The extracellular wall-bound β-N-acetylglucosaminidase from Lactobacillus casei is involved in the metabolism of the human milk oligosaccharide lacto-N-triose

Human milk oligosaccharides (HMOs) are considered to play a key role in establishing and maintaining the infant gut microbiota. Lacto-N-triose forms part of both type 1 and type 2 HMOs and also of the glycan moieties of glycoproteins. Upstream of the previously characterized gene cluster involved in lacto-N-biose and galacto-N-biose metabolism from Lactobacillus casei BL23, there are two genes, bnaG and manA, encoding a β-N-acetylglucosaminidase precursor and a mannose-6-phosphate isomerase, respectively. In this work, we show that L. casei is able to grow in the presence of lacto-N-triose as a carbon source. Inactivation of bnaG abolished the growth of L. casei on this oligosaccharide, demonstrating that BnaG is involved in its metabolism. Interestingly, whole cells of a bnaG mutant were totally devoid of β-N-acetylglucosaminidase activity, suggesting that BnaG is an extracellular wall-attached enzyme. In addition to hydrolyzing lacto-N-triose into N-acetylglucosamine and lactose, the purified BnaG enzyme also catalyzed the hydrolysis of 3′-N-acetylglucosaminyl-mannose and 3′-N-acetylgalactosaminyl-galactose. L. casei can be cultured in the presence of 3′-N-acetylglucosaminyl-mannose as a carbon source, but, curiously, the bnaG mutant strain was not impaired in its utilization. These results indicate that the assimilation of 3′-N-acetylglucosaminyl-mannose is independent of BnaG. Enzyme activity and growth analysis with a manA-knockout mutant showed that ManA is involved in the utilization of the mannose moiety of 3′-N-acetylglucosaminyl-mannose. Here we describe the physiological role of a β-N-acetylglucosaminidase in lactobacilli, and it supports the metabolic adaptation of L. casei to the N-acetylglucosaminide-rich gut niche.This work was financed by funds of the Spanish Ministry for Economy and Competitiveness (MINECO)/FEDER through projects AGL2014-52996-C2 (1-R and 2-R) and of the Valencian government through project ACOMP/2012/030. G.N.B. was supported by a predoctoral fellowship from the Carolina Foundation and Argentinian Ministry of Education.Peer reviewe

SUMOylation regulates LKB1 localization and its oncogenic activity in liver cancer

BACKGROUND: Even though liver kinase B1 (LKB1) is usually described as a tumor suppressor in a wide variety of tissues, it has been shown that LKB1 aberrant expression is associated with bad prognosis in Hepatocellular Carcinoma (HCC). METHODS: Herein we have overexpressed LKB1 in human hepatoma cells and by using histidine pull-down assay we have investigated the role of the hypoxia-related post-translational modification of Small Ubiquitin-related Modifier (SUMO)ylation in the regulation of LKB1 oncogenic role. Molecular modelling between LKB1 and its interactors, involved in regulation of LKB1 nucleocytoplasmic shuttling and LKB1 activity, was performed. Finally, high affinity SUMO binding entities-based technology were used to validate our findings in a pre-clinical mouse model and in clinical HCC. FINDINGS: We found that in human hepatoma cells under hypoxic stress, LKB1 overexpression increases cell viability and aggressiveness in association with changes in LKB1 cellular localization. Moreover, by using site-directed mutagenesis, we have shown that LKB1 is SUMOylated by SUMO-2 at Lys178 hampering LKB1 nucleocytoplasmic shuttling and fueling hepatoma cell growth. Molecular modelling of SUMO modified LKB1 further confirmed steric impedance between SUMOylated LKB1 and the STe20-Related ADaptor cofactor (STRADα), involved in LKB1 export from the nucleus. Finally, we provide evidence that endogenous LKB1 is modified by SUMO in pre-clinical mouse models of HCC and clinical HCC, where LKB1 SUMOylation is higher in fast growing tumors. INTERPRETATION: Overall, SUMO-2 modification of LKB1 at Lys178 mediates LKB1 cellular localization and its oncogenic role in liver cancer. FUND: This work was supported by grants from NIH (US Department of Health and Human services)-R01AR001576-11A1 (J.M.M and M.L.M-C.), Gobierno Vasco-Departamento de Salud 2013111114 (to M.L.M.-C), ELKARTEK 2016, Departamento de Industria del Gobierno Vasco (to M.L.M.-C), MINECO: SAF2017-87301-R and SAF2014-52097-R integrado en el Plan Estatal de Investigación Cientifica y Técnica y Innovación 2013-2016 cofinanciado con Fondos FEDER (to M.L.M.-C and J.M.M., respectively), BFU2015-71017/BMC MINECO/FEDER, EU (to A.D.Q. and I.D.M.), BIOEF (Basque Foundation for Innovation and Health Research): EITB Maratoia BIO15/CA/014; Instituto de Salud Carlos III:PIE14/00031, integrado en el Plan Estatal de Investigación Cientifica y Técnica y Innovacion 2013-2016 cofinanciado con Fondos FEDER (to M.L.M.-C and J.M.M), Asociación Española contra el Cáncer (T.C.D, P·F-T and M.L.M-C), Daniel Alagille award from EASL (to T.C.D), Fundación Científica de la Asociación Española Contra el Cancer (AECC Scientific Foundation) Rare Tumor Calls 2017 (to M.L.M and M.A), La Caixa Foundation Program (to M.L.M), Programma di Ricerca Regione-Università 2007-2009 and 2011-2012, Regione Emilia-Romagna (to E.V.), Ramón Areces Foundation and the Andalusian Government (BIO-198) (A.D.Q. and I.D.M.), ayudas para apoyar grupos de investigación del sistema Universitario Vasco IT971-16 (P.A.), MINECO:SAF2015-64352-R (P.A.), Institut National du Cancer, FRANCE, INCa grant PLBIO16-251 (M.S.R.), MINECO - BFU2016-76872-R to (E.B.). Work produced with the support of a 2017 Leonardo Grant for Researchers and Cultural Creators, BBVA Foundation (M.V-R). Finally, Ciberehd_ISCIII_MINECO is funded by the Instituto de Salud Carlos III. We thank MINECO for the Severo Ochoa Excellence Accreditation to CIC bioGUNE (SEV-2016-0644). Funding sources had no involvement in study design; in the collection, analysis, and interpretation of data; in the writing of the report; and in the decision to submit the paper for publication

A Case of Polarized Pluralism in a Mediterranean country. The Media and Politics in Spain

Based on the polarized pluralism – or Mediterranean model for the media, (Hallin & Mancini, 2004), we have analyzed the structure of the media system in Spain from the beginning of the post-Franco democracy at the end of the 1970s through to its current form today. Although some authors have considered the Spanish media system to be a mixture of the liberal and Mediterranean models (both described by Hallin and Mancini), we argue that the polarized pluralism model is applicable to the Spanish case. Below, we review the indicators used by Hallin and Mancini to classify the media models, with a view to demonstrating that Spain fulfils the 4 prerequisites set out by the authors typifying the Mediterranean media model: The low degree of press circulation (contrasting with a high level of TV viewing); an authoritarian past in which part of the media was involved in the struggle for freedom resulting in their political alienation; a low degree of autonomy among Spanish journalists under both political and commercial pressure, and a high degree of state interventionism in public media

Estudios sobre la inmunogenicidad y los mecanismos fisiopatológicos de la proteína NSP4 de rotavirus.

RESUMEN Rotavirus es el principal agente causante de gastroenteritis viral en niños y animales jóvenes en todo el mundo. Una de las principales proteínas de rotavirus es la glicoproteína no estructural 4 (NSP4) que juega un papel crucial tanto en el ciclo replicativo de rotavirus, actuando como receptor de partículas inmaduras en el retículo endoplasmático, como en la fisiopatología de rotavirus, siendo la primera enterotoxina de origen vírico descrita hasta el momento. El objetivo de la presente tesis fue clonar y producir la glicoproteína NSP4 de diferentes cepas humanas y animales de rotavirus para así poder realizar estudios inmunogénicos tales como la caracterización de epitopos presentes en la proteína y la respuesta inmune que esta proteína despierta tras la infección por rotavirus. Así mismo nos planteábamos estudiar la capacidad que poseen tanto la infección por rotavirus como la proteína NSP4 de producir óxido nítrico (ON) tanto in vivo como in vitro y la posible implicación del ON en la fisiopatología de rotavirus. Se utilizó el sistema de expresión de baculovirus en células de insecto para la producción y purificación de la proteína NSP4 de diferentes cepas de rotavirus humanas y de animales en forma biológicamente activa. Experimentos de inmunización de ratones demostraron que los anticuerpos producidos frente a la proteína NSP4 reconocen principalmente el fragmento carboxi-terminal de la proteína (aminoácidos 114 a 175), por lo que esta región es inmunodominante. En la presente tesis se utilizó la tecnología de phage display para producir anticuerpos monoclonales de simple cadena (scFv) frente a la proteína NSP4. Esta técnica nos permitió aislar scFvs frente a regiones no inmunodominantes de la proteína NSP4. Los estudios realizados con sueros de niños convalecientes de una infección por rotavirus muestran que la proteína NSP4 provoca una respuesta inmune humoral tras la infección natural por rotavirus en niños, constituída por anticuerpos séricos de clase IgG y que esta respuesta no parece ser de larga duración, según los resultados obtenidos con sueros de niños y adultos sanos. Proteínas NSP4 procedentes de dos diferentes genotipos (A y B) fueron utilizadas para estudiar la reactividad cruzada de los anticuerpos frente a NSP4. Los resultados obtenidos muestran que los anticuerpos IgG séricos desarrollados frente a NSP4 en niños con gastroenteritis aguda por rotavirus presentan en el 40% de los casos estudiados reactividad cruzada frente a más de un genotipo de dicha proteína, por lo que este reconocimento de los genotipos A y B de NSP4 no es siempre heterotípico. Los experimentos realizados con células epiteliales humanas HT-29 in vitro muestran que la proteína NSP4 provoca un incremento de la secreción de ON en este tipo celular. Este incremento ocurre de forma paralela al incremento de calcio intracelular observado en la misma línea celular en respuesta a NSP4, indicando una posible participación de la enzima óxido nítrico sintasa constitutiva (cNOS). Por último los experimentos realizados in vivo en el modelo murino, así como en muestras de orina procedentes de niños con gastroenteritis por rotavirus muestran que las infecciones por rotavirus en ratones Balb/c provocan un aumento en la concentración de los productos derivados del ON en la orina de los animales infectados, con la participación de la enzima óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) en el modelo murino y que este incremento se observa también en la orina de niños con gastroenteritis por rotavirus. __________________________________________________________________________________________________The baculovirus expression system in insect cells was utilized to produce and purify the biologically active form of the NSP4 protein from rotavirus strains isolated from different animal and human strains. After the immunization of mice with the different ourified NSP4 proteins the super-immune sera obtained from NSP4 immunized mice, strongly recognize the carboxi-end of the protein (aminoacids 114 to 175), being indicative of the immunodominance of this region. One of the objebtives of this thesis was to obtain monoclonal antibodies, using the phage display technique that showed to be a useful tool in producing antibodies that recognize different epitopes in the NSP4 protein, thus being able to conduct inhibitory studies to identify biological activity. One interesting result when using this technique was that the phage display technique allowed us for the isolation of single chain monoclonal antibodies against non-immunodominant regions of NSP4. We also present data on the immunogenicity of the NSP4 protein in natural rotavirus infections in humans. Our results show that the NSP4 protein elicits a humoral immune response in children that had been naturally infected by rotavirus. The IgG serical antibodies developed against the NSP4 in children suffering acute rotavirus gastroenteritis, present cross reactivity against more than one genotype of the protein in 40% of the studied cases, indicating that the recognition of A and B NSP4 genotypes is not always heterotypic. Finally we studied the possible role of the nitric oxide (NO) in rotavirus pathophysiology. The NSP4 protein produced an increase in NO secretion in cultured HT-29 human epithelial cells. This increase occurred in parallel to the intracellular calcium increase previously observed in the same cell line in response to the NSP4. The rotaviral infections in Blab/c mice produced an increase in the concentration of the nitric oxide derived products in the urine of the infected animals, through the induction of the inducible nitric oxide enzyme (iNOS) in the murine model. This increase was also observed in the urine of children suffering acute rotaviral gastroenteritis

A Rate Control Algorthm for Low-Delay H.264 Video Coding with Stored-B Pictures

A rate control (RC) algorithm for H.264 video coding with stored-B (SB) pictures is proposed for low-delay applications. Different models for P and SB pictures are defined for a better QP and MAD estimation. Furthermore, a novel saw-tooth shaped model of target buffer level has also been introduced for a proper bit allocation in GOP structures with SB pictures. Our experimental results show that this proposal outperforms the reference software RC in terms of buffer occupancy and target bit rate adjustment at the expense of slight quality reduction.Publicad

Plan de acción para propiciar la retención de los usuarios en el Gimnasio de Cultura Física Fidel Linares Rodríguez de la ciudad de Pinar del Río

En el presente trabajo investigativo se aborda el proceso de un Plan de Acción para propiciar la retención de los usuarios en el Gimnasio de Cultura Física “Fidel Linares Rodríguez” de la Ciudad de Pinar del Río. , la muestra fue dividida en sexos y grupos etáreos, los servicios que se desarrollan en la organización deportiva básica y su influencia en el accionar de la comunidad. Teniendo en cuenta métodos sociológicos estudiados, realizamos una búsqueda de conseso a través de informantes claves por medio de encuestas a los usuarios que participan de los servicios que se prestan en el centro, para conocer su índice de satisfacción deseado, y el índice real que se ofertan, así como se realizó una valoración por parte de especialistas de la Cultura Física, con el propósito de valorar el plan de acción que permita la retención de los usuarios en dicha institución. Dentro del método etnográfico aplicamos una guía de observación a los servicios que se ofrecen para que nos diera a conocer la realidad mediante la percepción directa del objeto de estudio. Realizamos un diagnóstico a través de la Matriz Dafo al escenario de la investigación, y así realizar acciones que nos permitan mejorar la retención de los usuarios, como aporte teórico se fundamenta acciones que permitan modificar el modo de vida de los usuarios que reciben dichos servicios y como aporte práctico, la retención de los usuarios en el Gimnasio de Cultura Físic

Relación entre capacidades gerenciales de los funcionarios públicos y calidad del gasto público del Proyecto Especial Jequetepeque Zaña, 2019

El objetivo general de este informe de investigación es determinar la existencia de la conexión entre capacidades gerenciales de los funcionarios públicos de confianza con la calidad del gasto público en el Proyecto Especial Jequetepeque Zaña en el año fiscal 2019. Para proceder con el estudio se aplicó los instrumentos de recolección de datos a 50 servidores civiles entre nombrados, contratados y terceros que presentan servicios en las diversas Gerencias y Unidades de la entidad que ha sido materia de análisis al fin de proceder con la comprobación de las variables de competencias gerenciales de los funcionarios públicos de confianza y la calidad del gasto público, así como las capacidades gerenciales como los procedimientos administrativos, la planificación de obras y el cumplimiento de metas programadas, debiendo precisar que esa investigación consiste en un estudio básico con metodólogo cuantitativa y con diseño correlación, puesto que se trata de probar una relación entre las variables, para ello se aplicado dos cuestionarios para medir las variables capacidades gerenciales y calidad del gasto público, debiendo precisar que estos instrumentos cuentan con la validez y confiabilidades respectiva puesto que han sido sometidos a los procedimientos respectivos antes de su aplicación a los servidores civiles; en consecuencia, se ha asegurado que los resultados que obtenidos son serios para que sean base de futuras investigaciones relacionadas a las variables que se está estudiando a través de la presente. Por otro lado, después de la recolección de la información obtenida se ha procedido con el análisis efectuando la comprobación de la hipótesis con niveles de confianza que sobrepasa el 90%, por lo tanto, se ha llegado a determinar efectivamente una conexión significativa entre las competencias gerencias de los directivos estatales de confianza y la calidad de gasto público para el 2019, lo que se justifica la realización del presente informe

Estudio palinológico de mieles de montaña de la provincia de Orense (NW-España)

In the following study a quantitative and qualitative analysis of thirteen samples of honey is realised. The honey is extracted from beehives all of which are located at an altitude between 600 m to 1000 m in the province of Orense (NW Spain). In eleven of the samples the dominant pollen is Castanea sativa, reaching in three of them a percentage between 80-84%. The pollen of Rubus sp. is also dominant in one of honeys studied, wich a percentage of 67%. The nine remaining honeys are polyfloral and as well as Castanea sativa and Rubus sp. other pollens are commonly present, these being: Adenocarpus complicatus, Campanula sp., Hypericum perforatum, Lotus corniculatus , Prunus sp., Crataegus mono gina and Ericaceae.Se analizan cualitativa y cuantitativamente trece muestras de miel procedentes de colmenares ubicados en la zona montañosa oriental de Galicia, entre los 600 y 1000 m de altitud. En once de las muestras, aparece como polen dominante Castanea sativa Miller, alcanzando valores en tres de ellas entre el 80-84%. Rubus sp. es dominante en una de las mieles estudiadas, en la que alcanza un 67%, mientras que las restantes muestras se consideran multiflorales, con abundancia, además de los táxones citados, de otros tipos polánicos como: Adenocarpus complicatus DC., Campanula sp., Hypericum perforatum L., Lotus corniculatus L., Prunus sp., Crataegus mono gina Jacq. y Ericaceae