Estudio de los efectos causados por el VDVB y el HVB en células presentadoras de antígeno mediante modelos experimentales in vivo e in vitro

The impairment of the immune system arisen during bovine viral diarrhea virus (BVDV) infections is one major paradigm of the immunology in the modern research of cattle diseases. In this sense, several efforts are being conducted to elucidate the complex mechanisms used by BVDV to evade the host immune response. Although BVDV is not a primary agent in the pathogenesis of bovine respiratory disease complex (BRDC), its suppressive effects on the host immune system can increase the risk of secondary infections, thus enhancing pulmonary colonization by other pathogens. Consequently, the general objective of this work was to contribute to the knowledge of the immunopathogenic strategies by which BVDV infections enhance the susceptibility to secondary infections, as those produced by bovine herpesvirus type 1 (BHV-1). Due to the important effects that viral pathogens can induce on the immune system, this work was firstly focused on a cell type of outstanding relevance for the immune system, the dendritic cells (DC), which are the most effective antigenpresenting cells (APC), and modulates both innate and adaptive immune responses. The absence of a solid literature detailing DC marker candidates for cattle gave rise to the first objective, focused on finding potential DC markers for the bovine species, standardize their immunohistochemical protocol and describe their histological distribution, in order to establish a basis for the study of DCs in diseased tissues (CHAPTER 1). For this purpose, paraffin wax-embedded tissues from 6 healthy Friesian calves were subjected to immunohistochemical studies and the most appropriate protocols were studied for each of the following primary antibodies: MHC-II, CD208, CD1b, CD205, CNA.42 and S100. Despite labeling other APCs, MHC-II expression was established as the most sensitive marker for detecting any DC of hematopoietic origin in bovine tissue sections. Both CNA.42 and anti-S100 antibodies stained stromal FDCs, but only the latter allowed for the identification of FDCs as isolated cells. Cells stained against...El deterioro del sistema inmunológico que surge durante las infecciones con el virus de la diarrea vírica bovina (VDVB) es uno de los principales paradigmas de la inmunología en la investigación actual de las enfermedades del vacuno. En este sentido, se están llevando a cabo numerosos esfuerzos para dilucidar los complejos mecanismos utilizados por el VDVB para evadir la respuesta inmune del hospedador. Aunque el VDVB no es un agente primario en la patogénesis del complejo respiratorio bovino (CRB), sus efectos supresores sobre el sistema inmune del hospedador pueden aumentar el riesgo de infecciones secundarias, potenciando así la colonización pulmonar por otros patógenos. En consecuencia, el objetivo general de este trabajo fue contribuir al conocimiento de las estrategias inmunopatógenas mediante las cuales, infecciones con el VDVB aumentan la susceptibilidad a infecciones secundarias, como las producidos por el herpesvirus bovino tipo 1 (HVB-1). Debido a los importantes efectos que los patógenos virales pueden inducir sobre el sistema inmune, este trabajo se centró en primer lugar en un tipo de células de excepcional relevancia para el sistema inmune, las células dendríticas (CDs), que son las células presentadoras de antígeno (CPA) más eficaces y modulan las respuestas inmunitarias tanto innatas como adaptativas. La ausencia de una literatura sólida que detalle candidatos marcadores de CDs para bovino dio lugar al primer objetivo, centrado en encontrar marcadores potenciales de CDs para la especie bovina, estandarizar su protocolo inmunohistoquímico y describir su distribución histológica, con el fin de establecer una base para el estudio de las CDs en tejidos patológicos (CAPÍTULO 1). Para este propósito, tejidos incluidos en parafina de 6 terneros frisones sanos fueron sometidos a técnicas inmunohistoquímicas y se estudiaron los protocolos más apropiados para cada uno de los siguientes anticuerpos primarios: MHC-II, CD208, CD1b, CD205, CNA.42 y S100..

Pathogenic mechanisms implicated in the intravascular coagulation in the lungs of BVDV-infected calves challenged with BHV-1

Resistance to respiratory disease in cattle requires host defense mechanisms that protect against pathogens which have evolved sophisticated strategies to evade them, including an altered function of pulmonary macrophages (MΦs) or the induction of inflammatory responses that cause lung injury and sepsis. The aim of this study was to clarify the mechanisms responsible for vascular changes occurring in the lungs of calves infected with bovine viral diarrhea virus (BVDV) and challenged later with bovine herpesvirus type 1 (BHV-1), evaluating the role of MΦs in the development of pathological lesions in this organ. For this purpose, pulmonary lesions were compared between co-infected calves and healthy animals inoculated only with BHV-1 through immunohistochemical (MAC387, TNFα, IL-1α, iNOS, COX-2 and Factor-VIII) and ultrastructural studies. Both groups of calves presented important vascular alterations produced by fibrin microthrombi and platelet aggregations within the blood vessels. These findings were earlier and more severe in the co-infected group, indicating that the concomitance of BVDV and BHV-1 in the lungs disrupts the pulmonary homeostasis by facilitating the establishment of an inflammatory and procoagulant environment modulated by inflammatory mediators released by pulmonary MΦs. In this regard, the co-infected calves, in spite of presenting a greater number of IMΦs than single-infected group, show a significant decrease in iNOS expression coinciding with the presence of more coagulation lesions. Moreover, animals pre-inoculated with BVDV displayed an alteration in the response of pro-inflammatory cytokines (TNFα and IL-1), which play a key role in activating the immune response, as well as in the local cell-mediated respons

El tejido linfoide asociado a mucosas como blanco del virus de la diarrea vírica bovina: estructura y función

Las tonsilas, al igual que otros tejidos linfoides asociados a mucosas como las placas de Peyer del intestino delgado, debido a su localización, se presentan como la puerta de entrada de numerosos agentes patógenos, y por sus características estructurales e inmunológicas, protegen los tractos respiratorios y digestivos de los antígenos que son constantemente inhalados e ingeridos. En los bovinos, distintos agentes patógenos replican en las tonsilas en las primeras fases de la infección, destacando virus como el de la diarrea vírica bovina (vDVB). En rumiantes jóvenes, las placas de Peyer ileales son responsables de la generación de la mayoría de células B, habiéndose especulando con su posible papel como órgano linfoide primario ya que, al igual que ocurre con el timo, también involuciona a edades jóvenes. El tejido linfoide asociado a mucosas se presenta como el principal lugar de replicación del vDVB, siendo además la localización en la que se producen las lesiones más importantes en el transcurso de esta enfermedad, dando lugar a una intensa depleción linfoide que se traduce, a nivel sistémico, en una marcada leucopenia. Por este motivo y con el fi n de profundizar en los mecanismos patogénicos del vDVB, es necesario estudiar y comprender en profundidad tanto la estructura como las funciones inmunológicas de estos tejidos linfoides

BVDV permissiveness and lack of expression of co-stimulatory molecules on PBMCs from calves pre-infected with BVDV

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) has been detected in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of immunocompetent animals, not being clear whether the development of a specific humoral immune response can prevent BVDV infection. The aim of this study was to evaluate the ability of non-cytopathic BVDV to replicate and produce infectious virus in PBMCs from calves pre-infected with BVDV and to elucidate the immunomodulatory effect of BVDV on these cells in an in vitro model. Quantification of virus was by quantitative PCR, while its replicative capacity and shedding into the extracellular environment was evaluated by viral titration. Apoptosis was assessed by flow cytometry analysis of annexin V and propidium iodide, and by expression of caspase-3/7. Flow cytometry was used to analyze the expression of CD14/CD11b/CD80, CD4/CD8/CD25, MHC-I/MHC-II and B-B2 markers. Our results showed that PBMCs from cattle naturally infected with BVDV were more susceptible to in vitro BVDV infection and showed a more severe apoptosis response than those from na\uefve animals. Non-cytopathic BVDV in vitro infection also resulted in a lack of effect in the expression of antigen presentation surface markers. All these findings could be related to the immunosuppressive capacity of BVDV and the susceptibility of cattle to this infection

Funciones y clasificación de las células dendríticas

Las células dendríticas (CDs) son leucocitos que juegan un importante papel tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa, siendo las células presentadoras de antígeno más potentes que existen y con la capacidad única de activar linfocitos T colaboradores que no han tenido contacto antigénico previo. No sólo son importantes en la regulación de respuestas inmunógenas efectivas, sino también en la inducción de fenómenos de tolerancia inmunológica, necesarios para evitar la aparición de procesos autoinmunes. Tras la captación y procesamiento de los antígenos, las CDs se dirigen principalmente a los órganos linfoides, donde se produce la presentación de antígenos a los linfocitos T, proceso en el cual no sólo es necesaria la interacción del CMH-II con el receptor de linfocitos T sino también la interacción de otras moléculas accesorias como las moléculas coestimuladoras y las moléculas de adhesión. Las CDs son células de una gran plasticidad funcional y que van a caracterizarse por su diferente localización en el organismo, su estado de madurez y su origen. En este último aspecto, cabe destacar las importantes diferencias funcionales entre las células dendríticas foliculares (CDF) de origen estromal y las clásicas CDs de origen hematopoyético, que van a derivar a su vez de progenitores mieloides o linfoides y que van a clasificarse de manera distinta según la especie estudiada

Mecanismos inductores y vías de la apoptosis en la diarrea vírica bovina

La apoptosis es una forma de muerte celular inducida por una gran variedad de estímulos, considerada como el resultado final de una cascada en la que intervienen una serie de enzimas denominadas caspasas, inducidas tanto por estímulos externos como internos. Entre éstas destacan las denominadas caspasas iniciadoras (2, 8, 9 y 10) y las caspasas ejecutoras o efectoras (3, 6 y 7). Existen dos vías principales reguladoras de la apoptosis: la vía extrínseca, inducida y mediada por receptores, la cual se inicia cuando un ligando apropiado se une a receptores de muerte localizados en la superficie celular, de modo que estas uniones ligando-receptor hacen que los dominios de muerte celular intracelulares y su unión a ciertas proteínas del citosol activen a las caspasas iniciadoras de esta vía (pe: caspasa 8), y la vía intrínseca o mitocondrial, gobernada por proteínas de la familia del Bcl-2 que agrupa un grupo de moléculas involucradas en la permeabilidad de la mitocondria, pudiéndose distinguir entre moléculas anti-apoptóticas y pro-apoptóticas. El desequilibrio en la expresión de estas moléculas incrementa la permeabilidad de la membrana mitocondrial, favoreciendo la liberación de proteínas al citosol y la activación de las caspasas iniciadora de esta vía (pe: caspasa 9). Una vez activadas las caspasas iniciadoras, éstas ejercerán su actividad proteolítica sobre las denominadas caspasas efectoras o ejecutoras (3, 6 y 7), las cuales, una vez activadas ejecutarán la muerte de forma irreversible. Junto a aspectos generales relacionados con los mecanismos y vías de la apoptosis, en este trabajo se abordan aspectos relacionados con dichos mecanismos en el transcurso de la diarrea vírica bovina, donde la apoptosis parece ser la responsable de la depleción linfoide y la leucopenia que caracterizan a esta enfermedad

Productions and technical knowledge in the Early Neolithic in Catalonia

The development of the economic activities inherent to the establishment of Neolithic farming activities entails an increasing technical specialization. This is often visible through the exploitation of specific resources, the development of suitable techniques for the manufacture of consumption goods as well as new ways of using and consuming them. We briefly present the main features of the technical productions carried out by the first Neolithic populations in the northeast of Iberia, trying to characterize the technical knowledge spent on all of them and making their signs of specialization clear.[FR] Le développement des activités économiques inhérent à l’implantation des activités agricoles et d’élevage du Néolithique entraîne une spécialisation technique croissante. Cela se traduit souvent par l’exploitation de ressources spécifiques, le développement de techniques appropriées pour la fabrication de biens de consommation, et de nouvelles façons de les utiliser et de les consommer. Nous présentons brièvement les principales caractéristiques des productions techniques réalisées par les premières populations néolithiques du nord-est de la péninsule ibérique, en essayant de caractériser les connaissances techniques dépensées dans chacune d’elles et en mettant en évidence leurs indications de spécialisation

A Single-Run Next-Generation Sequencing (NGS) Assay for the Simultaneous Detection of Both Gene Mutations and Large Chromosomal Abnormalities in Patients with Myelodysplastic Syndromes (MDS) and Related Myeloid Neoplasms

Chromosomal abnormalities and somatic mutations are found in patients with myelodysplastic syndromes (MDS) and myelodysplastic/myeloproliferative neoplasms (MDS/MPN) in around 50-80% of cases. The identification of these alterations is important for the accurate diagnosis and prognostic classification of these patients. Often, an apparently normal or failed karyotype might lead to an inadequate estimation of the prognostic risk, and several strategies should be combined to solve these cases. The aim of this study was to introduce a novel next-generation sequencing (NGS)-based strategy for the simultaneous detection of all the clinically relevant genetic alterations associated with these disorders. We validated this approach on a large cohort of patients by comparing our findings with those obtained with standard-of-care methods (i.e., karyotype and SNP-arrays). We show that our platform represents a significant improvement on current strategies in defining diagnosis and risk stratification of patients with MDS and myeloid-related disorders. Myelodysplastic syndromes (MDS) and myelodysplastic/myeloproliferative neoplasms are clonal disorders that share most of their cytogenetic and molecular alterations. Despite the increased knowledge of the prognostic importance of genetics in these malignancies, next-generation sequencing (NGS) has not been incorporated into clinical practice in a validated manner, and the conventional karyotype remains mandatory in the evaluation of suspected cases. However, non-informative cytogenetics might lead to an inadequate estimation of the prognostic risk. Here, we present a novel targeted NGS-based assay for the simultaneous detection of all the clinically relevant genetic alterations associated with these disorders. We validated this platform in a large cohort of patients by performing a one-to-one comparison with the lesions from karyotype and single-nucleotide polymorphism (SNP) arrays. Our strategy demonstrated an approximately 97% concordance with standard clinical assays, showing sensitivity at least equivalent to that of SNP arrays and higher than that of conventional cytogenetics. In addition, this NGS assay was able to identify both copy-neutral loss of heterozygosity events distributed genome-wide and copy number alterations, as well as somatic mutations within significant driver genes. In summary, we show a novel NGS platform that represents a significant improvement to current strategies in defining diagnosis and risk stratification of patients with MDS and myeloid-related disorder

Measurement of 73 Ge(n,γ) cross sections and implications for stellar nucleosynthesis

© 2019 The Author(s). Published by Elsevier B.V.73 Ge(n,γ) cross sections were measured at the neutron time-of-flight facility n_TOF at CERN up to neutron energies of 300 keV, providing for the first time experimental data above 8 keV. Results indicate that the stellar cross section at kT=30 keV is 1.5 to 1.7 times higher than most theoretical predictions. The new cross sections result in a substantial decrease of 73 Ge produced in stars, which would explain the low isotopic abundance of 73 Ge in the solar system.Peer reviewe

Estado actual de la investigación arqueometalúrgica prehistórica en la provincia de Málaga

The lack of data on prehistoric metallurgical activities in Málaga made local prehistorians think that all the metal artefacts recovered in the province were of non-local origin. As a result of a project funded by the Junta de Andalucía, new data have been collected and we can begin to outline the development and socioeconomic importance that metal technologies have in different parts of Málaga throughout prehistory.La práctica inexistencia de datos sobre actividades metalúrgicas prehistóricas en Málaga y el vacío investigador que sobre este aspecto existía en la provincia habían creado un estado de opinión entre los prehistoriadores locales tendente a considerar como de origen extraprovincial la totalidad de los artefactos metálicos prehistóricos recuperados. Como resultado de un proyecto subvencionado por la Junta de Andalucía, estos datos que faltaban comienzan ahora a ser recuperados, y se puede empezar a trazar un esbozo general del desarrollo e importancia socieconómica que este grupo de tecnologías tuvieron en los diversos ambientes geográficos de la provincia de Málaga durante la prehistoria