Levantamento sorológico e detecção de Salmonella sp. em granjas de postura comercial de pequeno porte em um município do estado do Rio Grande do Sul

Este trabalho teve o intuito de detectar a presença de  Salmonella sp. em aves de postura comercial em granjas com pequena produção de um município do Estado do Rio Grande do Sul. Para o isolamento foi utilizado o método microbiológico convencional, com amostragens pelo swab de cloaca e pelo swab de arrasto. Concomitantemente, foi realizada a soroaglutinação rápida em placa (SARP) em todas as aves, com antígenos para Salmonella pullorum  e Salmonella enteritidis. O swab de cloaca foi realizado em 360 aves de 6 granjas diferentes, onde também foi executado um swab de arrasto. Das granjas analisadas, três delas (1, 3 e 6) foram negativas para a presença de Salmonella sp. por ambas técnicas. Na granja 2, houve isolamento de S. Ohio em um swab de cloaca, sendo que o respectivo lote apresentou resultado negativo pelo swab de arrasto. Na granja 4, a S. Senftenberg foi detectada em uma ave, e o mesmo sorovar foi isolado por swab de arrasto. A granja 5 teve detecção de S. Schwarzengrund pelo swab de cloaca, e de S. Schwarzengrund e S. Ohio pelo swab de arrasto. Os resultados demonstrados acima corresponderam a 0,83% de aves positivas no isolamento em 360 amostras analisadas. A SARP para Salmonella pullorum teve 34 soros positivos em 360 análises, representando 9,44% do total. Os resultados da SARP com o antígeno para Salmonella Enteritidis tiveram 5,56% de reações fracas com poucos grumos, consideradas negativas. Finalmente, os resultados finais demonstrados neste experimento permitiram concluir que: 1o) a SARP realizada obteve baixa quantidade de soros positivos, de certa forma correspondendo à ausência dos isolamentos destes sorovares; 2o) A SARP não deve ser uma técnica utilizada para a confirmação de aves positivas para Salmonella sp. em um lote, mas somente como um  teste de triagem; 3o) A metodologia de isolamento para o swabs de cloaca e de arrasto permitiu detectar a presença de Salmonella sp. nas amostras coletadas; 4o) O status sanitário destas criações de pequeno porte, em relação à pesquisa de Salmonella sp., parece ser muito superior ao que poderia fazer concluir sua baixa tecnificação

Assessment of protein aggregation using super-resolution microscopy

Tese de Mestrado, Biologia Molecular e Genética, 2022, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasO misfolding e a agregação de diversas proteínas estão frequentemente relacionados com o aparecimento de determinadas doenças neurodegenerativas, como a doença de Parkinson e a doença de Huntington. Todavia, ainda não é claro se a agregação das proteínas é uma causa ou consequência do processo, nem o processo de agregação proteica no contexto celular é totalmente compreendido. Técnicas inovadoras que permitam adquirir novos conhecimentos sobre como as proteínas sofrem misfold e agregam são, portanto, de extrema importância para encontrar novas terapias e tratamentos para estas doenças. A microscopia de super-resolução é uma destas técnicas, uma vez que permite uma melhor análise da formação de agregados proteicos, em comparação com técnicas convencionais. Neste contexto, o objetivo principal deste projeto consistiu em implementar técnicas de microscopia de super-resolução, nomeadamente microscopia de stimulated emission depletion (STED), para analisar agregados intracelulares de proteínas relacionadas com doenças neurodegenerativas. Mais concretamente, foram analisados agregados de alfa-sinucleína (aSyn), relacionada com a doença de Parkinson, e de huntingtina (Htt), relacionada com a doença de Huntington. Durante o decorrer desta investigação, foi ainda descoberta uma nova mutação para a-synucleína (K58N), a qual foi também alvo de estudo. Para realização deste projeto, células humanas de neuroglioma (células H4), foram transfetadas com i) uma forma da proteína aSyn que possui uma proteína verde fluorescente melhorada (enhanced green fluorescent protein – EGFP) truncada no seu C-terminal, a qual se designa SynT, para estudar os agregados de aSyn; ii) uma forma da proteína huntigtina com 104 repetições de glutamina na sua cauda de poliglutamina, para estudar a agregação de huntingtina (104QHtt-EGFP). Durante esta investigação, foram realizadas técnicas de imunocitoquímica e os agregados formados pelas proteínas foram estudados usando microscopia de fluorescência e microscopia de superresolução. Foram ainda feitas análises de immunoblotting (western blot) para quantificar o nível de expressão das proteínas em estudo. Técnicas de imunocitoquímica foram usadas para estudar as inclusões que resultam do modelo SynT + Sph-1-v5 e da expressão de 104QHtt-EGFP. As células transfetadas foram classificadas em quatro categorias distintas quanto ao número de inclusões que apresentavam. Para o estudo de aSyn, foi comparada a percentagem de células com inclusões e a percentagem de inclusões por célula com um determinado tamanho, entre SynT WT e mutante K58N, e concluiu-se que a mutação leva a um decréscimo significativo da percentagem de agregados por célula com mais do que 3 µm de diâmetro. Também comparámos o nível de expressão proteica entre WT e mutantes aSyn e SynT e observámos que não haviam diferenças estatisticamente significativas. Para o estudo dos efeitos da Htt na formação de inclusões, observámos que apenas a forma patológica da proteína com 104 repetições de glutamina levou à formação das mesmas. Estas inclusões apresentavam uma semelhante distribuição em relação ao seu diâmetro. Adicionalmente, foi feita microscopia STED nas condições onde tinham sido previamente observadas inclusões, tanto para Htt como aSyn. Esta técnica permitiu obter imagens dos agregados com melhor resolução do que aquela que tinha sido obtida com microscopia de fluorescência. Em estudos futuros, será pertinente usar a microscopia de STED para obter imagens das inclusões em diferentes orientações espaciais, de forma a obter um melhor conhecimento da sua estrutura e composição. Para além disso, será ainda apropriado fazer estudos de co-localização com proteínas que interagem com aSyn e Htt, uma vez que estas podem também podem estar presentes nos agregados formados pelas respetivas proteínas. Também seria relevante estudar a localização subcelular das inclusões, visto que tal não foi possível neste projeto.The misfolding and aggregation of several proteins is one of the central features of various neurodegenerative diseases, such as Parkinson’s and Huntington’s disease. However, whether protein aggregation is a cause or a consequence of the disease process is still unclear. Also, the process of protein aggregation in the cellular context is not fully understood. Novel techniques that allow further insight into how these proteins misfold and form inclusions are of major importance to find new therapies for these diseases. Super resolution microscopy is one of these techniques since it allows us to better assess the aggregates formed by misfolded proteins and the mechanisms leading to their assemble, thus putting us in a better position to uncover solutions to address neurodegeneration. Taking this into account, the aim of this project was to use super-resolution microscopy techniques to image and study the aggregation of different proteins (a-synuclein and huntingtin) in human cell cultures that model two of these neurodegenerative diseases (Parkinson’s and Huntington’s disease). We hoped to gain insight into the mechanisms that lead to the misfolding and aggregation of these proteins, to find new therapeutic targets and strategies. While the project was ongoing, a novel mutation of a-synuclein protein (K58N) was discovered, and its study was added to the project. The project involved several cell biology and biochemical techniques, such as the expression of variants of wild type and mutant proteins in human cells, the performance of immunostainings with different antibodies against the proteins studied and the assessment of the aggregation of two aggregation-prone proteins, a-synuclein and huntingtin, using fluorescence microscopy and superresolution microscopy. We used immunocytochemistry assays to study the inclusions form by the model used for aSyn, which consisted of a aSyn truncated form fused with a non-fluorescent GFP fragment (SynT). We compared the percentage of cells with inclusions and the percentage of inclusions with a certain size per cell between WT and mutant K58N SynT, and concluded that the mutation leads to the decrease of the percentage of aggregates with more than 3 µm, compared to WT. We also compared the level of protein expression between WT and mutant aSyn and SynT and no significant differences were found. For the study of the effects of Htt on inclusion formation, we observed that only the pathological form of Htt with a extended number of glutamines led to the formation of inclusions. These inclusions had a similar size distribution. Additionally, we conducted STED microscopy on the conditions that led to the formation of aggregates, both for aSyn and Htt. This technique allowed us to better image the inclusions formed, with a much higher resolution than the one obtained with fluorescence microscopy. In future studies, STED microscopy should be used to image inclusions in different display orientations, allowing a better insight of their structure and composition. Furthermore, the colocalization of proteins that interact with aSyn and Htt should be studied, to better assess the protein composition of the inclusions formed. Finally, it would also be pertinent to study the subcellular localization of the inclusions

NO2Probe: Application of a new nitrite point-of-care test in biomedicine

Periodontal disease (PD) results from the inflammatory response to the presence of bacterial biofilms. The disease progression goes through two phases: gingivitis, characterized by bleeding and gingiva gums swelling, and periodontitis, an aggravated condition that can lead to bone, gingival, and teeth loss. For diagnosis, time-consuming periodontal charts and X-rays are evaluated. Thus, it is convenient to recognize clinical biomarkers measuring each individual's PD occurrence and extent. The nitrite (NO2-) level in saliva has been pointed out in this regard, but it is not yet clinically used as a PD biomarker. Thus, the study objectives were to evaluate the relationship between PD and nitrite concentration in non-stimulated saliva samples, and the implementation of a new specific and sensitive biosensor, the NO2Probe, for nitrite quantification during the medical appointment. The approach involved the screen-printed carbon electrodes (SPE) modification and optimization with the multihemic nitrite reductase enzyme (ccNiR), which catalyzes the direct reduction reaction of nitrite into ammonia. As an oxygen scavenging system, an ascorbate oxidase (AOx) layer was added and, finally, a polymer layer (PVA), to “delay” the ccNiR saturation. The amperometric biosensor (SPE/ccNiR/AOx/PVA) covers a linearity range between 5-300 μM, with a sensitivity of 0.015 μM-1. The obtained values were compared with the conventional Griess method. The biosensor was statistically validated. Initially, the centrifugation and freezing steps of the samples were evaluated, evaluating the two methods, and verifying that, with the biosensor, centrifugation is not necessary. In the Griess method, centrifugation is essential, as the nitrite concentration in non-centrifuged samples (199 ± 3 μM) decreases after centrifugation (68.8 ± 0.5 μM). When frozen, the NO2- concentration decreases, probably due to the NO2- instability. It was concluded that samples should be analyzed fresh as soon as possible. In the pilot study, carried out at the CiiEM Dental Clinic, it was not possible to establish a concrete relationship between the NO2- concentration and the disease stages and grades. Contrary to the expectations, the periodontally healthy group (n=11) had higher NO2- concentration (257 ± 30 μM) higher than those observed in the PD patients group (n=24).A Doença Periodontal (PD) decorre da resposta inflamatória à presença de biofilmes bacterianos. A progressão desta, passa por duas fases: a gengivite, caracterizada pelo sangramento e inchaço da gengiva, e a periodontite, condição agravada que pode conduzir à perda de tecidos ósseo, gengival e de dentes. Para diagnóstico, são avaliados morosos periodontogramas e os raios-X. Assim, é conveniente o reconhecimento de biomarcadores clínicos aferindo a ocorrência e extensão da PD em cada indivíduo. O nível de nitrito (NO2-) na saliva, tem sido apontado nesse sentido, mas ainda não é utilizado clinicamente como biomarcador da PD. Assim, os objetivos foram: avaliar a relação entre a PD e a concentração de nitrito, em amostras de saliva não estimulada, e a implementação de um novo biossensor, o NO2Probe, específico e sensível para quantificação de nitrito durante a consulta. A abordagem passou pela modificação e otimização de elétrodos impressos de carbono (SPE) com a enzima multihémica redutase do nitrito (ccNiR), que catalisa a reação de redução direta do nitrito a amónia. Como sistema de remoção de oxigénio, adicionou-se uma camada de Ascorbato oxidase (AOx) e, finalmente, uma camada de polímero (PVA), para “atrasar” a saturação da ccNiR. O biossensor amperometrico (SPE/ccNiR/AOx/PVA) mostrou abranger uma gama de linearidade entre 5-300 μM, com sensibilidade de 0.015 μM-1. Os valores obtidos foram comparados com o método convencional de Griess. Estatisticamente, o biossensor foi validado. Inicialmente, foram avaliados os passos centrifugação e congelamento das amostras avaliando os dois métodos, verificando-se que, com o biossensor, não é necessário centrifugar amostras. Já pelo método de Griess, a centrifugação é fundamental, pois a concentração de nitrito em amostras não centrifugadas (199 ± 3 μM) decresce após centrifugação (68.8 ± 0.5 μM). Quando congeladas, há diminuição da concentração de nitrito, provavelmente devido à instabilidade deste. Concluiu-se que as amostras devem ser analisadas de fresco, o mais rápido possível. No estudo piloto, conduzido na Clínica Dentária do CiiEM, não foi possível estabelecer uma relação concreta entre a concentração de nitrito e os estadios e graus da doença. Contrariamente ao esperado, o grupo composto por indivíduos periodontalmente saudáveis (n=11), apresentaram concentrações de nitrito (257 ± 30 μM) superiores às verificadas no grupo de doentes (n=24)

Cooperação internacional para recuperação de ativos provenientes de lavagem de capitais

Busca analisar a política criminal referente à lavagem de capitais, tendo em vista a cooperação internacional para a recuperação de ativos ilícitos

Balanced Scorecard adoption in Portuguese organizations: Contingent and institutional variables

Objeto: Este artículo tiene como objetivo identificar y analizar un conjunto de variables contingentes e institucionales que pueden potencialmente influir en el conocimiento e implementación del Cuadro de Mando Integral (CMI) en las organizaciones portuguesas pertenecientes al sector público y privado. Diseño/metodología: Para comprobar empíricamente las hipótesis de investigación formuladas hemos recurrido a los datos obtenidos mediante la aplicación de un cuestionario postal a 591 organizaciones públicas y 549 organizaciones privadas portuguesas, con una tasa de respuesta total del 31,3%. Aportaciones y resultados: Los resultados obtenidos indican la asociación entre el conocimiento CMI y el grado de formación de los empleados, así como entre la implementación del CMI y la realización de cursos de formación. Por otro lado, no hemos obtenido evidencia empírica respecto a la posible relación entre la implementación del CMI y el grado de comunicación interna, el recurso a consultores externos, cuestiones de “modas de gestión” y la búsqueda de legitimidad. Valor añadido: En la revisión de la literatura no se encontraron elementos bibliográficos sobre los factores contingentes e instituciones determinantes en la adopción del CMI en Portugal, hecho que nos permitió dar a este estudio un enfoque innovador. Además, se ha caracterizado la situación del CMI en Portugal haciendo un estudio comparativo con los resultados obtenidos en estudios llevados a cabo en otros países.Purpose: In this article we aim to identify and analyze a set of contingent and institutional variables that can potentially influence the knowledge and the adoption of the Balanced Scorecard (BSC) in Portuguese public and private organizations. Design/methodology/approach: Hypotheses were tested using data obtained from a questionnaire sent to 591 public organizations and 549 private organizations in Portugal, with an overall response rate of 31.3%. Findings and Originality/value: The results indicate the association between BSC knowledge and the level of training of employees, and between BSC implementation and conducting training courses. On the other hand, we did not obtain empirical evidence regarding the possible relationship between the BSC implementation and the degree of internal communication, the use of external consultants, questions of "management fads" and the search for legitimacy. Originality/value: In the literature review we did not found bibliographic elements about the contingent and institutional factors that determine the BSC adoption in Portugal, a fact that allowed us to give this study an innovative approach. Moreover, the BSC situation in Portugal has been characterized, doing a comparative study with the results of studies conducted in other countries.Peer Reviewe

Estudar e Trabalhar na It\ue1lia: instrumentos e procedimentos para a inclus\ue3o de pessoas com defici\ueancia Studying and living in Italy: tools and procedures to include disabled people

Italy is known for the best practices on educational and la- bour inclusion. An organic set of laws allows a full access to education and work, ensuring rights and necessary re- sources to disabled people, their families and organisations hosting them. The evolution of the Italian regulatory frame- work has resulted in the development of a theoreticand conceptual structure on special pedagogy and didactics, to follow the constant changes and demands of the institu- tions and society. This paper examines the evolution of laws that transformed Italy in the forefront in social inclusion as well as the different moments and scope of them concern- ing the participation of people with disabilities in education and work

Variáveis ambientais e a distribuição de espécies do estrato herbáceo-subarbustivo emuma área de campo limpo úmido no Distrito Federal, Brasil

O solo é sazonal ou permanentemente saturado nas savanas campestres úmidas, localmente conhecidas como Campo Limpo Úmido. A variação na umidade do solo parece determinar a distribuição espacial desta comunidade. O objetivo deste estudo foi analisar a relação entre as variáveis ambientais e o padrão de distribuição espacial das espécies do estrato herbáceo-subarbustivo em uma área de Campo Limpo Úmido na Fazenda Água Limpa, Brasília, DF (15° 56 a 15° 59 S e 47° 55 a 47° 58 WGr.). Uma área de 400 x 400 m foi subdividida em quatro porções de 200 x 200 m onde foram sorteadas as linhas de amostragem. No levantamento, fitossociológico adotou-se o método de inventário por interseção na linha. Foram coletadas amostras de solo superficial (0-20 cm) para análise química e textural. A umidade gravimétrica do solo foi obtida quinzenalmente durante o ano de estudo. Foram amostradas 85 espécies incluídas em 67 gêneros e 24 famílias. A diversidade da área segundo o índice de Shannon foi de H = 2,60 nats.cobertura–1. A composição florística dos transectos em solos com alta umidade gravimétrica, altos teores de matéria orgânica e areia diferiu da dos transectos em solos com menor umidade gravimétrica e com variação sazonal na umidade. Uma análise de correspondência canônica (CCA) mostrou correlações significativas entre a textura e a umidade do solo e a distribuição das espécies. As variáveis ambientais mais fortemente correlacionadas foram umidade gravimétrica, matéria orgânica, argila, silte e areia, que foram preponderantes na determinação da distribuição das espécies do campo limpo úmido da FAL, determinando a formação de mosaicos na vegetação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThe soils are seasonally or permanently saturated in the moist grassland savanna, locally known as Campo Limpo Úmido. Soil moisture variation seems to determine spatial distribution of communities. The objective of this study is to analyse the relationship between environmental variables and the patterns of spatial distribution of species in the herbaceous-subshrub layer of an area of moist grassland at the Água Limpa Farm, Brasília, DF (15° 56 to 15° 59 S and 47° 55 to 47° 58 W Gr.). An area of 400 x 400 m was divided into four sections of 200 x 200 m where four transects were randomly sampled. A line intercept method was adopted for the phytossociological study. Superficial soils samples (0-20 cm) were collected for chemical and textural analyses. Gravimetric soil moisture was measured quarterly during the study-year. A total of 85 species in 67 genera and 24 families were found. The diversity was high, Shannon s index, H , was 2.60 nats.cover-1. Floristic composition of the transects in soils with a high gravimetric soil moisture and high content of organic matter and sand differed from those transects in soils with a lower gravimetric soil moisture indicating seasonal variation. A Canonical Correspondence Analysis (CCA) showed significant correlations between soil texture and soil moisture features and species distribution. Gravimetric soil moisture, organic matter, clay, silt and sand were significantly correlated to species distribution in the moist grassland determining mosaics in the vegetation

E-banking: current use and factors affecting its adoption in Portugal

The internet and Information Systems are a worldwide phenomenon that originated new solutions and business models, which can be used in innumerous activity sectors. In parallel several theories and models were developed to better understand consumers' reactions and new technologies adoption behavior, including frameworks like Theory of Planned Behavior and Technology Acceptance Model. Internet banking, mostly known as e-banking, is a general term to refer to the set of activities that can be perform electronically, without fiscally visit any bricks-and-mortar institution. E-banking is not a brand new topic starting in Portugal in 1994. Although, e-banking adoption in Portugal is by far lower than compared with the leading European countries. The present work aims to contribute to the investigation to which factors influence Portuguese customers' e-banking adoption. In order to accomplish this goal, a research model was built up, following current tested theories present in the literature. For that, was used a quantitative method associated to an online survey to collect customers' opinions. The results show that e-banking adoption in the sample is higher than the current estimations. Additionally, according to the analysis of the proposed model was possible to conclude that the lack trust and the lack of personal contact are the two main factors preventing consumers from using e-banking services.A internet e os Sistemas de Informação são fenómenos mundiais que originaram novas soluções e modelos de negócio, que podem ser aplicados a diversos setores de atividade. Paralelamente foram desenvolvidos vários modelos e teorias para explicar as reações e os comportamentos de adoção de novas tecnologias. Tal inclui estruturas modelos como Teoria do Comportamento Planeado e Modelo de Adoção da Tecnologia. A Banca "online", também muito conhecida como "e-banking", é um termo genérico usado para definir o conjunto de atividade de podem ser feitas com recurso à internet, em vez de ser necessário ir fisicamente a uma agência bancária. Este não é um tópico recente, tendo mesmo sido introduzido em Portugal em 1994. No entanto, a taxa de adoção em Portugal é bastante inferior comparada à dos principais países europeus. O presente trabalho tem como objetivo dar um contributo no que toca a entender o que influenciam os consumidores portugueses a adotar o "e-banking". Como forma de atingir o objetivo proposto, foi construído um modelo de investigação com base nas teorias atualmente presente na literatura. Para tal, foi utilizado um método quantitativo associado a um questionário, como forma de recolher as opiniões dos consumidores. Pela análise dos resultados é possível apurar que o nível de utilização da banca "online" é superior à anteriormente estimada. Adicionalmente, de acordo com a análise do modelo proposto foi possível concluir que a falta de confiança e a falta de contacto pessoal são os principais fatores que impedem o uso da banca "online" em Portugal

Internationalization of the portuguese Jewelry industry

This work projectexplores how the Portuguese jewelry industry has been performing over the years,mainly how different companies and the industry itself have approached internationalization. This is an industry with many years of tradition in the countrythat has been developing its own legacy, techniques and concepts on the jewelry making process giving its own personal identity. Having so much potential with already given proofs of its value and quality, this project aims to understand and find strategic methods to improve the visibility of the industry internationallyonce this growth is not stable and balanced. Hence, the purpose of this studyis to make strategic recommendations of how to be successful at worldwidelevel. The methodology used was mainly based in secondary data, statistical information and previous studies about the topic and a real example of success of internationalization of the footwear industry in Portugal. Collecting all of the information and data was possible to make some strategic recommendations on how to tackle the internationalization process