INFOGEST static in vitro simulation of gastrointestinal food digestion

peer-reviewedSupplementary information is available at http://dx.doi.org/10.1038/s41596-018-0119-1 or https://www.nature.com/articles/s41596-018-0119-1#Sec45.Developing a mechanistic understanding of the impact of food structure and composition on human health has increasingly involved simulating digestion in the upper gastrointestinal tract. These simulations have used a wide range of different conditions that often have very little physiological relevance, and this impedes the meaningful comparison of results. The standardized protocol presented here is based on an international consensus developed by the COST INFOGEST network. The method is designed to be used with standard laboratory equipment and requires limited experience to encourage a wide range of researchers to adopt it. It is a static digestion method that uses constant ratios of meal to digestive fluids and a constant pH for each step of digestion. This makes the method simple to use but not suitable for simulating digestion kinetics. Using this method, food samples are subjected to sequential oral, gastric and intestinal digestion while parameters such as electrolytes, enzymes, bile, dilution, pH and time of digestion are based on available physiological data. This amended and improved digestion method (INFOGEST 2.0) avoids challenges associated with the original method, such as the inclusion of the oral phase and the use of gastric lipase. The method can be used to assess the endpoints resulting from digestion of foods by analyzing the digestion products (e.g., peptides/amino acids, fatty acids, simple sugars) and evaluating the release of micronutrients from the food matrix. The whole protocol can be completed in ~7 d, including ~5 d required for the determination of enzyme activities.COST action FA1005 INFOGEST (http://www.cost-infogest.eu/ ) is acknowledged for providing funding for travel, meetings and conferences (2011-2015). The French National Institute for Agricultural Research (INRA, www.inra.fr) is acknowledged for their continuous support of the INFOGEST network by organising and co-funding the International Conference on Food Digestion and workgroup meeting

Indomethacin-induced activation of the death receptor-mediated apoptosis pathway circumvents acquired doxorubicin resistance in SCLC cells

Small-cell lung cancers (SCLCs) initially respond to chemotherapy but are often resistant at recurrence. A potentially new method to overcome resistance is to combine classical chemotherapeutic drugs with apoptosis induction via tumour necrosis factor (TNF) death receptor family members such as Fas. The doxorubicin-resistant human SCLC cell line GLC(4)-Adr and its parental doxorubicin-sensitive line GLC(4) were used to analyse the potential of the Fas-mediated apoptotic pathway and the mitochondrial apoptotic pathway to modulate doxorubicin resistance in SCLC. Western blotting showed that all proteins necessary for death-inducing signalling complex formation and several inhibitors of apoptosis were expressed in both lines. The proapototic proteins Bid and caspase-8, however, were higher expressed in GLC(4)-Adr. In addition, GLC(4)-Adr expressed more Fas (3.1x) at the cell membrane. Both lines were resistant to anti-Fas antibody, but plus the protein synthesis inhibitor cycloheximide anti-Fas antibody induced 40% apoptosis in GLC(4)-Adr. Indomethacin, which targets the mitochondrial apoptotic pathway, induced apoptosis in GLC(4)-Adr but not in GLC(4) cells. Surprisingly, in GLC(4)-Adr indomethacin induced caspase-8 and caspase-9 activation as well as Bid cleavage, while both caspase-8 and caspase-9 specific inhibitors blocked indomethacin-induced apoptosis. In GLC(4)-Adr, doxorubicin plus indomethacin resulted in elevated caspase activity and a 2.7-fold enhanced sensitivity to doxorubicin. In contrast, no effect of indomethacin on doxorubicin sensitivity was observed in GLC(4). Our findings show that indomethacin increases the cytotoxic activity of doxorubicin in a doxorubicin-resistant SCLC cell line partly via the death receptor apoptosis pathway, independent of Fas

Efecto de la combinación fungicida protectante y variedad sobre el tizón tardío [Phythopthora Infestas (Montagne) De Bary] en el cultivo de papa (Solanum tuberosum L.) en época de primera localidad La Tejera, San Nicolás, Estelí, 2008

El objetivo principal de este estudio fue el de evaluar el efecto de tres intervalos de aplicación del fungicida clorotalonil y tres variedades de papa con diferentes niveles de resistencia sobre la epidemiología y manejo del tizón tardío [Phytophthora infestans (Montagne) De Bary] en el cultivo de papa (Solanum tuberosum L.) El trabajo experimental se realizó de Julio a Octubre 2008, en la localidad “La Tejera”, municipio de San Nicolás, departamento de Estelí, localizado en las coordenadas geográficas 12º58'23” latitud norte y 86º24'21” longitud oeste, a una altura de 1,328 metros sobre el nivel del mar. Se evaluaron doce epidemias de tizón tardío que resultaron de la combinación de tres variedades de papa (Cal White, Granola y Jacqueline Lee) y cuatro tratamientos (tres intervalos de aplicación del fungicida clorotalonil y un testigo en el cual no se aplicó fungicida). Los tratamientos fueron distribuidos en bloques completos al azar. El manejo experimental fue el mismo que realiza el productor convencionalmente. Las variables epidemiológicas evaluadas fueron: severidad, área bajo la curva de progreso de la enfermedad (ABCPE) y la tasa de infección aparente (r). Además, se midieron variables climáticas como temperatura, humedad relativa y precipitaciones y se determinó el rendimiento de las variedades incluidas en el estudio. Las doce epidemias analizadas en este estudio iniciaron con varios días de diferencia, en dependencia del nivel de resistencia de la variedad y del intervalo de aplicación del fungicida protectante clorotalonil. La severidad de la enfermedad alcanzó casi el 100% en las variedades susceptibles (Cal White y Granola) en las parcelas donde no se aplicó el fungicida clorotalonil, pero el porcentaje de severidad en las parcelas tratadas disminuyó conforme el intervalo de aplicación se fue acortando. En la variedad Jacqueline Lee los porcentajes de severidad fueron bajos, incluso en las parcelas que no fueron tratadas con el fungicida clorotalonil, lo cual demuestra que esta variedad es resistente a P. infestans. Ninguno de los intervalos de aplicación (cada 4, 7 y 14 días) del fungicida clorotalonil detuvo el avance de las epidemias de tizón tardío una vez que éstas iniciaron, principalmente, en las parcelas con variedades susceptibles. El rendimiento obtenido en cada una de las variedades evaluadas fue menor al compararlo con otro estudio de validación llevado a cabo en 2007 en tres localidades de Matagalpa y Jinotega. Los resultados de este estudio const ituyen una contribución muy importante para el desarrollo de futuras estrategias encaminadas, no a la erradicación total del tizón tardío de los campos de papa y/o tomate de Nicaragua, pero si para lograr mitigar su efecto devastador sobre tan importantes cultivos tanto desde el punto de vista nutritivo como económico