Método para la cuantificación fluoirimétrica de la enzima LDH en disolución

Número de publicación: ES2527796 A1 (29.01.2015) También publicado como: ES2527796 B1 (10.11.2015) Número de Solicitud: Consulta de Expedientes OEPM (C.E.O.) P201300775 (29.07.2013)La invención está dirigida al desarrollo de un método y creación de un kit para la cuantificación del efecto citotóxico y/o viabilidad celular ante agentes químicos (elemento, compuesto, mezcla o fármaco en cualquier de sus estados) y/o físicos (i.e. iluminación, temperatura, turbulencia, fluidodinámica, etc.) que puedan producir rotura de la membrana celular. El kit mide la liberación de la enzima citoplasmática lactato deshidrogenasa (LDH) proveniente de células muertas y/o lisadas. Esta enzima cataliza la oxidación del lactato, presente en el kit, a piruvato. Durante la reacción, el NAD+, también presente en el kit, es reducido a NADH. La concentración de LDH, se cuantifica a través de la fluorescencia del NADH formado. Las mediciones indirectas de la enzima LDH se realizan en el sobrenadante de cultivos celulares. El método es aplicable tanto en medios inorgánicos para microalgas como en medios comerciales para células animales y de insecto.Universidad de Almerí

Efecto citotóxico de hipoclorito de sodio y EDTA sobre células madre de pulpa dental

Introducción. La presente investigación surge de la importancia que implica la irrigación en relación a la regeneración del complejo dentino-pulpar. En la actualidad, una gran cantidad de artículos han enfocado sus objetivos en el efecto antibacteriano de soluciones irrigantes, sin embargo, son pocas las investigaciones que evalúan el efecto de dichas soluciones sobre las células madre presentes en la pulpa dental. Objetivo. Evaluar el efecto citotóxico de hipoclorito de sodio y EDTA sobre células madre de pulpa dental in vitro. Materiales y métodos. Se utilizaron Células madre de pulpa dental cortesía de la Unidad de Odontología Integral y Especialidades del Centro de Investigación y Desarrollo en Ciencias de la Salud. Para la evaluación de la citotoxicidad, se utilizó la solución de EDTA a concentraciones de 1.7%, 1%, 0.5% y 0.1% y NaOCl al 0.25%, 0.15%, 0.1% y 0.5% por triplicado. Ambas moléculas (EDTA y NaOCl) se incubaron con las células a 37° C, 5% de CO2 en una atmosfera a 95% de humedad durante 3 y 24 horas. Los controles negativos fueron incubados con PBS. Resultados. En los resultados se observó una alta toxicidad del NaOCl frente a las DPSCs a 3 y 24 horas de exposición. Así mismo se observó que la combinación del NaOCl y el EDTA no disminuyó el efecto citotóxico sobre las células, a excepción de la combinación de EDTA .1% + NaOCl .05% la cual presentó un ligero aumento en la viabilidad celular. Por otra parte, todas las concentraciones evaluadas de la solución de EDTA fueron menos toxicas cuando se incubaron durante 3 y 24 horas frente a las células. Conclusiones. De acuerdo a los resultados observados en el presente estudio podemos concluir lo siguiente: el NaOCl presentó alta citotoxicidad en todas sus concentraciones a las 3 y 24 horas de exposición, el EDTA presentó una mayor viabilidad a las 3 y 24 horas cuando se utilizó al 0.5% y 0.10%, la combinación del EDTA y NaOCl resultó menos citotóxica cuando se utilizó al 0.1% y 0.5% respectivamente a las 3 horas de exposición

Toxicity assessment of polycyclic aromatic hydrocarbons: the importance of the use of complementary methods

Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (HAPs) e seus derivados Halogenados (HHAPs) são conhecidos como um conjunto de contaminantes ambientais, classificados como potencialmente tóxicos, mutagénicos e carcinogénicos, sendo um assunto de extrema importância e preocupação para a saúde pública. Diversos estudos têm reportado o potencial efeito tóxico destes compostos após longos períodos de exposição, pelo uso de métodos colorimétricos como o ensaio de brometo de 3-[4,5- dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e vermelho neutro. Contudo, apesar de estes métodos clássicos de avaliação da citotoxicidade in vitro permitirem, de forma rápida, identificar as propriedades nocivas dos compostos, não permitem compreender os mecanismos moleculares subjacentes responsáveis pela sua toxicidade. Deste modo, no presente estudo, para avaliar os efeitos à exposição aos compostos Pireno (Pir) e seu derivado resultante da desinfeção de águas por bromação, 1-BromoPireno (1-BrPir), foram utilizados outros métodos complementares como avaliação do stress oxidativo e vários fenómenos associados à morte celular programada. Os resultados obtidos comprovam não só a existência de efeitos citotóxicos dos poluentes quando acumulados, como também possíveis efeitos genotóxicos. Assim, pelos métodos complementares, foi possível a identificação de alvos moleculares passiveis de ação farmacológica, o que pode constituir o primeiro passo para o desenho de estratégias terapêuticas que visem prevenir ou tratar os danos provocados por estes poluentes no Homem.Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs) and their halogenated derivatives (HPAHs) are known as a set of environmental contaminants classified as potentially toxic, mutagenic and carcinogenic, being a matter of utmost importance and concern to public health. Several studies have reported the potential toxic effects of these compounds after long periods of exposure by the use of colorimetric methods such as 3-(4,5-dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and neutral red. Nonetheless, despite these classic in vitro cytotoxicity assays allow, in a faster way, the identification of the harmful properties of the compounds, they fail in elucidating the underlying molecular mechanisms responsible for their toxicity. Taking into account these mentioned aspects, in the present work, other complementary methods were used in order to evaluate the effects of the exposure to Pyrene (Pyr) and to a brominated-pyrene derivative (resulted from water disinfection), 1-BromoPyrene (1-BrPyr). Effectively, by the evaluation of the oxidative stress and programmed cell death induced by PAHs it was not only possible to verify the cytotoxic effects of PAHs when accumulated but also their potential genotoxic effects. In conclusion, through the use of other tests than the classic cytotoxicity assays, it was possible to identify potential druggable molecular targets which can be the first step towards the development of new therapeutic strategies either to prevent or treat the damage caused by these compounds in Humans.Este trabalho foi desenvolvido no âmbito do projeto RECI/QEQMED/ 0330/2012, financiado pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT)

Determinacion de factores de virulencia, antigeno capsular K1 (gen neuC) y factor citotoxico necrotizante-1 (gen cnfl) en cepas de Escherichia coli aisladas de secreciones vaginales

39 p.Las infecciones vaginales son en la actualidad un problema recurrente en las mujeres fértiles, siendo ocasionadas por microorganismos tanto anaerobios como aerobios. Escherichia coli es un emergente agente etiológico de esta patología, por lo cual es importante comenzar con el estudio de sus factores de virulencia. Lo anterior podría contribuir al establecimiento de un nuevo fenogenotipo de Escherichia coli causante de infecciones vaginales. Se sabe que el antígeno capsular K1 gen (neuC) y el factor citotóxico necrotizante-1 gen (cnf1) actúan sinérgicamente en otros patotipos de E. coli. En esta tesis se estableció la presencia de ambos factores de virulencia a través de amplificación por PCR de los genes respectivos. Los resultados de este estudio indican que un 64.9 % de las cepas estudiadas no presentan ninguno de los genes investigados y un porcentaje inferior al 2.7 % expresa ambos factores de virulencia. Con relación a las cepas positivas para alguno de los 2 factores de virulencia, se observa que el antígeno capsular K1 se manifiesta en un 18.9%, mientras que un 13.5% de las cepas fue positiva para el factor citotóxico necrotizante 1. A partir de los datos anteriores, se puede determinar la existencia de una diferencia estadísticamente significativa entre los factores de virulencia de estas cepas de origen vaginal, predominando así las cepas con antígeno capsular K1 dentro del conjunto de cepas positivas para alguno de los dos genes estudiados

Comparative study on myelotoxic and antineoplastic action of Synadenium umbellatum, Vitis vinifera and Resveratrol

Cancer is one of the pathologies that most challenge medicine, not only because of the complexity of its development, but also because of the difficulty of treatment that is not always effective. Due to the significant toxicity and adverse effects profile presented by the main chemotherapeutic agents used to treat neoplasm, there is a constant interest in the search for new drugs that may be a more effective alternative. Therefore, the search for new compounds of plant origin becomes an interesting tool for the discovery of drugs with antitumor activity. Synadenium umbellatum is a plant native to tropical Africa known as “cola-nota”, “hazel”, “cancerous”, “miraculous”, among others. The plant is used by the Brazilian population as having anti-inflammatory, analgesic, antineoplastic properties, among others. However, the literature is lacking on reports of the toxicity of Synadenium umbellatum macerate. Resveratrol is a polyphenolic compound found in different plant species, mainly in grape species (Vitis) and their seeds. Vitis vinifera is a species of grape easily found in several regions, also containing a high concentrations of phenolic compounds, including resveratrol in its fruits, leaves and seeds. Therefore, this study was aimed to evaluate the myelotoxicity of macerate, extract and resveratrol and their antitumor activity in Balb/c mice with Ehrlich tumor. The hematological evaluation was obtained by flow cytometry and the tumors were measured using a pachymeter and the tumor masses by means of weighing. No statistically significant difference was observed between results from the control group and the treatment groups. It was concluded that macerate, crude extract and resveratrol did not demonstrate a myelotoxic effect and did not cause a decrease in tumor mass1928086sem informaçã

Complexos Organometálicos: caracterização preliminar de compostos de vanádio e de moléculas libertadoras de CO como potenciais fármacos

Vários complexos metálicos têm sido explorados visando uma melhoria de atuais tratamentos das mais variadas doenças. Os compostos de vanádio apresentam uma capacidade de mimetizar a ação da insulina, insurgindo-se assim como uma aposta no tratamento da doença Diabetes mellitus. O monóxido de carbono (CO), outrora visto como apenas um agente tóxico, atualmente é explorado pelas suas capacidades anti-inflamatórias, tendo-se desenvolvido moléculas libertadoras de CO, os CORMs, de modo a tirar partido dos seus efeitos biológicos. Com vista a determinar a formação de aductos entre os complexos organometálicos de vanádio e diferentes proteínas e caracterizar o tipo de interação estabelecida recorreu-se à Cristalografia de raios-X. A estrutura cristalográfica do aducto VOIV(picolinato)2–tripsina bovina foi obtida a 1,09 Å de resolução, mostrando o complexo VOIV(pic)2 no centro ativo da enzima, coordenado à cadeia lateral da serina catalítica (Ser195), numa geometria octaédrica. Ensaios cinéticos preliminares realizados com o complexo VO(pic)2 foram efetuados para determinar potenciais efeitos inibitórios na atividade das enzimas lisozima da clara do ovo (HEWL) e tripsina. O potencial terapêutico dos CORMs associado à Nanotecnologia foi explorado para o [Ru(CO)3Cl(glicinato)] (CORM-3), visando desenvolver nanopartículas de ouro (AuNPs) funcionalizadas com o composto e diferentes proteínas. A toxicidade celular direta do CORM-3, bem como alguns potenciais efeitos biológicos de CORM-3–albumina de soro humano (BSA) e CORM-3–HEWL foram também avaliados, recorrendo a ensaios de viabilidade celular , riscados celulares, e RT-qPCR em várias linhas celulares tumorais e linha primária de fibroblastos humanos. Foi possível iniciar o desenvolvimento de nanosistemas de AuNPs@PEG@BSA e AuNPs@PEG@HEWL, seguindo-se futuramente a conjugação com o CORM-3. Não foi possível determinar o efeito anti-inflamatório do CORM-3 e seus conjugados através da análise dos genes de resposta por RT-qPCR em tempo real, no entanto determinou-se que o composto CORM-3 não possui toxicidade em linhas celulares tumorais, e que aparenta fomentar a regeneração celular em fibroblastos e células tumorais NINA, sendo este efeito potenciado aquando conjugação com BSA

Determinación de parámetros de deshidratación de la hoja de Guanábana (Annona muricata) en la presentación de cápsulas mediante pruebas microbiológicas

Esta tesis ha sido desarrollada con la finalidad de determinar parámetros óptimos de deshidratación (Tiempo y Temperatura) de la hoja de Guanábana (Annona muricata) para elaborar una cápsula de harina de hoja de guanábana deshidratada para el consumo humano ya que tiene propiedades anticancerígenas cumpliendo con todos los requerimientos sanitarios. La temperatura y tiempo óptimo del proceso de deshidratación de la hoja de guanábana (Annona muricata) para su aceptación microbiológica, es 65°C y 4.00 horas respectivamente, en estas condiciones se logró obtener un producto inocuo apto para el consumo humano, según los resultados microbiológicos de los parámetros mohos y enterobacteriaceas, que se encuentran por debajo de los límites máximos permisibles para estos tipos de productos según la NTS N°071-MINSA/DIGESA.V.014 (Norma sanitaria que establece los criterios microbiológicos de calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y bebidas de consumo humano). Asimismo, en estas condiciones la hoja de guanábana deshidratada no llego perder sus características físicas y organolépticas. El costo de cada cápsula de hoja de guanaba (Annona muricata) deshidratada es de S/.4.96, siendo ello razonable y aceptable por los consumidores

Prevalencia de gonococo y clamidia en gestantes de segundo y tercer trimestre que consultan a urgencias de obstetricia del HOMIC en un lapso de 5 meses

Teniendo en cuenta la vulnerabilidad y la alta prevalencia de ITS en la población de militares en servicio activo, que está amplia mente descrita y documentada en artículos a nivel mundial, es de esperar que este tipo de infecciones sean transmitidas a sus parejas causando complicaciones cuando estas se embarazan y posteriormente en los recién nacidos.por lo tanto establecimos la prevalencia de gonococo y clamidia en la población gestante de II y III trimestre que consultaron al HOMIC en un lapso de 5 meses, mediante la aplicacion de la prueba APTIMA COMBO 2 que mide la presencia de CT y GN por PCR; donde encontramos que la prevalencia de clamidia fue similar a la prevalencia nacional (5.3%) y que la prevalencia de Gonococo fue inferior a la prevalencia nacional y mundial (0%), conluyendo que tendria impacto sobre la disminucion de la morbilidad materna y perinatal el tamizaje de clamidia durante el embarazo y que al momento, no es necesario tamizar para Gonococo en este mismo grupo . sin embargo se hace necesario la realización de mas estudios que sustenten la anterior conclusiónABL pharmaGiven the vulnerability and the high prevalence of STIs in the population of active duty , who is broadminded described and documented in articles worldwide, it is expected that these infections are transmitted to their partners causing complications when these become pregnant and later in the newly nacidos.por therefore we established the prevalence of gonorrhea and chlamydia in the pregnant population II and III quarter Homic looked at in a period of 5 months by applying the APTIMA COMBO 2 test that measures the presence of CT and NG by PCR where we found that the prevalence of chlamydia was similar to the national prevalence (5.3 %) and the prevalence of Gonococcus was lower than the national and global prevalence ( 0%), conluyendo that would have impact on decrease maternal and perinatal screening for chlamydia morbidity during pregnancy and at the time it is not necessary to sift Gonococcus in this group. however conducting more studies that support the above conclusion is necessar