dados foram confirmados pelo teste de Kruskal-Wallis para os grupos Zirconfill e Aura Bulk Fill (p<0,0001), e pelo teste ANOVA para o grupo Luna (p<0,0001). Todavia, o grupo Aura Bulk Fill apresentou melhor desempenho quando comparada a frequência de defeitos nas margens restauradoras antes e após ciclagem. A ciclagem térmica foi determinante para o surgimento/agravamento de falhas nas margens restauradas. A Aura Bulk Fill apresentou melhor desempenho

Search for new particles in events with energetic jets and large missing transverse momentum in proton-proton collisions at root s=13 TeV

A search is presented for new particles produced at the LHC in proton-proton collisions at root s = 13 TeV, using events with energetic jets and large missing transverse momentum. The analysis is based on a data sample corresponding to an integrated luminosity of 101 fb(-1), collected in 2017-2018 with the CMS detector. Machine learning techniques are used to define separate categories for events with narrow jets from initial-state radiation and events with large-radius jets consistent with a hadronic decay of a W or Z boson. A statistical combination is made with an earlier search based on a data sample of 36 fb(-1), collected in 2016. No significant excess of events is observed with respect to the standard model background expectation determined from control samples in data. The results are interpreted in terms of limits on the branching fraction of an invisible decay of the Higgs boson, as well as constraints on simplified models of dark matter, on first-generation scalar leptoquarks decaying to quarks and neutrinos, and on models with large extra dimensions. Several of the new limits, specifically for spin-1 dark matter mediators, pseudoscalar mediators, colored mediators, and leptoquarks, are the most restrictive to date.Peer reviewe

Combined searches for the production of supersymmetric top quark partners in proton-proton collisions at root s=13 TeV

A combination of searches for top squark pair production using proton-proton collision data at a center-of-mass energy of 13 TeV at the CERN LHC, corresponding to an integrated luminosity of 137 fb(-1) collected by the CMS experiment, is presented. Signatures with at least 2 jets and large missing transverse momentum are categorized into events with 0, 1, or 2 leptons. New results for regions of parameter space where the kinematical properties of top squark pair production and top quark pair production are very similar are presented. Depending on themodel, the combined result excludes a top squarkmass up to 1325 GeV for amassless neutralino, and a neutralinomass up to 700 GeV for a top squarkmass of 1150 GeV. Top squarks with masses from 145 to 295 GeV, for neutralino masses from 0 to 100 GeV, with a mass difference between the top squark and the neutralino in a window of 30 GeV around the mass of the top quark, are excluded for the first time with CMS data. The results of theses searches are also interpreted in an alternative signal model of dark matter production via a spin-0 mediator in association with a top quark pair. Upper limits are set on the cross section for mediator particle masses of up to 420 GeV

Probing effective field theory operators in the associated production of top quarks with a Z boson in multilepton final states at root s=13 TeV

Peer reviewe

Measurement of the W gamma Production Cross Section in Proton-Proton Collisions at root s=13 TeV and Constraints on Effective Field Theory Coefficients

A fiducial cross section for W gamma production in proton-proton collisions is measured at a center-of-mass energy of 13 TeV in 137 fb(-1) of data collected using the CMS detector at the LHC. The W -> e nu and mu nu decay modes are used in a maximum-likelihood fit to the lepton-photon invariant mass distribution to extract the combined cross section. The measured cross section is compared with theoretical expectations at next-to-leading order in quantum chromodynamics. In addition, 95% confidence level intervals are reported for anomalous triple-gauge couplings within the framework of effective field theory.Peer reviewe