Structural Characterization of Serine Protease Complexes with Novel Inhibitors

Human Neutrophil Elastase (HNE) is a serine protease responsible for cleavage of peptide bonds conferring elasticity to the connecting tissues. For this reason, this enzyme is mainly found in the lungs, arteries and ligaments [1-2]. In case of over-expression, HNE enables the appearance of some diseases, such as Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD), Rheumatoid Arthritis, Psoriasis and Arteriosclerosis [3-4]. Currently, diseases affecting the respiratory tract are one of the major causes of death in the world, so HNE is a potential drug target of considerable interest [4]. Porcine Pancreatic Elastase (PPE) is commonly used as a model for HNE, sharing 37% of amino acid sequence identity [5]. According to previous studies, the catalytic serine performs a nucleophilic attack on a carbonyl group present in the inhibitors [6]. The focus of this work was the three-dimensional structure determination of elastases (PPE and HNE) in complex with inhibitors by X-ray crystallography to characterize their interactions at atomic level. The rational is to correlate structure and function and contribute to the design of more potent and specific inhibitors. These newly synthetic compounds were provided by the group of Prof. Rui Moreira, Instituto de Investigação do Medicamento, Faculdade de Farmácia, Universidade de Lisboa. X-ray diffraction data of PPE crystals were collected at a synchrotron source and three 3D-structures of PPE in complex with inhibitors were determined at resolutions around 1.4 Ǻ. Analysis of the electron density maps revealed that the nucleophilic attack occurred at the sulfonyl group of the inhibitors, contrary to what was initially expected (which would be in the carbonyl group). In silico energy minimization studies of the docked ligand structure into the active site of HNE, show no relevant structural modifications of the protein structure upon ligand binding. Finally, crystals of HNE have already been obtained and experiments are ongoing to grow complexes of HNE with various inhibitors. References: [1] A. Thomson and S. B. Kapadia, “The specificity of the S1 and S2 subsites of elastase,” Eur. J. Biochem., vol. 102, pp. 111–116, 1979. [2] Z. Werb, M. J. Banda, J. H. McKerrow, and R. A. Sandhaus, “Elastases and elastin degradation.,” J. Invest. Dermatol., vol. 79 Suppl 1, p. 154s–159s, Jul. 1982. [3] E. F. P. Ruivo, L. M. Gonåalves, L. A. R. Carvalho, R. C. Guedes, S. Hofbauer, J. A. Brito, M. Archer, R. Moreira, and S. D. Lucas, “Clickable 4-Oxo- b -lactam-Based Selective Probing for Human Neutrophil Elastase Related Proteomes,” pp. 1–7, 2016. [4] L. R. P. Areias, E. F. P. Ruivo, M. T. Duarte, R. Moreira, S. D. Lucas, and R. C. Guedes, “RSC Advances PAPER A uni fi ed approach toward the rational design of selective low nanomolar human neutrophil elastase,” pp. 51717–51721, 2015. [5] “Uniprot.” [Online]. Available: http://www.uniprot.org/. [Accessed: 16-Aug-2017]. [6] W. Huang, Y. Yamamoto, Y. Li, D. Dou, K. R. Alliston, R. P. Hanzlik, T. D. Williams, and W. C. Groutas, “X-ray Snapshot of the Mechanism of Inactivation of Human Neutrophil Elastase by 1,2,5-Thiadiazolidin-3-one 1,1-Dioxide Derivatives.,” Society, pp. 2003–2008, 2008.Elastase Neutrófila Humana (HNE) é uma protease de serina responsável pela clivagem das ligações peptídicas que conferem elasticidade aos tecidos de conexão. Por esta razão, esta enzima é encontrada principalmente nos pulmões, artérias e ligamentos [1-2]. Em casos de sobre-expressão, esta permite o aparecimento de algumas doenças, como Doença Pulmonar Obstrutiva Crónica (DPOC), Artrite Reumatóide, Psoríase e Arteriosclerose [3-4]. Atualmente, as doenças que afetam o trato respiratório são uma das principais causas de morte no mundo, sendo então a HNE um potencial alvo terapêutico de considerável interesse [4]. A Elastase Pancreática Suína (PPE) é normalmente usada como modelo para HNE, compartilhando 37% de identidade de sequência primária [5]. De acordo com estudos anteriores, a serina catalítica realiza um ataque nucleofílico ao grupo carbonilo presente nos inibidores [6]. O foco deste trabalho foi a determinação por cristalografia de raios-X da estrutura tridimensional de elastases (HNE e PPE) complexadas com inibidores, de modo a caracterizar as respetivas interações a nível atómico. O racional é correlacionar a estrutura com a função e contribuir para o desenho de inibidores mais fortes e mais específicos. Estes novos compostos sintéticos foram fornecidos pelo grupo do Prof. Rui Moreira, Instituto de Investigação do Medicamento, Faculdade de Farmácia, Universidade de Lisboa. Os dados de difração de raios-X dos cristais de PPE foram recolhidos numa fonte de sincrotrão e três estruturas 3D de três complexos da PPE com inibidores foram determinadas com resoluções em torno dos 1,4 Å. A análise dos mapas de densidade eletrónica revelaram que o ataque nucleofílico ocorreu no grupo sulfonilo dos inibidores ao contrário do que era inicialmente esperado (que seria no grupo carbonilo). A minimização de energia in silico da estrutura do ligando acoplado no centro ativo da HNE não mostra modificações relevantes na estrutura da proteína após a ligação do ligando. Finalmente, já foram obtidos cristais de HNE, estando já em curso experiencias para o crescimento de cristais de complexos de HNE com vários inibidores. Referências: [1] A. Thomson and S. B. Kapadia, “The specificity of the S1 and S2 subsites of elastase,” Eur. J. Biochem., vol. 102, pp. 111–116, 1979. [2] Z. Werb, M. J. Banda, J. H. McKerrow, and R. A. Sandhaus, “Elastases and elastin degradation.,” J. Invest. Dermatol., vol. 79 Suppl 1, p. 154s–159s, Jul. 1982. [3] E. F. P. Ruivo, L. M. Gonåalves, L. A. R. Carvalho, R. C. Guedes, S. Hofbauer, J. A. Brito, M. Archer, R. Moreira, and S. D. Lucas, “Clickable 4-Oxo- b -lactam-Based Selective Probing for Human Neutrophil Elastase Related Proteomes,” pp. 1–7, 2016. [4] L. R. P. Areias, E. F. P. Ruivo, M. T. Duarte, R. Moreira, S. D. Lucas, and R. C. Guedes, “RSC Advances PAPER A uni fi ed approach toward the rational design of selective low nanomolar human neutrophil elastase,” pp. 51717–51721, 2015. [5] “Uniprot.” [Online]. Available: http://www.uniprot.org/. [Accessed: 16-Aug-2017]. [6] W. Huang, Y. Yamamoto, Y. Li, D. Dou, K. R. Alliston, R. P. Hanzlik, T. D. Williams, and W. C. Groutas, “X-ray Snapshot of the Mechanism of Inactivation of Human Neutrophil Elastase by 1,2,5-Thiadiazolidin-3-one 1,1-Dioxide Derivatives.,” Society, pp. 2003–2008, 2008

A Ponte da Integração e os Impactos Socioambientais das Obras de Infraestrutura no Mercosul

Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Economia, Sociedade e Política da Universidade Federal da Integração Latino- Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Relações Internacionais e Integração.A pesquisa se dedica ao estudo dos impactos socioambientais da Ponte da Integração para as cidades de Presidente Franco, Foz do Iguaçu e Puerto Iguazú. Desde a abordagem do campo dos estudos da Integração Regional, analisa-se as características das obras de Infraestrutura na Região Transfronteiriça do Iguaçu (RTI) e a participação dos atores locais no âmbito das transformações causadas pela ponte e pelas obras complementares da Perimetral Leste e o Corredor Metropolitano del Este. A partir disso, os objetivos são delimitados na produção de um diagnóstico com a análise dos impactos socioambientais da Ponte para a população de Foz do Iguaçu, Presidente Franco e Puerto Iguazú, indicando possíveis soluções desde uma visão mais crítica deste modelo de integração. Metodologicamente, este trabalho se organiza, para aplicar técnicas de pesquisa qualitativa e quantitativa no Trabalho de Conclusão de Curso (TCC). A pesquisa qualitativa foi composta pela apresentação do arcabouço teórico-conceitual baseado na bibliografia em levantamento e apresentação dos conceitos relacionados às obras de infraestrutura na região, sob a ótica de pensadores da América Latina, dos Estudos Ambientais e da Infraestrutura Regional. A pesquisa quantitativa aqui é caracterizada pelo processo de coleta, filtragem e análise dos dados empíricos sobre as obras, bem como o mapeamento dos principais impactos causados pela obra por meio da realização da análise dos documentos de Estudos de Impacto Ambiental (EIA), Relatório de Impacto Ambiental (RIMA) e Informes do Consórcio Ponte Brasil Paraguai e Banco Interamericano do Desenvolvimento (BID). Conclui-se que este projeto alcançou os objetivos propostos com a análise dos indicadores ambientais, no entanto os instrumentos de proteção e conservação ambiental carecem de uma visão socioambiental, uma vez que o meio ambiente possui um caráter transnacional, que, por natureza, exige estes esforços conjuntos na superação dos problemas e na criação de potencialidades comuns, como os exemplos de possíveis soluções propostas ao final do trabalho

A importância das tecnologias da informação e da comunicação para minimizar as dificuldades de aprendizagem em âmbito escolar

Este trabalho refere-se a um projeto de pesquisa, que buscará informações sobre os aspectos que dificultam o processo de construção da leitura e da escrita, dificuldades estas apresentadas por alunos das séries/anos iniciais do Ensino Fundamental, nas quais vem aumentando o índice de dificuldades cognitivas, a cada ano que passa. Pensando nisso, busca-se alternativas para a superação de tais problemas, ficando constatado através de pesquisa na realidade que o professor terá que mudar seus métodos e procedimentos, incluindo as Tecnologias da Informação e da Comunicação no cotidiano da sala de aula, passando a trabalhar de forma mais dinâmica e significativa com os alunos, envolvendo, inclusive, a comunidade escolar, para que tais dificuldades sejam superadas. O referido estudo propõe fornecer alternativas para auxiliar a comunidade escolar, através do uso das TIC’s, da expressão da coleta e análise de dados, contribuindo assim, de forma significativa, para evitar o declínio cada vez mais emergente da capacidade de ler e escrever dos alunos, buscando analisar práticas e experiências positivas para inovar metodologias, direcionando-as às necessidades existentes. Está cada vez mais evidente as dificuldades de aprendizagem que os alunos vêm apresentando a cada ano escolar evidenciando o declínio, dos alunos, dos anos iniciais no processo de leitura, produção da escrita e construção da aprendizagem. Nesse contexto, busca-se através da atual proposta, analisar tal situação; reconhecer o papel das TIC’s como recurso para a melhoria da qualidade no processo de ensino e aprendizagem; analisar o trabalho realizado em uma escola com proposta diferenciada e exitosa; contribuir com sugestões a partir dos resultados, a fim de que os professores possam superar as dificuldades em seu trabalho pedagógico. Assim pergunto: Qual a importância das TIC’s na superação das dificuldades de aprendizagem

Coleção “Nas Capas de Vinil”: David Bowie, moda, música e sem gênero

This work aims the conception of a genderless brand, as well as creating a collection inspired by the music and work of David Bowie. The study is based on a research on the history of gender divisions in fashion, the relationship between fashion and music and how the music industry had an influence on the breakdown of the binarism barries when dressing, as well as a deep study on David Bowie and how he became one of the most important figures not only for music but also for fashion, breaking gender rules. The collection, which is titled "On the Vinyl Covers", features 15 looks that are inspired by the singer's drawings and costumes, as well as the album covers that were released during the first two decades of his career.Este trabalho tem como objetivo a concepção de uma marca de roupas sem gênero, bem como a criação de uma coleção inspirada na música e na obra de David Bowie. O estudo é realizado a partir de uma pesquisa sobre a história das divisões de gênero na moda, a relação entre moda e música e como a indústria musical teve influência na quebra das barreiras do binarismo na hora de se vestir, além de um estudo profundo sobre David Bowie e como ele se tornou uma das figuras mais importantes não só para a música, mas também para a moda, quebrando regras de gênero. A coleção apresentada, que é intitulada “Nas Capas de Vinil”, apresenta 15 looks que são inspirados por desenhos e figurinos do cantor, além das capas dos discos lançados em suas primeiras duas décadas de carreira

Les pratiques enseignantes pour un enseignement sans stéréotypes de genre en 1-2H :: choix des jouets, ressources et actions des enseignant·e·s

Afin de s’orienter vers un système éducatif plus égalitaire, une sensibilisation dès le plus jeune âge aux stéréotypes de genre est à préconiser. C’est effectivement l’intérêt de ce mémoire, qui s’intéresse à un thème particulièrement d’actualité, car il concerne l’égalité entre filles et garçons à l’école. Ce travail s’articule autour de lectures scientifiques ainsi que d’un travail de recherche dans les écoles, avec notamment la rencontre d’enseignant·e·s titulaires de classes de première et deuxième HarmoS, dans lesquelles les stéréotypes de genre sont particulièrement présents. L’étude permet d’une part de mettre en exergue le rôle primordial de l’enseignant·e dans la lutte des stéréotypes de genre à l’école qui est notamment celui de prévenir la création de stéréotypes et de développer le sens critique des élèves, leur permettant ainsi de les reconnaître. D’autre part, elle décrit les pratiques des enseignant·e·s, leurs ressources et leurs actions pour un enseignement basé sur l’égalité des sexes. Ce travail étudie également les critères de choix des jouets des personnes interviewées, ces derniers pouvant être un transmetteur de stéréotypes de genre ou inversement, un moyen de les contrecarrer pour autant qu’ils s’orientent vers une certaine neutralité

Vivências de bebês no contexto de um berçário em Belo Horizonte

Este artigo analisa as vivências de um grupo de bebês inseridos/as em um contexto coletivo de educação e cuidados. Com base no diálogo entre a Teoria Histórico-Cultural e a Etnografia em Educação, acompanhamos um grupo de 13 bebês, com idades entre 10 meses a 1 ano e 2 meses, durante seis meses, visando o conhecimento das suas vivências nesse contexto. O material empírico foi construído por meio de registros fílmicos, fotográficos, anotações em diário de campo e entrevistas semiestruturadas com professoras. Os/as bebês se aproximaram provocados pelo toque corporal, pelos artefatos e iniciaram brincadeiras no berçário. Argumentamos que a aproximação pode ser compreendida como o movimento realizado pelos/as bebês, constituindo um campo de sentidos por meio das vivências naquele contexto e possibilitando a relação entre eles/as. Selecionamos um caso expressivo das vivências de dois bebês, Ícaro e Giulia. Tais vivências revelaram atos de cuidado pelos quais os dois bebês iniciaram e sustentaram suas relações no espaço educacional. As análises revelam (i) a força atrativa dos artefatos culturais; (ii) a diversidade de atividades elencadas na rotina do berçário; (iii) a preciosidade da relação com as professoras; (iv) a fugacidade da dinâmica interativa dos bebês

Estudo de caso: o Instituto Superior de Ciências Policiais e Segurança Interna

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A percepção de formandos sobre a pesquisa em enfermagem no curso de graduação

http://dx.doi.org/10.5902/217976927746Objective: to investigate the perceptions of senior students about research in nursing at undergraduate level. Method: qualitative study, with data collected from a questionnaire applied to 81 senior students of the nursing course of a Higher Education Institution from a city of Bahia, Brazil. The sample was simple random probabilistic. Data was analyzed with the technique of Thematic Content Analysis. This study was approved by the Ethics in Research Committee - Report nº 039/2009. Results: the senior students consider that there are deficits on teaching methodologies and pedagogical practices of professors related to encouraging undergraduate scientific initiation and research production. Almost half of the sample did not conduct research during their studies, and almost the entire sample did not publish research. Conclusion: more emphasis is to be given on educating in favor of research, so that the tripod teaching-research-extension may be present in the studied Nursing Course’s Institution.Objetivo: investigar la percepción de los estudiantes próximos a graduarse sobre la investigación en enfermería en el Curso de Graduación. Método: estudio cualitativo, colecta de datos a partir de cuestionario aplicado con 81 académicos del curso de Enfermería de una Institución de Enseñanza Superior en Bahia, Brasil. La muestra fue probabilística aleatoria simple. El análisis de datos fue efectuado con la técnica del Análisis de Contenido Temático; Estudio aprobado por el Comité de Ética en Investigación - Parecer nº. 039/2009. Resultados: los estudiantes consideran que hay déficit de enseñanza y prácticas pedagógicas cuanto al incentivo a la iniciación científica y a la producción de investigaciones. Casi la mitad de la muestra no realizó investigación durante la graduación, y casi toda la muestra no publicó investigación. Conclusión: es necesario mayor énfasis en educar para la investigación, para que el trípode enseñanzainvestigación-extensión esté presente en la graduación de Enfermería estudiada.http://dx.doi.org/10.5902/217976927746Objetivo: investigar a percepção de formandos sobre a pesquisa em enfermagem no curso de graduação. Método: estudo qualitativo, com coleta de dados a partir de questionário aplicado a 81 formandos do curso de Enfermagem de uma Instituição de Ensino Superior de um município do interior baiano. A amostra foi probabilística aleatória simples. Para analisar os dados, utilizou-se a técnica de Análise de Conteúdo Temática. Estudo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa, sob Parecer nº. 039/2009. Resultados: os formandos consideram haver deficit de metodologias de ensino e práticas pedagógicas de professores quanto ao incentivo à iniciação científica e à produção de pesquisas. Quase metade da amostra não realizou pesquisa durante a graduação e quase toda a amostra não publicou pesquisa. Conclusão: é necessário maior ênfase no educar em prol da pesquisa, para que o tripé ensino-pesquisa-extensão esteja presente na graduação de Enfermagem da instituição em estudo

Identificação do caráter medicinal da espécie Curatella americana por meio das folhas

O uso de plantas medicinais foi durante muito tempo o único recurso disponível para o cuidado da saúde das pessoas. Estes conhecimentos foram transmitidos através das gerações familiares. No entanto, com o avanço tecnológico e científico, os medicamentos industrializados se tornaram o modelo majoritário de tratamento alopático utilizado pela população, deslocando o tratamento por plantas medicinais restritos a determinados grupos populares que detêm este conhecimento. Curatella americana é utilizada para tratamento de inflamação e dor, sendo a sua constituição fitoquímica responsável por esses benefícios ainda pouco estudada. Objetivou-se através desta pesquisa realizar o estudo fitoquímico do extrato bruto das folhas de Curatella americana para a identificação dos metabólitos secundários. A metodologia de extração foi por maceração utilizando etanol como líquido extrator, e a concentração e secagem foi por rotaevaporação onde observou-se um rendimento de, aproximadamente, 37%. Em seguida, foi realizada uma análise fitoquímica do extrato bruto, obtendo-se resultado positivo para fenóis, taninos, açúcares redutores, saponinas, depsídeos e depsidonas, esteroides, triterpenoides e alcaloides, onde apresentam amplas atividades biológicas, dente elas inflamação no caso dos taninos. A ação comprovada na literatura dos metabólitos encontrados nas folhas de Curatella americana justifica, em parte, a utilização popular desta planta medicina