Key Proteins of Oxidative Stress and Addiction Potential Induced with Tramadol by Proteomics and Related Analytical Technologies in Zebrafish Brain

盐酸曲马多(Tramadolhydrochloride,TH)作为一种非麻醉性中枢镇痛药，已经成为世界范围内最广泛使用的处方药。关于曲马多在脊椎动物中的积极作用的报导曾经一直占据主导地位，包括缓解中度至重度疼痛、抗抑郁、抗炎和免疫刺激作用、排尿控制、降低糖尿病症体内的血糖浓度等。然而，近年来曲马多滥用中毒、不良反应和依赖性的市场监测报告和临床案例却日益增多，而滥用相关的神经毒性、功能障碍和依赖性潜力的细胞和分子水平机理的研究报道却极少。因而，迫切需要从分子和细胞水平对曲马多滥用可能造成的依赖性潜力和神经毒性等进行微观分析。本论文选用斑马鱼(Daniorerio)为研究对象，从行为学角度观察和统...Tramadol hydrochloride (TH), an atypical centrally acting opioid analgesic, has become the most prescribed drug worldwide. Previous reports predominantly have focused on the numerous positive response of TH in vertebrates, including analgesia for moderate to severe pain; antidepressant, anti-inflammatory, and immunostimulatory effects, micturition control; an ability to lower glucose in diabetics ...学位：理学博士院系专业：生命科学学院生物学系_生物化学与分子生物学学号：2162006015333

蛋白质辅助基质提高激光解吸/电离多肽离子化率和绝对强度的研究

人血清转铁蛋白(Human serum transferrin,HTF)、牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)、鲨鱼肝铁蛋白(Sphyrna zygaenaliver ferritin,SZLF)、马脾铁蛋白(Horse spleen ferritin,HSF)均能辅助基质提高激光解吸/电离胰岛素(Insulin,INS)和海兔酸性多肽(Aplysiaacidic peptide,AP)离子化率和质谱峰的绝对强度(简称为绝对强度),其中绝对强度分别提高10和4倍,这一现象不依赖于INS浓度,而与蛋白质类型和结构有关.SZLF和脱铁核SZLF(apoSZLF)辅助基质提高INS绝对强度的能力几乎相同,蛋白质中的金属离子含量对这种效应无明显影响,主要取决于蛋白质的氨基酸组成与结构.采用胶内酶解和肽指纹技术(PMF)鉴定HTF过程中,发现基质中分别添加SZLF,apoSZLF和HSF后,HTF肽片段质谱检测的质谱峰数目及绝对强度均有明显增加,进一步提高了数据库鉴定HTF的可信度

器官组织中有机态/无机态重金属比值作为评价海水污染程度的标志物研究

以蓝斑背肛海兔(Notarchus Leachii cirrosus Stimpson,NLCS)为实验材料,研究NLCS经人工海水净化前后,NLCS各器官组织中有机态(结合态)/无机态(游离态)重金属含量相对比值及变化趋势,提出组织细胞中的有机态/无机态重金属比值参数,适合于监测流动海水中各类重金属污染程度及危害性的看法.实验结果发现,NLCS受铜盐污染后,海兔器官组织内的有机态/无机态重金属的比值应低于0.85;受Cd、Pb和Ag盐分别污染后,NLCS各器官组织中的有机态/无机态的Cd、Pb和Ag相对含量比值,分别为1.43~1.55、1.47~2.05和1.78~1.89;金属Mn的安全比值很高,但它的阈值却低于10.21.NLCS各器官组织中有机态/无机态重金属相对比值可作为连续监测流动海水中重金属污染程度及危害性的新颖标志参数,它比选用直接分析动植物及微生物机体中总金属含量作为评价环境污染程度的经典分析法,更为科学且合理,并具有潜在的应用前景

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术分析三七和海兔神经连索内的皂甙组分

基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术能高效解吸三七提取液(Panaxnotoginseng Extraction,PNE)中的混合皂甙分子为皂甙离子,并供质量分析器检测与分析。选用MALDI-TOF质谱技术直接分析色谱纯皂甙样品的纯度,其检测灵敏度优于反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。优化提取中药三七(Panax notoginseng,PN)的混合皂甙,选用MALDI-TOF质谱技术直接分析PNE中的皂甙种类和相对含量,发现PNE至少含有20种不同分子结构的皂甙组分,其中人参皂甙(Ginsenoside)Rg1和三七皂甙(Notoginsen-oside)R1含量相对较高。选用薄板层析法(TLC)制备PNE中的R1皂甙。MALDI-TOF质谱技术研究蓝斑背肛海兔(Notarcus leachiicirrosus Stimpson,NLCS)神经连索内的超微量R1的组成与分布。建立PNE皂甙的指纹图谱,并适合于评价中药三七的品质和分析体内超微量皂甙的代谢过程与机理

蛋白质组学技术鉴定与分析三七粉诱导海兔神经连索表达的差异蛋白质

RP-HPLC分离三七粉提取液,并鉴定含有Rb1、Rg1、Re、R1等皂甙成分。以蓝斑背肛海兔(Notarcusleachii cirrosus Stimpson,NLCS)为分析模型,三七粉提取液为诱导剂,选用蛋白质组技术研究NLCS神经连索诱导前后所表达的差异蛋白质。通过优化双向凝胶电泳分离NLCS神经连索全蛋白质组技术,获得496个蛋白质斑点。采用肽指纹图谱技术和数据库检索比对法,初步鉴定了NLCS受三七粉提取液诱导前后,其神经连索表达13个差异蛋白质,其中较高的匹配率蛋白质为肌动蛋白、3-羟酯酰辅酶A脱氢酶、ATP结合转运子和甲基转移酶12。选用LOC tree软件对13个差异蛋白质进行亚细胞定位,认为它们在保护神经系统中发挥重要的调节作用

基质辅助激光解吸/电离质谱法研究海兔卵多肽内切酶组成、结构与功能

选择DEAE-52纤维素和Sephadex G-150为分离介质,采用柱层析法分离纯化海兔卵多肽酶(En-dopeptidease of Aplysiaegg,AEE)。选用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定AEE纯度和亚基分子量(约39kDa)。基质辅助激光解吸/电离(MALDI-TOF)质谱技术测定AEE由单类型亚基(M)组成,其m/z比值分别为12738.17、18108.79和38221.42,即分子式为[M3+]、[M2+]和[M+]。其中AEE分子量为38221.42Da(称为AEE39),是一种含金属锌的多肽酶。以胰岛素(INS)为探针,研究AEE39酶切INS能力,其酶切产物m/z比值为1449.51、2085.84、4080.41和4165.42。自行设计INS序列分析软件,鉴定AEE39酶切INS的位点,发现易酶切位点是Leu-X(氨基酸残基),其次是Glu-X,部分Phen-X、Asn-X和Ser-X结构也可以发生酶切。通过INS和海兔吸引素的分子结构比对后,指出海兔卵中的AEE39主要功能之一是负责酶切海兔吸引素,起着海兔之间信息交往、召唤、识别和交配的重要作用。AEE39具有酶切酸性多肽(acidic pep-tide,AP)中Leu-Leu的能力,属于一种广谱性多肽内切酶

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术研究人血清转铁蛋白稳定性及裂解产物

制备质谱纯人血清转铁蛋白(HTF),供分子结构分析。选用SDS-PAGE、胶外酶解、基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)、数据库检索和比对技术鉴定铁饱和HTF、双铁HTF(HTF-2Fe3+)、单铁HTF(HTF-Fe3+)和脱铁HTF(apoHTF)的稳定性和裂解产物。以乙腈溶液作为洗脱相,发现铁饱和HTF在RP-HPLC分离纯化过程中产生裂解现象。铁饱和HTF和HTF-2Fe3+经乙腈处理后均能产生不同分子量的短肽裂解产物,指出HTF结构稳定性与络合铁离子数量有关。铁组分改善了HTF分子结构的稳定性。采用比对法,研究在乙腈作用下HTF裂解成为各种各样短肽的规律,初步阐明其裂解机理。在乙腈作用下,HTF可能通过蛋白质去折叠途径,形成不同多聚态HTF或多肽裂解产物。推测目前用于临床诊断先天性糖基化紊乱(CDG)和慢性酒精滥用(CAA)疾病低准确率的起因可能是受HTF裂解产物或多聚体的干扰

监测流动水体污染程度的生物标志物研究进展

利用生物监测流动水体污染程度一直是环境科学研究领域中的热点课题之一。本文综述酶、蛋白细胞和核酸等生物标记物在监测流动水体污染程度方面的研究进展,描述铁蛋白反应器监测流动海水中重金属离子污染的特点,并介绍近年来蛋白组学技术在筛选监测环境污染程度生物标志物中的应用进展

优化提取与分离海兔大脑神经节蛋白质组

蓝斑背肛海兔(Notarcus Leachii cirrosusStimpson,NLCS)属于海洋软体动物.NLCS大脑神经节(cerebral ganglion,CG)富含高丰度的脂类物质,并干扰了三氯醋酸-丙酮法沉淀CG蛋白质.本实验的目的是找到一种适合提取、分离海兔CG蛋白的方法.经各种实验方法对比后,发现超速离心法能有效分离CG破碎液中的脂类化合物,提高双向凝胶电泳法分离BG蛋白质组的分辨率,大约可检测到450个蛋白质点

MALDI-TOF质谱技术研究胰岛素海藻酸钠纳米粒特性

从海洋生物中提取海藻酸纳和壳聚糖作为纳米粒的包被材料,并分别包装成人胰岛素纳米粒。选用基质辅助激光解吸离子化飞行时间(Matrix-assistedlaserdesorptionionization/timeofflight,MALDI-TOF)质谱技术研究胰岛素海藻酸钠纳米粒包装、释放过程及在不同酸碱介质条件下的稳定性