7 research outputs found
Thalidomide modulates Mycobacterium leprae-induced NF-κB pathway and lower cytokine response
AbstractIt is widely accepted that tumor necrosis factor alpha (TNF-α) plays a critical role in the development of tissue and nerve damage in leprosy and during the reactional episodes of acute inflammation. Thalidomide (N-α-phthalimidoglutarimide), a drug used to treat leprosy reaction, modulates immune response, inhibits inflammation and NF-κB activity. Here we investigated whether thalidomide inhibits NF-κB activation induced by Mycobacterium leprae, p38 and ERK1/2 MAPK activation. EMSA and supershift assays were performed to investigate NF-κB activation in response to M. leprae and its modulation following in vitro treatment with thalidomide. Luciferase assay was assayed in transfected THP-1 cells to determine NF-κB transcriptional activity. Flow cytometry and immunofluorescence were used to investigate p65 accumulation in the nucleus. Immunoblotting was used to investigate p38 and ERK1/2 phosphorylation. Following activation of PBMC and monocytes with M. leprae, the formation and nuclear localization of NF-κB complexes composed mainly of p65/p50 and p50/p50 dimers was observed. Induction of NF-κB activation and DNA binding activity was inhibited by thalidomide. The drug also reduced M. leprae-induced TNF-α production and inhibited p38 and ERK1/2 activation. Definition of the activation mechanisms in cells stimulated with M. leprae can lead to the development of new therapy applications to modulate NF-κB activation and to control the inflammatory manifestations due to enhanced TNF-α response as observed in leprosy and in leprosy reactions
Estudo do receptor LILRA2 na maturação e produção de citocinas por células dendríticas e se envolvimento na hanseníase
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Previous issue date: 2014-11-18Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, BrasilOs receptores da família LILR (Leukocyte Immunoglobulin- like Receptor) pertencem à superfarm1ia .das imunoglobulinas e são expressos em células de origem mielóide e linfóide. Os receptores inibidores (LILRB) apresentam longos domínios citoplasmáticos contendo de 2 a 4 domínios ITIM e são capazes de inibir ativação celular recrutando proteínas tirosinas fosfatases SHP-I. Já os receptores ativadores (LILRA) apresentam curto domínio citoplamático mas após associação com a cadeia gama do receptor Fc, que apresenta domínio ITAM, são capazes de transduzir sinais estimulatórios às células. Já foi demonstrado que LILRB I e LILRB2 podem inibir a citotoxidade de células NK e aumentar o limite de ativação de linfócitos T. Pouco se sabe a respeito da função dos receptores ativadores. No entanto. foi observado que LILRA2 estava com a expressão gênica aumentada nas lesões dos pacientes de hanseníase do polo lepromatoso. A função deste receptor foi investigada e os possíveis efeitos do Mycobacterium leprae sobre a ativação induzida por LILRA2 avaliados
Foram realizados experimentos de "cross-linking" em células dendríticas derivadas de monócitos (MDDC). Inicialmente, foi observado que após a estimulação àtravés de LILRA2 ocorria aumento no conteúdo de proteínas tirosina fosforiladas, sugerindo haver transdução de sinal. Também foi observado que as MDDC estimuladas via LILRA2 apresentavam marcadores de ativação celular, como a expressão de CD83, aumento na expressão de moléculas co-estimulatórias e do MHC. Foi observado ainda que a ativação de LILRA2 não induz a secreção de níveis significativos das citocinas. No entanto, um forte efeito sinergístico na secreção de TNF e IL-IO pode ser observado quando as células eram estimuladas via LILRA2 e TLR4 ou CD40. Foi observado ainda que após o "cross-linking", as MDDC apresentam forte capacidade aloestimulatória. A presencade células LILRA2+ CD68+ nas lesões dos pacientes lepromatosos foi detectada utilizando microscopia confocal. Nos experimentos subseqüentes foi avaliado se o M. leprae ativaria as MDDC e modularia a ativação induzida por LILRA2. Inicialmente observamos que as MDDC estimuladas com M. tuberculosis, mas não com M. leprae, secretam TNF
Baixas concentrações de IL-IO foram encontradas nas culturas estimuladas com M. leprae quando comparadas às culturas estimuladas com M tuberculosis. E ainda, o M. tuberculosis, mas não o M. leprae, teve efeito sinergístico com LILRA2 na produção de TNF. Na tentativa de encontrar o ligante deste receptor, foi gerado um tetrâmero e sua ligação a diversos tipos celulares foi testada. Interação do tetrâmero com monócitos estimulados com IL-4 e também MDDC foi detectada. Embora experimentos de imunoprecipitação tenham sido realizados, o ligante não foi encontrado. Até o momento, já observamos que a LILRA2 pode favorecer a maturação de MDDC, pelo menos in vitro, e contribuir para aumentada produção de citocinas. O M. leprae não parece ser um potente ativador das células dendríticas e ainda pode limitar a ativação induzida por outros receptores. A elevada expressão de moléculas coestimulatórias, a presença de IL-I O e ausência de IL-12 nas MDDC estimuladas com M. leprae ou via LILRA2 sugere que estes podem estar envolvidos na indução de tolerância observada nos pacientes lepromatososLILR (Leukocyte Immunoglobulin- like Receptor) are
a family of receptors from the
immunoglobulin superfamily expressed on myeloid and
lymphoid cells. LILR are characterized
by either 2 or 4 homologous Immunoglobulin-like dom
ais. One subset of receptors, LILRB,
displays long citoplasmatic tails containing immuno
receptor tyrosine-based inhibitory motifs
(ITIM). These receptors inhibit cell activation by
recruiting protein tyrosine phosphatase SHP-1.
Another subset of receptors, LILRA, contains short
cytoplasmatic domain that lack recognizable
docking motifs for signalling mediators. These rece
ptors associate with the gamma chain of the
Fc receptor, which transduces stimulatory signals b
y recruiting protein tyrosine kinases through a
cytoplasmatic immunoreceptor tyrosine-based activat
ion motif (ITAM). A third subset of
receptors has no transmembrane domain and is secret
ed as a soluble receptor. Some of these
receptors, LILRB1 and LILRB2, are specific receptor
s for MHC class I molecules. LILRBs have
been shown to inhibit cell activation in several ex
perimental systems. Little is know about the
activating receptors. LILRA2 was found to be up-reg
ulated in lesions of lepromatous leprosy
patients. In order to clarify whether this receptor
might influence the immune response in leprosy,
the function of this receptor was investigated. Cro
ss-linking of LILRA2 on dendritic cell (DC)
caused an up-regulation on protein tyrosine phospho
rylation, suggesting LILRA2 stimulates
intracellular signaling. Upon cross-linking, DC exp
ress high levels of MHC I and II and co-
stimulatory molecules, but cytokines were not detec
ted on culture supernatant. However, a strong
synergistic effect on TNF and IL-10 production was
observed when cells were simultaneously
stimulated by LILRA2 and TLR4 or CD40. LILRA2 activ
ated DC also induced allogeneic T
lymphocytes proliferation. By double immunofluoresc
ence labeling, it was identified that
LILRA2 is expressed on macrophage-like CD68+cells i
n lepromatous leprosy skin lesions. The
capacity of
M. leprae
to induce DC activation and/or to modulate LILRA2-
induced activation was
further investigated. In functional experiments it
was observed that M. tuberculosis but not
M.
leprae
stimulated cells induce TNF secretion. IL-10 was d
etected on
M. leprae
-stimulated
cultures, albeit at lower level than that of
M. tuberculosis
-stimulated cells.
M. leprae
had no
synergistic effect on LILRA2 activated cells. To id
entify LILRA2 ligand, a tetramer was
generated and it’s binding to different cell types
was tested. The tetramer interacted with IL-4
stimulated monocytes and DC. Although Immunoprecipi
tation experiments were preformed, the
ligand was not successfully identified. The data ob
tained so far indicates that LILRA2 activation
enhances DC maturation markers expression and cytok
ine secretion by activated DC.
M. leprae
is
not a potent DC activator. The high surface levels
of co-stimulatory molecules, the presence of
IL-10 and absence of IL-12 suggest that DC stimulat
ed by
M. leprae
or LILRA2 are only partially
activated and they might contribute to lepromatous
leprosy toleranc
PROGRAMA DE LIDERANÇA E VIGILÂNCIA EM TESTES ANTIMICROBIANOS (ATLAS): ANÁLISE RETROSPECTIVA DE 5 ANOS DO PERFIL DE SENSIBILIDADE DE BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS ISOLADAS EM UTIS NO BRASIL
Introdução: Infecções por bactérias Gram-negativas multirresistentes (MDR), principalmente por Enterobacterales, Pseudomosas aeruginosa e Acinetobacter baumannii, tem se tornando uma preocupação crescente em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos de amostras clínicas de Enterobacterales, P. aeruginosa e A. baumannii de diferentes sítios de infecção provenientes de Unidades de Terapia Intensiva de 34 instituições no Brasil entre os anos de 2017 e 2021. Métodos: Os dados epidemiológicos utilizados neste estudo estão depositados na plataforma de vigilância global Atlas. Após teste de sensibilidade aos antimicrobianos por cada instituição, as amostras foram enviadas para o International Health Management Associates (IHMA). Amostras de corrente sanguínea, do trato respiratório, geniturinário, intestinal, entre outros sítios, foram analisadas e os pontos de corte do EUCAST, 2023 foram utilizados para interpretação do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Resultados: Para este estudo, 741 amostras clínicas de Enterobacterales, 316 de P. aeruginosa e 185 de A. baumannii foram avaliadas, sendo que 62%, 30,7% e 95% dos isolados foram considerados MDR, respectivamente. Observamos um aumento nas taxas de resistência para Enterobacterales principalmente para cefepima (44,9%-55,7%), meropenem (24,5%-27,0%), colistina (12,4%-25,5%), amicacina (7,7%-23,4%), ceftazidima-avibactam (1,4%-4,1%) entre 2017 e 2021; ciprofloxacino (42,8%-56,2%) entre 2018 e 2021; ceftolozana-tazobactam (34,5%-47,9%) (2017, 2020 e 2021). Foi observado também um aumento nas taxas de resistência para os isolados de P. aeruginosa para cefepima (19,6%-24,7%), meropenem (14,3%-17,5%), amicacina (7,1%-19,6%), ceftazidima-avibactam (3,6%-12,3%) entre 2017 e 2021; ciprofloxacino (7,7%-29,9%) entre 2018 e 2021; ceftolozana-tazobactam (9,0%-16,5%) (2017, 2020 e 2021). Para os isolados de A. baumannii, o aumento nas taxas de resistência foi observado para amicacina (71,4%-98,6%) entre 2017 e 2021; imipenem (85,0%-98,6%), ciprofloxacino (90,0%-98,6%) e colistina (0% para 4,2%) entre 2018 e 2021. Conclusão: Um aumento da diminuição da sensibilidade aos antimicrobianos foi observada em bactérias Gram-negativas isoladas em UTIs de hospitais brasileiros durante o período deste estudo, incluindo para as novas associações com antimicrobianos, o que reforça a preocupação do surgimento e da disseminação de bactérias com o fenótipo MDR