Novo sistema two-hybrid bacteriano baseado na manipulação da degradação protegida

Tese de mestrado, Biologia (Biologia Molecular e Genética), 2007, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasA expressão de anticorpos intracelulares em eucariotas apresenta um enorme potencial na genómica funcional e na terapia génica. Métodos como o phage display e os sistemas two-hybrid permitem a selecção de anticorpos intracelulares com elevada afinidade e especificidade contra um dado antigénio. Contudo, nestes métodos a orientação espacial do anticorpo face ao antigénio encontra-se comprometida, dado que o anticorpo se encontra em fusão com uma outra proteína. Assim, torna-se importante desenvolver um novo método, em que o anticorpo possa ser expresso sem estar ligado a outra proteína, ou seja, um método que permita a selecção de anticorpos específicos contra um antigénio, sem que haja interferência da orientação espacial do anticorpo. Nesta dissertação de mestrado é apresentado um novo sistema two-hybrid, em que a via de degradação ClpXP é manipulada, no sentido de ser possível detectar fortes interacções proteína-proteína (como por exemplo, interacções entre anticorpo e antigénio). Neste sistema, o antigénio é expresso em fusão com um repressor (proteína Arc do fago P22) e o anticorpo em fusão com um sinal de degradação (DAS+4). Também é assegurada a expressão simultânea da proteína SspB (stringent starvation protein B) por indução com arabinose. Se ocorrer interacção entre o anticorpo e o antigénio, a proteína SspB reconhece o sinal e encaminha o complexo Arcantigénio- anticorpo-DAS+4 para degradação. Como resultado, o repressor Arc, em fusão com o antigénio, deixa de reprimir um promotor que regula a resistência ao cloranfenicol e a bactéria, onde essa interacção ocorreu, torna-se resistente ao cloranfenicol. O trabalho experimental realizado permitiu confirmar esta interacção e o método apresentado pode ser considerado como um bom sistema para isolar anticorpos intracelulares com elevada afinidade, especificidade e estabilidadeThe expression of intrabodies [intracellular antibodies (Ab)] in eukaryotes presents an enormous potential in functional genomics and therapeutics. Methods as phage display and two-hybrid systems allow us to select intrabodies with great affinity and specificity against an antigen (Ag). However, in these methods the spatial orientation of the Ab facing an Ag is compromised, since the Ab is fused to another protein. Thus, it is essential to develop a new method where the Ab can be expressed without being attached to a protein, one that allows the selection of good binders against an Ag without the interference of the Ab spatial orientation. Here, we present a novel bacterial two-hybrid system where the degradation pathway ClpXP is manipulated in order to detect strong protein-protein interactions (eg. Ab- Ag). In this system, we express an Ag in fusion with a repressor (Arc of P22 Phage) and an Ab with a degradation tag (DAS+4). At the same time we induce (with arabinose) the expression of the SspB protein (stringent starvation protein B). If there is an interaction between the Ab and Ag, then SspB recognizes the sinal and leads the complex Ab-Ag for degradation. As a result, the Ag-trans-inhibitor protein no longer represses the promoter that regulates the resistance to chloramphenicol and the bacteria where the Ab-Ag interaction occurred becomes resistant to the chloramphenicol. In our experiments we have confirmed this interaction and we can envision this method as a potent system to isolate intrabodies with high affinity, specificity and stabilit

Assessing the Semiotic Inspection Method – The Evaluators’ Perspective

This paper presents an assessment of the Semiotic Inspection Methodaimed at understanding its costs, benefits, advantages and disadvantages from the evaluators’perspective. We applied a questionnaire to novice evaluators and interviewedthe authors of the method (representing the experts’ evaluators). An analysis of theresponses shows interesting insights and characteristics of the method

Mapeamento dos fluxos logísticos do armazém avançado de Palmela

O presente documento descreve uma análise focada nos fluxos logísticos que ocorrem dentro e fora do armazém avançado de uma empresa da indústria automóvel. O principal objetivo do projeto passou pela otimização destes fluxos e pela melhoria das taxas de ocupação dos recursos logísticos, de forma a torná-los mais eficientes. Numa primeira fase identificaram-se os fluxos de informação e de materiais que ocorrem na cadeia de abastecimento. Com esta informação fez-se um mapeamento recorrendo à ferramenta MIFA – Material and Information Flow Analysis. O passo seguinte passou pela realização de um mapeamento focado em todos os fluxos internos do armazém, destacando-se os de abastecimento e recolha de material das linhas de produção/montagem. Em complemento à análise mencionada, foi ainda estudada a implementação de um comboio logístico (mizusumashi) para realizar o abastecimento de componentes às linhas. Com a introdução deste sistema, será possível reduzir o número total de empilhadores utilizados e racionalizar os fluxos de abastecimento e recolha de material. Para além disto, o trabalho dos operadores logísticos foi organizado de forma a que a taxa de ocupação de cada um não excedesse os 85% de ocupação ideal.The actual document describes an analysis focused on the logistic flows that occur inside and outside an advanced warehouse of a company in the automotive industry. The main goal of the project is the optimization of these flows and the improvement of the occupancy rate of each logistics operator, in order to make them more efficient. In a first phase, the information and material flows that occur within the supply chain were identified. Using this information, a mapping was done using the MIFA tool – Material and Information Flow Analysis. The next step was performed a mapping focused on all the internal flows of the warehouse, highlighting the supply and picking of material from the production/assembly lines. In addition to the analysis mentioned, it was also studied the implementation of a mizusumashi to carry out the supply of components. With the introduction of this system, it will be possible to reduce the total number of forklifts used and to rationalize the logistics flows. Furthermore, the work of logistic operators was organized in such a way that the occupancy rate of each one did not exceed the ideal occupancy of 85%.Mestrado em Engenharia e Gestão Industria

Estágio na empresa Neocom Distribuição de Componentes Automóveis, Lda

O marketing tem vindo cada vez mais a crescer e a ser percebido pelas empresas como um fator bastante determinante no seu sucesso. Contudo, quando falamos em marketing, devemos entender que esta palavra integra várias estratégias, sendo uma delas o marketing internacional. O marketing internacional tem vindo a ser cada vez mais relevante para as empresas, isto porque permite a sua expansão de forma controlada através de estratégias que concedem o seu sucesso num mercado externo. Assim sendo, é importante perceber quais as ferramentas que devem ser utilizadas para garantir que o enquadramento da empresa no mercado internacional seja realizado de forma correta. Nos dias que correm qualquer empresa que queira vingar nos mercados internacionais deve focar-se no desenvolvimento de uma estratégia completa e extremamente minuciosa, sendo que por esta mesma razão estão expostas neste documento todas as tarefas que irão ser desenvolvidas na empresa Neocom. No relatório de estágio apresentado, é possível encontrar todos os detalhes acerca das atividades realizadas na empresa Neocom – Distribuição de Componentes Automóveis, Lda. entre o dia 10 de outubro de 2022 e o dia 31 de março de 2023. O documento encontra-se repartido em três partes, sendo elas a revisão de literatura, que contextualiza todo o tema do marketing internacional, a descrição da entidade acolhedora e por fim, a descrição completa de cada uma das atividades desenvolvidas ao longo do estágio

A gestão da internacionalização de uma empresa - o caso da telelangue

info:eu-repo/semantics/acceptedVersio

Como o comércio eletrônico pode ajudar o artesanato brasileiro

Essa monografia tem como objetivo mostrar os principais benefícios que o comércio eletrônico pode trazer para o artesanato do Brasil, assim como auxiliar os artesãos a se inserirem no mercado virtual, conseguindo aumentar suas vendas e levar seus trabalhos para todos os lugares do mundo

Relações entre Amizade, Regulação Emocional e Autoestima na Adolescência

Dissertação de Mestrado realizada sob a orientação do Professor Doutor António José dos Santos, apresentada no Ispa – Instituto Universitário para a obtenção de grau de Mestre na especialidade de Psicologia Clínica.A adolescência é um período de desenvolvimento bastante complexo e significativo na vida do indivíduo sendo que ocorrem diversas mudanças a níveis biológicos, comportamentais, psicológicos, entre outros, sendo que algumas destas dizem respeito à qualidade da amizade, regulação emocional e autoestima. Diversos autores revelam que a amizade está bastante relacionada com a regulação emocional e a autoestima. Ademais, estudos indicam que as jovens do género feminino apresentam qualidades de amizade superiores, não existe consenso sobre qual o género que apresenta melhor capacidade de regulação emocional e os rapazes apresentam melhor autoestima. O presente estudo, foca-se em compreender estas variáveis, como é que elas interagem uma com as outras e averiguar se existem diferenças de género e de idade. Deste modo, foi aplicado um inquérito a adolescentes dos 15 aos 19 anos onde foram aplicados o Friendship Quality Questionnaire, o Emotion Regulation Questionnaire for Children and Adolescents e o Self Perception Profile for Adolescents. Como resultados descritivos deste trabalho, a qualidade da amizade, a regulação emocional e a autoestima estão correlacionadas, as raparigas demonstram níveis mais elevados de qualidade da amizade e os adolescentes mais novos apresentaram níveis mais altos no conflito e traição e na capacidade de resolução de problemas. Análises de regressão revelaram que a regulação emocional é um mediador entre a qualidade da amizade e a autoestima.ABSTRACT: Adolescence is a very complex and significant period of development in an individual's life, with several changes occurring at biological, behavioural, and psychological levels, some of which relate to the quality of friendship, emotional regulation, and self-esteem. Several authors reveal that friendship is correlated to emotional regulation and self-esteem. Furthermore, studies indicate that young females have superior friendship qualities, there is no consensus on which gender has better emotional regulation and boys have better self-esteem. That said, the study focuses on understanding these variables, how they interact with each other and finding out if there are gender and age differences. Thus, a survey was applied to adolescents between 15 and 19 years old, where the Friendship Quality Questionnaire, the Emotion Regulation Questionnaire for Childrens and Adolescents and the Self-Perception Profile for Adolescents were applied. As descriptive results of this work, friendship quality, emotional regulation and self-esteem are correlated, girls showed higher levels of friendship quality and younger adolescents showed higher levels of conflict and betrayal and problem-solving skills. Regression analyses revealed that emotional regulation is a mediator between the quality of friendship and self-esteem

As receitas patrimoniais das autarquias locais

Dissertação de mestrado em Direito Tributário e FiscalA presente dissertação versa sobre as receitas patrimoniais das autarquias locais. Torna-se necessário começar pelo enquadramento da autonomia patrimonial, enquanto prerrogativa da autonomia financeira das autarquias e pela contextualização das receitas patrimoniais no universo das receitas que as autarquias podem auferir. De seguida, levar-se-á a cabo uma análise sobre o património das autarquias, partindo da distinção entre domínio público e privado. Posto isto, estamos em condições de nos debruçarmos sobre as receitas que o património gera, isto é, aquelas que provêm da normal administração ou alienação do património autárquico, bem como da prestação de alguns serviços públicos, e que não têm caráter tributário. Por fim, vamos observar o peso das receitas patrimoniais nos orçamentos municipais, numa tentativa de perceber o impacto destas na estrutura global da receita.The present dissertation is about patrimonial revenues of Autarchies. It becomes necessary to start by the framework of the patrimonial autonomy, while prerogative of Autarchies’ financial autonomy and by the patrimonial revenues contextualization in the universe of revenues that the autarchies may get. Afterward, it will be performed an analysis to the autarchies properties, starting from the distinction between public dominion and private dominion. Hereupon, we are able to assay the revenues that the patrimonial profits, provided from the regular administration or the disposal of the patrimony, as well as from some public services without a tributary purport. Lastly, we will observe the weight, importance of the patrimonial revenues to the counties budgets an attempted to understand their impact in the global structure of the profits, revenues