Integration of differentiation signals during indirect flight muscle formation by a novel enhancer of Drosophila vestigial gene

AbstractThe gene vestigial (vg) plays a key role in indirect flight muscle (IFM) development. We show here that vg is controlled by the Notch anti-myogenic signaling pathway in myoblasts and is regulated by a novel 822 bp enhancer during IFM differentiation. Interestingly, this muscle enhancer is activated in developing fibers and in a small number of myoblasts before the fusion of myoblasts with the developing muscle fibers. Moreover, we show that this enhancer is activated by Drosophila Myocyte enhancing factor 2 (MEF2), Scalloped (SD) and VG but repressed by Twist, demonstrating a sensitivity to differentiation in vivo. In vitro experiments reveal that SD can directly bind this enhancer and MEF2 can physically interact with both SD and TWI. Cumulatively, our data reveal the interplay between different myogenic factors responsible for the expression of an enhancer activated during muscle differentiation

CTD kinase I is required for the integrity of the rDNA tandem array

The genomic stability of the rDNA tandem array is tightly controlled to allow sequence homogenization and to prevent deleterious rearrangements. In this report, we show that the absence of the yeast CTD kinase I (CTDK-I) complex in null mutant strains leads to a decrease in the number of tandem rDNA repeats. Reintroduction of the missing gene induces an increase of rDNA repeats to reach a copy number similar to that of the original strain. Interestingly, while expansion is dependent on Fob1, a protein required for replication fork blocking activity in rDNA, contraction occurs in the absence of Fob1. Furthermore, silencing of class II genes at the rDNA, a process connected to rDNA stability, is not affected. Ctk1, the kinase subunit of the CTDK-I complex is involved in various steps of mRNA synthesis. In addition, we have recently shown that Ctk1 is also implicated in rRNA synthesis. The results suggest that the RNA polymerase I transcription defect occurring in a ctk1 mutant strain causes rDNA contraction

Le complexe CTD Kinase-I est requis pour le maintien de l'intégrité du locus RDN1 chez la levure S. cerevisiae

Chez la levure S. cerevisiae, le complexe CTDK-I a été initialement identifié comme étant impliqué dans la transcription catalysée par l ARN polymérase II. Au laboratoire, nous avons montré que la kinase CTDK-I est également impliquée dans la transcription catalysée par l ARN polymérase I (Pol I) (Bouchoux et al., 2004). La Pol I transcrit un gène unique (ADNr) codant le précurseur 35S des ARN ribosomiques. Ce gène est répété 150 fois en tandem au niveau du locus RDN1 sur le chromosome XII. Le nombre de répétitions, normalement maintenu stable, peut être affecté, notamment en cas de défaillance du système de transcription par la Pol I. Au cours de ma thèse, j ai montré que le complexe CTDK-I est requis pour l intégrité du locus RDN1. En effet, l absence d activité de ce complexe provoque systématiquement une réduction importante du nombre de copies d ADNr présentes dans la cellule. Ce phénomène de contraction est réversible : le nombre de répétitions revient à son niveau initial après complémentation des cellules mutantes avec le gène CTK manquant. La contraction semble spécifique du locus RDN1 car elle ne touche pas d autres régions répétées du génome. Nous avons également montré qu elle ne dépend pas de la protéine Fob1, une protéine nucléolaire impliquée dans la recombinaison au niveau de l ADNr. De façon intéressante, la contraction du locus RDN1 observée chez les mutants ctk ne s accompagne pas d une augmentation de la recombinaison au niveau de l ADNr, et semble plutôt résulter d évènements uniques d excision de plusieurs copies d ADNr. Si le mécanisme moléculaire de ce phénomène n est pas encore élucidé, l ensemble de nos résultats suggèrent qu il soit causé par un défaut de la transcription par la Pol I et/ou la diminution de l expression de Sir2, une protéine requise pour assurer la stabilité et l homogénéité du locus RDN1.PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

A redundancy of processes that cause replication fork stalling enhances recombination at two distinct sites in yeast rDNA

15 páginas, 6 figuras, -- PAGS nros. 361-375,DNA recombination was investigated by monitoring integration at the rDNA of a circular minichromosome containing a 35S minigene and a replication fork barrier (RFB). The effects of replication fork stalling on integration were studied in wild-type, FOB1 Delta, SIR2 Delta and the double mutant FOB1 Delta SIR2 Delta cells. The results obtained confirmed that Sir2p represses and replication fork stalling enhances integration of the minichromosome. This integration, however, only took place at two distinct sites: the RFB and the 3' end of the 35S gene. For integration to take place at the 35S gene, replication fork stalling must occur at the 3' end of the gene in both the minichromosome and the chromosomal repeats. Integration at the RFB, on the other hand, occurred readily in FOB1 Delta cells, indicating that more than a single mechanism triggers homologous recombination at this site. Altogether, these observations strongly suggest that the main role for replication fork stalling at the rDNA locus is to promote homologous recombination rather than just to prevent head-on collision of transcription and replication as originally thought.BIO2005/02224 to J.B.S. and BFU2007/62670 to P.H. from the Spanish Ministerio de Educación y Ciencia.Peer reviewe