Uso de baculovírus como ferrramenta para produção de antígenos vacinais e “virus like particles” (VLPs)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016.Os baculovírus são vírus de insetos amplamente utilizados no controle biológico de pragas agrícolas e também como ferramenta para expressão de proteínas heterólogas. Os baixos custos, a segurança na manipulação e as diferentes formas de expressão de proteínas tornam os baculovírus e células de inseto uma escolha eficaz para a correta expressão de antígenos vacinais e produção de VLPs (“Virus like particles”). No capítulo 1 deste trabalho, foi avaliado o potencial imunogênico de BVs (“Budded virus”) recombinantes contendo o EDIII (Domínio III da proteína de envelope do vírus da Febre amarela – FA) fusionado à proteína GP64 dos baculovírus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) e Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV); e também de uma massa protéica gerada pela fusão de EDIII com a proteína poliedrina de AcMNPV. O EDIII interage com os receptores celulares e contém os epítopos reconhecidos pelos anticorpos neutralizantes, sendo assim alvo para a produção de uma vacina de subunidade. Foi mostrado neste trabalho, a confirmação da correta expressão das proteínas recombinantes (GP64 + EDIII e Poliedrina + EDIII) por Western blot, microscopia de luz e confocal. No caso do EDIII fusionado à GP64 de AcMNPV e AgMNPV, as partículas virais recombinantes foram purificadas e inoculadas em camundongos. O teste de proliferação de linfócitos indicou uma maior proliferação em camundongos inoculados com o vírus recombinante contendo o EDIII fusionado à proteína GP64 do baculovírus AgMNPV quando comparado com o controle LPS. Testes complementares serão feitos, para avaliar o perfil da resposta imunológica e confirmar a obtenção de um antígeno vacinal contra FA. No capítulo 2, o sistema baculovírus de expressão foi utilizado para expressar o precursor da proteína GAG (Pr55) de HIV-1. A expressão de Pr55 HIV-1 é suficiente para a montagem de VLPs na membrana plasmática da célula do hospedeiro. Porém, a proteína GP64 de baculovírus é altamente imunogênica e também é expressa na superfície de células infectadas e normalmente está presente na superfície da VLP. Neste trabalho, mostramos que não é possível separar BVs e VLPs produzidos em um mesmo ciclo de infecção por baculovírus mesmo usando diferentes metodologias de separação. Então, utilizando um sistema que consegue produzir baculovírus recombinantes livres de GP64, foi construído o vírus recombinante vGAGHIV-1 GP64 null e utilizado na infecção de células Sf9. Por Western blot foi observado a perda do sinal da proteína GP64 de baculovírus no extrato de células infectadas com esse vírus recombinante. Essas mesmas células foram visualizadas por microscopia eletrônica de transmissão (MET), mostrando que mesmo quando GP64 não está presente (o que resulta na ausência de produção de BVs), o brotamento de VLPs continua a acontecer. Essa técnica mostrou-se eficiente para a produção de VLPs livres de partículas ou proteínas baculovirais. Este trabalho confirma a eficiência do uso do sistema de expressão baseado em baculovírus para a expressão de proteínas e VLPs de interesse famacológico.Baculoviruses are insect viruses widely used in the biological control of agricultural pests and as a tool for heterologous protein expression. Their low production costs, security in manipulation and the many ways of protein expression, make baculoviruses and insect cells an effective choice for the efficient expression of vaccine antigens and VLPs (Virus like particles) production. In chapter 1 of this work, it was evaluated the immunogenic potential of recombinant BVs (Budded virus) containing EDIII (Yellow fever virus -YF- envelope protein domain III) fused to the Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) and Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) GP64 protein; and also of a protein mass generated by the fusion of the EDIII and AcMNPV polyhedrin protein. The EDIII interacts with cell receptors and contains epitopes recognized by neutralizing antibodies, being the target for the production of a subunit vaccine. We showed in this work the confirmation of the correct recombinant protein expression (GP64 + EDIII and Polyhedrin + EDIII) by Western blot, optical and confocal microscopy. In the case of the EDIII fused with AcMNPV and AgMNPV GP64, the recombinant viral particles were purified and inoculated in mice. The lymphocyte proliferation assay showed a higher proliferation in mice immunized with recombinant virus containing the EDIII fused with the GP64 from the AgMNPV baculovirus comparing to the LPS control. Complementary assays will be carried out in order to evaluate the immunological response pattern and to confirm the production of a vaccine antigen against YF. In chapter 2, the baculovirus expression system was used to express the GAG protein precursor (Pr55) of HIV-1. The Pr55 expression is sufficient to VLP assembly on the cell host plasma membrane. However, the GP64 baculovirus protein is highly immunogenic and is also expressed on the surface of infected cells and is also present on the surface of the VLP. In this work, we showed that is not possible to separate BVs and VLPs produced in the same baculovirus infection cycle using different separation methodologies. Then, using a system able to produce GP64 free recombinant baculovirus, the recombinant virus vGAGHIV-1 GP64 null was produced and used to infect Sf9 cells. By Western blot analyses, it was shown that the baculovirus protein GP64 signal was missing in the recombinant virus infected cell extract. These same cells were observed by transmission electron microscopy (MET), showing that even when the GP64 is absent (which results in the absence of BVs production), VLPs budding continues to happen. This technique was shown to be efficient for VLPs production, free of baculvirus particles or proteins. This work confirms the efficiency of the baculovirus expression system for protein expression and VLPs of pharmacological interest

Tecnologias subalternas : um exercício de imaginação política e reinvenção de alteridades

Trabalho de conclusão de curso (graduação)— Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Sociais, Departamento de Antropologia, 2017.Este trabalho gira em torno de exercícios de imaginação política, a partir da ideia de subalternidade. Com isso, o trabalho promove alguns deslocamentos em relação ao conceito, concebendo-o não apenas como um marcador mas também como uma tecnologia. Dessa maneira, são contadas algumas histórias que engatilharam a fabulação da concepção daquilo que chamo por tecnologias subalternas. O trabalho investe na adoção dessas tecnologias como possíveis agentes de atuação em novos porvires, dando, assim, uma função para essas tecnologias no que se refere as práticas políticas e epistemológicas

Effects of metformin on inflammation, oxidative stress, and bone loss in a rat model of periodontitis.

AimTo evaluate the effects of metformin (Met) on inflammation, oxidative stress, and bone loss in a rat model of ligature-induced periodontitis.Materials & methodsMale albino Wistar rats were divided randomly into five groups of twenty-one rats each, and given the following treatments for 10 days: (1) no ligature + water, (2) ligature + water, (3) ligature + 50 mg/kg Met, (4) ligature + 100 mg/kg Met, and (5) ligature + 200 mg/kg Met. Water or Met was administered orally. Maxillae were fixed and scanned using Micro-computed Tomography (μCT) to quantitate linear and bone volume/tissue volume (BV/TV) volumetric bone loss. Histopathological characteristics were assessed through immunohistochemical staining for MMP-9, COX-2, the RANKL/RANK/OPG pathway, SOD-1, and GPx-1. Additionally, confocal microscopy was used to analyze osteocalcin fluorescence. UV-VIS analysis was used to examine the levels of malondialdehyde, glutathione, IL-1β and TNF-α from gingival tissues. Quantitative RT-PCR reaction was used to gene expression of AMPK, NF-κB (p65), and Hmgb1 from gingival tissues. Significance among groups were analysed using a one-way ANOVA. A p-value of p<0.05 indicated a significant difference.ResultsTreatment with 50 mg/kg Met significantly reduced concentrations of malondialdehyde, IL-1β, and TNF-α (p < 0.05). Additionally, weak staining was observed for COX-2, MMP-9, RANK, RANKL, SOD-1, and GPx-1 after 50 mg/kg Met. OPG and Osteocalcin showed strong staining in the same group. Radiographically, linear measurements showed a statistically significant reduction in bone loss after 50 mg/kg Met compared to the ligature and Met 200 mg/kg groups. The same pattern was observed volumetrically in BV/TV and decreased osteoclast number (p<0.05). RT-PCR showed increased AMPK expression and decreased expression of NF-κB (p65) and HMGB1 after 50 mg/kg Met.ConclusionsMetformin, at a concentration of 50 mg/kg, decreases the inflammatory response, oxidative stress and bone loss in ligature-induced periodontitis in rats

ESTRESSE OCUPACIONAL RELACIONADO À ASSISTÊNCIA DE ENFERMAGEM EM TERAPIA INTENSIVA

Objetivo: estimar a prevalência de estresse ocupacional entre profissionais de enfermagem que atuam em Unidade de Terapia Intensiva e identificar sua associação com variáveis sociodemográficas, profissionais e relacionadas à assistência de enfermagem. Método: estudo transversal, realizado em um hospital de ensino de Salvador, Bahia, Brasil, com 54 profissionais. Os dados foram coletados entre fevereiro e março de 2020 por meio da Escala Bianchi de Stress e analisados pelo Programa Stata. Resultados: a prevalência de estresse ocupacional em nível médio ou alto foi de 57,4%. Maiores níveis de estresse foram associados significativamente ao menor tempo de formação (p-valor=0,05), ser enfermeiro (p-valor=0,00), enfrentar a morte do paciente (p-valor=0,01), atender aos familiares dos pacientes críticos (p-valor=0,00) e atender às necessidades dos familiares (p-valor=0,00). Conclusão: a elevada prevalência de estresse ocupacional, bem como os fatores associados identificados, foram informações essenciais para implementação de estratégias preventivas. Descritores: Estresse Ocupacional. Cuidados de Enfermagem. Unidade de Terapia Intensiva. Equipe de Enfermagem. Enfermagem

ROBÓTICA PEDAGÓGICA LIVRE E EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA: UMA EXPERIÊNCIA FORMATIVA

As transformações ocorridas no mundo, advindas do avanço das Tecnologias de Informação e Comunicação - TIC tiveram reflexos na educação, demandando do professor um novo perfil para sua prática e, consequentemente, uma formação que abarque a fluidez e dinâmica existente nessas tecnologias. Assim, cabe ao professor ressignificar sua prática, buscando alternativas criativas que possibilitem aprendizagens prazerosas e contextualizadas. Nesse cenário, este trabalho se propõe apresentar a Robótica Pedagógica Livre (RPL), em um viés articulador entre tecnologia-prática pedagógica, através de uma experiência formativa que articular a utilização das TIC com a RPL, a partir de um curso a distância. Como metodologia fora adotada a pesquisa-ação, considerando que as etapas da formação foram construídas conjuntamente com os sujeitos e trabalhadas no ambiente virtual de aprendizagem. Assim, a RPL pode ser considerada uma proposta de redimensionamento da tecnologia, capaz de potencializar o fazer pedagógico

Offspring analysis in a polygyne colony of Melipona scutellaris (Hymenoptera: Apidae) by means of morphometric analyses

In the few cases of polygyne colonies in Melipona the presence of active queens is common, generating offspring from different maternal origins. One of the techniques employed to identify maternity of the offspring is morphometric analysis, which allows inter- and intraspecific groups to be discriminated. The objective of this study was to identify the maternal source of Melipona scutellaris workers from a polygyne colony with five queens using wing morphometric analysis. The right forewings and hindwings of 209 workers were used. The workers came from a brood disk extracted from the colony and taken to a B.O.D. incubator maintained at 28±1°C and 75% relative humidity. Conventional and geometric morphometry analyses were made. Groups were discriminated, indicating that the material analyzed had different maternal origins, with predominance of one queen, which was responsible for 57% of the progeny. Cluster analysis allowed to confirm that the use of conventional morphometry can identify offspringgroups from existing queens in a M. scutellaris polygyne colony. However, such identification was not possible with geometric morphometry

Condições higienico sanitarias de feiras livres:: uma revisão integrativa

O objetivo do estudo é realizar um levantamento da literatura sobre as condições higiênico-sanitárias de feiras livres no Brasil a partir da análise de artigos publicados em revistas indexadas. Nesse sentido, este estudo é delineado como uma revisão integrativa da literatura, sendo realizada uma busca na Biblioteca Virtual em Saúde (BVS) utilizando os descritores em saúde: Condições sanitárias; Manipulação de alimentos, e Higiene dos alimentos de modo a encontrar 14 artigos  que se enquadraram no critério de inclusão do estudo. Após a categorização dos artigos foi possível constatar que na maioria das feiras livres avaliadas, as condições higiênicas de comercialização dos produtos alimentícios são insatisfatórias, constituindo-se um importante vetor no processo de contaminação e proliferação de doenças de origem alimentar. A maior dificuldade encontrada nas feiras é que a há uma necessidade de realizar medidas corretivas a fim de reduzir os riscos nos ambientes em que esses alimentos são comercializados. Descritores: Condições sanitárias; Manipulação de alimentos; Higiene dos alimentos

Estresse oxidativo e fenilcetonúria: uma revisão integrativa

Phenylketonuria is an autosomal recessive disease. It is caused by an innate error that occurs in individuals where there is a change in the PAH chromosome 12q22-q24.2 gene, which encodes phenylalanine hydroxylase. Also known as PKU, the pathology consists of the absence of this enzyme or the lack of its full functionality, which can be detected in the first days of life. Treatment for PKU is essentially dietary and should be started as soon as it is diagnosed. The dietary restriction of phenylketonuric individuals is extensive, based on a limited diet that offers low content of, or free from phenylalanine. The decrease in phenylalanine levels in the blood aims to protect the patient from neurological damage caused by high levels of this amino acid. Commonly, diets are based on fruits and vegetables with low Phe levels accompanied by food formulas to achieve the necessary protein intake. Based on scientific studies, there is evidence that the restrictive diet, to which these patients have been submitted, results in a decrease in the body's antioxidant capacity and, consequently, contributes to the increase in oxidative stress caused by the presence of reactive oxygen species. Thus, the objective of the present study was to conduct an integrative review based on scientific studies regarding the correlation between oxidative stress in phenylketonuric patients and pathology. The analysis of selected studies showed a strong correlation between oxidative stress and neurological disorders in individuals diagnosed with PKU, being more common in patients with delayed diagnosis, showing that the restrictive diet is an essential factor in protecting patients.A fenilcetonúria é uma doença autossômica recessiva. É causada por um erro inato que ocorre em indivíduos onde há uma alteração no gene 12q22-q24.2 do cromossomo PAH, que codifica a fenilalanina hidroxilase. Também conhecida como PKU, a patologia consiste na ausência dessa enzima ou na falta de sua plena funcionalidade, que pode ser detectada nos primeiros dias de vida. O tratamento da PKU é essencialmente dietético e deve ser iniciado assim que for diagnosticado. A restrição alimentar de indivíduos fenilcetonúricos é extensa, baseada em uma dieta limitada que oferece baixo teor ou isento de fenilalanina. A diminuição dos níveis de fenilalanina no sangue visa proteger o paciente de danos neurológicos causados por níveis elevados desse aminoácido. Comumente, as dietas são baseadas em frutas e vegetais com baixos níveis de Phe acompanhados de fórmulas alimentares para atingir a ingestão proteica necessária. Com base em estudos científicos, há evidências de que a dieta restritiva, à qual esses pacientes têm sido submetidos, resulta na diminuição da capacidade antioxidante do organismo e, consequentemente, contribui para o aumento do estresse oxidativo causado pela presença de espécies reativas de oxigênio. Assim, o objetivo do presente estudo foi realizar uma revisão integrativa baseada em estudos científicos sobre a correlação entre estresse oxidativo em pacientes fenilcetonúricos e patologia. A análise dos estudos selecionados mostrou forte correlação entre estresse oxidativo e distúrbios neurológicos em indivíduos diagnosticados com PKU, sendo mais comum em pacientes com diagnóstico tardio, mostrando que a dieta restritiva é um fator essencial na proteção dos pacientes

Que escola pós-pandemia?

The covid-19 pandemic has drastically altered the social scenario, impacting all sectors of life. In the educational field, the rapid transition to remote teaching imposed by social isolation, affected the lives of students, educators and families, as well as their teaching-learning process. In addition to the psychic effects resulting from social isolation, the replacement of face-to-face teaching in the pandemic context accentuated the lack of interest of young people in school, which was already losing political and existential meanings for them, making evident the lesser engagement with remote teaching. In addition, the reduced economic conditions of a large part of the population were also deepened, corroborating the difficulties of accessing the internet and the media necessary for this adaptation. If the school was no longer able to attract them, in the context of the pandemic it seems even more distant and unable to help them deal with the current impasses. In this context, we carried out a qualitative research, seeking to listen to young people about their feelings and experiences in the context of the pandemic, as well as about the meanings they attribute to school, especially at a time of transition when returning to face-to-face classes. The research sought to investigate, above all, which school they would like to help build in a post-pandemic context, considering that adaptations will be required by all agents involved in education.La pandemia del covid-19 ha cambiado drásticamente el escenario social, impactando todos los sectores de la vida. En el ámbito educativo, la rápida transición a la enseñanza a distancia impuesta por el aislamiento social, afectó la vida de estudiantes, educadores y familias, centrándose en el proceso de enseñanza-aprendizaje. Además de los efectos psíquicos derivados del aislamiento social, la sustitución de la enseñanza presencial en el contexto de la pandemia acentuó el desinterés de los jóvenes por la escuela, que ya perdía significados políticos y existenciales para ellos, evidenciándose la menor compromiso con la enseñanza a distancia. Además, también se profundizaron las reducidas condiciones económicas de gran parte de la población, corroborando las dificultades de acceso a internet y los medios necesarios para esta adaptación. Si la escuela ya no fue capaz de atraerlos, en el contexto de la pandemia parece aún más distante e incapaz de ayudarlos a lidiar con los impasses actuales. En ese sentido, realizamos una investigación cualitativa, buscando escuchar a los jóvenes sobre sus sentimientos y vivencias en el contexto de la pandemia, así como sobre los significados que le atribuyen a la escuela, especialmente en un momento de transición al volver a enfrentar las clases presenciales. La investigación buscó indagar, sobre todo, qué escuela les gustaría ayudar a construir en el nuevo contexto, considerando que se requerirán adaptaciones por parte de todos los agentes involucrados en la educación.A pandemia de covid-19 alterou drasticamente o cenário social, impactando todos os setores da vida. No campo educacional, a rápida transição para o ensino remoto imposta pelo isolamento social, afetou a vida de estudantes, educadores e familiares, incidindo sobre o processo ensino-aprendizagem. Além dos efeitos psíquicos decorrentes do isolamento social, a substituição do ensino presencial no contexto pandêmico acentuou o desinteresse dos jovens pela escola, que já vinha perdendo sentidos políticos e existenciais para eles, tornando patente o menor engajamento pelo ensino remoto. Além disso, as reduzidas condições econômicas de grande parte da população também foram aprofundadas, corroborando as dificuldades de acesso à internet e às mídias necessárias para essa adaptação. Se a escola já não era capaz de atraí-los, no contexto da pandemia ela parece ainda mais distante e incapaz de ajudá-los a lidar com os impasses atuais. Neste sentido, realizamos uma pesquisa qualitativa buscando escutar os jovens sobre seus sentimentos e vivências no contexto da pandemia, bem como sobre os sentidos que atribuem à escola, especialmente em momento de transição no retorno às aulas presenciais. A pesquisa buscou investigar, sobretudo, que escola eles gostariam de ajudar a construir no novo contexto, considerando que adaptações serão exigidas por parte de todos os agentes envolvidos na educação

Quantification of litter and organic carbon in fragment of cerrado sensu stricto in Tocantins

This study aimed to quantify the accumulated litter of a fragment of cerrado sensu stricto, besides estimating the organic carbon stored from the organic matter. We conducted the study in a sensu stricto cerrado fragment in the municipality of Formoso do Araguaia, State of Tocantins, where samples of litter were collected in six random plots of 10 m x 50 m (500m2) using a 0.5 m x 0.5 m iron template by throwing it into the ground to collect the material. We separated the collected litter into two fractions, dry and green litter. Those collected were conditioned in paper containers for oven drying at 70°C for 48 h. It was weighed 1.5 g of the biomass ground in porcelain crucibles, which were dried in an oven at 105°C for 24h, then in the muffle at 550°C for 3h, at the Madeira Laboratory from the Federal University of Tocantins. For the litter, it was quantified 4.36 t ha-1 (value below the ones found in the literature), 69.08% of organic matter for the dry material, 95.42% of organic matter for the green material, 0.546 t ha-1 of organic carbon in the dry material, 0.769 t ha-1 of organic carbon in the green material