Разработка мультиплексной системы для определения маркеров предрасположенности к развитию сердечно-сосудистых заболеваний

A multiplex system to detect mutations at loci rs5985, rs1799983, rs5918, rs2243093, rs4673, rs4646994, rs1722009, rs3980933, rs71103505 associated with the development of cardiovascular diseases has been developed. These mutations belong to different types - SNP, STR, Ins/Del - therefore, minisequencing and fragment analysis technologies were used to determine them. Oligonucleotide analysis was performed to amplify all loci in a single reaction format. The minisequencing technology, in comparison with fragment analysis, required additional stages of sample preparation; therefore, oligonucleotides for loci with SNP were combined into a separate plex. For the two plexes created, the same composition of the amplification mixture and parameters of the PCR reaction program were optimized, and “bin” panels were developed to interpret the results. The testing of the system confirmed the possibility of detecting mutations at nine loci with high sensitivity and reproducibility. Разработана мультиплексная система для определения мутаций в локусах rs5985, rs1799983, rs5918, rs2243093, rs4673, rs4646994, rs1722009, rs3980933, rs71103505, ассоциированных с развитием сердечно-сосудистых заболеваний. Данные мутации относятся к различным типам - SNP, STR, Ins/Del - поэтому для их определения использованы технологии минисеквенирования и фрагментного анализа. Проведен анализ олигонуклеотидов для амплификации всех локусов в формате одной реакции. Технология минисеквенирования по сравнению с фрагментным анализом потребовала дополнительных этапов пробоподготовки, в связи с чем олигонуклеотиды для локусов с SNP были объединены в отдельный плекс. Для двух созданных плексов оптимизированы одинаковые состав амплификационной смеси и параметры программы ПЦР реакции, разработаны панели «бинов» для интерпретации результатов. Апробация системы подтвердила возможность определения мутаций в девяти локусах с высокой чувствительностью и воспроизводимостью

Синтез 3-изобутилгексагидропирроло[1,2-а]пиразин-1,4-диона

3-Isobutylhexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione, [cyclo(prolyl-leucyl)], which has a wide range of biological effects, was obtained by thermolysis both the L-prolyl-L-leucine methyl ester and the methyl ester L-leucyl-L-proline, for the synthesis of which the removal of tert-butyloxycarbonyl amino protecting groups in tert-butyloxycarbonylprolyl-leucine methyl ester and tert-butyloxycarbonylleucyl-proline methyl ester under the action of a methanolic solution of hydrogen chloride and the treatment of the resulting of methyl esters hydrochlorides L-prolyl-L-leucine and L-leucyl-L-proline with an equimolar amount of triethylamine were used. The starting tert-butyloxycarbonylleucyl-proline methyl ester was prepared like the previously synthesized tert-butyloxycarbonylprolyl-leucine methyl ester by the carbodiimide method. It was found that the cyclization of the methyl ester of L-leucyl-L-proline into the desired diketopiperazine proceeds at a lower temperature than the cyclization of the methyl ester of L-prolyl-L-leucine.3-Изобутилгексагидропирроло[1,2-a]пиразин-1,4-дион, [цикло(пролил-лейцил)], обладающий широким спектром биологического действия, получен термолизом как метилового эфира L-пролил-L-лейцина, так и метилового эфира L-лейцил-L-пролина, для синтеза которых были использованы удаление трет-бутилоксикарбонильных аминозащитных групп в трет-бутилоксикарбонилпролилметоксилейцине и трет-бутилоксикарбониллейцилметоксипролине под действием метанольного раствора хлористого водорода и обработка образующихся при этом гидрохлоридов метиловых эфиров L-пролил-L-лейцина и L-лейцил-L-пролина эквимолярным количеством триэтиламина. Исходный трет-бутилоксикарбониллейцилметоксипролин был получен, как и синтезированный ранее трет-бутилоксикарбонилпролилметоксилейцин, карбодиимидным методом. Установлено, что циклизация метилового эфира L-лейцил-L-пролина в целевой дикетопиперазин протекает при более низкой температуре, чем циклизация метилового эфира L-пролил-L-лейцина

Синтез ацильных производных пролиллейцилглицинамида

Tert-butyloxycarbonylprolylleucylglycinamide is obtained both by the interaction of tert-butyloxycarbonylprol ylleucylglycine ethyl ester with a methanolic ammonia solution and by the reaction of glycine amide with a mixed anhydride which was synthesized from tert-butyloxycarbonylprolylleucine and isobutylchloroformate. The removal of the tert-butyloxycarbonyl group by the action of formic acid or a dioxane solution of hydrogen chloride and treatment of the resulting salts with the corresponding base yielded a prolylleucylglycinamide, by the interaction of which with acetic, benzoic or 5-phenylisoxazole-3-carboxylic acids chlorides acyl derivatives of prolylleucylglycinamide are obtained.Трет-бутилоксикарбонилпролиллейцилглицинамид получен как взаимодействием этилового эфира трет-бутилоксикарбонилпролиллейцилглицина с метанольным раствором аммиака, так и реакцией амида глицина со смешанным ангидридом, синтезированным из трет-бутилоксикарбонилпролиллейцина и изо-бутилхлорформиата. Удаление трет-бутилоксикарбонильной группы под действием муравьиной кислоты или диоксанового раствора хлористого водорода и обработка образующихся при этом солей соответствующим основанием давали пролиллейцилглицинамид, взаимодействием которого с хлорангидридами уксусной, бензойной или 5-фенилизоксазол-3-карбоновой кислот получены ацильные производные пролиллейцилглицинамида

Разработка мультиплексной системы для определения 11 генетических маркеров предрасположенности к развитию ожирения

A system has been developed to identify 11 genetic markers associated with the risk of obesity: rs10852521, rs11075990, rs1121980, rs1421085, rs1477196, rs17817449, rs3751812, rs7206790, rs8047395, rs9940128 (FTO gene) and rs1137101 (LEPR gene) by minisequencing (SNaPshot analysis). The conditions for carrying out the amplification and minisequencing reactions, as well as the compositions of the reaction mixtures, were optimized so that the analysis was carried out for all 11 markers simultaneously. The resulting system was tested and showed a high degree of reproducibility and sensitivity required for the detection of these polymorphisms.С помощью метода минисеквенирования (SNaPshot анализ) разработана система для определения 11 генетических маркеров, связанных с риском развития ожирения: rs10852521, rs11075990, rs1121980, rs1421085, rs1477196, rs17817449, rs3751812, rs7206790, rs8047395, rs9940128 (ген FTO) и rs1137101 (ген LEPR). Условия проведения реакций амплификации и минисеквенирования, а также составы реакционных смесей оптимизированы так, чтобы проводить анализ по всем 11 маркерам одновременно. Полученная система апробирована и показала высокую степень воспроизводимости и чувствительности, необходимой для определения данных полиморфных вариантов

Athlome Project Consortium: a concerted effort to discover genomic and other "omic" markers of athletic performance.

Despite numerous attempts to discover genetic variants associated with elite athletic performance, injury predisposition, and elite/world-class athletic status, there has been limited progress to date. Past reliance on candidate gene studies predominantly focusing on genotyping a limited number of single nucleotide polymorphisms or the insertion/deletion variants in small, often heterogeneous cohorts (i.e., made up of athletes of quite different sport specialties) have not generated the kind of results that could offer solid opportunities to bridge the gap between basic research in exercise sciences and deliverables in biomedicine. A retrospective view of genetic association studies with complex disease traits indicates that transition to hypothesis-free genome-wide approaches will be more fruitful. In studies of complex disease, it is well recognized that the magnitude of genetic association is often smaller than initially anticipated, and, as such, large sample sizes are required to identify the gene effects robustly. A symposium was held in Athens and on the Greek island of Santorini from 14-17 May 2015 to review the main findings in exercise genetics and genomics and to explore promising trends and possibilities. The symposium also offered a forum for the development of a position stand (the Santorini Declaration). Among the participants, many were involved in ongoing collaborative studies (e.g., ELITE, GAMES, Gene SMART, GENESIS, and POWERGENE). A consensus emerged among participants that it would be advantageous to bring together all current studies and those recently launched into one new large collaborative initiative, which was subsequently named the Athlome Project Consortium