Small firms competitive strategy : an exploratory study of a sample of Brazilian companies.

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Assessment of Erwinia amylovora diversity and virulence: from strain molecular typing to immuno-flow cytometry of infected Pyrus fruits

Tese de mestrado, Microbiologia Aplicada, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2020Erwinia amylovora is a phytopathogenic bacterium and the causative agent of fire blight, a destructive disease that affects several members of the Rosaceae family. Pear and apple are particularly susceptible hosts of this bacterium, representing a major concern due to their socioeconomic value. The devasting nature of this disease has led to the classification of E. amylovora as a quarantine organism. Although this bacterium is widespread throughout the world, its emergence in Portugal happened relatively recently when compared to other European countries. Since its first report in 2006 in Fundão region, the number of outbreaks has increased, leading Portugal to loss its statute of Integral Protected Area within the European Union, in 2019. Factors such as the absence of a cure, false-negatives results and the need to understand unknown aspects about the life cycle of E. amylovora, lead to the interest in conducting characterization studies and developing alternative laboratory methods as an attempt to make preventive measures more effective. A set of Portuguese and foreign E. amylovora isolates was characterized by molecular, pathogenicity and virulence studies. Molecular characterization used CRISPR-PCR and genomic fingerprintings, whereas pathogenicity and virulence were assessed by biological tests on immature fruitlets of Pyrus communis cv. “Rocha”. In addition, a flow cytometry and an immuno-flow cytometry protocols were developed using pure and mixed bacterial cultures for the detection and cell viability assessment of E. amylovora in planta. A total of two CRISPR genotypes, A and D, was observed revealing a low genetic diversity among the E. amylovora isolates tested. Genomic fingerprinting reinforced the high homogeneity of this species. In contrast, a wide diversity in virulence was displayed. Flow cytometry and immuno-flow cytometry protocols were validated, revealing the capacity to detect and distinguish different viability states of E. amylovora artificially inoculated in pear fruitlets. In the future, the established protocols may help shed some light over previously undiscovered aspects of E. amylovora life cycle.Erwinia amylovora é uma bactéria fitopatogénica Gram-negativa responsável pela doença comummente denominada por fogo bacteriano. A designação desta doença está relacionada com o desenvolvimento de necroses de cor castanha a preta no hospedeiro durante o processo de infeção, cuja aparência se assemelha a uma queima. Outros sintomas típicos incluem o surgimento de lesões, exsudado bacteriano, cancros nos ramos e tronco, bem como de mumificação dos frutos. Originalmente nativa da América do Norte, E. amylovora foi detetada pela primeira vez no final do século 18. Atualmente, por consequência da ação humana, a doença está amplamente disseminada pelo globo. Devido à elevada capacidade de propagação e ao efeito potencialmente devastador para os seus hospedeiros, E. amylovora foi classificada como um organismo de quarentena. Os hospedeiros desta bactéria pertencem à família Rosaceae, na qual estão inseridos géneros de plantas agrícolas importantes a nível socioeconómico, tais como Malus e Pyrus, Em Portugal, a presença de fogo bacteriano foi reportada pela primeira vez em 2006 no Fundão, data relativamente tardia aquando comparação do surgimento da doença nos restantes países da Europa. Desde então, a ocorrência de situações reportadas em várias regiões do país tem vindo a aumentar, fazendo com que o país perdesse o estatuto de Zona Integral Protegida na União Europeia em 2019. Alguns fatores que tornam esta doença preocupante são a inexistência de cura e o desconhecimento de alguns aspetos do ciclo de vida de E. amylovora. Assim, são aplicadas estratégias de controlo que incluem abordagens complementares, tais como medidas preventivas, profiláticas e de erradicação. Outro fator preocupante é a ocorrência de resultados falso-negativos aquando aplicação dos métodos utilizados para o diagnóstico desta bactéria. Estes podem dever-se a uma concentração bacteriana insuficiente ou à indução do estado viável não cultivável em E. amylovora, o qual pode estar associado, por exemplo, a condições climáticas adversas e à utilização de compostos cúpricos como medida profilática. Um diagnóstico errado pode conduzir à falta de aplicação de medidas de controlo e, consequentemente, acarretar consequências catastróficas. O presente trabalho teve dois objetivos. O primeiro consistiu na caracterização de um conjunto de isolados de Erwinia amylovora da Coleção Portuguesa de Bactérias Fitopatogénicas através de estudos genómicos, de patogenicidade e de virulência. O segundo compreendeu o desenvolvimento e validação de protocolos de citometria de fluxo e de imuno-citometria de fluxo, para servirem como método de diagnóstico alternativo na deteção e avaliação da viabilidade celular de populações de E. amylovora presentes em material infectado. Um total de 48 isolados de E. amylovora foram caracterizados genotipicamente a partir da utilização CRISPR-PCR e de fingerprintings genómicos, nomeadamente rep- e MSP-PCR. A patogenicidade e virulência destes isolados foram caracterizadas a partir da utilização de frutos imaturos de Pyrus communis cv. “Rocha”, os quais foram artificialmente infetados por um subconjunto dos 48 isolados. Após 6 e 12 dias de infeção, foram registados o tamanho da lesão necrótica e a presença/ausência de exsudado bacteriano, respetivamente. Para avaliação da viabilidade celular de E. amylovora por citometria de fluxo, foram testados três fluoróforos diferentes, nomeadamente Syto9, PI e DIBAC4(3). Estes foram aplicados em células tratadas por calor e em células não tratadas. A aplicação do protocolo de imuno-citometria de fluxo compreendeu o uso do anticorpo monoclonal Ea7A IVIA e de um anticorpo secundário conjugado com FITC. Ambos os protocolos foram testados primeiramente numa cultura pura de E. amylovora e posteriormente em culturas mistas. Por fim, os dois protocolos foram implementados na deteção e avaliação de viabilidade celular de E. amylovora presente em peras imaturas cv. “Rocha” infetadas artificialmente. A técnica CRISPR-PCR permitiu diferenciar os isolados em dois grupos consoante a presença ou ausência da duplicação do spacer 1029, nomeadamente em genótipo A e genótipo D, respetivamente. A análise dos isolados Portugueses permitiu verificar que ambos os genótipos estão presentes no país desde 2010 e que existe uma ligeira predominância do genótipo D, o qual foi registado em 17 dos 31 isolados. Em termos de distribuição, observou-se que o genótipo A e D estão presentes nas regiões Centro e Oeste de Portugal, contudo no Alentejo só se verificou a presença do genótipo A. Aquando análise conjunta de resultados de estudos prévios com os que foram obtidos no presente trabalho, verificou-se que o genótipo A é o genótipo mais distribuído na Europa, possivelmente devido à introdução mais precoce do mesmo no continente Europeu. As técnicas de fingerprinting genómico utilizadas, nomeadamente rep- e MSP-PCR, permitiram a obtenção de perfis genómicos complexos, mas muito homogéneos entre si. Desta forma, os mesmos mostraram não ter poder discriminatório suficiente para a diferenciação dos isolados de E. amylovora a nível infraespecífico. Estes resultados são o reflexo de uma variedade genómica limitada característica desta espécie bacteriana, que culmina numa elevada homogeneidade entre os isolados. Os ensaios em peras imaturas revelaram que, à excepção dos isolados CPBF 142 e CPBF 544, 43 isolados são patogénicos, uma vez que possuíram a capacidade de induzir o aparecimento de pelo menos um dos sintomas típicos do fogo bacteriano no hospedeiro. Todos os isolados patogénicos provocaram lesão necrótica de cor castanha a preta, contudo apenas 28 isolados produziram exsudado bacteriano. A análise destes sintomas permitiu observar variabilidade na virulência, de tal modo que os isolados foram distribuídos em três categorias de virulência, nomeadamente baixa, média e alta. Estas categorias tiveram em consideração o tamanho da lesão necrótica provocada no hospedeiro. Adicionalmente, observou-se a existência de correlação entre a categoria de virulência baixa e o genótipo D. Os dados de CRISPR-PCR, patogenicidade, virulência e presença/ausência de exsudado bacteriano foram agrupados para uma análise polifásica de modo a adquirir mais informação acerca dos isolados. Os dados obtidos por fingerprinting genómico não foram considerados, uma vez que não tiveram o poder discriminatório adequado. A utilização desta abordagem permitiu separar os isolados em 11 grupos de estirpes distintos. Contudo, não foi possível fazer uma associação entre estes grupos e o hospedeiro original a partir do qual cada isolado foi obtido. Relativamente à citometria de fluxo, a utilização dos fluoróforos permitiu a distinção de diferentes populações relativamente à integridade celular e potencial membranar presentes na cultura pura de E. amylovora. De facto, esta técnica apresentou uma boa correlação entre a viabilidade esperada e a observada, o que significa que os três fluoróforos se mostraram apropriados para serem utilizados em estudos de viabilidade celular nesta bactéria. O estudo de viabilidade celular de E. amylovora em cultura mista ficou comprometido devido ao comportamento semelhante que as bactérias podem ter face aos fluoróforos. O protocolo de imuno-citometria de fluxo permitiu detetar E. amylovora em cultura pura a partir da observação de uma elevada intensidade de fluorescência verde. Em cultura mista, para além da intensidade de fluorescência verde característica de E. amylovora, verificou-se também a ocorrência de uma emissão de fluorescência verde menor que se supõe que resulte de ligações inespecíficas entre o anticorpo secundário e outros alvos que não o anticorpo monoclonal Ea7A IVIA. Contudo, uma vez que a intensidade da emissão de fluorescência verde adicional foi reduzida, a mesma não impossibilitou a detecção de E. amylovora. O presente estudo reforçou a paradoxalidade existente entre a homogeneidade genómica e a heterogeneidade de virulência em Erwinia amylovora. Adicionalmente, o mesmo mostrou que o desenvolvimento de um potencial método alternativo para a detecção desta bactéria, nomeadamente com recurso a citometria de fluxo e técnicas afins, pode significar uma melhoria considerável no processo de diagnóstico, bem como abrir portas para descobertas futuras relacionadas com o ciclo de vida de E. amylovora

The effect of gamma-cyclodextrin addition in the self-assembly behavior of pyrene labeled poly(acrylic) acid with different chain sizes

The interaction between poly(acrylic acid) polymers (PAA) of low- (2000 g/mol) and high- (450,000 g/mol) molecular weight (Mw) hydrophobically modified with pyrene (PAAMePy) and beta- and gamma-cyclodextrins (beta-CD, gamma-CD) was investigated with fluorescent techniques. The interaction with beta-CD promotes little variation in the spectral and photophysical behavior of the polymer, whereas significant changes are observed upon addition of gamma-CD. The degree of inclusion (between the pyrene groups of the polymer and the cyclodextrins) is followed through the observation of the changes in the absorption, excitation (collected in the monomer and excimer emission regions) and emission (IE/IM ratio) spectra and from time-resolved data. Within the studied range of gamma-CD concentration, the fluorescence decays of the long chain (high Mw) PAAMePy polymers were found tri-exponential in the monomer and excimer emission regions in agreement with previous studies. In the case of the low Mw PAAMePy polymers, tri-exponential decays were observed at the monomer and excimer emission wavelengths. However, when a gamma-CD concentration of 0.01 and 0.03 M is reached for, respectively, the low- and high-labeled pyrene short chain (low Mw) polymers, the fluorescence decays in the excimer region become biexponential (two excimers) with no rising component, thus showing that all pyrene groups are encapsulated (and preassociated) into the gamma-CD cavity. In the case of the high Mw polymers, the addition of gamma-CD has been found to change the level of polymer interaction from pure intramolecular (water in the absence of cyclodextrin) to a coexistence of intra- with intermolecular interactions. © 2008 Wiley Periodicals, Inc. J Polym Sci Part A: Polym Chem 46: 1402-1415, 200

Caminhos da resiliência: Entrevista com Rosilene Tuxá sobre Ancestralidade, Lutas Indígenas e Educação Escolar Diferenciada

Rosilene Tuxá possui Graduação em História pela Universidade de Pernambuco – UPE (1996), Graduação em Licenciatura Intercultural em Educação Escolar Indígena – Ciências Matemática e da Natureza pela Universidade do Estado de Mato Grosso – UNEMAT (2006), Especialização em História do Brasil pelo Centro de Ensino Superior do Vale do São Francisco – CESVASF (2006), Mestrado em Educação e Contemporaneidade pela Universidade do Estado da Bahia – UNEB (2011), Doutoranda em Antropologia Social pela Universidade de Brasília - UNB. Atualmente é Professora do Magistério Superior, Dedicação Exclusiva da Universidade Federal do Amapá, atua na Área de Ciências Humanas (História e Antropologia) e Educação; Membro do Núcleo Docente Estruturante do Curso de Licenciatura Intercultural Indígena; Desenvolve pesquisa com povos indígenas, atuando como pesquisadora indígena do OPARÁ: Centro de Pesquisas em Etnicidades, Movimentos Sociais e Educação da Universidade do Estado da Bahia – UNEB e pesquisadora do Grupo de Estudos, Pesquisa e Práticas em Educação Intercultural em Ciências da Natureza e Matemática – GECIM da Universidade Federal do Amapá – UNIFAP

Evaluation of antibiotic prescription for upper respiratory tract infections in the community pharmacy setting

This is an Open access article distributed under the terms of Creative Commons Attribution 4.0 International License. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/"Objectives: To empirically classify the etiology of URTI; to study the prescription pattern for antibiotics in URTI; and to analyze the necessity and adequacy of prescribed therapy. Study design: Observational non analytical cross-sectional study. Study sites: Two community pharmacies located in Almada and in Elvas. Study population: Patients with an antibiotic prescription for a URTI (self use) and age greater than or equal to 18 years. Methods: Clinical and therapeutic data were collected during patient observation performed by a training pharmacist, and complemented with information collected through a questionnaire administered face-to-face to patients meeting the inclusion criteria and agreeing to participate. Empirical classifications were developed, one to ascertain the probability of URTI, based on Centor criteria, and another, to judge the need for antibiotic therapy, based on additional criteria considering subpopulations known to be at higher risk. Data was analyzed using the software SPSS, version 20.0. Results: The sample included 22 patients (27.3% recruited in Almada and 72.7% in Elvas). The most frequently prescribed antibiotic class was macrolides (54.5%), followed by penicillins (36.4%). In the first group, clarithromycin prevailed (66.7%) and in the second group, the more common was the association amoxicillin/clavulanic acid (75%). Considering the empirical classification developed, it was estimated that only one patient (4.5%) presented signs and symptoms suggestive of URTI with probable bacterial aetiology, and only three patients (13.6%) had an indication for antimicrobial therapy. Conclusion: The majority of patients observed were classified as having infections with apparently non-bacterial aetiology, for which the prescription of antibiotic would have been probably needless. This alerts to the overuse of antibiotics in the community setting, particularly for URTI, and its contribution to resistance.

O processo de tornar-se : um estudo de caso na perspectiva cutltural

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Psicologia, Departamento de Psicologia Escolar e do Desenvolvimento, Programa de Pós-Graduação em Processos de Desenvolvimento Humano e Saúde, 2013.O presente trabalho, na perspectiva cultural, busca contribuir com as pesquisas na área de Psicologia do Desenvolvimento, utilizando metodologia qualitativa, especialmente a narrativa da história de vida, buscando rupturas e marcadores que possam ser consideradas indicadores de desenvolvimento humano durante toda a vida, com possibilidades até o último suspiro. Compreende-se o desenvolvimento humano como um fenômeno sistêmico, aberto, bilateral, entre a relação da pessoa com o ambiente, mediado dialogicamente pela cultura. Além das entrevistas semiestruturadas realizadas para esta pesquisa, foram analisados DVDs com entrevistas feitas por terceiros e documentos escolhidos pela participante. O objetivo geral da investigação foi analisar a trajetória de vida, buscando compreender como a narrativa da história de vida ou autobiográfica pode se tornar uma referência importante na compreensão da identidade do sujeito e sua relação com a cultura, construindo uma estrutura e uma dinâmica psicológica, cuja autoria pode ser assumida pela participante. Foi realizada uma análise da narrativa, organizando-se os relatos em crônicas, tendo como perspectiva o reconhecimento dos significados e sentidos que a participante deu a fatos, lugares e pessoas, buscando pontos que provavelmente geraram mutação na sua trajetória de vida. O resultado das análises mostrou que todos os elementos considerados tiveram importância na compreensão da trajetória de vida da participante, e que a narrativa na primeira pessoa, autobiográfica, ainda que sendo complementada pelo relato dos outros e por todo o material utilizado, apresentou-se como recurso importante e legítimo no sentido de demarcar os momentos cruciais de seu desenvolvimento. A pesquisa, especialmente por trabalhar com uma história de vida tão longeva, que testemunhou momentos significativos da história ocidental, traz importantes contribuições para os estudos sobre Psicologia do Desenvolvimento, na perspectiva cultural e para outros campos do conhecimento. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACTThis dissertation in the cultural perspective seeks to contribute to the research in developmental psychology by using qualitative methodology, especially the narrative of a life history, seeking breaks and markers that may be considered indicators of human development throughout life, with its possibilities until the last breath. Human development is understood as an opened, bilateral systemic phenomenon which takes place between the person's relationship and the environment, dialogically mediated by culture. Besides the semi-structured interviews conducted for this research, interviews on DVDs produced by third parties and documents chosen by the participant have contributed to the analyses. The overall goal of the inquiry was to analyze the trajectory of life, trying to understand how Life history or the autobiographical narrative can become an important reference in the understanding of the subject's identity and its relation to culture, building a structure and a psychological dynamics whose authorship can be assumed by the participant. An analysis of the narrative was made possible by transforming the reports in chronicles in an attempt to recognize the senses and the meanings that the participant attributed to facts, places and people, seeking points that probably generated mutation on her life course. The result of the analysis showed that all elements considered were important in understanding the life trajectory of the participant, and that the first-person narrative, autobiographical, although being complemented by the narrative of others together with all the used material , has presented itself as an important and legitimate instrument to demarcate the crucial moments of her development. The research, especially by working with a long-lived life story, which has witnessed significant moments of the Western history, brings important contributions to the study of developmental psychology, in cultural perspective and in other fields of knowledge

Estudo de Sistemas de Produção Fotovoltaica para Autoconsumo de uma Biorrefinaria

A minha tese de mestrado insere-se na área da eficiência energética na indústria, mais em concreto uma biorrefinaria real, a Bioportdiesel S.A, localizada em Baltar. Após discussão do projeto a realizar, foi decidido em reunião com a mestranda, a orientadora e o administrador da empresa, o Eng. Mário Coelho que a melhor opção seria o estudo de sistema fotovoltaico para autoconsumo. Assim sendo, primeiramente foram analisadas as faturas elétricas durante o ano de 2015; foi realizada uma estimação dos diagramas de carga para cada mês do ano, um para os dias da semana, outro para o sábado e mais um para os domingos e feriados; obtive o preço praticado em cada mês do ano referido, tendo em conta a proposta tarifária atualmente em vigor.De momento, estou a analisar os resultados obtidos no software Homer, de modo a obter a potência ótima a instalar, e a potência que é possível instalar tendo em conta a área útil disponíve

O USO DA GESTÃO DE PROJETOS PARA A IMPLANTAÇÃO DE UMA GESTÃO DA INFORMAÇÃO INTEGRADA E PARTICIPATIVA: A EXPERIÂNCIA DA COORDENADORIA DE EDUCAÇÃO ABERTA E A DISTÂNCIA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA-MG

A gerência da Educação a Distância exige de seus gestores executarem tarefas de planejamento, sistematização, organização, direção e controle de processos e projetos e por isso não pode prescindir de um gerenciamento da informação que atenda aos requisitos de integração, de responsabilidade coletiva e de participação. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo a implementação da gestão da informação na Coordenadoria de Educação Aberta e a Distância da Universidade Federal de Viçosa (CEAD-UFV), seguindo a metodologia de gerenciamento de projetos com base numa modificação do dotProject, um software livre de código aberto. Para tanto, foi desenvolvido e implementado um sistema de gerenciamento da informação no órgão, com base na metodologia da gestão de projetos para organizações de tecnologia da informação e comunicação. Constatou-se, de modo geral, que o modelo implantado ofereceu à CEAD-UFV uma visão sistêmica de seus projetos e dinamizou o fluxo de informações, a experiência mostrou ainda que esse modo de gestão baseado na gerência de projetos permite enfatizar a sinergia entre grupos necessária no contexto de EaD