IL-6 induces the overexpression of genes involved in the regulation of apoptosis and cell-cell adhesion in polarized colorectal cancer cells

Introduction: An inflammatory microenvironment was identified as a critical tumor-promoting condition for cells harboring tumor-initiating mutations. Cancer cells respond to pro-inflammatory signals with changes in their transcriptome, namely upregulating the expression of pro-tumorigenic transcript variants. A paradigmatic example is the variant RAC1B. We found increased RAC1B levels in samples from inflammatory bowel disease patients or following experimentally-induced acute colitis in mouse models and showed it to be overexpressed in colorectal tumors. Recently, we found that the overexpression of RAC1B in polarized Caco-2 colorectal cancer (CRC) cells was triggered by the presence of pro-inflammatory interleukin (IL)-6. Here we describe the use of RNA-seq to characterize the transcriptome-wide changes induced in CRC cells by exposure to IL-6. Methods: Total RNA isolated from control and IL-6-stimulated cells was subjected to library preparation and paired-end sequencing. Sequencing fastq files were first processed and quality controlled. Salmon was used to align raw reads to the human reference transcriptome (hg38) and to perform transcript quantification. Differentially expressed genes (DEGs) were identified using DESeq2, by analyzing the summarized counts per gene comparing control and IL-6 stimulation conditions. We have also performed an analysis for biological process enrichments by Gene Ontology. Selected DEGs in significantly enriched categories were validated by semiquantitative (sq)RT-PCR. Results and discussion: We show that the most significant IL-6-induced transcriptional changes were associated with the upregulation of a cluster of 18 genes, mostly associated with the regulation of apoptosis and CEACAM-mediated cell-cell adhesion. Using sqRT-PCR, we validated the upregulation of three of these genes in IL-6 treated Caco2-cells, but, interestingly, found their expression to be instead downregulated in primary tumors of the CRC TCGA dataset. Conclusion: Exposure of polarized Caco-2 CRC cells to IL-6 causes upregulation of pro-tumorigenic genes, which, paradoxically, appear to be downregulated in primary CRC tumors. Further studies will be required to clarify the impact of these results in CRC development.This work was funded by Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) (PTDC/BIA MOL/28386/2017) and EstagiAP2022.info:eu-repo/semantics/draf

Antimicrobial Resistance and Zoonotic Bacteria: Assessing interventions, risk factors and the occurrence of antimicrobial resistance in the food chain production in Portugal

Tese de doutoramento em Saúde Pública Global apresentada à Escola Nacional de Saúde Pública, Universidade Nova de Lisboa, 2022.Tese defendida a 29-09-2023.Orientadora Professora Andreia Leite e coorientador Professor Miguel Cardo.Background: Resistant microorganisms that spread in the food system are a major threat to animal health and public health since they are a potential pathway of transmission to humans. This thesis evaluates: (i) antimicrobial resistance (AMR) prevalence and associated risk factors in the Portuguese food system (ii) effectiveness of interventions designed to reduce and adequate antimicrobial usage in animal production and tackle AMR. Methods: Portuguese AMR surveillance program on animals and food products data, 2014-2019, were used to estimate prevalence of AMR in Escherichia coli, Campylobacter and Salmonella samples, factors associated with Salmonella resistance, and AMR profiles. Logistic regression and clustering methods were applied. Effectiveness was assessed in a systematic review with meta-analysis. Articles were identified on PubMedTM, ScopusTM, The Cochrane LibraryTM, Web of ScienceTM, and grey literature on DANS EASYTM, WorldCatTM, RCAAPTM. Effectiveness was estimated by intervention, bacterial species, production type and population through fixed and random-effects models. Results: High prevalence of Salmonella resistance was observed, especially during summer and in post farm-stages to most antimicrobials and in summer and farms to fluoroquinolones and quinolones-F(Q). Salmonella F(Q) resistance was associated with broilers. Clusters suggested an escalating multi-drug resistance (MDR) behavior from farm to post-farm stages. Our review indicates that organic and antimicrobial-free farms, and group treatment restrictions lead to AMR reduction. Conclusions: Further attention is needed in the Portuguese food system regarding AMR behavior in particular in post-farm stages due to the potential source of MDR bacteria. Our findings support policy- and decision-making on effective interventions to reduce AMR. Keywords: food-producing animals; antimicrobial resistance; zoonotic bacteria; surveillance; food security; One Health.Contexto: Os microrganismos resistentes e a sua disseminação pelo sistema de produção de alimentos constituem uma ameaça para a saúde animal e para a saúde pública. Foram avaliados: (i) prevalência de resistência aos antimicrobianos (RAM) e fatores de risco associados à sua ocorrência no sistema português de produção de alimentos, (ii) efetividade de intervenções para redução do uso de antimicrobianos em produção animal e assim reduzir a RAM. Métodos: Análise dos dados do Programa de Vigilância de Resistência aos Antimicrobianos em animais e alimentos de origem animal, 2014-2019 em Portugal, para estudar as RAM e os seus perfis em E. coli, Campylobacter e Salmonela, e avaliar fatores de risco associados ao desenvolvimento de RAM em Salmonella, através de modelos de regressão logística e de clustering. A efetividade foi estudada através de revisão sistemática com meta-análise. Os artigos foram identificados na PubMedTM, ScopusTM, The Cochrane LibraryTM, Web of ScienceTM, e literatura cinzenta na DANS EASYTM, WorldCatTM, RCAAPTM. A efetividade foi estimada por tipo de intervenção e produção, espécie bacteriana, e população animal, através de modelos de efeitos fixos ou aleatórios. Resultados: Prevalência elevada de resistência à Salmonella, especialmente durante o Verão na maioria dos antimicrobianos testados e em fases de produção destinadas ao processamento de alimentos, mas também para fluoroquinolonas e quinolonas-F(Q)- ao nível de explorações de animais. A resistência às F(Q) em Salmonella esteve mais associada a frango de engorda. Os grupos formados pelo método de clustering, indicaram um comportamento de multirresistência em cascata desde as unidades de produção de animais até às de retalho. A revisão demonstrou uma redução de RAM associada à produção orgânica, explorações livres de utilização de antimicrobianos e restrições de tratamentos de grupo. Conclusão: É essencial reforçar a atenção ao comportamento das RAM no sistema português de produção de alimentos, principalmente em unidades de processamento de alimentos e de retalho, devido à potencial fonte de bactérias multirresistentes. Os resultados obtidos apresentam informação útil para a definição de ações no combate às RAM.Funding: This research was supported by the Portuguese Foundation for Science and Technology (FCT) (PD/BD/135759/2018 and COVID/BD/152615/2022)N/

Haemophilus influenzae Type b Vaccine Failure in Portugal: A Nationwide Multicenter Pediatric Survey

Portuguese Study Group on Haemophilus influenzae Invasive Disease in Children: Celia Bettencourt, Arminda Maria Jorge, Maria Conceição Faria, Carla Zilhão, Laura Marques, Conceição Casanova, Cristiana Pereira, Fernando Fonseca, Cláudia Monteiro, Mariana Bettencourt, Diana Moreira, Fernanda Rodrigues, Henrique Oliveira, Catarina Sousa, Graciete Pinheiro, Sara Diogo Santos, Adília Vicente, Tiago Milheiro, Margarida Pinto, Graça Seves, Rosa Bento, M ª João Virtuoso, Rita Fonseca, Maria Dinah Carvalho, Luís Lito, Carla Cruz, Adriana Coutinho, Paula Correia, Luísa Sancho, Elzara Aliyeva, Cristina Freitas, Nuno Canhoto, Ana Filipa Nunes, Ana Maria Queiroz, José Diogo, Maria Manuel Flores, Paula Reis, Elmano Ramalheira, Maria Manuel Zarcos, Sofia Lima, Susana Castilho, Catarina Lacerda, Luísa Teixeira, Ana Maria Jesus, Sofia Maia Aroso, Margarida Tavares, Bonito Vitor, Angélica Ramos, Manuela Costa Alves, Isabel Cunha, Alberta Faustino, Álvaro Sousa, Margarida Rodrigues, Idalina Maciel, Sandra Vieira, Jorge Rodrigues, Elisabete Santos, Alexandra Costa, Filomena Martins, Carlos Escobar, Pedro Flores, Maria Favila Menezes, João Calado Nunes, Ana Neto, Marina Soares, Rita Mouro Pinto, Diana Almeida, Isabel Brito, Hermínia Costa, Fátima Silva, Joana Cardoso, Magalys Pereira, Luís Gonçalves, João Tavares, Sofia Botelho Moniz, Eurico Jorge Gaspar, Joana Carvalho, Ana Paula Castro, Álvaro Sousa, Catarina Francisco, João Farela Neves, Paulo Paixão.Background: Despite the high effectiveness of the Haemophilus influenzae type b (Hib) vaccine in preventing invasive disease (ID) in children, Hib vaccine failures (VFs) cases may still occur. This study aimed to characterize the Hib-VF cases in Portugal in a 12-year period and trying to identify the possible associated risk factors. Methods: Prospective descriptive nationwide surveillance study. Bacteriologic and molecular studies were performed at the same Reference Laboratory. Clinical data were collected by the referring pediatrician. Results: Hib was identified in 41 children with ID and 26 (63%) were considered VF. Nineteen (73%) cases occurred in children less than 5 years old; 12 (46%) occurred before the Hib vaccine booster dose at 18 months of age. Comparing the first and the last 6-year periods of the study, the incidence rate of Hib, VF and total H. influenzae (Hi) ID significantly raised ( P < 0.05). VF cases corresponded, respectively, to 13.5% (7/52) and 22% (19/88) of total Hi-ID cases ( P = 0.232). Two children died due to epiglottitis and 1 acquired sensorineural hearing loss. Only 1 child had an inborn error of immunity. The immunologic workup performed in 9 children revealed no significant abnormalities. All 25 Hib-VF strains analyzed belonged to the same clonal complex 6. Conclusions: In Portugal, more than 95% of children are vaccinated against Hib, but severe Hib-ID cases still occur. No predisposing factors were clearly identified to justify the increased number of VF in recent years. Along with continued Hi-ID surveillance, Hib colonization and serologic studies should be implemented.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Multivariate Analysis applied in the study of the nutritional quality of processed products

Trabalho de Projeto de Mestrado em Bioestatística, apresentado à Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa, 2023Dissertação orientada pela Professora Doutora Eunice Isabel Ganhão Carrasquinha Trigueirão da Faculdade de Ciências da Universidade de Lisboa e Doutora Helena Soares Costa do Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge.Recently, the search for processed food has been increasing due to its characteristics and convenience, and accessibility in our everyday life. Regrettably, most of these products have salt and fat content superior to what national and international entities recommend. Following this issue, to contribute to the betterment of the nutritional quality of a diversity of processed products, the contents of their total fat and salt as well as fatty acids were analysed to verify the major differences between them. Under the PTranSALT project, 280 processed products were acquired in supermarkets, restaurants, takeaway, pastry shops, and fast-food chains and analysed as well. The purpose was to prioritize the nutritional parameters with the intent to proceed with the reformulation (if needed) of its composition. This leads to the contribution towards more safe and balanced nutrition. And for that, two multivariate techniques were considered: Cluster Analysis (CA) and Principal Component Analysis (PCA). Once these methods were applied it was verified that some of the products in the category of snacks, fries, and cookies show a poor nutritional profile, having simultaneously elevated levels of salt and saturated fatty acids. These are nutrients that, when consumed excessively, are associated with illnesses such as obesity, hypertension, and some other chronic diseases. In the future, it will be necessary for the topic of food processing to remain in the spotlight to address many of the existing gaps, both in current food classifications and their rather negative impact on public health.A procura por alimentos processados tem vindo a aumentar nos últimos tempos devido às suas características sensoriais, à sua conveniência e acessibilidade. Estando o consumo excessivo de alimentos processados associado a diveras implicações na saúde de quem os consome, é muito importante e urgente encontrar soluções para diminuir esse impacto. Uma das principais causas associadas ao consumo excessivo de produtos processados e ultra processados, começa no desconhecimento das características e na facilidade da compra destes alimentos no supermercado. Isto dá-se porque grande parte dos consumidores não está devidamente informado acerca da composição nutricional dos alimentos. Grande parte dos alimentos processados, têm teores de sal e de gordura superiores aos recomendados pelas entidades nacionais e internacionais e por este motivo é essencial que os consumidores passem a saber identificar quais os alimentos que devem priorizar para terem uma alimentação mais nutritiva e equilibrada. Com vista a ajudar o consumidor a ler e interpretar a declaração nutricional de cada produto, já se encontram em vigor diferentes sistemas de simplificação de rótulos, nomeadamente o descodificador de rótulos e o Nutri-Score. Este trabalho surge para colmatar algumas das falhas presentes nestes sistemas, analisando diferentes nutrientes, não abrangidos em nenhum dos mencionados. No âmbito do projeto PTranSALT desenvolvido pelo Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge (INSA), foram analisados os teores de gordura total, sal e ácidos gordos de diversos alimentos processados. Este projeto teve o intuito de contribuir com informação de forma a melhorar a qualidade nutricional dos produtos processados. Para isso, foram analisados 280 produtos processados, adquiridos em supermercados, restaurantes take away, pastelarias e cadeias de fast-food. Os vários produtos analisados foram agrupados consoante as suas características em nove grupos diferentes: Snacks, produtos fast-food, sementes e frutos secos, refeições pré-feitas, cereais, molhos, batatas fritas, produtos de panificação e pastelaria. Este trabalho tem como principal objetivo, verificar as principais diferenças relativas aos parâmetros analisados para diversos produtos processados, e ainda priorizar os parâmetros nutricionais com vista à reformulação (se necessário) da sua composição, contribuindo assim para alimentos mais seguros e equilibrados, e ainda determinar as caraterísticas major de cada agrupamento de produtos. Para isso, foram consideradas duas técnicas de Análise Multivariada, a Análise de Agrupamentos e Análise de Componentes Principais. A partir destas metodologias foi possível identificar quais os alimentos ou categorias de alimentos que devem ser considerados prioritários para a implementação de estratégias de reformulação, e assim obter alimentos mais saudáveis que possam contribuir para a prevenção dos principais riscos de consumo a eles associados. Com base nos resultados da análise descritiva verificou-se que grande parte dos produtos processados apresentaram valores de gordura superiores aos recomendados pelas entidades reguladoras. É importante destacar que estes produtos demonstraram uma redução bastante significativa na quantidade de ácidos gordos trans (com exceção de três produtos), sendo que todos eles se encontram dentro dos limites regulamentados. Em relação à caracterização de cada um dos grupos, observou-se que os alimentos que constituem o grupo dos Fast Food e dos molhos apresentam valores bastante elevados de sal, quando comparados com os restantes, enquanto que, as principais características dos frutos secos em análise foram os seus valores bastante elevados de gordura insaturada (nomeadamente os ácidos gordos monoinsaturados e polinsaturados). Os cereais que foram analisados são caracterizados pelos seus valores de ácidos gordos saturados e monoinsaturados. Finalmente, os produtos processados das categorias dos snacks, das batatas fritas, dos produtos de panificação e pastelaria, apresentam heterogeneidade dentro dos mesmos, não sendo possível identificar características major para cada um deles, sendo um obstáculo para a caracterização destes alimentos e do grupo a que pertencem. Considerando a Análise de Agrupamentos testou-se diferentes partições consideradas adequadas aos dados. A Análise de Agrupamentos Hierárquica com recurso à Distância Euclidiana, foi usada para determinar as distâncias entre os vários objetos, tal como a Análise de Agrupamentos Não Hierárquica com recurso ao algoritmo de K-means. A partir dos dados e de metodologias para determinar o número ótimo de clusters, as partições que se mostraram mais indicadas, consoante os dados apresentados, foram as partições a 4 e a 6 clusters, para ambas as classificações. Visto os alimentos que foram recolhidos, terem sido inicialmente agrupados em 9 categorias de produtos processados, a partição em 9 clusters foi testada e comparada com as restantes. De forma a poder identificar as características de cada um dos clusters, formados pela Análise de Agrupamentos, a Análise de Componentes Principais foi também aplicada com vista à descrição dos mesmos, consoante as variáveis analisadas. Ao comparar os clusters com as conclusões obtidas a partir da análise descritiva dos dados, a partição a 9 clusters mostrou ser a mais adequada face aos dados e às características identificadas nos mesmos. Esta conclusão aplica-se tanto para a Análise de Agrupamentos Hierárquica como para a Análise de Agrupamentos Não-Hierárquica, e por esse motivo ao ser aplicado o método de Análise de Componentes Principais esta partição foi também considerada. Pela Análise de Componentes Principais verificou-se que alguns dos produtos pertencentes às categorias dos Snacks, Batatas fritas e das Bolachas, mostram um perfil nutricional menos adequado, apresentando simultaneamente valores elevados de sal e de ácidos gordos saturados. Nutrientes esses que quando consumidos em excesso estão associados a vários tipos de doenças tais como a obesidade, hipertensão e outras doenças crónicas. Deste modo é necessário que estes alimentos sofram várias reformulações na sua constituição de forma a torná-los muito mais equilibrados. Para além destes alimentos, dois produtos pertencentes à categoria dos snacks mostraram valores de sal muito elevados. Inclusivamente, em três das bolachas analisadas, abundam na sua constituição, essencialmente ácidos gordos saturados, sendo que os mesmos quando consumidos em excesso estão associados a várias implicações bastante negativas para a saúde dos consumidores. Posto isto, é possível perceber que apesar de já terem sido aplicadas várias regulamentações que limitam o consumo de determinados nutrientes, muitos dos alimentos comercializados são constituídos por nutrientes menos equilibrados e adequados para consumo, como o excesso de gordura e de sal. Pelas conclusões obtidas neste projeto os snacks, as batatas fritas e as bolachas são constituídos por nutrientes que devem ser bastante reajustados, uma vez que o seu consumo excessivo é prejudicial. Além de serem necessárias novas ferramentas para ajudar os consumidores a fazerem escolhas alimentares mais conscientes e informadas, também é de grande importância o desenvolvimento de diferentes medidas com vista à reformulação de vários dos produtos processados analisados no decorrer deste projeto. No futuro, será necessário que a temática do processamento alimentar continue em voga, de modo a solucionar muitas das lacunas existentes, quer a nível das classificações alimentares atuais, quer do seu impacto bastante negativo na saúde humana.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Deteção e quantificação de vírus em Ruditapes philippinarum do estuário do Tejo

Dissertação de Mestrado em Tecnologia e Segurança Alimentar, apresentada à Universidade NOVA de Lisboa.Orientadora: Doutora Rita Maria Cruz de Campos Batista, Investigadora Auxiliar do Departamento de Alimentação e Nutrição do Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge; Coorientadora: Professora Doutora Ana Luísa Almaça da Cruz Fernando, Prof. Associada, NOVA School of Science and Technology, Universidade Nova de LisboaA disseminação de vírus entéricos em alimentos e águas é uma das principais causas de doenças de origem alimentar. Os Norovírus (NoV) e o vírus da Hepatite A (HAV) são os principais responsáveis por surtos alimentares conhecidos, sendo o vírus da Hepatite E (HEV) um perigo emergente. Estes são excretados em altas concentrações nas fezes, e a transmissão ocorre principalmente via fecal-oral. Os bivalves são um dos principais veículos de transmissão de vírus devido ao facto de se alimentarem por filtração e os bioacumularem. Neste estudo, foi analisada a presença de NoVI, NoVII, HAV e HEV, por Real-time RTqPCR, em Ruditapes philippinarum e outros bivalves provenientes do estuário do Tejo entre abril e junho de 2023. Os resultados mostraram a presença de norovírus em 46,9% das amostras. Não se detetou HAV ou HEV. O NoVI foi o mais prevalente e o NoVII apresentou a maior concentração média de carga viral, com 1,3x103 CG/g. Foram também comparados resultados de amostras de outras zonas de produção de moluscos bivalves (ZPMB) com diferentes classificações sanitárias. Detetou-se uma correlação significativa [Χ2 (4, N=57) =13,8, p=0,0079] com maior prevalência viral em locais de classificação C e colheita proibida em comparação com locais de classificação A e B. O estuário do Tejo revelou prevalência viral superior a outras ZPMB com 14 amostras positivas para NoVI (41,2%), 11 para NoVII (32,4%) e com 10 amostras (29,4%) apresentando coinfecção de ambos os genogrupos I e II. Nas restantes ZPMB, encontrou-se apenas uma amostra infetada com NoVI (4,4%), duas com NoVII (8,7%), e uma com HEV (4,4%). A diferença de prevalência viral entre os dois grupos foi significativa [Χ2 (1, N=57) =4,4098, p=0,0357]. Existe necessidade de vigilância e controlo da contaminação viral em moluscos bivalves, particularmente no estuário do Tejo, onde uma elevada prevalência viral foi identificada.The dissemination of enteric viruses in food and water is one of the primary causes of foodborne illnesses. Noroviruses (NoV) and the Hepatitis A virus (HAV) are the main culprits behind known foodborne outbreaks, with Hepatitis E virus (HEV) emerging as a potential threat. These viruses are excreted in high concentrations in feces, and transmission occurs primarily via the fecal-oral route. Bivalves are significant vectors for viruses due to their filtration and subsequent bioaccumulation processes, posing risks to public health. In this study, the presence of NoVI and NoVII, HAV, and HEV was analyzed by Realtime RT-qPCR, in Ruditapes philippinarum and other bivalves from the Tejo estuary between April and June 2023. The results revealed the presence of noroviruses in 46.9% of the samples. HAV and HEV were not detected. NoVI was the most prevalent, and NoVII exhibited the highest average viral load, at 1.3x103 CG/g. Results from samples of other bivalve molluscs production areas (BMPA) with diverse sanitary classifications were also used for comparison. A significant correlation [Χ2 (4, N=57) =13.8, p=0.0079] with higher viral prevalence in areas with Class C classification and restricted harvesting as compared to Class A and B areas, was obtained. The Tejo estuary exhibited a higher viral prevalence compared to other BMPA with 14 samples testing positive for NoVI (41.2%), 11 for NoVII (32.4%) and 10 samples (29.4%) showing co-infection of both genogroups I and II. In the remaining BMPA, only one sample was infected with NoVI (4.4%), two with NoVII (8.7%), and one with HEV (4.4%). The difference in viral prevalence between the two groups was significant [Χ2 (1, N=57) =4.4098, p=0.0357]. There is a need for surveillance and control of viral contamination in bivalve molluscs, particularly in the Tejo estuary, where a high viral prevalence was identified.N/

Implementation of an epidemiological survey targeting owners of backyard animal production systems in Portugal

A detenção e a criação de animais em explorações caseiras podem representar um risco para a transmissão de agentes patogénicos zoonóticos e de genes de resistência a antibióticos, com impacto na saúde pública. Em Portugal, a ausência de registo de sistemas de produção caseira (SPC) dificulta a caracterização das práticas de gestão e criação de animais, assim como o perfil dos seus proprietários. Este estudo piloto pretende avaliar o método de amostragem dos detentores de SPC e desenvolver um questionário epidemiológico pioneiro para avaliar as condições de criação, biossegurança e riscos sanitários e ambientais em SPC. Estruturado em cinco seções, o questionário foi disponibilizado em i) formato eletrónico e ii) em papel, tendo-se testado duas formas de divulgação: através de divulgação digital e por aplicação presencial por pontos de contacto (veterinários, inspetores sanitários e associações do setor). Até ao momento, observou-se um maior número de respostas na versão online, pela sua maior facilidade e abrangência de divulgação. Apesar das limitações na distribuição dos questionários, a metodologia adotada permitirá caracterizar os SPC e os seus proprietários, contribuindo para a avaliação de possíveis riscos e o seu impacto na saúde pública. A continuidade da recolha de dados fortalecerá esta caracterização, apoiando estratégias de mitigação de riscos zoonóticos, segurança alimentar e promoção da saúde animal sob a abordagem One Health.Keeping and rearing animals on backyard farms can pose a risk for the transmission of zoonotic pathogens and antibiotic resistance genes, impacting public health. In Portugal, the lack of registration for backyard production systems (BPS) hinders the characterization of management and animal husbandry practices, as well as the profile of their owners. This pilot study aims to evaluate the sampling method of BPS owners and develop a pioneering epidemiological questionnaire to assess breeding conditions, biosecurity, health and environmental risks in BPS. Structured into five sections, the questionnaire was made available in i) electronic format and ii) on paper, having tested two dissemination strategies: digital distribution and face-to-face application by key contact points (veterinarians, health inspectors and sector associations). To date, the online version has received a higher number of responses due to its broader reach and ease of dissemination. Despite limitations in questionnaire distribution, the adopted methodology will enable the characterization of BPS and their owners, contributing to the assessment of potential risks and their impact on public health. Continued data collection will strengthen this characterization, supporting strategies for mitigating zoonotic risks, ensuring food safety and promoting animal health under the One Health framework

Hazard characterization of the mycotoxins enniatins and beauvericin to identify data gaps and improve risk assessment for human health

Enniatins (ENNs) and beauvericin (BEA) are cyclic hexadepsipeptide fungal metabolites which have demonstrated antibiotic, antimycotic, and insecticidal activities. The substantial toxic potentials of these mycotoxins are associated with their ionophoric molecular properties and relatively high lipophilicities. ENNs occur extensively in grain and grain-derived products and are considered a food safety issue by the European Food Safety Authority (EFSA). The tolerable daily intake and maximum levels for ENNs in humans and animals remain unestablished due to key toxicological and toxicokinetic data gaps, preventing full risk assessment. Aiming to find critical data gaps impeding hazard characterization and risk evaluation, this review presents a comprehensive summary of the existing information from in vitro and in vivo studies on toxicokinetic characteristics and cytotoxic, genotoxic, immunotoxic, endocrine, reproductive and developmental effects of the most prevalent ENN analogues (ENN A, A1, B, B1) and BEA. The missing information identified showed that additional studies on ENNs and BEA have to be performed before sufficient data for an in-depth hazard characterisation of these mycotoxins become available.The European Partnership for the Assessment of Risks from Chemicals (PARC) has received funding from the European Union’s Horizon Europe research and innovation programme under Grant Agreement No 101057014 and has received co-funding of the authors’ institutions. Funding Open Access funding enabled and organized by Projekt DEAL. HORIZON EUROPE Framework Programme 101057014. https://doi.org/10.13039/100018693

Unveiling the Role of APOB Variants in Familial Hypercholesterolemia: Functional Insights

Familial hypercholesterolemia (FH) is a condition characterized by increased LDL cholesterol levels with APOB variants accounting for about 5-10% of FH cases. However, variants in this gene may be more common than initially estimated since the entire APOB gene has only recently started to be sequenced. Although most of the alterations are missense, nonsense variants and small indels in exon 29 were also identified in individuals with FH phenotype and can be the cause of disease. This work aimed to characterize APOB variants identified in individuals with clinical diagnosis of FH. Moreover, we intended to do an overview of the APOB variants presenting functional studies. PubMed repository was consulted to collect publications regarding functional characterization of APOB variants. For variant characterization, LDL was isolated through sequential ultracentrifugation. ED-LDLR fragments purified from HEK293 cells were incubated with the different APOB variants and antibodies, to determine apoB affinity for LDLR by ELISA assay. CHO-ldlA7 cells were transfected with wt LDLR plasmid and incubated with FITC-labeled LDL to determine LDL binding and uptake by flow cytometry. In the literature there are 23 APOB variants with functional studies, six of which characterized by our group. Fourteen variants affecting apoB normal function; the remaining results presenting normal apoB function. Recently we characterized 8 more variants: p.(Ala1393Val), p.(Asp1456Asn), p.(Met2042Thr), p.(Asp2213del), p.(Ile3374Thr), p.(Val4295Leu) and p.(Arg4519Thr) that do not appear to impact apoB's binding to the LDLR; p.(Gln4316*) demonstrated reduced affinity for the LDL receptor. Functional studies play a critical role in assessing the pathogenicity of genetic variants and are among the key criteria for variant classification. These in-depth analyses confirm clinical diagnosis and provide essential insights for developing personalized treatment strategies. In the future, we aim to increase the number of studied variants, starting with 15 more variants from the Portuguese FH Study.Personalizing diagnosis and treatment for Familial Hypercholesterolaemia patients (PerMedFH) project (HR23-00749 (BPD2)) funded by La Caixa Foundation in partnership with FCT

Oral health behavior associated with cardiometabolic outcomes: A nationally representative cross-sectional study in Portugal

Background: Oral diseases are associated with the development of cardiometabolic diseases. This study aimed to evaluate the relationship between oral health behaviors (tooth brushing and oral health appointments) with cardiometabolic diseases. Methods: Data from the First National Health Examination Survey were used. Participants aged 25-74 years and diagnosis of acute myocardial infarction (n = 4442), stroke (n = 4441), hypertension (n = 4450) and diabetes (n = 4327) were analyzed. A fifth subsample (n = 2555) included participants aged 40-69 for calculating cardiovascular risk. Poor oral health behavior was defined as brushing once a day or less and having the last oral health appointment at 12 months or more. Poisson regression models assessed the relationship between poor oral health behavior and these cardiometabolic outcomes. Results: Among 4.450 participants, 20.5 % had poor oral health behavior. A statistically significant association was found between poor oral health behavior with diabetes (PR: 1.44 [95 % CI: 1.10-1.98], and high/very high cardiovascular risk (PR: 1.42 [95 % CI: 1.25-1.62]). In the sensitivity analysis the association with diabetes and high/very high cardiovascular risk persisted when considering only brushing behavior but not when considering only oral health appointments at 12 months or more. Conclusions: Individuals with poor oral health behavior had a higher prevalence of diabetes and high/very high cardiovascular risk. Sensitivity analysis suggested that regular tooth brushing may be the main behavior for preventing diabetes and cardiovascular risk. The results suggest that regular tooth brushing may act in prevention for diabetes and cardiovascular risk.Highlights: - Oral health is associated with cardiovascular outcomes; - Poor oral health increased the prevalence of diabetes and cardiovascular risk; - Regular tooth brushing may help prevent diabetes and cardiovascular risk.INSEF development was part of the project “Improvement of epide miological health information to support public health decision and management in Portugal. Towards reduced inequalities, improved health, and bilateral cooperation”, benefiting a €1,500,000 Grant from Iceland, Liechtenstein and Norway through the EEA Grants. This research did not receive any specific grant from funding agencies in the public, commercial, or not-for-profit sectors

The mechanism through which translation-termination codons are recognized as premature

About one third of the gene mutations found in human genetic disorders, including cancer, result in premature termination codons (PTCs) and the rapid degradation of their mRNAs by nonsense-mediated decay (NMD). NMD controls the quality of eukaryotic gene expression. The strength of the NMD response appears to reflect multiple determinants on a target mRNA. We have reported that human mRNAs with a PTC in close proximity to the translation initiation codon (AUG-proximal PTC), and thus, with a short open reading frame, can substantially escape NMD. Our data support a model in which cytoplasmic poly(A)-binding protein 1 (PABPC1) is brought into close proximity with an AUG-proximal PTC via interactions with the translation initiation complexes. This proximity of PABPC1 to the AUG-proximal PTC allows PABPC1 to interact with eRF3 with a consequent enhancement of the release reaction and repression of the NMD response. Here, we provide strong evidence that the eIF3 is involved in delivering eIF4G-associated PABPC1 into the vicinity of the AUG-proximal PTC. In addition, we dissect the biochemical interactions of the eIF3 subunits in bridging PABPC1/eIF4G complex to the 40S ribosomal subunit. Together, our data provide a framework for understanding the mechanistic details of PTC definition and mRNA translation initiation.FCT/PTDC/BIMONC/4890/2014info:eu-repo/semantics/publishedVersio