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    Caracterización transcriptómica y funcional de las células madre mesenquimales residentes en tejido adiposo de pacientes obesos

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    La obesidad se asocia con un estado de inflamación crónica de bajo grado y es considerada uno de los mayores factores de riesgo cardiovascular y de otro tipo de enfermedades como son la diabetes, hipertensión, arteriosclerosis y trombosis. Se han descrito diversos procesos que tienen lugar en el tejido adiposo y que determinan el desarrollo de la obesidad. Sin embargo, el tejido adiposo no solo se considera un órgano de almacenamiento energético o endocrino, sino que hoy en día también es considerado como una fuente de células madre mesenquimales (ASC). Recientemente las ASC se han convertido en una alternativa de gran interés en terapia celular para regenerar el corazón dañado. Sin embargo se ha sugerido que una alteración en la homeostasis de las células madre desencadenada por un estímulo nocivo, constante y repetitivo, como podría ser el caso de una enfermedad crónica, podría provocar un desequilibrio persistente en el reservorio de éstas células produciendo un cambio prematuro e irreversible del potencial regenerador de las células madre. De hecho, estudios previos han demostrado que la presencia de factores de riesgo cardiovascular, como la hipertensión, la enfermedad coronaria o la diabetes, alteran y merman las propiedades de las células progenitoras circulantes. Del mismo modo, se ha visto que la edad y el género modifican la funcionalidad de las ASC. El objetivo central de esta tesis ha sido el estudiar y caracterizar las ASC derivadas de pacientes obesos. En esta tesis doctoral se ha observado que la presencia de desórdenes metabólicos disminuye el porcentaje de células positivas para ciertos marcadores característicos de ASC, como es el caso de CD90, en el tejido adiposo. Sin embargo, una vez aisladas las ASC, independientemente del índice de masa corporal del donante de las ASC, éstas presentan el 100% de los marcadores característicos confirmándonos la obtención de una población homogénea. No obstante, hemos observado que algunas características importantes y necesarias para el uso de las ASC en la terapia celular se ven afectadas cuando las células se aíslan de pacientes que presentan obesidad mórbida y factores de riesgo cardiovascular. A nivel clínico y en la terapia celular es beneficioso poder obtener el máximo número de células en el menor tiempo posible. El hecho de que observemos una mejora en la velocidad de crecimiento celular al cultivar las ASC en condiciones de hipoxia refuerza el uso de bajas concentraciones de oxígeno a la hora de su expansión para fines clínicos. Sin embargo, el uso de las ASC de pacientes obesos no parece ser tan beneficioso. Estas células presentan un crecimiento celular más lento, una menor capacidad proangiogénica al liberar el factor antiangiogénico trombospondina-1, así como una capacidad de diferenciación disminuida respecto a las ASC de pacientes no-obesos. De hecho, parece ser que las ASC de pacientes obesos se encuentran en un estado de desarrollo menos multipotencial que las de individuos no-obesos, más dirigido hacia la adipogénesis, y a un estado más proinflamatorio. Una de las ventajas del uso de las ASC en la terapia celular es su uso autólogo, sin embargo esta ventaja desaparece en el caso de los pacientes obesos. Aunque se conocen bastante bien los cambios que se producen en el tejido adiposo de los obesos, no está muy estudiado como afectan estos cambios a la población endógena de células madre mesenquimales de éste tejido. Los resultados obtenidos en este trabajo nos ayudan a comprender mejor como la obesidad, y los desórdenes metabólicos que derivan de ella, afectan y modifican a la población de ASC.The adipose tissue is an endocrine regulator and a risk factor for atherosclerosis and cardiovascular disease when by excessive accumulation induces obesity. Moreover, it has been demonstrated that the adipose tissue is a reservoir of mesenchymal stem cells. The potential use of adipose-derived stem cells (ASCs) from white adipose tissue for organ repair and regeneration has been considered because of their obvious benefits in terms of accessibility and quantity of available sample. However, age, adipose tissue depot site, and gender have been shown to modify the number and the proliferation, differentiation, and angiogenic capacity of ASCs. Our aim was to investigate the mechanisms by which obesity affects subcutaneous white adipose tissue stem cells. Here we report that ASCs from white adipose tissue of patients with obesity have lower proliferative and angiogenic potential than ASCs of nonobese metabolically normal individuals. Moreover, the transcriptomic profile of the stem cells reservoir in obese subcutaneous adipose tissue is highly modified with significant changes in genes regulating stemcellness, lineage commitment and inflammation. In addition to body mass index, cardiovascular risk factor clustering further affect the ASC transcriptomic profile inducing loss of multipotency and, hence, capacity for tissue repair. In summary, obesity produces a detrimental effect on its resident stem cells. In fact, the ASC undifferentiated multipotent state is impaired in obese patients with respect to non-obese individuals. These effects may negatively influence their regenerative potential when used in cell therapy and also in spontaneous repair of minor organ damage. Indeed, ASCs have already been tested in several clinical trials, from repair of heart ischemic injury to Crohn’s disease and multiple sclerosis. However, our observations indicate that the therapeutic strategies based on autologous ASC implantation would be impaired in patients with obesity and metabolic syndrome

    A New Study for the Characterization and Work with Young University People about Religious Indifference

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    Considerando que los principios morales de la religión son normas y preceptos que perfeccionan al ser humano con las acciones buenas que realiza, esta investigación se le considera importante para grupos de laicos, religiosos, estatales y de otros credos. El objetivo es identificar las causas y consecuencias de la indiferencia hacia la religión, el vacío de identidad religiosa y la carestía de valores morales y religiosos. Las mismas se analizan desde una perspectiva cuantitativa que enriquece el trabajo cualitativo de este artículo. El resultado de este estudio es una caracterización parcial del joven universitario actual que se evidencia las principales causas de la indiferencia religiosa, tales como: ejemplo negativo de los líderes religiosos, descomposición familiar e influencia del internet.Taking into consideration that the religious moral principles are norms and precepts that shape the human being with the good actions that he takes, this research is considered important for groups of laities, religious, state, and other faiths. The objective is to identify the causes and consequences of indifference towards religion, the emptiness of religious identity and the lack of moral and religious values. They are analyzed from a quantitative perspective that enriches the qualitative work of this article. The result of this study is a partial characterization of the youth university student of today that shows the main causes of religious indifference, such as: negative example of religious leaders, family decomposition and influence of the internet.Cátedra Libre de Pensamiento Cristiano (UNLP)Seminario Mayor San José (La Plata

    La imagen y la narrativa como herramientas para el abordaje psicosocial en escenarios de violencia. Departamentos de La Guajira, Cundinamarca y Cesar

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    La violencia en Colombia se ha convertido en un fenómeno social que viene afectando la salud física y mental de millones de víctimas, incidiendo en su desarrollo humano y bienestar social, tal como se puede evidenciar en el relato “Camilo”, un joven afrocolombiano que fue víctima del conflicto, al haberse desplazado de su región por amenazas contra su integridad de parte de grupos ilegales, quienes lo obligaron a migrar de su territorio para proteger su integridad y la de su familia, buscando un cambio de vida. No obstante, a través de su narrativa y el uso de preguntas circulares y reflexivas como herramientas de autoexploración y autoreconocimiento subjetivo como sobreviviente de las dificultades vividas, logramos identificar un importante proceso de sanación, resiliencia y empoderamiento, que le ha permitido avanzar en la transformación de sus realidades psicosociales, redireccionando su proyecto de vida con una visión de servicio de otras víctimas de su comunidad. Un contexto similar se puede apreciar en el estudio de caso de la comunidad Peñas Coloradas (Caquetá), que ha sido víctima de desplazamiento forzado por más de 17 años y su narrativa desde los procesos de la reconstrucción de la memoria histórica del conflicto interno, ha visibilizado esta población olvidada y abandonada por parte del Estado, que requieren la atención psicosocial para generar efectivos procesos de reconciliación, resiliencia, potenciación y retorno progresivo a su territorio rural, mediante la formulación e implementación de efectivas estrategias de intervención psicosocial. En este documento, se relacionan tres propuestas de acción viables. Finalmente, retomaremos la técnica de la foto voz, para identificar las voces silenciosas que entonan una reconstrucción de sus realidades en distintos escenarios de violencias que cotidianamente, un número importante de víctimas experimenta en entorno.Violence in Colombia has become a social phenomenon that has been affecting the physical and mental health of millions of victims, affecting their human development and social well-being, as can be seen in the story “Camilo”, a young Afro-Colombian who was A victim of the conflict, having displaced from his region due to threats against his integrity from illegal groups, who forced him to migrate from their territory to protect his integrity and that of his family, seeking a change of life. However, through his narrative and the use of circular and reflective questions as tools for self-exploration and subjective self-recognition as a survivor of the difficulties experienced, we were able to identify an important process of healing, resilience and empowerment, which has allowed him to advance in the transformation of their psychosocial realities, redirecting their life project with a vision of service to other victims in their community. A similar context can be seen in the case study of the Peñas Coloradas community (Caquetá), which has been a victim of forced displacement for more than 17 years and its narrative from the processes of the reconstruction of the historical memory of the internal conflict, has made visible this forgotten and abandoned population by the State, who require psychosocial attention to generate effective processes of reconciliation, resilience, empowerment and progressive return to their rural territory, through the formulation and implementation of effective psychosocial intervention strategies. In this document, three viable action proposals are listed. Finally, we will return to the technique of the photo voice, to identify the silent voices that sing a reconstruction of their realities in different scenarios of violence that a significant number of victims experience in the environment on a daily basis

    Allogenic adipose-derived stem cell therapy overcomes ischemia-induced microvessel rarefaction in the myocardium : systems biology study

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    Altres ajuts: This work was supported by the Spanish Cardiovascular Network of Cell Therapy (Red TerCel RD16/0011/018) and Ciber CV(CB16/11/00411) from the Instituto Salud Carlos III (to LB). Additional funding was received from Plan Nacional de Salud (PNS SAF2016-76819-R to LB, 2015-71653-R to GV) from the Spanish Ministry of Science and Innovation and FEDER funds; from Instituto de Salud Carlos III (CPII13/00012 to GA); and support from a grant from the Muy Ilustrísima Administración from the Hospital de la Santa Creu I Sant Pau (to MG). The authors thank Fundacion Jesus Serra, Barcelona for continuous support.Myocardial microvascular loss after myocardial infarction (MI) remains a therapeutic challenge. Autologous stem cell therapy was considered as an alternative; however, it has shown modest benefits due to the impairing effects of cardiovascular risk factors on stem cells. Allogenic adipose-derived stem cells (ASCs) may overcome such limitations, and because of their low immunogenicity and paracrine potential may be good candidates for cell therapy. In the present study we investigated the effects of allogenic ASCs and their released products on cardiac rarefaction post MI. Pig subcutaneous adipose tissue ASCs were isolated, expanded and GFP-labeled. ASC angiogenic function was assessed by the in-vivo chick chorioallantoic membrane (CAM) model. Pigs underwent MI induction and 7 days after were randomized to receive: allogenic ASCs (intracoronary infusion); conditioned media (CM; intravenous infusion); ASCs + CM; or PBS/placebo (control). Cardiac damage and function were monitored by 3-T cardiac magnetic resonance imaging upon infusion (baseline CMR) and 1 and 3 weeks thereafter. We assessed in the myocardium: microvessel density; angiogenic markers (CD105, CD31, TF, VEGFR2, VEGFR1, vWF, eNOS, CD62); collagen deposition; and reparative fibrosis (TGFβ/TβRII/collagen). Differential proteomics of ASCs and CM was performed to characterize the ASC protein signature. CAM indicated a significant ASC proangiogenic capacity. In pigs after MI, only PBS/placebo animals displayed an impaired cardiac function 3 weeks after infusion (p < 0.05 vs baseline). Administration of ASCs + CM significantly enhanced neovessel formation and favored cardiac repair post MI (p < 0.05 vs the other groups). Molecular markers of angiogenesis were significantly upregulated both at transcriptional and protein levels (p < 0.05). The in-silico bioinformatics analysis of the ASC and CM proteome (interactome) indicated activation of a coordinated protein network involved in the formation of microvessels and the resolution of rarefaction. Coadministration of allogenic ASCs and their CM synergistically contribute to the neovascularization of the infarcted myocardium through a coordinated upregulation of the proangiogenic protein interactome. The online version of this article (doi:10.1186/s13287-017-0509-2) contains supplementary material, which is available to authorized users

    Estudio molecular de la glicoproteína oviductal OVGP1 y su efecto en la fecundación y el desarrollo embrionario in vitro en la especie porcina (Sus scrofa) y bovina (Bos taurus)

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    Se ha considerado el oviducto como un mero conducto para gametos y embriones durante muchos años, pero numerosos estudios realizados en las últimas décadas han demostrado que está involucrado en importantes procesos que son necesarios para la correcta fisiología de gametos y embriones. Además, el oviducto es el lugar donde tiene lugar la fecundación y el desarrollo embrionario temprano. Gametos y embriones están en contacto con el fluido oviductal (FO) durante su paso a través del oviducto. El FO es un fluido complejo que contiene numerosos compuestos metabólicos y una gran variedad de proteínas. Podemos destacar la proteína oviductal dependiente de estrógenos (OVGP1), también llamada oviductina o mucina-9, como la glicoproteína mayoritaria del FO. Análisis de la secuencia de OVGP1 han mostrado que existe un alto grado de identidad y similitud en el extremo N-terminal de OVGP1 entre las diferentes especies de mamíferos, mientras que el grado de identidad y similitud es bajo en el extremo C-terminal de la misma. La comparación de las secuencias de aminoácidos de OVGP1 entre especies revela la existencia de cinco regiones diferentes (A-E). Todas las proteínas OVGP1 de mamíferos contienen la región A, pero difieren en la presencia/ausencia de otras regiones en el extremo C-terminal. A pesar de la existencia de datos sobre la contribución de OVGP1 en la fisiología reproductiva, todavía no se conoce el mecanismo molecular mediante el que actúa. Por esta razón, en este estudio se realiza una valoración acerca del papel de OVGP1 y su extremo C-terminal en fecundación. Para investigar la función de OVGP1 y su extremo C-terminal, se realizó la clonación de varias proteínas: OVGP1 porcina nativa, OVGP1 de coneja y OVGP1 porcina truncada en la región D y cada una de las regiones A, D y BD de manera individual. Después de la expresión y purificación de las proteínas, fueron utilizadas para realizar ensayos moleculares y fisiológicos. En este trabajo observamos que OVGP1 se unía a la zona pelúcida (ZP) de ovocitos porcinos madurados in vitro (MIV) a través de la región A de su extremo N-terminal y se mostró que su extremo C-terminal modula esta unión, modificando la morfología externa del ovocito. También observamos que la región A no estaba involucrada en la unión especie-específica entre OVGP1 y la ZP. Se detectó OVGP1 en el interior de cuerpos multivesiculares del citoplasma de ovocitos porcinos MIV, sugiriendo la posible endocitosis de la proteína. Por el contrario, la eliminación de la región D del extremo C-terminal impedía la endocitosis. Por otro lado, se ha descrito OVGP1 como el componente del FO responsable del endurecimiento frente a la digestión proteolítica de la ZP. En este trabajo, se mostró que el extremo C-terminal de la proteína es responsable de modular este endurecimiento. Además, se utilizó OVGP1 como suplemento durante la fecundación in vitro (FIV), produciéndose un incremento significativo en el porcentaje de monospermia y en la eficiencia de fecundación, que dependía de la presencia de la región D del extremo C-terminal. De igual manera, se observó un efecto positivo al utilizar OVGP1 como suplemento durante la FIV o el cultivo in vitro (CIV), mientras que al suplementar ambos procesos, el efecto en el rendimiento del sistema bovino era negativo. Por el contrario, esta suplementación en ambos procesos mejoró la calidad de los embriones obtenidos, ya que se detectó un incremento en la expresión de algunos genes relacionados con el desarrollo embrionario temprano. Por todo ello, OVGP1 podría ser un componente idóneo a ser utilizado en los medios sintéticos para mejorar las técnicas de reproducción asistida. Oviducts have long been considered mere conduits for gametes and embryos, but numerous studies performed in recent years have demonstrated that the oviduct is involved in several important processes that are necessary for the correct gamete and embryo physiology. Moreover, the oviduct is the site of fertilization and early cleavage of the zygote. During their trip through the oviductal tube, gametes and early embryos are bathed in oviductal fluid (OF). This complex fluid contains many metabolic compounds and a great variety of proteins. The major non-serum glycoprotein present in the OF is the estrogen-dependent oviductal protein (OVGP1), also named oviductin or mucin-9. Analysis of the sequence shows that the N-terminal region of the mature polypeptide OVGP1 has a high degree of identity and similarity among the species. However, C-terminal regions show a low degree of identity and similarity, with several insertions/deletions in their sequence. Comparison of the amino acid sequences of several mammalian OVGP1 reveals the existence of five different regions (A-E). All mammalian OVGP1 proteins possess region A but differ in the length of the core proteins and therefore the presence/absence of the other regions in C-terminal position. Despite the robust data obtained concerning the contribution of OVGP1 in reproductive physiology in different species, the molecular mechanism that would explain its role remains to be established. For this reason, this study makes a molecular and physiological assessment of the role of OVGP1 and its C-terminal region in fertilization. To investigate the role of OVGP1 and its C-terminal region, several proteins were cloned: full length porcine OVGP1 including regions A, B and D; rabbit OVGP1 including regions A, B and D, wich was almost absent, and porcine OVGP1 which was truncated in the D region. In order to analyze the molecular implications of the different OVGP1 regions, each region of the porcine protein was also cloned. The presence of recombinant protein was confirmed by immunoblot after expression and purification and these proteins were used to carry out molecular and physiological experiments. We showed that OVGP1 were able to bind to the zona pellucid (ZP) of in vitro maturated (IVM) porcine oocytes trought the N-terminal A region of the protein. This study has shown that the A region is not involved in the species-specific binding property when the OVGP1 cross-reactivity between species was analysed. Besides, we showed that C-terminal of OVGP1 modulates the binding to the ZP and the surface morphology of oocyte. OVGP1 was detected within multivesicular-like bodies located inside of the IVM porcine oocytes, suggesting that pOVGP1 was endocytosed by the oocyte. By contrast, deletion of the c-terminal D region prevented OVGP1 endocytosis. Moreover, OVGP1 has been referred to the OF component involved in enzymatic ZP hardening. Here, we proved that OVGP1 C-terminal is responsible for modulating this hardening. Besides, using OVGP1 as a supplementary component in in vitro fertilization (IVF) of the porcine system we noticed a significant increase in the percentage of monospermy and in the fertilization efficiency, whose final output depended on the presence of the carboxy-terminal D region of OVGP1. We also showed that incubation with OVGP1 during IVF or in vitro culture (IVC) had a positive effect in the bovine system, while supplementation in both processes had a negative effect on the final blastocyst output. Nevertheless, such incubation in both IVF and IVC improved embryo quality, because OVGP1 increased the expression of some genes involved in early embryo development. Consequently, OVGP1 would seem to be suitable for incorporation into the synthetic medium to improve assisted reproductive technologies

    Diseño de una estrategia didáctica para la enseñanza de Matemática a niños de Educación Básica Media con coeficiente intelectual límite

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    1. Introducción.-- 2. Planteamiento de la Propuesta de Trabajo.-- 3. Marco Teórico.-- 4. Metodología.-- 5. Resultados.-- 6. Conclusiones y RecomendacionesEl presente trabajo contiene una estrategia didáctica activa basada en el aprendizaje cooperativo, con técnicas que los docentes pueden utilizarlas para que los estudiantes con coeficiente intelectual límite a más de adquirir conocimientos también puedan socializar con sus compañeros, fomentando así una verdadera inclusión educativa. La mayoría de estudios e investigaciones se relacionan con el diseño y aplicación de estrategias para ayudar a los estudiantes con problemas de aprendizaje; pero no se especifican técnicas para desarrollar las destrezas de matemática en niños que tienen CIL, siendo necesaria la implementación de esta estrategia. Para diagnosticar se aplicaron encuestas y fichas de cotejo a profesores y padres de familia con la finalidad de establecer las características de la herramienta didáctica que necesitan los docentes para que el aprendizaje sea significativo. La estrategia propuesta se fundamenta en el constructivismo, porque fomenta la participación activa del estudiante en un ambiente de respeto y responsabilidad compartida. Se establece que con una apropiada orientación por parte de los docentes y la aplicación de técnicas adecuadas los estudiantes con CIL, desarrollarán las destrezas básicas del área de matemática.Tesis (Magister en Ciencias de la Educación) - Pontificia Universidad Católica del Ecuador, Departamento de Investigación y Posgrados.Magister en Ciencias de la Educació

    Síntesis, preparación y caracterización de materiales supramoleculares basados en estructuras de tipo bent-core anfifílicas

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    La geometría angular de las moléculas de tipo bent-core ha aportado al campo de los materiales cristal líquido propiedades singulares como obtener orden polar o la posibilidad de inducir quiralidad supramolecular a partir de moléculas aquirales. Aunque los cristales líquidos tienen un gran interés como materiales termótropos, se ha demostrado recientemente que moléculas de tipo bent-core, con un diseño molecular adecuado, son capaces de formar sistemas supramoleculares en distintos disolventes, tales como los agregados y los geles. En la última década ha surgido una tecnología novedosa basada en la manipulación de los fluidos a escala micrométrica, microfluídica, que está siendo utilizada en el autoensamblaje de materiales poliméricos, pero apenas ha sido explorada con moléculas de bajo peso molecular. Por ello en este trabajo se propone utilizar el método de la microfluídica para controlar el autoensamblaje de agregados supramoleculares preparados anteriormente con el método clásico de coprecipitación seguido mediante turbidimetría, con el fin de mejorar la reproducibilidad del proceso de agregación y el control de la morfología de estos sistemas supramoleculares. Para ello se han elegido tres tipos de moléculas: Dendrímeros iónicos (PPI1-B5-4-8 y PPI1-B5-4-14), anfífilos oxietilénicos dendríticos (TEG-D1B5-4-8, TEG-D1B5-10-14) y anfífilos oxietilénicos no dendríticos (TEG-B5-0-14 e isoTEG-B6-0-14), que fueron estudiados en el grupo de investigación y formaban agregados de distintas morfologías y dimensiones. Como parte de este proyecto se han sintetizado de nuevo y caracterizado tres de ellos: PPI1-B5-4-14, TEG-D1B5-10-14 y TEG-B5-0-14. En el estudio comparativo entre el método clásico y el método de microfluídica se ha observado un mayor control en la morfología y las dimensiones de los agregados formados mediante microfluídica, además de una muy significativa rapidez del procesamiento. Por otra parte, se han preparado geles físicos en disolventes de distintas polaridades y estudiando su morfología mediante SEM comprobando que el compuesto TEG-B5-0-14 presenta las mejores cualidades para gelificar tanto en diferentes disolventes como a diferentes concentraciones, generando redes tridimensionales fibrilares

    COMPORTAMIENTO DEL LÍDER RELIGIOSO Y SU INFLUENCIA EN LA ACTUACIÓN DE LOS FELIGRESES

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    En este artículo se presenta una visión centrada en el comportamiento del líder religioso y su influencia en la actuación de los feligreses de las parroquias urbanas del cantón Ambato, con el fin de encontrar las causas y consecuencias analizándose aspectos como: el mal ejemplo en la coherencia de vida, el poder, la fama, el dinero, entre otros; los mismos que han sido cuestionados por la sociedad, y sus efectos son notorios en la actuación de sus feligreses, entre ellos se destacan: abandono de la fe, cambio de religión, quemeimportismo, desinterés y pérdida de valores religiosos. Por ello se busca aportar elementos esenciales como: la aceptación considerable del líder religioso por parte del feligrés, pese a la incoherencia de vida y la necesidad de crear una nueva cultura religiosa, aspectos que la persona humana toma en cuenta para manifestar su fe.This article shows a point of view focused on the behavior of the religious leaders and its influence on parishioners’ behavior of urban parishes of Ambato in order to find the causes and consequences, and it is going to be analyzed some aspect such as: the lack of coherence in their life, the power, fame, money among others. Those aspects have been questioned by society, and its effects are noticeable in the parishioners´ behavior, and it can be evidenced in abandonment of the faith, some others go to other churches, indifference, and loss of religious values. Because of all those aspects that have been mentioned before, the project aim is to contribute essential elements such as: the acceptance of the religious leaders by the parishioners, in spite of the lack of coherence in their life and the necessity to create a new religious culture, aspects that people consider to express their faith
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