Impacto de la variación en el número de copias y del estado de metilación de genes supresores de tumor en las vías de progresión del meningioma

El meningioma es el tumor del sistema nervioso central más frecuente en la edad adulta, con una incidencia superior al 30% y una evidente predominancia femenina. La sintomatología deriva fundamentalmente de la localización del tumor, que crece desde las células de la cubierta aracnoidea. El tratamiento es principalmente quirúrgico, y su radicalidad se relaciona clásicamente con la aparición de recidivas tumorales, que es la principal complicación que sufren los afectados. Macroscópicamente, son tumores habitualmente bien delimitados y encapsulados, de crecimiento lento, y microscópicamente la OMS los clasifica en 16 subtipos histológicos. Son tumores positivos para vimentina y EMA, y en menor medida y de manera focal, para S-100. El marcador de proliferación Ki-67 se realiza de manera rutinaria pues a pesar de no existir unos valores estándar, es un excelente marcador de agresividad. En relación a esa agresividad, la OMS utiliza una asociación compleja de criterios histológicos, que incluyen el aumento en el número de mitosis, la prominencia nucleolar, la anaplasia, el aumento de celularidad, la presencia de focos de necrosis y la infiltración del tejido cerebral adyacente, para clasificarlos en 3 grados, siendo los tumores de grado I los más frecuentes y los más benignos. Hasta la fecha, la citogenética ha caracterizado los meningiomas como tumores hipodiploides, con frecuentes pérdidas de un cromosoma 22 –concretamente de su banda q12-, como cambio iniciador, y el aumento de la complejidad cariotípica se ha relacionado con grados histológicos mayores (II-III); de ellos, son frecuentes las pérdidas en 1p y en 14q, y en menor medida pero también relacionados con la agresividad, las que afectan a los cromosomas 6, 9, 10, 18 e incluso a los cromosomas sexuales. El gen NF2 es el principal supresor tumoral identificado en el meningioma. Se localiza en 22q12 y codifica la proteína merlín. Se han explorado otros cambios genéticos, como las pérdidas en DAL-1 relacionadas con la iniciación, si bien la mayoría de alteraciones en otros genes, se han descrito habitualmente en tumores de grados II y III. Recientemente y gracias al auge de la epigenética, se han desarrollado múltiples estudios sobre el papel de la metilación de los promotores de genes supresores de tumor en el meningioma; de ellos, la hipermetilación en NDRG2 se ha relacionado con la malignidad, generalmente con tumores de alto grado. Otros genes, como RASSF1 y TP73 parecen también implicados en la biología de este tumor, aunque las consecuencias sobre sus defectos aún resultan controvertidas. Aunque son numerosos los trabajos que describen alteraciones relacionadas con la agresividad en los meningiomas de grados II y III, son los meningiomas de grado I los más frecuentes, y en consecuencia, los que en números absolutos más recidivas originan. Este hecho, enfatiza la necesidad de mejorar la caracterización genética y epigenética de los meningiomas de histología benigna, para poder afinar el pronóstico en los pacientes afectados. Por todo ellos nos proponemos: • Caracterizar los parámetros clínicos e histopatológicos en una serie de 120 meningiomas, y establecer patrones cromosómicos en tumores primarios y recidivados para relacionarlos con la iniciación y progresión del tumor. • Analizar el gen NF2 y su implicación en la iniciación tumoral • Valorar el estado alélico de genes supresores de tumor (GST) mediante MLPA en meningiomas primarios y recidivados, y en función del grado histológico, para establecer diferentes grupos genéticos • Determinar la inactivación epigenética de GST durante la progresión tumoral • Valorar, en los meningiomas de grado I, las alteraciones genéticas de los tumores primarios que recidivaron frente a los que no lo hicieron, para establecer perfiles genéticos y epigenéticos que se puedan asociar con la agresividad biológica de los meningiomas Para tal fin, se han estudiado 120 meningiomas procedentes de 101 pacientes, de los que 92 eran tumores primarios y 28 recidivas tumorales. Las muestras tumorales se procesaron para su diagnóstico y cuando fue posible un fragmento se cultivó “in vitro” para la obtención de su cariotipo. Sobre el material incluido en parafina se tomaron muestras representativas de las lesiones para la construcción de micromatrices tisulares (TMAs) sobre las que se realizó la tinción hematoxilina-eosina para el recuento de mitosis y el estudio de la expresión inmunohistoquímica de Ki-67. También sobre TMAs se estudió mediante hibridación “in situ” de fluorescencia, el estado de los cromosomas 1, 14 y 22. Además, se tomaron muestras para extraer ADN con el que estudiar mediante amplificación de sondas múltiple dependiente de ligación (MLPA), el estado alélico del gen NF2, y mediante su variante específica para metilación (MS-MLPA), estudiar simultáneamente la variación en número de copias y el estado de metilación de un grupo de GST. Nuestros resultados mostraron un aumento de los índices proliferativos (mitosis y Ki-67) en relación al grado histológico de los tumores, así como con la complejidad cariotípica. De manera análoga, el estudio del cariotipo mostró mayor afectación de los cromosomas 1 y 14 en tumores de grado II y una mayor complejidad cariotípica en las recidivas tumorales analizadas. Los resultados de FISH mostraron resultados similares a los del cariotipo, con una sensibilidad mayor para las pérdidas del cromosoma 14, en acuerdo con descripciones previas. El estudio de NF2 mostró 3 perfiles de pérdidas diferentes (pérdidas completas, pérdidas de la región de homología a proteínas 4.1 y pérdidas de la región codificante de la hélice-α), con una afectación global próxima a 2 tercios de las muestras, similar a lo descrito anteriormente y sin diferencias ni en función del grado, ni entre tumores primarios y recidivas, incidiendo en el papel iniciador de las pérdidas que afectan a este gen. El estudio de GST mostró pérdidas en el 10% de las regiones analizadas de media por tumor e hipermetilación en al menos uno de los genes estudiados, en cerca del 70% de los casos. Fueron de manera global muy frecuentes las pérdidas en TP73, ESR1 y CDH13 y la hipermetilación en RASSF1, GSTP1 y CDH13. Más allá de los cambios génicos concretos, las pérdidas de heterocigosidad, y las pérdidas en homocigosis, así como la hipermetilación, fueron significativamente más frecuentes en las recidivas analizadas que en el conjunto de los tumores primarios. Lo más destacable de este trabajo, son los resultados que se extraen del análisis de los meningiomas de grado I que con el periodo de seguimiento, han ocasionado recidivas tumorales: en ellos la hipermetilación en MLH1, RASSF1 y CDKN2B fue estadísticamente más frecuente que en aquellos que no recidivaron, y aunque sin alcanzar significancia, otros la afectación epigenética de otros 4 genes más afectados en este grupo (TP73, ESR1, CDKN2A, PTEN y CDH13), pone de manifiesto un perfil muy similar al detectado en el grupo de recidivas analizadas. En esta serie, las modificaciones epigenéticas parecen relacionarse con los cambios iniciales hacia la malignidad, y consecuencia de la inactivación de genes supresores de tumor que afectan a las vías de reparación del ADN, control de la apoptosis y proliferación celular, irían incorporándose pérdidas alélicas y aumentando la inestabilidad cromosómica, como se detecta en los tumores de alto grado y en los ya recidivados

Production of soluble eukaryotic recombinant proteins in E. coli is favoured in early log-phase cultures induced at low temperature

BackgroundProducing recombinant plant proteins expressed in Escherichia coli produce in high yields and in a soluble and functional form can be difficult. Under overexpression conditions, proteins frequently accumulate as insoluble aggregates (inclusion bodies) within the producing bacteria. We evaluated how the initial culture density, temperature and duration of the expression stage affect the production of some eukaryotic enzymes in E. coli.FindingsA high yield of active soluble proteins was obtained by combining early-log phase cultures and low temperatures for protein induction. When IPTG was added at OD600 = 0.1 and cultures were maintained at 4°C for 48-72 h, the soluble protein yield was 3 fold higher than that obtained in the mid-log phase (OD600 = 0.6). Besides, the target protein expression increased and the endogenous bacterial proteins reduced, thus making the protein purification process easier and more efficient.ConclusionsThe protocol can be widely applied to proteins with a heterologous expression which was limited by loss of activity at high temperatures or by low soluble recombinant protein yield

Material multimedia para aumentar la motivación y el aprendizaje en el aula universitaria

[EN] The multimedia material used as a teaching medium in the classroom can help the teaching-learning process of the students. It also helps the teacher in his work of transmitting information from another point of view more striking and entertaining. This would cause an enlargement and enrichment in the recipient's experience to assimilate more quickly, dynamically and fluidly. In this study we analyze the grades obtained with and without the help of a multimedia material prepared by teachers. Subsequently, the opinion of the students is collected through an anonymous and voluntary survey allowing the teachers to collect the information necessary for the search to improve the quality of teaching.[ES] El material multimedia usado como medio didáctico en el aula puede ayudar al proceso enseñanza-aprendizaje del alumnado. Además le sirve de apoyo al profesor en su labor de trasmitir la información desde otro punto de vista más llamativo y entretenido. Esto provocaría una ampliación y enriquecimiento en la experiencia del receptor para asimilar el contenido didáctico de manera más rápida, dinámica y fluida. En este estudio se analizan las calificaciones obtenidas con y sin ayuda de un material multimedia elaborado por profesores. Posteriormente, se recoge la opinión del alumnado mediante una encuesta anónima y voluntaria permitiendo al profesorado recoger la información necesaria para a partir de ésta, elaborar unos objetivos de mejora de la calidad de la enseñanza.Serna Garcia, E.; Megías Vericat, J.; Olaso González, G.; Mauricio Aviñó, M.; San Miguel Díez, T. (2018). Material multimedia para aumentar la motivación y el aprendizaje en el aula universitaria. En IN-RED 2018. IV Congreso Nacional de Innovación Educativa y Docencia en Red. Editorial Universitat Politècnica de València. 81-90. https://doi.org/10.4995/INRED2018.2018.8608OCS819

PPARγ as an indicator of vascular function in an experimental model of metabolic syndrome in rabbits

Background and aims: Underlying mechanisms associated with vascular dysfunction in metabolic syndrome (MetS) remain unclear and can even vary from one vascular bed to another. Methods: In this study, MetS was induced by a high-fat, high-sucrose diet, and after 28 weeks, aorta and renal arteries were removed and used for isometric recording of tension in organ baths, protein expression by Western blot, and histological analysis to assess the presence of atherosclerosis. Results: MetS induced a mild hypertension, pre-diabetes, central obesity and dyslipidaemia. Our results indicated that MetS did not change the contractile response in either the aorta or renal artery. Conversely, vasodilation was affected in both arteries in a different way. The aorta from MetS showed vascular dysfunction, including lower response to acetylcholine and sodium nitroprusside, while the renal artery from MetS presented a preserved relaxation to acetylcholine and an increased sensitivity to sodium nitroprusside. We did not find vascular oxidative stress in the aorta from MetS, but we found a significant decrease in PPARγ, phospho-Akt (p-Akt) and phospho-eNOS (p-eNOS) protein expression. On the other hand, we found oxidative stress in the renal artery from MetS, and PPARγ, Akt and p-Akt were overexpressed. No evidence of atherosclerosis was found in arteries from MetS. Conclusions: MetS affects vascular function differently depending on the vessel. In the aorta, it decreases both the vasodilation and the expression of the PPARγ/Akt/eNOS pathway, while in the renal artery, it increases the expression of PPARγ/Akt signalling pathway without decreasing the vasodilation

Healthcare workers hospitalized due to COVID-19 have no higher risk of death than general population. Data from the Spanish SEMI-COVID-19 Registry

Aim To determine whether healthcare workers (HCW) hospitalized in Spain due to COVID-19 have a worse prognosis than non-healthcare workers (NHCW). Methods Observational cohort study based on the SEMI-COVID-19 Registry, a nationwide registry that collects sociodemographic, clinical, laboratory, and treatment data on patients hospitalised with COVID-19 in Spain. Patients aged 20-65 years were selected. A multivariate logistic regression model was performed to identify factors associated with mortality. Results As of 22 May 2020, 4393 patients were included, of whom 419 (9.5%) were HCW. Median (interquartile range) age of HCW was 52 (15) years and 62.4% were women. Prevalence of comorbidities and severe radiological findings upon admission were less frequent in HCW. There were no difference in need of respiratory support and admission to intensive care unit, but occurrence of sepsis and in-hospital mortality was lower in HCW (1.7% vs. 3.9%; p = 0.024 and 0.7% vs. 4.8%; p<0.001 respectively). Age, male sex and comorbidity, were independently associated with higher in-hospital mortality and healthcare working with lower mortality (OR 0.211, 95%CI 0.067-0.667, p = 0.008). 30-days survival was higher in HCW (0.968 vs. 0.851 p<0.001). Conclusions Hospitalized COVID-19 HCW had fewer comorbidities and a better prognosis than NHCW. Our results suggest that professional exposure to COVID-19 in HCW does not carry more clinical severity nor mortality

Effectiveness of an intervention for improving drug prescription in primary care patients with multimorbidity and polypharmacy:Study protocol of a cluster randomized clinical trial (Multi-PAP project)

This study was funded by the Fondo de Investigaciones Sanitarias ISCIII (Grant Numbers PI15/00276, PI15/00572, PI15/00996), REDISSEC (Project Numbers RD12/0001/0012, RD16/0001/0005), and the European Regional Development Fund ("A way to build Europe").Background: Multimorbidity is associated with negative effects both on people's health and on healthcare systems. A key problem linked to multimorbidity is polypharmacy, which in turn is associated with increased risk of partly preventable adverse effects, including mortality. The Ariadne principles describe a model of care based on a thorough assessment of diseases, treatments (and potential interactions), clinical status, context and preferences of patients with multimorbidity, with the aim of prioritizing and sharing realistic treatment goals that guide an individualized management. The aim of this study is to evaluate the effectiveness of a complex intervention that implements the Ariadne principles in a population of young-old patients with multimorbidity and polypharmacy. The intervention seeks to improve the appropriateness of prescribing in primary care (PC), as measured by the medication appropriateness index (MAI) score at 6 and 12months, as compared with usual care. Methods/Design: Design:pragmatic cluster randomized clinical trial. Unit of randomization: family physician (FP). Unit of analysis: patient. Scope: PC health centres in three autonomous communities: Aragon, Madrid, and Andalusia (Spain). Population: patients aged 65-74years with multimorbidity (≥3 chronic diseases) and polypharmacy (≥5 drugs prescribed in ≥3months). Sample size: n=400 (200 per study arm). Intervention: complex intervention based on the implementation of the Ariadne principles with two components: (1) FP training and (2) FP-patient interview. Outcomes: MAI score, health services use, quality of life (Euroqol 5D-5L), pharmacotherapy and adherence to treatment (Morisky-Green, Haynes-Sackett), and clinical and socio-demographic variables. Statistical analysis: primary outcome is the difference in MAI score between T0 and T1 and corresponding 95% confidence interval. Adjustment for confounding factors will be performed by multilevel analysis. All analyses will be carried out in accordance with the intention-to-treat principle. Discussion: It is essential to provide evidence concerning interventions on PC patients with polypharmacy and multimorbidity, conducted in the context of routine clinical practice, and involving young-old patients with significant potential for preventing negative health outcomes. Trial registration: Clinicaltrials.gov, NCT02866799Publisher PDFPeer reviewe

EducaFarma 11.0

Memoria ID2022-036. Ayudas de la Universidad de Salamanca para la innovación docente, curso 2022-2023

Myelodysplasia-associated immunophenotypic alterations of bone marrow cells in myeloma: are they present at diagnosis or are they induced by lenalidomide?

This is an open-access paper.-- et al.Increased risk of acute myeloid leukemia/myelodysplastic syndromes following treatment has been reported in multiple myeloma, but whether dysplastic features are already present at diagnosis remains to be investigated. Using multiparameter flow cytometry, we analyzed the distribution and phenotype of bone marrow hematopoietic cells from 47 multiple myeloma patients (15 symptomatic and 32 high-risk smoldering). From the 32 smoldering myeloma patients, 18 were studied at baseline and 22 after nine cycles of lenalidomide/dexamethasone treatment following the QUIREDEX trial (including 8 from baseline). Phenotypic alterations of bone marrow cells of 7 (47%) symptomatic and 6 (33%) smoldering myeloma patients were detected at baseline; there was no difference in the frequency and extent of phenotypic alterations between symptomatic versus smoldering cases. Likewise, no difference was seen between smoldering myeloma patients studied at baseline versus after lenalidomide/dexamethasone treatment. Our results suggest that phenotypic alterations of bone marrow hematopoietic cells are often present in newly diagnosed symptomatic and smoldering multiple myeloma patients. QUIREDEX trial (NCT00480363)This work was supported by the Cooperative Research Thematic Network (RTICs; RD06/0020/0006, RD06/0020/0005, RD06/0020/0035, RD06/0020/0031, and G03/136), Instituto de Salud Carlos III/Subdirección General de Investigación Sanitaria (FIS: PI060339; 06/1354; 02/0905; 01/0089/01-02; PS09/01897) and Consejería de Educación (GR37) and Consejería de Sanidad (557/A/10), Junta de Castilla y León, Valladolid, Spain.Peer Reviewe

Apoyo Biopracs-Repaso 1

Actividad de autoevaluación a realizar tras la sesión práctica. Objeto de aprendizaje realizado en el marco del proyecto de innovación docente UV-SFPIE_PID-207787