Reversible inactivation of the transcriptional function of P53 protein by farnesylation

BACKGROUND: The use of integrating viral vectors in Gene therapy clinical trials has pointed out the problem of the deleterous effect of the integration of the ectopic gene to the cellular genome and the safety of this strategy. We proposed here a way to induce the death of gene modified cells upon request by acting on a pro-apoptotic protein cellular localization and on the activation of its apoptotic function. RESULTS: We constructed an adenoviral vector coding a chimeric p53 protein by fusing p53 sequence with the 21 COOH term amino acids sequence of H-Ras. Indeed, the translation products of Ras genes are cytosolic proteins that become secondarily associated with membranes through a series of post-translational modifications initiated by a CAAX motif present at the C terminus of Ras proteins. The chimeric p53HRCaax protein was farnesylated efficiently in transduced human osteosarcoma p53-/- cell line. The farnesylated form of p53 resided mainly in the cytosol, where it is non-functional. Farnesyl transferase inhibitors (FTIs) specifically inhibited farnesyl isoprenoid lipid modification of proteins. Following treatment of the cells with an FTI, p53HRCaax underwent translocation into the nucleus where it retained transcription factor activity. Shifting p53 into the nucleus resulted in the induction of p21(waf1/CIP1 )and Bax transcription, cell growth arrest, caspase activation and apoptosis. CONCLUSION: Artificial protein farnesylation impaired the transcriptional activity of p53. This could be prevented by Farnesyl transferase inhibition. These data highlight the fact that the artificial prenylation of proteins provides a novel system for controlling the function of a transactivating factor

Use and comparison of different internal ribosomal entry sites (IRES) in tricistronic retroviral vectors

BACKGROUND: Polycistronic retroviral vectors that contain several therapeutic genes linked via internal ribosome entry sites (IRES), provide new and effective tools for the co-expression of exogenous cDNAs in clinical gene therapy protocols. For example, tricistronic retroviral vectors could be used to genetically modify antigen presenting cells, enabling them to express different co-stimulatory molecules known to enhance tumor cell immunogenicity. RESULTS: We have constructed and compared different retroviral vectors containing two co-stimulatory molecules (CD70, CD80) and selectable marker genes linked to different IRES sequences (IRES from EMCV, c-myc, FGF-2 and HTLV-1). The tricistronic recombinant amphotropic viruses containing the IRES from EMCV, FGF-2 or HTLV-1 were equally efficient in inducing the expression of an exogenous gene in the transduced murine or human cells, without displaying any cell type specificity. The simultaneous presence of several IRESes on the same mRNA, however, can induce the differential expression of the various cistrons. Here we show that the IRESes of HTLV-1 and EMCV interfere with the translation induced by other IRESes in mouse melanoma cells. The IRES from FGF-2 did however induce the expression of exogenous cDNA in human melanoma cells without any positive or negative regulation from the other IRESs present within the vectors. Tumor cells that were genetically modified with the tricistronic retroviral vectors, were able to induce an in vivo anti-tumor immune response in murine models. CONCLUSION: Translation of the exogenous gene is directed by the IRES and its high level of expression not only depends on the type of cell that is transduced but also on the presence of other genetic elements within the vector

Patients présentant une pathologie chronique et soins palliatifs en oncologie: Une mise en relation trop tardive. Télémédecine pour les soins palliatifs en oncologie

En 2030, el 23,4% de la població francesa tindrà més de 65 anys. La majoria d'ells tindran patologies cròniques (càncers) que requeriran una gestió integral per part dels equips de cures pal·liatives. No obstant això, el limitat nombre de llits hospitalaris i de metges suggereix que aviat serà necessari desenvolupar la telemedicina per al seguiment dels pacients en cures pal·liatives. Vam oferir a 30 pacients un seguiment mensual per teleconsulta després d'una avaluació inicial en un hospital de dia de cures pal·liatives amb la finalitat d'avaluar la viabilitat material de les consultes de telemedicina (pacients amb càncer avançat, sovint ancians) i l'acceptació d'aquesta pràctica per part dels pacients. Vam recollir l'experiència i els sentiments dels pacients respecte a aquestes teleconsultas 3 mesos després de la inclusió. Vam demostrar la viabilitat de la teleconsulta per a pacients seguits en cures pal·liatives. Els pacients estan a favor de este tipus de seguiment. No tenen cap dificultat per a connectar-se, independentment de la seva edat. Tots es beneficien d'això. S'estableix fàcilment una relació de confiança amb el seu metge, malgrat el seu desconeixement previ a la teleconsulta. D'altra banda, el nostre estudi mostra que el 65% dels pacients als quals vam proposar un seguiment per telemedicina van morir abans dels 3 mesos després de la inclusió, cosa que significa que els pacients accedeixen a les cures pal·liatives massa tard. Per això, és especialment important promoure no sols la telemedicina, sinó també l'accés precoç dels pacients a les cures pal·liatives.In 2030, 23.4% of the French population will be over 65 years old. Most of them will have chronic pathologies (cancers) requiring comprehensive management by palliative care teams. However, the limited number of hospital beds and physicians suggests that there will be a rapid need to develop telemedicine for the follow-up of palliative care patients. We proposed to 30 patients a monthly follow-up by teleconsultation after an initial evaluation in a palliative care day hospital in order to evaluate the material feasibility of consultations by telemedicine (patients altered in the context of their advanced course of cancer, often elderly) and the adherence of the patients to this practice. We collected the patients' experience and feelings regarding these teleconsultations 3 months after inclusion. We have shown the feasibility of teleconsultation for patients followed in palliative care. Patients are in favour of this type of follow-up. They have no difficulty connecting regardless of their age. They all benefit from it. A relationship of trust is easily established with their doctor, despite their lack of knowledge prior to teleconsultation. On the other hand, our study shows that 65% of the patients to whom we proposed a follow-up by telemedicine died before 3 months after inclusion, which means that patients have access to palliative care far too late. It is therefore particularly important to promote not only telemedicine but also early access to palliative care for patients.En 2030, el 23,4% de la población francesa tendrá más de 65 años. La mayoría de ellos tendrán patologías crónicas (cánceres) que requerirán una atención integral por parte de los equipos de cuidados paliativos. Sin embargo, el limitado número de camas hospitalarias y de médicos sugiere que pronto será necesario desarrollar la telemedicina para el seguimiento de los pacientes en cuidados paliativos. Ofrecimos a 30 pacientes un seguimiento mensual por teleconsulta tras una evaluación en un hospital de día de cuidados paliativos con el fin de evaluar la viabilidad material de las consultas de telemedicina (pacientes con cáncer avanzado, a menudo ancianos) y la aceptación de esta práctica por parte de los pacientes. Recogimos las experiencias y sentimientos de los pacientes en relación con estas teleconsultas 3 meses después de la inclusión. Hemos demostrado la viabilidad de la teleconsulta para pacientes seguidos en cuidados paliativos. Los pacientes están a favor de este tipo de seguimiento. No tienen ninguna dificultad para conectarse, independientemente de su edad. Todos se benefician de ello. Se establece fácilmente una relación de confianza con su médico, a pesar de su desconocimiento previo a la teleconsulta. Nuestro estudio muestra que el 65% de los pacientes a los que propusimos un seguimiento por telemedicina fallecieron antes de los 3 meses tras la inclusión, lo que significa que los pacientes acceden a los cuidados paliativos demasiado tarde. Por ello, es especialmente importante promover no sólo la telemedicina, sino también el acceso precoz de los pacientes a los cuidados paliativos.La population française comprendra 23,4 % de personnes de plus de 65 ans en 2030. La plupart d’entre elles présentera des pathologies chroniques (cancers) nécessitant une prise en charge globale par les équipes de soins palliatifs. Toutefois le nombre restreint de lits d’hospitalisation et de médecins suggère que l’on aura rapidement besoin de developper la télémédecine pour le suivi des patients en soins palliatifs  Nous avons proposé à 30 patients un suivi mensuel par téléconsultation après une première évaluation en Hospitalisation De Jour de soins palliatifs afin d’évaluer la faisabilité matérielle des consultations par télémédecine (patients altérés dans le cadre de leur parcours avancé dans la maladie cancéreuse, souvent âgés) et l’adhésion des patients dans cette pratique. Nous avons recueilli le vécu et ressenti des patients par rapport à ces téléconsultations 3 mois post inclusion. Nous avons montré la faisabilité de la téléconsultation pour les patients suivis en soins palliatifs. Les patients sont favorables à ce type de suivi. Ils n’ont aucune difficulté à se connecter indépendamment de leur âge. Tous en tirent bénéfice. Une relation de confiance s’établit facilement avec leur médecin, malgré leur méconnaissance antérieure à la téléconsultation. En revanche, notre étude met en évidence que 65% des patients à qui nous avons proposé un suivi par télémédecine sont décédés avant les 3 mois post inclusion traduisant un accès beaucoup trop tardif des patients aux soins palliatifs. Il est donc particulièrement important de promouvoir non seulement la télémédecine mais également un accès précoce aux soins palliatifs des patients

La collégialité dans la mise en place d’une sédation profonde et continue dans un centre de cancérologie en France

Une procédure collégiale désigne le fait de recueillir, avant de prendre une décision médicale délicate, l’avis de l’ensemble de l’équipe de soins responsable du patient, incluant le personnel infirmier et aide-soignant, entre autres. La loi Claeys-Leonetti relative à la fin de vie (2016) l’inscrit dans le droit français comme étant obligatoire lors de la mise en place d’une sédation profonde et continue maintenue jusqu’au décès (SPCMD). L’objectif de l’étude est de faire un état des lieux de la connaissance de cet aspect de loi par le personnel soignant d’un institut de cancérologie et d’identifier comment la collégialité se met en place pour une décision de SPCMD selon les services. Nous avons proposé un questionnaire en ligne et anonyme à l’ensemble des acteurs du soin (connaissance de la loi Claeys-Leonetti) puis nous avons rencontré les soignants des différents services en groupes de discussion (cadres, personnel infirmier et aides-soignants) ou en entretiens individuels (médecins). Les résultats montrent que la loi est mieux connue, toutes professions confondues, des jeunes soignants (moins de 5 ans d’expérience) et surtout mieux revendiquée par les infirmières et aides-soignantes que par les médecins. Nous rapportons la diversité de la mise en œuvre de la collégialité pour une décision de sédation, en termes de formalisation, de standardisation et d’interprofessionnalisation. Nous concluons que la mise en place de la collégialité de façon anticipée pour une décision élargit les modes de communication pluri/inter professionnelle et permet d’apaiser la souffrance des patients, des médecins et des soignants

Complete exon sequencing of all known Usher syndrome genes greatly improves molecular diagnosis

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Usher syndrome (USH) combines sensorineural deafness with blindness. It is inherited in an autosomal recessive mode. Early diagnosis is critical for adapted educational and patient management choices, and for genetic counseling. To date, nine causative genes have been identified for the three clinical subtypes (USH1, USH2 and USH3). Current diagnostic strategies make use of a genotyping microarray that is based on the previously reported mutations. The purpose of this study was to design a more accurate molecular diagnosis tool.</p> <p>Methods</p> <p>We sequenced the 366 coding exons and flanking regions of the nine known USH genes, in 54 USH patients (27 USH1, 21 USH2 and 6 USH3).</p> <p>Results</p> <p>Biallelic mutations were detected in 39 patients (72%) and monoallelic mutations in an additional 10 patients (18.5%). In addition to biallelic mutations in one of the USH genes, presumably pathogenic mutations in another USH gene were detected in seven patients (13%), and another patient carried monoallelic mutations in three different USH genes. Notably, none of the USH3 patients carried detectable mutations in the only known USH3 gene, whereas they all carried mutations in USH2 genes. Most importantly, the currently used microarray would have detected only 30 of the 81 different mutations that we found, of which 39 (48%) were novel.</p> <p>Conclusions</p> <p>Based on these results, complete exon sequencing of the currently known USH genes stands as a definite improvement for molecular diagnosis of this disease, which is of utmost importance in the perspective of gene therapy.</p

Ku counteracts mobilization of PARP1 and MRN in chromatin damaged with DNA double-strand breaks

In mammalian cells, the main pathway for DNA double-strand breaks (DSBs) repair is classical non-homologous end joining (C-NHEJ). An alternative or back-up NHEJ (B-NHEJ) pathway has emerged which operates preferentially under C-NHEJ defective conditions. Although B-NHEJ appears particularly relevant to genomic instability associated with cancer, its components and regulation are still largely unknown. To get insights into this pathway, we have knocked-down Ku, the main contributor to C-NHEJ. Thus, models of human cell lines have been engineered in which the expression of Ku70/80 heterodimer can be significantly lowered by the conditional induction of a shRNA against Ku70. On Ku reduction in cells, resulting NHEJ competent protein extracts showed a shift from C- to B-NHEJ that could be reversed by addition of purified Ku protein. Using a cellular fractionation protocol after treatment with a strong DSBs inducer followed by western blotting or immunostaining, we established that, among C-NHEJ factors, Ku is the main counteracting factor against mobilization of PARP1 and the MRN complex to damaged chromatin. In addition, Ku limits PAR synthesis and single-stranded DNA production in response to DSBs. These data support the involvement of PARP1 and the MRN proteins in the B-NHEJ route for the repair of DNA DSBs

George Lucas : Prophète du transhumanisme ?

La Guerre des étoiles, saga cinématographique « grand public », permet de se questionner sur la nature humaine et sur le transhumanisme. Elle met en effet en scène différents personnages qui ne sont ni de « vrais » humains, ni des robots, des créatures pouvant être assimilées à des humains évolués (des cyborgs, des chimères ou des humains génétiquement modifiés). À partir de cette approche cinématographique, nous aborderons certains moyens de modification de la personne humaine à la fois dans son corps et dans sa conscience, et nous nous interrogerons sur l’homme de demain, en se demandant si George Lucas (réalisateur du premier film) n’était pas un visionnaire des hommes de demain