Towards improvement of Haematococcus pluvialis cultures by cell sorting and auv mutagenesis

Tese de mestrado, Microbiologia Aplicada, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2017Nowadays, there is an increased interest in biological active compounds derived from natural sources, especially compounds with medical applications, nutrient rich food and feed, and health promoting compounds. Microalgae are a potential valuable resource for a biotech purposes, as new sources of biomolecules such as pigments, lipids, carbohydrates and proteins. Natural pigments have pharmacological properties and have increased marketability of products advantages over synthetic products. Commercial production of natural carotenoids from microalgae is an eco-friendlier and safer approach than synthetic manufacture by chemical procedures. Of several naturally occurring carotenoids, astaxanthin is considered one of the best, being able to protect cells, lipids and membrane lipoproteins against oxidative damage. Haematococcus pluvialis is the richest source of natural astaxanthin and is produced at large scale. The work herein described had the objective to improve H. pluvialis strains with an enhanced accumulation of astaxanthin content. For the strain improvement three approaches have been used: (i) screening of different strains to select those with a superior performance; (ii) flow cytometry assisted cell sorting of cells subpopulations with increased astaxanthin production and (iii) random mutagenesis by UV-C irradiation and mutants selection. For this purpose, seven H. pluvialis strains were used and a characterization was conducted throughout the 3-steps cultivation experimental strategy: green vegetative growth, induction of astaxanthin accumulation and additional salinity stress stages. This integrative characterization focused on a number of microalgae physiological properties, intending to thoroughly assess the evolution and heterogeneity of their vitality and astaxanthin accumulation capacity. HP_02 and HP_03 were the most promising selected strains, reaching respectively 3.8 % and 4.4 % (of their DW) of astaxanthin content, and presenting high growth rates of 0.58 day-1 and 0.52 day-1. The two strains were submitted to fluorescence activated cell sorting for enrichment of astaxanthin over-producers. Both strains showed similar performances and no specific cell properties and/or stresses responses could be point as particularly relevant. The HP_03 strain was further subjected to random mutagenesis by exposure to UV-C radiation in order to promote heterogeneity in the cell population. The isolation of cells sub-populations of interest, with high recovery and high degree of purity, was not achieved, due to the homogeneity of the populations of the analyzed strains, and due to technical impossibility of the sorting device. However, it is noteworthy that, flow cytometry allowed the monitoring of astaxanthin content during the induction phase of the culture, and showed that the autofluorescence of this pigment can be a good indicator of its intracellular accumulation and can therefore be monitored in real time by flow cytometry. The results of the preliminary random mutagenesis assay, by exposure to UV-C radiation seem to indicate that this strategy is promising to increase the subpopulation of astaxanthin producing cells. Further similar studies with different strains and additional parameters should be performed to better clarify this subject.As microalgas estão a emergir como uma das mais promissoras fontes sustentáveis de biomassa, combustível, alimentação, rações e outros produtos. Estes microrganismos têm um potencial enorme na área da biotecnologia por serem uma fonte valiosa de metabolitos como pigmentos (ex. astaxantina, β-caroteno), proteínas (ex. ficocianina), lípidos (ex. ómega-3, DHA, EPA) e hidratos de carbono. Embora os seus compostos ativos apresentem vantagens relativamente aos produtos sintéticos ou outros produtos de fontes naturais, têm contudo, desvantagens a nível de custos (Borowitzka, 2013; Demirbas, 2011; Milledge, 2010). O maior desafio na aplicação das microalgas para fins comerciais tem sido minimizar os custos de produção e extração dos compostos, devido à complexidade da fase de cultivo e dos processos a jusante (ex. extração dos compostos de valor acrescentado). Entre os metabolitos de elevado valor acrescentado, a astaxantina (3,3’-dihidroxi-β,β’-caroteno-4,4’diona), carotenoide secundário, é considerada um composto valioso com um elevado número de aplicações, desde sectores alimentares, cosméticos a farmacêuticos. Este pigmento tem como fonte natural microalgas como Chlorella zofingiensis, Chlorococcum, Haematococcus pluvialis, leveduras vermelhas, Phaffia rhodozyma e bactérias, Paracoccus carotinifaciens. Haematococcus pluvialis, é considerada a maior fonte natural de astaxantina, podendo acumular até 6 % do seu peso seco e é a melhor fonte natural de astaxanthina para consumo humano (Ambati et al., 2014; Lorenz, 1999; Olaizola, 2003; Yuan et al., 2010). A acumulação de carotenoides secundários, como a astaxantina, é uma característica de resposta ao stress de certas microalgas como é o caso de H. pluvialis. Quando há privação de nutrientes, aumento da intensidade luminosa, salinidade, etanol e hormonas entre outros fatores desfavoráveis ao crescimento da microalga, esta começa a induzir (Sarada et al., 2002a; Su et al., 2014; Zhang et al., 2014). A fase de indução, também conhecida como fase vermelha, corresponde à produção e acumulação da astaxantina, essencial para H. pluvialis sobreviver a condições adversas (Hagen et al., 2002; Wayama et al., 2013). Devido às flutuações das condições de stress que podem ser aplicadas para iniciar o processo de indução, todas as estratégias devem ser otimizadas para que a acumulação de astaxantina seja o mais reprodutível possível. O desenvolvimento de novas tecnologias para produção de microalgas, em sistemas abertos (ex. raceways) e sistemas fechados (ex. fotobioreactores), assim como a otimização das condições de cultivo (um ou duas fases de produção) têm maximizado o crescimento e a produção de biomassa, teor de pigmentos e outros produtos, reduzindo os custos de produção à escala industrial (Der Rio et al., 2007; Fábregas et al., 2001; Shah et al., 2016). Contudo, existem ainda muitos desafios e problemas na produção a grande escala de H. pluvialis. A otimização não tem de ser restrita ao melhoramento das condições de cultivo e aos sistemas de produção. O melhoramento do desempenho das estirpes de H. pluvialis também tem sido alvo de estudos recentes. Para aumentar o conteúdo de astaxantina acumulado, as células podem ser submetidas a agentes mutagénicos químicos, como etil-metano-sulfanato (EMS) ou N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG), ou agentes físicos, como radiação ultravioleta ou raio-X (Chen et al., 2003; Kamath et al., 2008; Tjahjono et al.,1994; Tripathi et al., 2001). Mutações mais direcionadas também foram aplicadas a estas microalgas, como modificações genéticas (Forján et al., 2015; Sharon-Gojman et al., 2015). O trabalho desenvolvido no âmbito desta tese teve como principal objetivo o melhoramento de estirpes de H. pluvialis, pertencentes à coleção de microalgas da empresa A4F, para aumentar o teor intracelular de astaxantina. Para o melhoramento das estirpes foram utilizadas três abordagens: (i) caracterização de diferentes estirpes para posterior seleção daquelas que apresentaram desempenho superior; (ii) separação física (cell sorting) de subpopulações de células com aumento da produção de astaxantina, por citometria de fluxo e (iii) mutagénese aleatória por irradiação com UV-C e seleção de mutantes. Neste trabalho foram inicialmente utilizadas sete estirpes de H. pluvialis (HP_01 to HP_07) cultivadas numa estratégia experimental em três fases: na primeira fase de crescimento vegetativo ou fase verde, as diferentes estirpes foram crescidas em condições ótimas durante 7 dias, avaliando-se e comparando as taxas de crescimento e produtividade da biomassa; na segunda fase de indução ou fase vermelha, aplicaram-se dois fatores de stress, privação de nutrientes e aumento da intensidade luminosa (150 μmol.m-2.s-1), durante 17 dias, analisando-se a produtividade e a acumulação máxima de astaxatina nas diferentes estirpes; na terceira fase aplicou-se um stress salino adicional, analisando-se o seu impacto na biomassa e no conteúdo máximo de astaxantina das culturas já induzidas. Esta caracterização integrativa enfocou um número de propriedades fisiológicas das microalgas, com a intenção de avaliar completamente a evolução e heterogeneidade de sua vitalidade e capacidade de acumulação de astaxantina. Os parâmetros avaliados foram: contagem de células, peso seco, produtividade e viabilidade de biomassa e análise de pigmentos. Os resultados obtidos no decurso deste trabalho permitiram caracterizar as diferentes estirpes de H. pluvialis e selecionar as que apresentaram as melhores características relativamente à taxa de crescimento e produtividade de biomassa na fase de crescimento, e com especial interesse à sua produtividade e teor em astaxantina na fase de indução. Das sete, destacaram-se as estirpes HP_02 e HP_03, que durante a fase de crescimento apresentaram elevadas taxas de crescimento (0,52 e 0,58 dia-1, respetivamente) e produtividades similares de biomassa comparativamente às outras estirpes (0,27 e 0,22 g.L-1.dia-1, respetivamente). HP_02 e HP_03, obtiveram o maior conteúdo de astaxantina acumulado (3,8 % e 4,4 % respetivamente), e registaram produtividades de astaxanina elevadas, (2,31 e 2,58 mg.g-1.dia-1 respetivamente), superiores às outras estirpes estudadas. As duas estirpes foram submetidas a cell sorting para enriquecimento de sobre-produtores de astaxantina. Ambas as estirpes apresentaram desempenhos semelhantes e não foram consideradas particularmente relevantes propriedades específicas das células. A estirpe HP_03 foi ainda sujeita a mutagénese aleatória por exposição à radiação UV-C de modo a promover a heterogeneidade na população celular. Os pigmentos fotossintéticos presentes nas microalgas são clorofilas e carotenóides, e a sua concentração intracelular depende das condições de cultivo. Esta concentração está linearmente correlacionada com a fluorescência dos pigmentos, o principal componente da fluorescência endógena (autofluorescência) (Hyka et al., 2013). Assim, a intensidade de autofluorescência foi utilizada para a identificação e quantificação de pigmentos de microalgas por citometria de fluxo. Esta metodologia permitiu ainda detetar alterações no estado fisiológico das células; a morfologia, incluindo tamanho e complexidade celular dependem das condições de cultivo e estão correlacionadas com os dois sinais de dispersão da luz, medidos por citometria, nomeadamente dispersão direta (FSC) e ortogonal (SSC). A acumulação de astaxantina das 7 estirpes, foi monitorizada por citometria de fluxo, no início e ao longo da fase de indução, assim como foi seguida a evolução do estado fisiológico das células. É de salientar que os resultados da quantificação de astaxantina por citometria de fluxo (valores médios das intensidades de fluorescência) foram consistentes com os determinados pelo método de extração de pigmentos totais, confirmados pela forte correlação linear encontrada (r = 0,98) entre o conjunto completo de valores dos dois parâmetros. Demonstrou-se assim que, a autofluorescência da astaxantina é um bom indicador da sua acumulação intracelular, podendo ser monitorizada em tempo real por citometria de fluxo. Para concluir a fase de caracterização das estirpes, os resultados obtidos após adição de NaCl (10 g/L) mostraram que o aumento do conteúdo de astaxantina não é estatisticamente significativo, à exceção de HP_01 que obteve um aumento de 2,5 % para 3,4 % (p < 0,001). A aplicação do stress salino adicional, ainda que apenas durante um curto período de tempo, 1 a 2 dias, determinou um aumento do teor de astaxantina, começando as culturas a perder biomassa após o terceiro dia, e como tal teve efeitos negativos no conteúdo de astaxantina acumulado. A maior produtividade global de astaxantina foi obtida pelas estirpes HP_02 e HP_03, atingindo 1,63 e 1,88 mg.g-1.dia-1, respetivamente. Este valor foi baseado no tempo essencial para as estirpes alcançarem o valor máximo de astaxantina, incluindo as duas fases de cultivo durante 24 dias. A partir das culturas selecionadas, HP_02 e HP_03, o isolamento de subpopulações de células de interesse, com alta recuperação e alto grau de pureza, não foi alcançado, devido à homogeneidade das populações das estirpes analisadas, e devido à impossibilidade técnica do dispositivo de sorting. Como terceira abordagem para o melhoramento das estirpes, a HP_03 foi selecionada, realizou-se mutagénese aleatória por exposição à radiação ultravioleta (UV-C), criando condições propícias a que as células sofressem alterações genéticas de modo a potenciar a produção de astaxantina. O efeito letal da exposição à radiação foi estudado analisando a viabilidade celular por citometria de fluxo, usando como fluoróforo um oxonol [DiBAC4(3)], que responde ao potencial de membrana. Os resultados obtidos permitiram seguir a evolução da viabilidade celular com o aumento do tempo de exposição à radiação, observando-se uma despolarização progressiva da membrana, que terminou ao fim de 100 s de exposição por uma dissipação generalizada do potencial. No entanto, nos resultados obtidos pela análise de citometria de fluxo, não foi notável um aumento da heterogeneidade populacional, mantendo-se a dificuldade da realização do sorting das células com maior conteúdo de astaxantina. Este ensaio preliminar de mutágenese aleatória apresentou resultados promissores, na medida em que um dos mutantes isolados, Mut 2, atingiu valores superiores de astaxantina, 4,1 % por peso seco, relativamente ao controlo que obteve 3,1 % de astaxantina, para o mesmo período de tempo. Uma vez que as estirpes selecionadas apresentaram um desempenho análogo e uma homogeneidade populacional, torna-se difícil identificar propriedades celulares ou respostas ao stress que possam ser particularmente relevantes para o melhoramento das estirpes com vista a uma maior acumulação de astaxantina. Deverão realizar-se novos estudos com recurso a estirpes com maior heterogeneidade, que possibilitem o isolamento das células com as propriedades desejadas, e as configurações do citómetro de fluxo e do dispositivo de sorting devem ser otimizadas de modo a permitir separação física (cell sorting) de subpopulações de células com aumento da produção de astaxantina, com alta recuperação e alto grau de pureza

EXCESSO DE PESO E A OBESIDADE INFANTIL NUMA ESCOLA PORTUGUESA: SUAS CAUSAS E DETERMINANTES PARA O ESBOÇO DE UM PROJETO DE INTERVENÇÃO

Com o objetivo de conhecer um projeto de intervenção na área da educação para a saúde contra o excesso de peso e a obesidade nos alunos do 5.º ao 9.º ano, de uma escola em Arruda dos Vinhos, é fundamental fazer-se um bom diagnóstico da realidade, identificando de que forma os hábitos alimentares e de atividade física, o tempo usado a ver televisão, a usar o computador e a jogar consola, assim como as crenças e atitudes dos pais acerca do peso e da alimentação saudável interferem no excesso de peso e na obesidade destas crianças. Dos 432 alunos que participaram no estudo, 53,5% eram do sexo feminino. Os resultados relativos ao Índice de Massa Corporal dos alunos indicaram que, na população em estudo, 31,7% dos alunos apresentavam peso em excesso, dos quais 10,5% eram obesos. A prevalência de excesso de peso e obesidade era superior nos alunos mais novos e nas raparigas, no entanto eram os rapazes os mais obesos. Em virtude dos resultados, identificaram-se como áreas de intervenção, a melhoria dos hábitos alimentares, o aumento dos níveis de atividade física e a diminuição das atividades de lazer sedentárias dos alunos, bem como intervenções ao nível das crenças, atitudes e comportamentos dos alunos e dos pais. É sabido que mudar atitudes e comportamentos, nomeadamente, os que dizem respeito a mudança de estilos de vida, é um processo difícil e moroso, sendo fundamental uma abordagem integrada que afete as várias dimensões das causas dos problemas em que se pretende intervir

a figura da falha tecnológica no contexto da experiência turística

A era digital tomou conta dos nossos dias. As alterações no nosso quotidiano são notórias; desde o impacto na forma como comunicamos e nos relacionamos ao facilitismo que nos proporciona. Hoje em dia a tecnologia tornou-se imprescindível e significa muito mais do que em tempos se poderia imaginar. A Internet e as Aplicações móveis, mais conhecidas por apps, são ferramentas que os utilizadores dos dispositivos móveis e smartphones não dispensam, pelos mais variados motivos. O foco deste trabalho prende-se na utilização da tecnologia em dispositivos móveis em contexto turístico e questiona, de certa forma, a sua real utilização no contexto turístico atual, ao mesmo tempo que pretende abordar as condicionantes à utilização da tecnologia e as falhas resultantes da mesma. Foi realizado um inquérito por questionário, através do qual se verificou que a tecnologia não é igualmente utilizada em todas as fases da viagem e que os turistas experienciam falhas relacionadas com a tecnologia e consequências negativas provocadas pela sua utilização

Excesso de peso e a obesidade infantil numa escola portuguesa

Com o objectivo de conceber um projecto de intervenção na área da educação para a saúde contra o excesso de peso e a obesidade nos alunos do 5.º ao 9.º ano, de uma escola em Arruda dos Vinhos (Portugal), é fundamental fazer-se um bom diagnóstico da realidade, identificando de que forma os hábitos alimentares e de actividade física, o tempo usado a ver televisão, a usar o computador e a jogar consola, assim como as crenças e atitudes dos alunos e dos seus pais acerca do peso e da alimentação saudável interferem no excesso de peso e na obesidade destas crianças. Dos 432 alunos que participaram no estudo, 53,7% eram do sexo feminino e 46,3% do sexo masculino. Os resultados relativos ao Índice de Massa Corporal (IMC) dos alunos indicaram que, na população em estudo, 31,7% dos alunos apresentavam peso em excesso, dos quais 10,5% eram obesos. A prevalência de excesso de peso e obesidade era superior nos alunos mais novos e nas meninas, no entanto os rapazes eram mais obesos. Em virtude dos resultados, identificaram-se como áreas de intervenção, a melhoria dos hábitos alimentares, o aumento dos níveis de actividade física e a diminuição das actividades de lazer sedentárias dos alunos, bem como intervenções ao nível das crenças, atitudes e comportamentos dos alunos e dos pais. É sabido que mudar atitudes e comportamentos, nomeadamente, os que dizem respeito a mudança de estilos de vida, é um processo difícil e que leva tempo, sendo fundamental uma abordagem integrada que afecte as várias dimensões das causas do problema em que se pretende intervir

SDK development for bridging heterogeneous data sources through connect bridge platform

Nesta dissertação apresentou-se um SDK para a criação de conectores a integrar com o CB Server, que pretende: acelerar o desenvolvimento, garantir melhores práticas e simplificar as diversas atividades e tarefas no processo de desenvolvimento. O SDK fornece uma API pública e simples, suportada por um conjunto de ferramentas, que facilitam o processo de desenvolvimento, explorando as facilidades disponibilizadas através da API. Para analisar a exatidão, viabilidade, integridade e acessibilidade da solução apresentam-se dois exemplos e casos de estudo. Através dos casos de estudo foi possível identificar uma lista de problemas, de pontos sensíveis e melhorias na solução proposta. Para avaliar a usabilidade da API, uma metodologia baseada em vários métodos de avaliação de usabilidade foi estabelecida. O múltiplo caso de estudo funciona como o principal método de avaliação, combinando vários métodos de pesquisa. O caso de estudo consiste em três fases de avaliação: um workshop, uma avaliação heurística e uma análise subjetiva. O caso de estudo envolveu três engenheiros de software (incluindo programadores e avaliadores). A metodologia aplicada gerou resultados com base num método de inspeção, testes de utilizador e entrevistas. Identificou-se não só pontos sensíveis e falhas no código-fonte, mas também problemas estruturais, de documentação e em tempo de execução, bem como problemas relacionados com a experiência do utilizador. O contexto do estudo é apresentado de modo a tirar conclusões acerca dos resultados obtidos. O trabalho futuro incluirá o desenvolvimento de novas funcionalidades. Adicionalmente, pretende-se resolver problemas encontrados na metodologia aplicada para avaliar a usabilidade da API, nomeadamente problemas e falhas no código fonte (por exemplo, validações) e problemas estruturais.In this dissertation, we present an SDK for the creation of connectors to integrate with CB Server which accelerates deployment, ensures best practices and simplifies the various activities and tasks in the development process. The SDK provides a public and simple API leveraged by a set of tools around the API developed which facilitate the development process by exploiting the API facilities. To analyse the correctness, feasibility, completeness, and accessibility of our solution, we presented two examples and case studies. From the case studies, we derived a list of issues found in our solution and a set of proposals for improvement. To evaluate the usability of the API, a methodology based on several usability evaluation methods has been established. Multiple case study works as the main evaluation method, combining several research methods. The case study consists of three evaluation phases – a hands-on workshop, a heuristic evaluation and subjective analysis. The case study involved three computer science engineers (including novice and expert developers and evaluators). The applied methodology generated insights based on an inspection method, a user test, and interviews. We identify not only problems and flaws in the source code, but also runtime, structural and documentation problems, as well as problems related to user experience. To help us draw conclusion from the results, we point out the context of the study. Future work will include the development of new functionalities. Additionally, we aim to solve problems found in the applied methodology to evaluate the usability of the API, namely problems and flaws in the source code (e.g. validations) and structural problems

The economic value of Portuguese pine and eucalyptus forests

A Work Project, presented as part of the requirements for the Award of a Masters Degree in Economics from the NOVA – School of Business and EconomicsThis paper estimates the total economic value for the Portuguese pine and eucalyptus forest ecosystems considering market services (timber and non timber forest products) and non-market services (recreation, landscape, carbon sequestration, watershed protection, protection of soil erosion and biodiversity). According to the results obtained, at least half of the values of the ecosystems in study come from non-market services, and eucalyptus forests are more valuable than pine forests, even after including fire risks. Moreover, the results also suggest a non-optimal management of Portuguese pine forests

Investigation of an inherited cerebellar malformation in the Eurasier breed dog

Missbildungen des Kleinhirns können durch die Einwirkung von Noxen in den verschiedenen Entwicklungsstadien des Kleinhirns oder genetisch bedingt sein. Genetisch bedingte Kleinhirndegenerationen wurden häufig beim Hund beschrieben. Diese zeigen sich mit progressive Ataxie und Kleinhirnatrophie. Es gibt in der Literatur jedoch nur wenige gesicherte Hinweise auf das Vorkommen einer erblichen Kleinhirnmissbildung beim Hund. Das Ziel dieser Studie war daher, den klinischen Phänotyp und die Befunde der bildgebenden Diagnostik einer potentiell vererbten Kleinhirnmissbildung beim Eurasier im Detail zu beschreiben. Klinische Befunde, Videoaufzeichnungen des Gangs und die Befunde der bildgebenden Diagnostik mit CT und MR von 32 Eurasiern mit neurologischen Symptomen wurden retrospektiv und prospektiv erhoben. Bei 14 Hunden wurde eine uniforme Kleinhirnmissbildung nachgewiesen, die durch Fehlen der kaudalen Anteile des cerebellären Vemis und der kaudalen Anteile der Kleinhirnhemisphären sowie groβe retrocerebelläre Flüssigkeitsansammlungen charakterisiert war. Die Diagnose basierte auf den Befunden im MR (n = 8), CT (n = 3) und histopathologischen Befunden (n = 3). Zusätzlich fiel eine erhebliche Variabilität in der Gröβe der hinteren Schädelgrube sowie bei einigen Hunden auch Hydrocephalus und eine unterschiedliche Ausprägung des Corpus callosum auf. Klinisch zeigten die betroffenen Hunde eine nicht-progressive cerebelläre Ataxie, die sich erstmals zeigte wenn die Welpen zu laufen begannen. Der Grad der Ataxie variierte von mildem Schwanken des Rumpfes, milder Dysmetrie, Dysequilibrium und Ataxie der Hintergliedmaßen bis zu hochgradiger cerebellärer Ataxie mit episodischem Fallen oder Rollen. Andere klinische Symptome waren Nystagmus, persistierend fehlende Drohreaktion eines Auges oder beider Augen bei Hunden, die älter als 10-12 Wochen waren, Kopftremor und epileptische Anfälle, die erstmalig in einem Alter von 5 Monaten bis zu 4 Jahren auftraten. Folgeuntersuchungen zeigten eine deutliche Verbesserung der cerebellären Ataxie. Detaillierte Untersuchungen der Pedigrees und die eindeutige Erfassung des Phänotyps von Geschwistern und Eltern betroffener Hunde aus mehreren Würfen auf der Basis von MR Untersuchungen wiesen auf das Vorliegen einer autosomal rezessiv vererbte Kleinhirnmissbildung hin. Zusammenfassend wurde in dieser Arbeit eine autosomal rezessiv vererbte Kleinhirnhypoplasie bei der Hunderasse Eurasier nachgewiesen, die auch einzelne Aspekte einer Dandy-Walker Malformation aufwies.Cerebellar malformations result from insults during embryogenesis or are inherited. Inherited cerebellar abiotrophies are frequently recognized in dogs and usually result in progressive ataxia. Evidence for inherited cerebellar hypoplasia is rare in the veterinary literature. Therefore the aim of this study was to describe the clinical and neuroimaging phenotype of a potentially inherited cerebellar malformation in Eurasier dogs. Clinical and imaging data of 32 Eurasier dogs with neurological signs were collected retrospectively and prospectively. An uniform cerebellar malformation characterized by absence of the caudal parts of the cerebellar vermis and the caudal parts of the cerebellar hemispheres in association with large retrocerebellar fluid accumulations was identified in 14 closely related purebred Eurasier dogs. Diagnosis was based on MRI (n = 8), CT (n = 3), or post-mortem examination (n = 3). A wide variation in caudal fossa size as well as hydrocephalus and thinning of the corpus callosum were observed in some dogs. Clinically the dogs showed non-progressive cerebellar ataxia, which was observed for the first time when the puppies began to walk. Variable degrees of ataxia were observed, varying from mild truncal sway, mild dysmetria, dysequilibrium and pelvic limb ataxia to severe cerebellar ataxia with episodic falling or rolling. Other clinical signs observed in some dogs were nystagmus, an absence of the bilateral or unilateral menace reaction beyond 10-12 weeks of age, head tremors and epileptic seizures with an age of onset between 5 months and 4 years of age. Follow-up examinations showed a pronounced improvement of the cerebellar ataxia in adult dogs. Detailed pedigree analyses, which included confirmation of the phenotype by MRI of littermates and parents of multiple litters suggested an autosomal recessive inheritance. In conclusion, the neuroimaging phenotype observed in the Eurasier breed dogs is characterized by an autosomal recessive inherited inferior cerebellar hypoplasia with some resemblance to a Dandy-Walker-like malformation

Smart cities: urban green infrastructures: quantifying green infrastructures benefits and value

Project Work presented as the partial requirement for obtaining a Master's degree in Information Management, specialization in Knowledge Management and Business IntelligencePopulations have moved to cities and urban areas in recent years, resulting in their exponential growth. These migrations raise both traffic and resources consumption, leading to an increase of 2 emissions and contributing on a large scale to climate change. To extenuate the environmental issues adjacent to climate change, strengthening the number of urban trees is essential as they mitigate 2 emissions when incorporating carbon in their biomass. Understanding and measuring the extent of the role trees play as a mechanism for 2 storage introduces an interesting study that provides information on urban green infrastructures planification. Additionally, attending the relation between carbon storage and carbon value, the trees represent a credit benefit for the cities. The incorporation of tree's species, age, and environment type on the previous analysis could also offer valid inputs to enhance the cities' decision making. With the present project, we will provide an interactive dashboard that complete and supports the current analysis