Comparação da capacidade de dois localizadores apicais eletrônicos de determinar o limite apical da instrumentação endodôntica: estudo ex vivo

TCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Odontologia.O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de dois aparelhos eletrônicos localizarem o forame e a constrição apical, limites considerados importantes para a instrumentação endodôntica. Foram empregados 100 dentes humanos, com raízes únicas e completamente formadas. Após o acesso aos canais, os dentes foram medidos pela técnica direta, inserindo-se uma lima Flexofile calibre 15 no canal até que a sua ponta fosse visualizada no bordo mais cervical do forame apical. Nesta posição, um cursor de silicone foi deslizado até o bordo de referência e a lima foi, então, removida do canal. A distância compreendida entre o cursor e a ponta da lima foi medida em uma régua (precisão de 0,5 mm) e registrada como comprimento do dente (CD). Em seguida, os dentes foram medidos, duas vezes, por dois localizadores apicais eletrônicos: Root ZX e SmarPex. Para a primeira medida, a lima foi introduzida no canal até que os aparelhos acusassem que a sua ponta chegou ao forame apical. Com a lima nesta posição, o cursor foi deslizado até o bordo de referência e a lima foi removida do canal e medida conforme descrito para a técnica direta, sendo o comprimento obtido registrado como comprimento eletrônico/forame (CEF). Para a segunda medida, a lima foi introduzida no canal até que os aparelhos acusassem que a sua ponta chegou à constrição apical. Após a remoção da lima, a medida obtida foi registrada como comprimento eletrônico/constrição (CEC). Para avaliar a capacidade dos aparelhos localizarem o forame de cada dente, o CEF foi considerado aceitável quando coincidente com ou diferente 0,5 mm do CD. Para 14 avaliar a capacidade dos aparelhos localizarem a constrição apical, o CEC foi considerado aceitável quando coincidente com ou de 0,5 a 1,0 mm menor do que o CD. O percentual de medidas eletrônicas (CEF e CEC) aceitáveis foi avaliado estatisticamente pelo teste de proporções, num nível de significância de 5%. Considerando o limite de tolerância de ± 0,5 mm, os percentuais de medidas aceitáveis fornecidas pelo Root ZX e Smarpex na localização do forame e da constrição foram de 88% e 94%, e de 87% e 94%, respectivamente, sem diferenças estatísticas no desempenho dos dois aparelhos

Proximity assays for sensitive quantification of proteins

Proximity assays are immunohistochemical tools that utilise two or more DNA-tagged aptamers or antibodies binding in close proximity to the same protein or protein complex. Amplification by PCR or isothermal methods and hybridisation of a labelled probe to its DNA target generates a signal that enables sensitive and robust detection of proteins, protein modifications or protein–protein interactions. Assays can be carried out in homogeneous or solid phase formats and in situ assays can visualise single protein molecules or complexes with high spatial accuracy. These properties highlight the potential of proximity assays in research, diagnostic, pharmacological and many other applications that require sensitive, specific and accurate assessments of protein expression

Differential Requirements for Src-Family Kinases in SYK or ZAP70-Mediated SLP-76 Phosphorylation in Lymphocytes

In a synthetic biology approach using Schneider (S2) cells, we show that SLP-76 is directly phosphorylated at tyrosines Y113 and Y128 by SYK in the presence of ITAM-containing adapters such as CD3ζ, DAP12, or FcεRγ. This phosphorylation was dependent on at least one functional ITAM and a functional SH2 domain within SYK. Inhibition of Src-kinases by inhibitors PP1 and PP2 did not reduce SLP-76 phosphorylation in S2 cells, suggesting an ITAM and SYK dependent, but Src-kinase independent signaling pathway. This direct ITAM/SYK/SLP-76 signaling pathway therefore differs from previously described ITAM signaling. However, the SYK-family kinase ZAP70 required the additional co-expression of the Src-family kinases Fyn or Lck to efficiently phosphorylate SLP-76 in S2 cells. This difference in Src-family kinase dependency of SYK versus ZAP70-mediated ITAM-based signaling was further demonstrated in human lymphocytes. ITAM signaling in ZAP70-expressing T cells was dependent on the activity of Src-family kinases. In contrast, Src-family kinases were partially dispensable for ITAM signaling in SYK-expressing B cells or in natural killer cells, which express SYK and ZAP70. This demonstrates that SYK can signal using a Src-kinase independent ITAM-based signaling pathway, which may be involved in calibrating the threshold for lymphocyte activation

Improved efficiency of in situ protein analysis by proximity ligation using UnFold probes

We have redesigned probes for in situ proximity ligation assay (PLA), resulting in more efficient localized detection of target proteins. In situ PLA depends on recognition of target proteins by pairs of antibody-oligonucleotide conjugates (PLA probes), which jointly give rise to DNA circles that template localized rolling circle amplification reactions. The requirement for dual recognition of the target proteins improves selectivity by ignoring any cross-reactivity not shared by the antibodies, and it allows detection of protein-protein interactions and post-translational modifications. We herein describe an improved design of the PLA probes -UnFold probes - where all elements required for formation of circular DNA strands are incorporated in the probes. Premature interactions between the UnFold probes are prevented by including an enzymatic "unfolding" step in the detection reactions. This allows DNA circles to form by pairs of reagents only after excess reagents have been removed. We demonstrate the performance of UnFold probes for detection of protein-protein interactions and post-translational modifications in fixed cells and tissues, revealing considerably more efficient signal generation. We also apply the UnFold probes to detect IL-6 in solution phase after capture on solid supports, demonstrating increased sensitivity over both normal sandwich enzyme-linked immunosorbent assays and conventional PLA assays.Ola Söderberg and Ulf Landegren jointly supervised this work</p