Strategies for T-cell reconstruction : insights from human clinical models

Tese de doutoramento, Ciências Biomédicas (Ciências Biopatológicas), Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2010The thymus is essential for both the establishment of the peripheral T cell pool and the generation of the diverse T cell receptor (TCR) repertoire capable of dealing with new pathogens and controlling the escape of persistent infections. In humans, the thymus is almost fully developed at birth, with the rate of T cell production markedly decreasing after puberty. However, it is now clear that this central lymphoid organ plays an essential role in the lifetime “de novo” generation of T cells. The maintenance of naïve T cells is currently thought to depend upon a combination of peripheral T cell proliferation as well as to an age-dependent contribution of recent thymic emigrants. The overall aim of this work was to investigate the relative roles of the thymus and the “periphery” in the maintenance/recovery of the human T cell compartment through the study of specific clinical models. FOXN1 is a transcription factor, expressed by thymic epithelium, crucial for both the development of the thymus and prevention of its involution. Defects in FOXN1 in mice lead to athymia in association with total alopecia, due to its additional role in hair follicle differentiation (“nude-SCID mice”). Human FOXN1 deficiency was first reported by Pignata et al. in two sisters from Italy that, despite the evidence of athymia, exhibited a significant number of circulating T cells. We identified the same homozygous R255X mutation in a Portuguese child, who presented at 5 months of age with alopecia, respiratory failure due to Bacillus Calmette-Guérin (BCG) dissemination following routine neonatal BCG vaccination, and circulating T cells of non-maternal origin at close to normal numbers. The first aim of this work was to investigate the T cell population generated in the presence of FOXN1 deficiency. Circulating T cells were equally distributed between CD4, CD8 and, strikingly, an abnormally increased population of TCR αβ+ cells that expressed neither CD4 nor CD8 (double-negative, DNαβ), which usually represent less than 1% of the peripheral T cell pool. T cells were non-naïve, oligoclonal, activated, and unable to proliferate in vitro. The thymus is known to produce a regulatory CD4 T cell subset (Treg), with suppressive properties, fundamental for preventing autoimmunity. Currently they are best identified by expression of the forkhead box P3 transcription factor FoxP3. Notably, more than 40% of the CD4 subset expressed high levels of FoxP3 and had a clear regulatory-like T cell (Treg) phenotype. Thus, human FOXN1-deficiency due to R255X mutation was associated with significant numbers of oligoclonal T cells suggesting that, to a certain extent, T cell development still occured, albeit with altered positive/negative selection, as illustrated by the aberrant expansion of FoxP3+ and DN subsets. As FOXN1 mutations impact on thymic epithelium rather than hematopoietic precursors, we predicted that thymic transplantation, although never performed before in this setting, could be a curative strategy. This was confirmed by the documentation of the clinical efficacy of HLA-mismatched thymic transplantation, as attested by the temporal association between the clearance of the ongoing BCG adenitis and the development of specific responses against mycobacterium antigens. Our study of the kinetics of establishment of the T cell pool after HLA mismatched thymic transplantation provides unique data regarding the dynamics of replenishment of the immune system. A progressive increase of naive (antigen non-experienced cells) T cells was also observed, resulting in the generation of a fully diverse CD4 T cell repertoire in spite of the HLA-mismatched thymic epithelia. Reconstitution of the Treg pool occurred in parallel to that of the CD4 subset, leading to stable frequencies within the normal range. Thymic Treg development is currently thought to be dependent upon a small developmental niche that tightly controls Treg output. It is thus possible that FOXN1 plays a role in such niches, contributing to the thymic regulation of Treg numbers. In contrast, a significant population of circulating DNαβ persisted, at relatively stable frequencies (17% of αβ T cells) and phenotype, throughout 5yrs of follow-up. Although the possibility that DNαβ T cells are long-lived cells generated pretransplant cannot be excluded, it is also plausible that their persistence may reflect a continuous production of this population by a putative thymic rudiment. The functionality of the allogeneic thymic graft was further estimated by sj/βTREC quantification; a ratio between early and late products of TCR rearrangements that was shown to represent an indirect measurement of thymocyte division-rate, and a direct correlate of thymic output. A progressive increase of the sj/βTREC ratio was observed, reaching levels comparable to those found in healthy children. Importantly, a sharp decline of sj/βTREC, accompanied by a decrease in the proportion of naïve cells was observed 4yrs post-transplant. Notably, these values plateaued thereafter, suggesting that steady-state equilibrium could be established after replenishment of the immune system. Importantly, our data showed that immunocompetence can be achieved through HLA-mismatched thymic transplantation, despite the lack of a sustained thymocytedivision rate (as evidenced by sj/βTREC). These novel data regarding the long-term sustainability of allogeneic thymic tissue and the immunological reconstitution achieved have implications for the design of immune-based therapeutic strategies to be used in other clinical settings. Recent studies suggested the possibility of a thymic rebound as a compensatory feedback loop triggered by emptiness of the peripheral T cell pool, particularly in HIV infection. The cytokine IL-7 has been highlighted as a possible factor in this process. IL- 7 has also a central role in peripheral T cell homeostasis. The IL-7 driven peripheral T cell proliferation/survival is thought to be able to compensate any putative thymic impairment resulting either directly from HIV infection, or from the heightened state of immune-activation that characterizes HIV disease. In fact, the persistent immune stimulation, and the consequent T cell anergy and susceptibility to apoptosis, are considered key determinants of CD4 decline and AIDS progression. The second specific aim of this work was to investigate the interplay of these pathways during HIV/AIDS. The originality of this study mainly resulted from the definition of the cohorts under investigation. HIV-1+ patients with discordant responses to ART (ART-Discordants, poor CD4 recovery despite suppression of viremia) were compared with HIV-2+ patients that exhibited a similar degree of CD4- depletion and reduced circulating virus in the absence of ART. Untreated HIV-1+ patients who are expected to have high viremia, as well as HIV-1+ patients under ART with successful virological and immunological responses were studied in parallel. Low CD4-counts were associated with major naïve CD4 and CD8 depletion, irrespective of type of infection or ART-exposure. Several pathways were likely to contribute to the CD4-count stability and low rate of opportunistic infections documented in ART-Discordants in spite of their presumed thymic impairment, namely lower levels of T cell activation and a better ability to use IL-7 as indicated by the expression levels of the IL-7 induced, anti-apoptotic molecule, Bcl-2. Our third specific aim was based on the study of an individual with chronic granulomatous disease (CGD), a primary defect in the phagocytic oxidative burst, who, despite being HIV negative, presented CD4 T cell depletion at levels similar to those found in advanced AIDS patients. CGD represents the most prevalent (1:200000 live births) primary phagocytic defect. This 32-year-old patient, presenting with typical CGD-associated infections, had a CD4 lymphopenia of less than 200 cells/l, for more than 16 years. Although there are previous reports of diminished T cell numbers in CGD patients, these studies did not include phenotypic and functional T cell analysis. We found a generalized immune activation, in conjunction with markers of increased cell-turnover, including a reduced telomere length of both the CD4 and CD8 subsets, and expansion of terminally-differentiated effector CD8 T cells. Additionally a marked loss of naïve T cells was found, with evidence of impaired thymic production as assessed by sj/βTREC ratio, despite the increased IL-7 levels. This immunological profile has been considered a risk for infections, and was shown to be an independent predictor of death in aged subjects. Therefore, it is worth considering this putative exhaustion of immune resources in the evaluation of long-term therapeutic strategies, including stem-cell transplantation, given the increasing life-expectancy of CGD patients. Overall, our data provide evidence that, although immunodeficiency may be associated with profound lymphocyte disturbances, different pathways can be exploited to achieve immunological competence. The characterization of these pathways in human models is of importance for the definition and design of new strategies for immune reconstitution.O timo é o orgão linfóide primário que tem por função a produção de células T. A actividade tímica decresce progressivamente com a idade, mas, apesar de ocorrer uma clara involução do timo na puberdade, está claramente demonstrada a produção “de novo” de células T até depois dos 60 anos. Esta é considerada essencial para assegurar um repertório do receptor de células T (TCR) suficientemente diverso para responder a qualquer novo agente patogénico e capaz de prevenir a emergência de estirpes resistentes em infecções crónicas como a infecção HIV/SIDA. O compartimento periférico de células T é assim mantido não só pela proliferação linfocitária nos órgãos linfoides secundários mas também pela entrada contínua de novas células produzidas no timo. Este trabalho tem por objectivo investigar o contributo relativo do timo e da periferia para a homeostasia e reconstituição do compartimento de células T através do estudo de imunodeficiências. O FOXN1 é um factor de transcrição expresso pelo epitélio do timo essencial para o seu desenvolvimento e também recentemente implicado na prevenção da involução tímica. Mutações no gene FOXN1 no ratinho associam-se a ausência de timo e a alopécia total, devido ao papel adicional deste na diferenciação dos folículos pilosos (“nude-SCID mice”). Os primeiros casos de mutação do FOXN1 foram descritos por Pignata et al em duas irmãs da Sicília que apesar da evidência de atímia, apresentavam um número significativo de células T circulantes. Identificámos a mesma mutação homozigótica R255X numa criança Portuguesa com alopécia total a quem foi diagnosticada, aos 5 meses de idade, disseminação do Bacillus Calmette-Guérin (BCG) após vacinação perinatal de rotina com BCG. Nesta altura, apresentava um número de células T circulantes próximo do normal que não tinham origem materna. Assim, o primeiro objectivo do trabalho consistiu no estudo da população de células T gerada na presença de deficiência de FOXN1. As células T circulantes distribuíam-se igualmente entre as subpopulações CD4, CD8 e, aberrantemente, a subpopulação T de células com TCR αβ que não exprimem nem CD4 nem CD8 (duplas-negativas, DNαβ), que são geralmente inferiores a 1%. As células T apresentavam marcadores de memória e activação; eram oligoclonais e não proliferavam após estimulação in vitro. O timo produz também uma população de células T reguladoras (Treg) que representam cerca de 5% da subpopulação CD4, com propriedades supressoras, fundamental para a prevenção de autoimunidade, identificadas pela expressão do factor de transcrição “forkhead box P3” (FoxP3). No presente caso, mais de 40% das células CD4 circulantes expressavam altos níveis de FoxP3 e um fenótipo claramente supressor. Assim, a deficiência de FOXN1 devida à mutação R255X associa-se à presença de células T oligoclonais sugerindo a existência de manutenção de desenvolvimento de linfócitos T, embora com alterações da selecção positiva/negativa ilustrada pela expansão aberrante de células FoxP3+ e DNαβ. Uma vez que o defeito se restringia ao epitélio tímico, era plausível que o transplante tímico pudesse ser uma estratégia curativa apesar de ser actualmente uma terapia experimental nunca anteriormente usada neste contexto. Observou-se uma progressiva recuperação imunológica após o transplante tímico realizado aos 14 meses de idade, ilustrada pela associação temporal entre a documentação de respostas T específicas ao BCG e a resolução da adenite persistente. O estudo da cinética de estabelecimento do compartimento de células T após transplante de timo com um grau elevado de incompatibilidade HLA representa um contributo único para a compreensão da dinâmica de reconstituição do sistema imunitário. Observou-se uma reconstituição progressiva das células T naïve exibindo uma diversidade do repertório conservada apesar da incompatibilidade HLA do epitélio tímico. O estabelecimento da população Treg teve uma cinética semelhante às células CD4 mantendo níveis normais. Dados recentes sugerem que o desenvolvimento da população Treg no timo está dependente de um pequeno “nicho” que controla o número de células produzidas. É plausível especular que o FOXN1 desempenhe um papel nestes “nichos” e contribua para a regulação do número de Treg. Em contraste, observou-se a persistência da população DNαβ ao longo dos 5 anos de seguimento, sugerindo uma produção mantida eventualmente num possível rudimento tímico associado à mutação FOXN1. A função do enxerto tímico alogénico foi ainda estimada pela quantificação do sj/βTREC, um rácio entre produtos precoces e tardios do rearranjo do TCR no timo, que representa uma medida indirecta do número de divisões intra-tímicas e que se correlaciona directamente com a produção tímica. O rácio sj/βTREC atingiu níveis comparáveis aos observados em crianças saudáveis. No entanto, 4 anos póstransplante, documentou-se um declínio marcado do rácio sj/βTREC suportando uma diminuição da actividade do enxerto. Apesar disso, observou-se apenas uma pequena redução seguida de estabilização das células T naive, sugerindo que após reconstituição do sistema imunitário a homeostasia periférica consegue assegurar a manutenção da população T naive. Assim, os nosso dados demonstram que é possível adquirir competência imunológica com transplante tímico independentemente da compatibilidade HLA, mesmo na ausência de sustentabilidade do enxerto sugerida pela diminuição do rácio sj/βTREC, o que tem implicações para o desenvolvimento de novas estratégias de reconstituição imunológica noutros contextos clínicos. Estudos recentes sugerem um aumento compensatório da actividade tímica em resposta a uma diminuição do compartimento de linfócitos T. Tem sido atribuído um papel à citocina IL-7 neste processo para além dos seus efeitos na proliferação homeostática das células T na periferia. A infecção pelo HIV está associada a uma perda progressiva de células T CD4, sendo ainda controversa a capacidade do timo de compensar esta perda bem como de promover a reconstituição desta população após terapêutica antiretroviral (ART) em doentes infectados pelo HIV-1. Por outro lado, os efeitos periféricos da IL-7 podem minimizar a possível redução da actividade tímica quer devida à infecção directa dos timócitos pelo HIV quer mediada pela hiperactivação generalizada associada à infecção. De facto, a activação persistente do sistema imunitário, com a consequente anergia e aumento da susceptibilidade à apoptose, é considerada determinante na progressão para SIDA. O segundo objectivo deste trabalho foi investigar a relação destas vias na infecção HIV/SIDA. A originalidade deste estudo residiu na comparação de doentes infectados pelo HIV-2, que mesmo na ausência de terapêutica antiretroviral têm virémia reduzida, com indivíduos infectados pelo HIV-1 com supressão terapêutica da virémia e diferentes graus de recuperação das células T CD4. A comparação com doentes infectados pelo HIV-1 não tratados e, portanto, com elevada virémia, permitiu concluir que a linfopénia CD4 se associa a uma perda de células T naive, quer CD4 quer CD8, independentemente do tipo de infecção ou exposição à ART. Nos doentes HIV-1+ tratados com ausência de recuperação das contagens CD4 apesar de resposta virológica, várias estratégias parecem contribuir para suster o declínio das células T CD4 e proteger de infecções oportunistas, nomeadamente: menores níveis de activação imunológica e uma melhor utilização da IL-7 atestada pelo aumento dos níveis intracelulares de Bcl-2, uma molécula anti-apoptótica induzida pela IL-7. O terceiro objectivo deste trabalho baseou-se no estudo de um doente com Doença Granulomatosa Crónica (CGD) e uma linfopénia CD4 persistente na ausência de infecção pelo HIV. A CGD constitui a deficiência fagocitária primária mais frequente (1:200000 nascimentos) e é causada por defeitos na capacidade oxidativa fagocitária. Este doente de 32 anos, com uma clínica de infecções tipicamente associadas à CGD, apresentou contagens de células T CD4 inferiores 200 células/l durante mais de 16 anos. O estudo efectuado revelou uma activação linfocitária generalizada, com diferenciação efectora terminal dos linfócitos T CD8 e uma redução da dimensão dos telómeros das subpopulações T, sugerindo um turnover celular aumentado devido a uma estimulação persistente do sistema imunitário. Além disso, observou-se uma depleção marcada das células T naive, com evidência de diminuição da timopoeise estimada pelo rácio sj/βTREC, apesar dos níveis elevados de IL-7 sérica. Este perfil imunológico tem sido associado a um risco elevado de infecções e sido considerado um factor preditivo de morte em indivíduos com idade avançada. O aparente esgotamento dos recursos imunológicos é particularmente relevante tendo em conta o aumento de esperança de vida dos doentes com CGD, devendo ser considerado na definição de indicações terapêuticas, incluindo transplante de células hematopoiéticas. Em conclusão, este trabalho demonstra que diferentes vias podem ser exploradas para atingir competência imunológica mesmo na presença de profundas alterações linfocitárias. O seu estudo baseado em modelos humanos é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias de reconstituição imunológica.O trabalho aqui apresentado foi co-financiado pelo POCI 2010 e o FSE. Bolsa de Doutoramento da Fundação para a Ciência e a Tecnologia (referência: SFRH / BD / 29392 / 2006

Síntese, estrutura e magnetismo de nanoestruturas magnéticas : ferrita NiZn e ferrita NiZn - sílica

Orientador: Edson Bittencourt, Waldemar Augusto de Almeida MacedoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia QuimicaResumo: Neste trabalho, foram investigadas rotas não convencionais para a síntese, de maneira controlada, de partículas nanométricas de ferrita NiZn estequiométrica (Nio.5Zno.5Fe204). pura e embebida em matriz de sílica (Nío.sZno^O-iX (Si02)i-x. Duração e fluorescência de raios X, espectroscopia de absorção de raios X (EXAFS), espectroscopia Mõssbauer de 57Fe e magnetometria de amostra vibrante foram utilizadas no estudo das correlações entre as propriedades estruturais e magnéticas de tais materiais nanoestruturados. Pós ultrafinos de ferrita de NiZn de alta homogeneidade foram preparados pela coprecipitação de nitratos metálicos, promovida por NaOH, seguida de tratamento térmico entre 300 e 1350° C. As amostras obtidas apresentaram diâmetro médio de partículas (D) entre 5 e 150 nm. EXAFS foi particularmente empregada no acompanhamento da evolução da cristalinídade das amostras de ferrita NiZn após diferentes tratamentos térmicos. Os resultados de EXAFS para as bordas K de absorção do Ni. Zn e Fe indicaram que a ferrita NiZn apresenta estrutura bem ordenada para tratamentos térmicos do precipitado inicial a temperaturas a partir de 400° C. Os resultados de espectroscopia Mõssbauer revelaram o comportamento superparamagnético da ferrita nanoestruturada, sendo que foram determinados os parâmetros hiperfinos para os diferentes tamanhos médios de partículas, tanto a temperatura ambiente como a 100 K. Foram obtidas magnetização de saturação entre 13 e 80 emu/g e valor máximo de coercividade igual a 87 Oe, para diâmetros médios em torno de 40 nm, indicando que nesta região ocorre a transição monodomínio/ multidomínio para o material em questão. Os sólidos granulares nanoestruturados Nio.sZno sFe204 - SÍO2, com fração volumétrica e diâmetro médio das partículas de ferrita variando entre 6 e 78% e 6 e 92 nm, respectivamente, foram obtidos por processamento sol-gel, a partir de nitratos metálicos e de alcóxido de silício, seguido de tratamentos térmicos entre 800 e 1100° C. Para teores de ferrita NiZn a partir de 41%, foi constatada a formação de pequena fração de Fe2Ü3. Resultados Mõssbauer evidenciaram o comportamento superpamiagnético das nanopartículas ferrimagnéticas de ferrita NiZn em sílica, sendo que os parâmetros hiperfinos medidos são bastante próximos aos apresentados pela ferrita NiZn pura. Foram determinados valores de magnetização de saturação entre 2 e 68 emu/g e coercividade de até 140 Oe, sendo tal valor de coercividade duas ordens de grandeza maior do que aquele apresentado pela ferrita NiZn, em volumeAbstract: Non-conventional routes for the controlled synthesis of nanoraetric particles of stoichiometric NiZn-ferrite (Ni> sZnp 5Fe204), pure and embedded in silica-matrix (Nio 5ZN0 5Fe204)x (Si02)i* have been investigated, and X-ray diffraction, S7Fe Mdssbauer spectroscopy, EXAFS and vibrating sample magnetometry were applied to study the correlation between the structural and magnetic properties of the obtained nanostructured materials. Ultrafine, highly homogeneous NiZn-ferrite powders have been prepared by metallic nitrates coprecipitation, promoted by NaOH and followed by annealing at temperatures ranging from 300 to 1300° C. The obtained samples presented average particles diameter between 5 and 150 nm. EXAFS was mainly applied in the samples after the different heat treatments to follow the crystallinity of NiZn-ferrite. Results obtained from the Ni, Zn and Fe K-edge absorption spectra show that NiZn-ferrite has a well ordered structure after annealing starting from 400° C. Mfissbauer results revealed superparamagnetic behaviour of nanostructured ferrite and allowed the determination of the hyperfrne parameters, at room temperature and 100K, for the different average particles diameter. Our samples have show saturation magnetization ranging from 13 to 80 emu/g and maximal coercivity of 87 Oe for an average diameter near 40 run, suggesting a transition from monodomain to multidomain behaviour close to these particles size. Nanosctructured granular Nio.sZNo 5Fe2CV SiO? composite with ferrite nominal volumetric fraction and average particles diameter ranging from 6 to 78% and 6 to 92 nm, respectively, have been prepared by sol-gel processing, starting from metallic nitrates and TEOS, followed by annealing between 800 and 1100° C. Small amounts of Fe203 were also observed starting from 41% NiZn-ferrite. Mossbauer results show the superparamagnetic behaviour of the ferrimagnetic ferrite nanoparticles in silica and the hyperfrne parameters were found to be very close to that obtained for pure NiZn-ferrite. The composite samples presented saturation magnetization between 2 and 68 emu/g and coercivity as high as 140 Oe, two orders of magnitude higher than the bulk valueDoutoradoCiencia e Tecnologia de MateriaisDoutor em Engenharia Químic

O HABEAS DATA ENQUANTO GARANTIDOR DO DIREITO FUNDAMENTAL DE ACESSO À INFORMAÇÃO PERSONALÍSSIMA

Este artigo apresenta os resultados de uma investigação teórica a respeito da proteção jurídica do direito fundamental de acesso às informações personalíssimas, direito à intimidade e a vida privada, promovendo sua efetivação por meio da garantia constitucional do habeas data, definida a sua área de aplicação, nos moldes do artigo 5°, inciso LXXII, da Constituição Federal. Partindo da constatação de que ao longo da história brasileira o direito de acesso à informação foi dilacerado, ante a ausência de limitação do Poder Público por parte dos cidadãos na defesa de seus direitos, como meio de difundir a promoção dos direitos e garantias individuais e coletivos, o presente estudo expõe em leves pinceladas a origem histórica deste remédio constitucional, como também sua definição sob a ótica da legislação e da doutrina vigentes, além de tratar da competência para propositura do writ, do procedimento específico e do preenchimento da condição da ação, especialmente pela negativa por ação ou omissão do coator pela via administrativa. É nesse sentido que esse trabalho busca contribuir, trazendo as peculiaridades atinentes ao tema e ampliando o conhecimento da legislação constitucional e ordinária em vigor no ordenamento jurídico brasileiro, acessível a todo e qualquer possível impetrante que tenha negado o pedido de acesso, anotação, retificação ou contestação sobre dados próprios contidos em bancos de dados público ou particular de caráter público

AS OBRAS PARA OS MEGAEVENTOS NO BRASIL E AS DESOCUPAÇÕES FRENTE AO PRINCÍPIO DA DIGNIDADE DA PESSOA HUMANA, EXPRESSO COMO DIREITO SOCIAL A MORADIA NA CONSTITUIÇÃO BRASILEIRA

O princípio da dignidade da pessoa humana está mais presente em nosso texto legal do se pode perceber, é impossível deixar de percebê-lo mesmo porque sua menção é direta no artigo primeiro da Constituição. Entretanto, apesar de sua menção no texto legal basilar dessa nação, frente a obras de infraestrutura para os megaeventos, que ocorrerão entre 2014 e 2016, como é o caso da copa, esse mesmo princípio básico do respeito ao ser humano passa a ser desrespeitado em nome da construção de estruturas que em nada tem contribuído para o respeito à população pobre desse país. Como consequência dessa falta de planejamento, já tão corriqueira, no que diz respeito a obras públicas no Brasil, temos ainda o problema gerado pelas remoções, aonde o direito a moradia digna tem sido violentamente desrespeitado em nome desses eventos e suas obras, originando problemas como a exclusão das comunidades carentes e a violência em decorrência dessa exclusão

A implantação e implementação de uma hemeroteca digital em Ciência da Informação: algumas considerações sobre o Harvester in Library and Information Science – HILIS

Objetivo. Abordar a implantação e implementação de uma hemeroteca digital de periódicos de acesso livre da área de Ciência da Informação e transversais, de cobertura global, utilizando o software Open Harvester System e as possibilidades OAI-PMH. Para tanto, foram esboçados conceitos sobre o Acesso livre, Open Archive Initiative – Protocol for Metadata Harvesting, Public Knowledge Project e seus softwares Open Journal Systems e Open Harvester System. Metodologia. Como aportes metodológicos, procurando descrever e justificar as etapas de seleção de provedores de dados (periódicos) e da configuração do servidor de serviço (hemeroteca digital), denominado “Harvester in Library and Information Science (HiLIS)”, valemo-nos do ponto de vista qualitativo, exploratório, pesquisa ação e bibliográfica. Resultado. Os resultados obtidos propiciaram a sistemática e a política de desenvolvimento da coleção, a caracterização do HiLIS, e sua configuração quanto a entrada de dados, agrupamento de elementos de metadados Dublin Core, MARC, MODS e ETD-MS, as características da coleção e as modalidades de recuperação de informação. Conclusão. Assim, em nossas considerações finais, esboçamos algumas melhorias a serem implementadas e apontamos estudos futuros de ordem métrica para o conhecimento produzido na Ciência da Informação

A implantação e implementação de uma hemeroteca digital em Ciência da Informação: algumas considerações sobre o Harvester in Library and Information Science – HILIS

Objetive. This study aims to discuss the insertion and implementation of a Open Access digital scientific journal library for Information Science and related fields, with global coverage, using the Open Harvester System and OAI-PMH possibilities. For such concepts were planned concepts about the Acesso livre, Open Archive Initiative - Protocol for Metadata Harvesting, Public Knowledge Project and its software Open Journal Systems and Open Harvester System.Methodology. As methodological contribution the qualitative, exploratory, action research and bibliographic points-of-view were used, attempting to describe and justify the data providers (journals) and service server configuration (digital scientific library) selection, named “Harvester in Library and Information Science (HiLIS)”.Results. As results were presented the systematics and politics of collection development, the characterization of HiLIS and its configuration regarding data input, grouping of Dublin Core, MARC, MODS and ETD-MS element metadata, and the collection’s characteristics and the information recovery modes.Conclusion. The final considerations discuss some improvements to be implemented and future measurement studies for the knowledge produced in Information Science.Objetivo. Abordar la implantación e implementación de una hemeroteca digital de revistas científicas de acceso libre del área de Ciencia de la Información y transversales, de cobertura global, utilizando el software Open Harvester System y las posibilidades del OAI-PMH. Por ello fueron esbozados conceptos sobre el Acceso libre, Open Archive Initiative – Protocol sea Metadata Harvesting, Public Knowledge Project y sus softwares Open Journal Systems y Open Harvester System.Metodología. Como aportes metodológicos, busca describir y justificar las etapas de seleção de proveedores de datos (revistas científicas) y de la configuración del servidor de servicio (hemeroteca digital), denominado “Harvester in Library and Information Science (HiLIS)”, valemo-nos del punto de vista cualitativo, exploratório, investiga @ação y bibliográfica.Resultado. Los resultados obtenidos propiciaron la @sistemático y la política de desarrollo de la @coleção, la caracterización del HiLIS, y su configuración en cuanto a entrada de datos, agrupación de elementos de metadados Dublin Core, MARC, MODS y ETD-MS, las características de la @coleção y las modalidades de recuperación de información.Conclusión. Así, en nuestras consideraciones finales, esbozamos algunas mejorías a ser implementadas y apuntamos estudios futuros de orden métrica para el conocimiento producido en la Ciencia de la Información.Objetivo. Abordar a implantação e implementação de uma hemeroteca digital de periódicos de acesso livre da área de Ciência da Informação e transversais, de cobertura global, utilizando o software Open Harvester System e as possibilidades OAI-PMH. Para tanto, foram esboçados conceitos sobre o Acesso livre, Open Archive Initiative – Protocol for Metadata Harvesting, Public Knowledge Project e seus softwares Open Journal Systems e Open Harvester System.Metodologia. Como aportes metodológicos, procurando descrever e justificar as etapas de seleção de provedores de dados (periódicos) e da configuração do servidor de serviço (hemeroteca digital), denominado “Harvester in Library and Information Science (HiLIS)”, valemo-nos do ponto de vista qualitativo, exploratório, pesquisa ação e bibliográfica.Resultado. Os resultados obtidos propiciaram a sistemática e a política de desenvolvimento da coleção, a caracterização do HiLIS, e sua configuração quanto a entrada de dados, agrupamento de elementos de metadados Dublin Core, MARC, MODS e ETD-MS, as características da coleção e as modalidades de recuperação de informação.Conclusão. Assim, em nossas considerações finais, esboçamos algumas melhorias a serem implementadas e apontamos estudos futuros de ordem métrica para o conhecimento produzido na Ciência da Informação

Canine Mammary Neoplasms - Evaluation of Tumor Microenvironment

Background: The tumor microenvironment is an important target of studies in different types of neoplasms. Understanding the role of general components such as immune, vascular and fibroblastic cells has the objective of contributing to prognosis and treatment. The aim of this study was to evaluate the relationship between mast cells and angiogenesis in benign and malignant mammary neoplasms by investigating the role of degranulation and microlocation of mast cells and neoformed vessels in canine mammary neoplasms.Materials, Methods & Results: Mammary glands (n = 122) from 50 female dogs submitted to mastectomy without chemotherapy were evaluated and categorized into 3 groups: control group (n = 46); malignant group (n = 57) and benign group (n = 19). Lymph nodes without changes (n = 59) and with metastases (n = 6) were also evaluated. To evaluate the MCD (mast cell density) and angiogenesis, Toluidine Blue (0.1%) and Gomori’s Trichrome techniques were performed and adapted from previous studies. Photomicrographs of 10 hotspot areas on a 40x objective lens of the mammary glands and lymph nodes were captured to assess MCD and angiogenesis. In the absence of these areas, random fields were captured. For the mammary glands of the malignant and benign groups, 20 fields were analyzed, as the analysis considered the microlocation (peritumoral and intratumoral). Counting was performed manually using ImageJ software version 1.42q by 2 observers. The statistical analysis were performed using SPSS software version 19.0. The most frequent histological type in the malignant group was carcinoma in mixed tumor (68.42%; 39/57) and in the benign group was benign mixed tumor (57.89%; 11/19). Female dogs without breed pattern were more frequently affected represented 70% of the animals and the mean age was 9 years and 8 months ± 3 years and 1 month. The granulated density of mast cells and peritumor vessels was higher in the malignant group (P = 0.03; P = 0.02). There was also a positive correlation between intratumor and total vessel density and mast cell density. There was no significance between the malignant and benign groups in regard with fibrosis density.Discussion: In this study were observed a greater density of blood vessels in malignant group, suggesting the participation of blood vessels for neoplastic proliferation. Furthermore, these vessels were located in the peritumoral region as in previous studies. The positive correlation between MCD and blood vessels was similar to a previous study performed in canine breast carcinomas and breast cancer in women. Regarding microlocation, another study also found higher MCD in the peritumoral region than in the intratumoral region of canine carcinomas. Although there are already studies for this purpose in cases of oral squamous cell carcinoma in humans, we believe this is the first study to investigate the role of mast cell degranulation in mammary neoplasm of bitches. The MCD was not significant among the malignant and benign groups and in the mammary glands of the control group the MCD was higher, as observed by other studies. Future studies should be associated the survival time and the presence of metastases in order to confirm the findings. In view of these findings, we may conclude that a higher density of mast cells is related to a higher density of blood vessels and that these are more abundant in malignant neoplasms, which reinforces the crucial role of angiogenesis in the neoplastic development.Keywords: tumor microenvironment, mammary tumor, mast cells, angiogenesis, bitches

Role of Nitric Oxide Synthase in the Function of the Central Nervous System under Normal and Infectious Conditions

Nitric oxide (NO) was discovered as an endothelium‐derived relaxing factor more than two decades ago. Since then, it has been shown to participate in many pathways. NO has been described as a key mediator of different pathways in the central nervous system (CNS) in both healthy and diseased processes. The three isoforms of nitric oxide synthase differ in their activity patterns and expression in different cells. Neuronal nitric oxide synthase (nNOS) is localized in synaptic spines, astrocytes, and the loose connective tissue surrounding blood vessels in the brain; eNOS is present in both cerebral vascular endothelial cells and motor neurons; and iNOS is induced in astrocytes and microglia under pathological conditions. During physiological processes, NO produced by eNOS/nNOS, respectively, controls blood flow activation, and act as a messenger during long‐term potentiation (LTP). However, under pathological conditions, eNOS appears to be impaired, leading to a reduction in blood flow and, consequently, low oxygen/metabolites delivery, efflux of toxicological agents from the brain tissue and disturbance in the blood‐brain barrier. The NO produced by iNOS in glial cells and nNOS, which triggers the NMDA‐excitotoxic pathway, combines with superoxide anion and results in peroxynitrite synthesis, a potent free radical that contributes to tissue damage in the brain. Here, we intend to show the controversial role of the nitric oxide delivered by the three isoforms of the nitric oxide synthase in the CNS, assess its impact under healthy/pathological conditions and speculate on its possible sequela, particularly in long‐term cognitive decline

EXPERIÊNCIAS DE EXTENSÃO NA PROMOÇÃO À SAÚDE MENTAL DAS JUVENTUDES EM ÂMBITO ACADÊMICO

Os projetos de extensão “Vai dar bom: juventudes na trilha do bem viver” e “Permane(Ser): você não está só”, desenvolvido respectivamente nos anos de  2019 e 2022, tiveram como objetivo promover a saúde mental dos estudantes do ensino médio e superior, pertencentes à comunidade interna e externa do IFCE - Campus Iguatu, através de intervenções capazes de minimizar o sofrimento psíquico advindo do cotidiano, especialmente, da vivência acadêmica. Sendo assim, este artigo tem o intuito de apresentar as principais características e vivências desses projetos de extensão, bem como, as ações interventivas e os principais resultados e dificuldades encontradas. Para isso, também, será necessário construir breve fundamentação teórica a respeito das expressões do sofrimento psíquico das juventudes na contemporaneidade. Além de anunciar os argumentos e dados que justificaram a concretização desses projetos de extensão

Diagnostic accuracy of multiorgan point-of-care ultrasound compared with pulmonary computed tomographic angiogram in critically ill patients with suspected pulmonary embolism

Background: Critically ill patients have a higher incidence of pulmonary embolism (PE) than non-critically ill patients, yet no diagnostic algorithm has been validated in this population, leading to the overuse of pulmonary artery computed tomographic angiogram (CTA). This study aimed to comparatively evaluate the diagnostic accuracy of point-of-care ultrasound (POCUS) combined with laboratory data versus CTA in predicting PE in critically ill patients. Methods: A prospective diagnostic accuracy study. Critically ill patients with suspected acute PE undergoing CTA were prospectively enrolled. Demographic and clinical data were collected from electronic medical records. Blood samples were collected, and the Wells and revised Geneva scores were calculated. Standardized multiorgan POCUS and CTA were performed. The discriminatory power of multiorgan POCUS combined with biochemical markers was tested using ROC curves, and multivariate analysis was performed. Results: A total of 88 patients were included, and 37 (42%) had PE. Multivariate analysis showed a relative risk (RR) of PE of 2.79 (95% CI, 1.61-4.84) for the presence of right ventricular (RV) dysfunction, of 2.54 (95% CI, 0.89-7.20) for D-dimer levels >1000 ng/mL, and of 1.69 (95% CI, 1.12-2.63) for the absence of an alternative diagnosis to PE on lung POCUS or chest radiograph. The combination with the highest diagnostic accuracy for PE included the following variables: 1- POCUS transthoracic echocardiography with evidence of RV dysfunction; 2- lung POCUS or chest radiograph without an alternative diagnosis to PE; and 3- plasma D-dimer levels >1000 ng/mL. Combining these three findings resulted in an area under the curve of 0.85 (95% CI, 0.77-0.94), with 50% sensitivity and 96% specificity. Conclusions: Multiorgan POCUS combined with laboratory data has acceptable diagnostic accuracy for PE compared with CTA. The combined use of these methods might reduce CTA overuse in critically ill patients