New insights on the interplay between psychopharmacology and neuroplasticity in psychiatric disorders

Tese de Doutoramento em Ciências da SaúdeIt is now clear that various forms of structural plasticity, including the generation of new neurons and glial cells, may modify pathophysiological processes in neuropsychiatric disorders, namely in depression. In fact, several studies have shown decreased hippocampal neurogenesis in depressed patients, while treatment with different antidepressant drugs in animal models increases neurogenesis in this region, allowing the recovery from emotional and cognitive changes. However, these effects have not been described for all the available classes of antidepressant drugs. Furthermore, the neuroplastic effects of antidepressants in other neurogenic regions such as the hypothalamus have yet to be determined. Despite the importance of these drugs in the recovery from depression, a significant proportion of depressed patients reveal incomplete remission and develop treatment-resistant forms of the disorder. The use of atypical antipsychotics in these cases has been widely used in the clinical setting. However, the neuroplastic effects of these drugs in depression and schizophrenia are still largely unknown. Taking this into consideration we aimed to explore new perspectives on the interplay between psychopharmacology and neuroplasticity in these psychiatric disorders. To explore the neuroplastic effects of the antidepressant Pirlindole, a MAO-A (monoamine oxidase, type A) inhibitor, we used the unpredictable chronic mild stress (uCMS) animal model of depression. Our results indicate that Pirlindole is able to reverse the behavioural effects of stress exposure, potentiating hippocampal adult neurogenesis and rescuing the stress-induced dendritic atrophy of granule neurons in the dentate gyrus of the hippocampus. These results further reinforce the notion that the modulation of monoaminergic neurotransmission is involved in the neuroplastic effects of currently available antidepressant drugs. To dissect the potential actions of antidepressants in adult neurogenesis in the hypothalamus we treated animals exposed to uCMS with two different classes of antidepressants: fluoxetine (a selective serotonin reuptake inhibitor) and imipramine (a tricyclic antidepressant). Our results demonstrate that chronic stress and antidepressant treatment can modulate hypothalamic neurogenesis. Moreover, we proved that different classes of antidepressants, with an opposite action on appetite and body weight gain, differentially modulate hypothalamic neurogenesis. This data indicates that in addition to the neuroplastic effects on the hippocampus, stress and antidepressant drugs also modulate hypothalamic adult neurogenesis.Furthermore, we explored the role of neuroplasticity in the therapeutic actions of atypical antipsychotics in depression. To achieve this, we treated animals exposed to uCMS with a classical (haloperidol) and an atypical (clozapine) antipsychotic. Our data demonstrates that the atypical antipsychotic clozapine improved measures of depressive-like behavior while haloperidol had no beneficial effect, aggravating learned helplessness in the forced swimming test and behavior flexibility in a cognitive task. Importantly, an upregulation of adult neurogenesis and neuronal survival was observed in animals treated with clozapine while haloperidol promoted a downregulation of these processes. These results demonstrate that the atypical antipsychotic is able to reverse the behavioral effects of chronic stress by improving adult neurogenesis, cell survival and neuronal reorganization. Finally, to understand the impact of different classes of antipsychotics in the negative and cognitive symptoms of schizophrenia, we used a neurodevelopmental model of schizophrenia. Animals expose prenatally to the cytostatic agent methylazoxymethanol (MAM) presented specific cognitive deficits and social impairments. The classical antipsychotic haloperidol presented no beneficial effects in these behavioral dimensions. The atypical antipsychotic clozapine and risperidone revealed a positive effect on both dimensions while aripiprazole presented a significant effect in the social measure. Adult gliogenesis is affected in animals exposed to MAM, being modulated by the atypical antipsychotics used. Neurogenesis is not altered in MAM animals, with haloperidol negatively affecting this phenomenon. In this work, we proved that classical and atypical antipsychotics differentially modulate hippocampal cell genesis possibly contributing to different behavioural actions in hippocampal dependent functions. Together, these findings contribute to expand our knowledge on the role of psychopharmacological agents (including antidepressants and antipsychotics) on the modulation of different neuroplastic events, including cell genesis and neuronal remodelling. In the future, this knowledge may help to pave the way for new therapeutic interventions both in depression and schizophrenia.É actualmente sabido que várias formas de plasticidade estrutural, incluindo a formação de novos neurónios e células da glia, podem modificar o processo patofisiológico em algumas doenças neuropsiquiátricas, nomeadamente a depressão. De facto, vários estudos têm demonstrado uma redução da neurogénese hipocampal em pacientes com depressão. Para além disso, o tratamento com diferentes fármacos, nomeadamente os antidepressivos, revelou em modelos animais, aumentar a neurogénese nesta região cerebral, permitindo uma recuperação na componente emocional e cognitiva. Contudo, estes efeitos não estão descritos para todas as classes de antidepressivos disponíveis. Além disso, os efeitos dos antidepressivos na neuroplasticidade em outras regiões neurogénicas como o hipotálamo ainda não foram determinados. Apesar da importância destes fármacos na recuperação da depressão, uma proporção significativa de pacientes revela remissão incompleta bem como formas resistentes ao tratamento da doença. Nestes casos, o uso de antipsicóticos atípicos tem sido amplamente utilizado no contexto clínico. No entanto, os efeitos destes fármacos na neuroplasticidade na depressão e esquizofrenia são ainda amplamente desconhecidos. Tendo isto em consideração, propusemos explorar novas perspectivas na inter-relação entre a psicofarmacologia e a neuroplasticidade nestas doenças psiquiátricas. Para determinar os efeitos do antidepressivo inibidor da MAO-A (monoamina oxidase, tipo A) Pirlindol na neuroplasticidade, utilizamos o modelo animal de exposição a stress crónico moderado e imprevisível (uCMS). Os nossos resultados indicam que o Pirlindol é capaz de reverter os efeitos comportamentais de exposição ao stress, potenciando o aumento na neurogénese no hipocampo adulto e recuperando igualmente a atrofia dendrítica induzida pelo stress em neurónios granulares no giro dentado do hipocampo. Estes resultados reforçam a ideia de que a modulação da neurotransmissão monoaminérgica está envolvida nos efeitos neuroplasticos promovida pelos antidepressivos. Para dissecar, as acções dos antidepressivos na neurogénese hipotalâmica, utilizamos o modelo animal de depressão uCMS e tratamento com diferentes classes de antidepressivos: fluoxetina (um inibidor selectivo da reabsorção de serotonina) e imipramina (um antidepressivo tricíclico). Os nossos resultados demonstram que o stress crónico e o tratamento com antidepressivos modulam a neurogénese no hipotálamo. Além disso, provou-se que diferentes classes de antidepressivos, com uma acção contrária no apetite e no ganho de peso corporal, modulam a neurogénese no hipotálamo de uma forma diferencial. Estes resultados, indicam que, para além do hipocampo, o stress e os antidepressivos também modulam a neurogénese no hipotálamo adulto. Em seguida, exploramos o papel da neuroplasticidade nas acções terapêuticas dos antipsicóticos atípicos na depressão. Para isso, utilizou-se o modelo animal de depressão uCMS e tratamento com o antipsicótico clássico (haloperidol) e o atípico (clozapina). Os nossos dados demonstram que, o antipsicótico atípico clozapina melhorou o comportamento depressivo. Por outro lado, o haloperidol não teve qualquer efeito benéfico, agravando o desalento aprendido no teste de natação forçada e a flexibilidade comportamental numa tarefa cognitiva. Simultaneamente observou-se um aumento da neurogénese adulta e da sobrevivência neuronal em animais tratados com clozapina, enquanto que o haloperidol promoveu uma redução nestes processos. Estes resultados, demonstram que o antipsicótico atípico é capaz de reverter os efeitos comportamentais do stress crónico através da melhoria na neurogénese adulta, da sobrevivência celular e da reorganização neuronal. Por último, para compreender o impacto das diferentes classes de antipsicóticos nos sintomas negativos e cognitivos da esquizofrenia, utilizamos um modelo de neurodesenvolvimento desta mesma patologia. Os animais expostos no período pré-natal ao agente acetato de metilazoximetanol (MAM) apresentaram défices cognitivos e sociais. O antipsicótico clássico haloperidol não apresentou efeitos benéficos nestas dimensões de comportamento. Por outro lado, os antipsicóticos atípicos, clozapina e risperidona, apresentaram um efeito positivo em ambas as dimensões com o aripiprazol apresentando apenas um efeito estatístico na dimensão social. A gliogénese adulta esta afectada nos animais MAM, sendo esta modulada pelos antipsicóticos atípicos usados. A neurogénese não se encontra alterada neste modelo, sendo, no entanto, negativamente afectada pelo haloperidol. Neste trabalho, provamos que os antipsicóticos clássicos e atípicos modulam diferencialmente a formação de novas células no hipocampo, contribuindo possivelmente para diferentes acções comportamentais, em funções dependentes do hipocampo. Em suma, estes resultados contribuem para expandir o nosso conhecimento sobre o papel de agentes psicofarmacológicos (incluindo antidepressivos e antipsicóticos) na modulação de diferentes eventos neuroplásticos, incluindo a formação de novas células e a remodelação neuronal. No futuro, este conhecimento poderá ajudar na implementação de novas intervenções terapêuticas tanto na depressão como na esquizofrenia.The work presented in this thesis was performed in the Life and Health Sciences Research Institute (ICVS), University of Minho. Financial support was provided by a PhD grant (SFRH/BD/88825/2012) from the FCT - Foundation for Science and Technology -, by FEDER funds through the Operational Programme Competitiveness Factors - COMPETE and National Funds through FCT under the project POCI-01-0145-FEDER-007038; and by the project NORTE-01-0145-FEDER-000013, supported by Norte Portugal Regional Operational Programme (NORTE 2020), under the PORTUGAL 2020 Partnership Agreement, through the European Regional Development Fund (ERDF)

Provisiones mirando hacia adelante: Oferta de crédito y toma de riesgos

Este documento analiza los efectos reales, financieros y de toma de riesgos bancarios asociados al cambio en el cálculo de las provisiones de los préstamos con base en pérdidas esperadas a las calculadas con base en pérdidas incurridas. En nuestra identificación explotamos características únicas de una reforma regulatoria en Colombia usando datos a nivel de préstamos banco-firma. Encontramos que el cambio regulatorio condujo a un importante incremento en las provisiones bancarias. Asimismo, los bancos endurecieron los estándares de crédito, afectando negativamente a las firmas deudoras con efectos más fuertes sobre las firmas riesgosas. Para reducir el nivel de provisiones, los bancos más afectados (menos capitalizados) redujeron la oferta de crédito a las firmas riesgosas (firmas pequeñas con menor historia crediticia, menores activos tangibles o mayores préstamos en mora) y a su vez, incrementaron la búsqueda de retorno dentro del sector menos afectado por la regulación, aumentaron así la concentración del portafolio de créditos y por ende reduciendo la diversificación del riesgo.We show corporate-level real, financial, and (bank) risk-taking effects associated with calculating loan provisions based on expected—rather than incurred—credit losses. For identification, we exploit unique features of a Colombian reform and supervisory, matched loan-level data. The regulatory change induces a dramatic increase in provisions. Banks tighten all new lending conditions, adversely affecting borrowing-firms, with stronger effects for risky-firms. Moreover, to minimize provisioning, more affected (less-capitalized) banks cut credit supply to risky-firms— SMEs with shorter credit history, less tangible assets or more defaulted loans—but engage in “search-for-yield” within regulatory constraints and increase portfolio concentration, thereby decreasing risk diversification.Provisiones mirando hacia adelante: Oferta de crédito y toma de riesgos Enfoque El debate entre estabilidad financiera y crecimiento económico tiende a tomar mayor relevancia en los periodos de crisis financieras o económicas como el que enfrenta la economía mundial con el choque de la pandemia Covid-19. Este choque sobre la economía real ha sido soportado por la banca gracias a los mayores niveles de capital y provisiones bancarias que acumularon los bancos en cumplimiento de la regulación financiera adoptada luego de la crisis financiera global de 2008-9. Luego de la crisis financiera de finales de la década del noventa, Colombia realizó varios cambios institucionales con miras a fortalecer la supervisión del sistema financiero y hacerlo más resiliente ante los choques. En 2007 el regulador estableció un nuevo esquema de acumulación de provisiones para la banca que incorpora el tamaño del deudor, el uso de colateral y el desempeño del préstamo como determinantes del nivel de la provisión para cada préstamo. De esta forma, los bancos pasaron de acumular provisiones cuando el préstamo se torna en mora (i.e., modelo de pérdidas incurridas) a acumularlas desde la originación del préstamo, lo cual se asemeja al modelo de perdidas esperadas (IFRS9 y CLEC) que se viene implementando a nivel mundial desde 2018. Contribución Este documento evalúa el impacto del cambio en el esquema de provisiones bancarias sobre la oferta de crédito, el desempeño de las firmas y la toma de riesgos. Para ello usamos datos a nivel de banco-préstamo-firma provenientes del registro de crédito, los cuales permiten, entre otros aspectos, controlar por la demanda de crédito y así observar los efectos sobre la oferta de crédito asociados al cambio regulatorio de las provisiones bancarias. Encontramos que, bajo el esquema de provisiones esperadas, los bancos incrementaron sustancialmente el nivel de provisiones, siendo este mayor para los prestamos otorgados a las firmas pequeñas en comparación con las de mayor tamaño. Los bancos también endurecieron las condiciones de los créditos a todas las firmas, pero especialmente a las más riesgosas, lo cual sugiere que los bancos incorporaron la toma de riesgos en sus decisiones de préstamos. Sin embargo, también encontramos algunos efectos no deseados de la reforma sobre la oferta de crédito y el desempeño de las firmas, los cuales reflejan la reacción observada por parte de los bancos ante cambios regulatorios que encarecen el costo de la intermediación financiera (Ivashina and Scharfstein, 2010; Bolton et al., 2016; Di Maggio et al., 2017; Beck et al., 2018; Agarwal et al., 2018; Jiménez et al., 2019). En particular encontramos que, para reducir el nivel de provisiones, los bancos más afectados (i.e., aquellos con menor nivel de capital) redujeron en mayor medida la oferta de crédito y aumentaron las tasas de interés de los préstamos a las firmas riesgosas, es decir aquellas firmas pequeñas con poca historia crediticia, menores activos tangibles o mayores préstamos en mora; con efectos reales y financieros para estas firmas. Asimismo, los bancos incrementaron la búsqueda de retorno dentro del sector menos afectado por la regulación (i.e., firmas grandes con mayor nivel de riesgo observado antes de la reforma) aumentando así la concentración del portafolio de créditos y, por ende, reduciendo la diversificación del riesgo. Resultados Los resultados contribuyen al debate entre estabilidad financiera y crecimiento económico, al mostrar que una regulación bancaria más estricta reduce la oferta de crédito hacia los segmentos más riesgosos de la economía, lo que reduce las pérdidas del sistema ante choques adversos sobre la economía (i.e., como el actual Covid-19), pero encarece el costo de financiamiento de las firmas riesgosas acentuando sus restricciones crediticias. Frase destacada: Una regulación bancaria más estricta reduce la oferta de crédito hacia los segmentos más riesgosos de la economía, lo que reduce las pérdidas del sistema ante choques adversos sobre la economía

Enhanced photovoltaic performance of inverted hybrid bulk-heterojunction solar cells using TiO2/reduced graphene oxide films as electron transport layers

In this study, we investigated inverted hybrid bulk-heterojunction solar cells with the following configuration: fluorine-doped tin oxide (FTO) |TiO2/RGO|P3HT:PC61BM|V2O5 or PEDOT:PSS|Ag. The TiO2/GO dispersions were prepared by sol-gel method, employing titanium isopropoxide and graphene oxide (GO) as starting materials. The GO concentration was varied from 0.1 to 4.0 wt%. The corresponding dispersions were spin-coated onto FTO substrates and a thermal treatment was performed to remove organic materials and to reduce GO to reduced graphene oxide (RGO). The TiO2/RGO films were characterized by x-ray diffraction, Raman spectroscopy, and microscopy techniques. Atomic force microscopy (AFM) images showed that the addition of RGO significantly changes the morphology of the TiO2 films, with loss of uniformity and increase in surface roughness. Independent of the use of V2O5 or PEDOT: PSS films as the hole transport layer, the incorporation of 2.0 wt% of RGO into TiO2 films was the optimal concentration for the best organic photovoltaic performance. The solar cells based on TiO2/RGO (2.0 wt%) electrode exhibited a ∼22.3% and ∼28.9% short circuit current density (Jsc) and a power conversion efficiency enhancement, respectively, if compared with the devices based on pure TiO2 films. Kelvin probe force microscopy images suggest that the incorporation of RGO into TiO2 films can promote the appearance of regions with different charge dissipation capacities.The authors thank LNNano/LNLS for the AFM and KPFM images, and INEO, CNPq (fellowship 246430/2012-5), and FAPESP (fellowship 2010/18656-1) for the financial supports. MINECO for the economic support through the ENE2013-48816-C5-4-R project. The COST Action StableNextSol project MP1307. The Agència de Gestió d’Ajuts Universitaris i de Recerca for the project 2014 SGR 1212. FASL would like to thank to the Secretary of Education of the State of Ceará (SEDUC-CE) for the financial support.Peer reviewe

Ecossistemas empreendedores: estudo de caso

Trabalho apresentado em Jornadas Hispano Lusas de Gestión Cientifica, 30 janeiro-2 de fevereiro 2019, Osuna, EspanhaThe promotion of conditions that stimulate the emergence of new companies, support their rapid growth and their innovative capacity has been deserving special attention from several public and private entities. This interest is based on the expectation of business and social regeneration and the economic growth of the regions where these new companies are created. The conditions for its formation and growth depend on a set of actors who often include universities, investors, incubators, public entities, among others. Academically speaking, this finding culminated in an emerging approach of the entrepreneurial ecosystem which focuses on understanding how contexts affect entrepreneurship. This article aims to understand the relationship between entrepreneurship and the entrepreneurial ecosystems, and how these phenomena attempt to explain the creation of new companies. The main objective of this article is to explain how different configurations of the ecosystem (Coimbra and Sines) produce results with its own specificities and characteristics.N/

Sucessos na literatura: regras, receitas e surpresas na literatura portuguesa contemporânea

Tese de mestrado, Teoria da literatura, Universidade de Lisboa, Faculdade de Letras, 2004Na Literatura portuguesa dos nossos dias, muitos são os sucessos que inundam o mercado livreiro. Mas há sucessos e sucessos. A presente tese visa lançar um pouco de luz num fenómeno que tem criado alguma celeuma nos meios de comunicação social: o aparecimento de um grande número de bestsellers nacionais, que, um pouco à imagem do contexto anglo-saxónico, apresenta um formato bastante previsível como denominador comum; versus o visível reconhecimento da crítica e do público em geral de vários romances que se destacam pela sua qualidade, originalidade e imprevisibilidade. Pretendeu-se destacar quais os aspectos que tornaram as narrativas singulares e que, consequentemente, levaram o público e a crítica considerá-las alvos preferenciais. A focalização, a voz, o discurso narrativo e a construção da personagem foram os elementos que revelaram ter maior importância na criação de uma narrativa interessante e irreproduzível. Conclui-se que, apesar do record de vendas extraordinário de Margarida Rebelo Pinto, apontada como a produtora de romances light em série, os leitores portugueses continuam a comprar outros livros, cujo conteúdo não se enquadra dentro da receita de sucesso. No presente trabalho, também foram analisadas obras que, sendo aparentemente imprevisíveis e originais, não têm conseguido preencher as prateleiras dos leitores portugueses, como uma tentativa de observação das causas para este facto. De acordo com a análise efectuada, verificou-se que determinadas opções do escritor podem minar a recepção da obra, mais concretamente as que se prendem com questões como a fluidez de discurso; as perturbantes opções focais, com as súbitas e confusas alterações de narrador; e a apresentação algo turva dos enredos.Abstract: In contemporary Portuguese Literature, there are many cases of successful novels, which glut the book market. Nevertheless, there is success and success. This thesis aims to shed some light into a phenomenon that has created some hype in the media: several national bestsellers have been published, which present a predictable format as common denominator, somewhat in the image of the Anglo Saxon context; versus a strong acknowledgement of critics and of general reading public regarding several novels that have stood out for their quality, originality and unpredictable character. One of the goals was to underline the aspects that made the narratives singular ones and, consequently, that impelled the public and the critics to consider them preferential targets. Narrative perspective, voice, narrative discourse and character construction were the elements that had greater importance in the creation of an interesting and unique novel. In spite Margarida Rebelo Pinto’s extraordinary sales record (she is a massive producer of light novels), Portuguese readers continue to buy other kind of novels, which do not coincide with the success recipe. In the present essay, account was also taken of novels, which seem to be unpredictable and original, but that Portuguese readers have not been tempted to buy. An attempt is made in this thesis to analyse the causes for such lack of interest. According to this analysis, one has verified that certain choices made by the writer may undermine the novel’s reception, namely the ones concerning the fluency of the narrative discourse, the disturbing choices of the narrative perspective, where sudden and confusing narrator changes take place; and a somewhat cloudy way of presenting the plot

Própolis: efeito na fragilidade osmótica da membrana eritrocitária

Própolis é uma substância resinosa colhida das plantas, pelas abelhas. A composição do própolis depende da vegetação envolvente, da estação do ano, e da área da qual provém. Este produto da colmeia contém normalmente, uma grande variedade de compostos químicos, tais como polifenóis (flavonóides, ácidos fenólicos e ésters), esteróides e aminoácidos. A esferocitose hereditária (EH) é um tipo de anemia de transmissão hereditária que resulta da presença de eritrócitos microcíticos e hipercromicas, esféricos e sem palidez central. Clinicamente, os indivíduos apresentam normalmente desde condições assintomáticas até anemias hemolíticas graves. Os objectivos deste estudo foram avaliar o efeito de dois extractos de própolis, oriundos de diferentes regiões (Bornes – Trás-os-Montes; Fundão – Beira Interior), na fragilidade osmótica da membrana eritrocitária em pacientes com Esferocitose Hereditária. Para avaliar o efeito do própolis este foi extraído com DMSO (Dimetilsulfóxido), e posteriormente testado no sangue de dois indivíduos, um com esferocitose hereditária e outro sem esta patologia. O sangue utilizado foi obtido por punção venosa com EDTA sódico. No indivíduo portador da doença procedeu-se aos testes de fragilidade osmótica, tendo-se verificado que ambos os própolis demonstraram efeito sob a membrana do eritrócito, no entanto o efeito do própolis oriundo de Bornes - Trás-os-Montes foi mais acentuado comparativamente com o do Fundão – Beira Interior. Estes resultados abrem portas a investigações futuras, no sentido de elucidar os mecanismos pelos quais o própolis altera a fragilidade da membrana eritrocitária

Sustained remission from depressive-like behavior depends on hippocampal neurogenesis

Impairment of hippocampal neurogenesis has been associated with the expression of depressive-like symptoms and some studies have suggested neurogenesis as a critical factor in the normalization of behavior by antidepressant (AD) drugs. This study provides robust evidence that ongoing neurogenesis is essential for the maintenance of behavioral homeostasis and that its pharmacological arrest precipitates symptoms commonly found in depressed patients. Further, the incorporation of newly born neurons and astrocytes into the preexisting hippocampal neurocircuitry is shown to be necessary for the spontaneous recovery from the adverse effects of stress and for long-term benefits of AD treatments.We thank M Carneiro and L Martins for technical assistance. AM-P, LP, MM and SM received fellowships from the Portuguese Foundation for Science and Technology (FCT). This work was supported by FCT (PTDC/SAU-NEU/105180/2008) and the ICVS

Citalopram administration does not promote function or histological recovery after spinal cord injury

Citalopram is a selective serotonin reuptake inhibitor, and although widely used as an antidepressant, this drug has also demonstrated interesting repairing properties leading to motor recovery and pathology amelioration in animal models of stroke and degeneration. Here, we tested the efficacy of both 7-day and 8-week citalopram treatment in a contusive spinal cord injury (SCI) rat model. A combination of behavioral tests, histological and serum cytokine analysis was used to assess overall recovery. Despite promoting a mild reduction of inflammatory cells as well as an early, but transient increase of specific serum cytokines, citalopram administration showed no overall beneficial effects on motor performance or lesion extension. Our results do not support citalopram treatment as a therapeutic strategy for SCI.This research was funded by Prémios Santa Casa Neurociências—Prize Melo e Castro for SpinalCord Injury Research, Grant Number MC-04/17 and the Portuguese Foundation for Science and Technology(FCT) through the Scientific Employment Stimulus to N. Silva and S. Monteiro (CEECIND/04794/2017 and CEECIND/01902/2017) and fellowships to RL (PD/BDE/127836/2016); EDG (SFRH/BD/103075/2014);NLV (SFRH/BD/136952/2018) and R.AS (PDE/BDE/113596/2015).This work was also funded by FEDER,through the Competitiveness Internalization Operational Program (POCI) and by National funds, throughthe Foundation for Sciences and Technology (FCT), under the scope of the projects POCI-01-0145-FEDER-007038,POCI-01-0145-FEDER-029206, POCI-01-0145-FEDER-029751 and PTDC/BTM-MAT/29968/2017. This work hasbeen funded by ICVS Scientific Microscopy Platform, member of the national infrastructure PPBI - PortuguesePlatform of Bioimaging (PPBI-POCI-01-0145-FEDER-022122; by National funds, through the Foundationfor Science and Technology (FCT) - project UIDB/50026/2020 and UIDP/50026/2020; and by the projectsNORTE-01-0145-FEDER-000013, supported by the Northern Portugal Regional Operational Program (NORTE2020), under the Portugal 2020 Partnership Agreement, through the European Regional Development Fund (ERDF)