Recerca en incendis forestals: cremes experimentals a Austràlia

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Julgar quem mata: A decisão judicial em processos-crime de homicídio

O que é apreciado pelos juízes num processo crime de homicídio em Portugal ainda carece de um longo percurso investigativo no âmbito da psicologia da justiça. A presente investigação de carácter exploratório objetiva analisar diferenças na medida da pena aplicada em função de elementos identificados nos acórdãos. Procura igualmente conhecer se existem diferenças decisórias entre a primeira e a segunda instâncias. Salientam-se os seguintes resultados: os juízes tendem a aplicar penas mais elevadas quando as vítimas são do sexo feminino; sentenciam os agentes a penas superiores quando estes se remetem ao silêncio, consubstanciando estes dois fatores, elementos extralegais. Constatou-se igualmente que a medida da pena é inferior quando o ofensor se diz arrependido. Verifica-se que nenhuma variável relativa às características do ofensor resultou estatisticamente significativa. Os resultados são discutidos, salientando-se a participação de fatores extralegais na decisão judicial.What is appreciated by judges in a homicide process in Portugal still has a long investigative course to pursue in the field of psychology. This exploratory research aims to analyze differences in the extent of the penalty applied according to the elements identified in the judgments. It also seeks to know if there are any differences between decisions in the first and second instances. The following results are noted: judges tend to apply higher penalties when the victims gender is female; they sentencing offenders to higher penalties when they use the right to remain silence, consubstantiating these two factors, extralegal factors. It was also found that the measure of the penalty is less when the offender shown regret. It was verified that no variable related to the characteristics of the offender was statistically significant. The results are discussed, and the participation of extralegal factors in the judicial decision-making are highlighted.(undefined

Probabilistic Mu-Calculus: Decidability and Complete Axiomatization

We introduce a version of the probabilistic mu-calculus (PMC) built on top of a probabilistic modal logic that allows encoding n-ary inequational conditions on transition probabilities. PMC extends previously studied calculi and we prove that, despite its expressiveness, it enjoys a series of good meta-properties. Firstly, we prove the decidability of satisfiability checking by establishing the small model property. An algorithm for deciding the satisfiability problem is developed. As a second major result, we provide a complete axiomatization for the alternation-free fragment of PMC. The completeness proof is innovative in many aspects combining various techniques from topology and model theory

Recerca en incendis forestals: cremes experimentals a Austràlia

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Biological properties of aromatic plants used in folk medicine: a focus on the essential oil of Thymus zygis

For centuries, plants have been used for a wide variety of purposes, such as treating diseases, food flavouring and preservation and perfumery. The essential oils (EOs) are aromatic, oil-like volatile substances present in different plant materials that have a wide range of biological activities and can be used in different areas, such as chemical, cosmetic, food, perfumery, and pharmaceutical industries and have been used as therapeutic agents since ancient times. Thymus zygis is a widespread plant, mainly used as a culinary flavouring agent, which EO has demonstrated bioactive properties, such as antioxidant and antimicrobial, and that may even enhance the effect of certain antimicrobial agents. Furthermore, the potential application as a food preservative has been described on different matrixes mainly due to its antimicrobial activity against pathogenic and spoilage microorganisms in food. Considering the different applications of EOs, this work aimed to study the composition, antioxidant, and antimicrobial properties and also the cytotoxicity of the EOs of Foeniculum vulgare, Helichrysum stoechas, Mentha pulegium, Pinus pinaster, Ruta graveolens, and Thymus mastichina. The chemical composition, and the bioactive properties of the T. zygis EO were also evaluated with a focus on antimicrobial activity against Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes, and application of the EO in food. The F. vulgare, H. stoechas, M. pulegium, P. pinaster, R. graveolens, T. mastichina and T. zygis EOs showed antioxidant activity acting through inhibition of lipid peroxidation, while only the H. stoechas, M. pulegium and T. zygis EOs scavenged the free radicals of DPPH. M. pulegium and T. zygis EOs showed the strongest antimicrobial activity and only volatiles compounds from these EOs demonstrated inhibitory activity. Regarding the EO cytotoxicity on a fibroblasts cell line, it was observed that the effect was directly proportional to the EOs concentration, in which the highest cytotoxic effect was obtained with the R. graveolens EO. Considering the antimicrobial potential of the EO from T. zygis and since it showed the greater activity among the tested EOs, it was decided to proceed with further evaluation of this EO, thus deepening its bioactive activities, mainly the antibacterial activity against S. aureus and L. monocytogenes. Taking into account that S. aureus is a Gram-positive bacterium that causes a wide variety of clinical infections, from less severe to serious and life-threatening infections and because these are aggravated by antibiotic resistance, the antibacterial activity of T. zygis EO against strains of S. aureus was evaluated. The T. zygis EO demonstrated antimicrobial activity against S. aureus strains with bactericidal effect. The EO of T. zygis also revealed a synergistic or additive effect in combination with the antibiotic’s ampicillin, ciprofloxacin, or vancomycin against S. aureus strains and, in some cases, changed the antibiotic-resistance phenotype from resistant to susceptible. The T. zygis EO inhibit the formation of biofilms by S. aureus and partially eliminate the preformed biofilms even at subinhibitory concentrations. The EO reduced the haemolytic activity of S. aureus SA 03/10 (the only strain tested that causes haemolysis) as well the quorum-sensing in Chromobacterium violaceum biosensor. Therefore, these results demonstrate the good bioactive properties of the T. zygis EO, mainly the antimicrobial activity against S. aureus, revealing its potential to be used as an antibacterial agent and/or as an enhancer of the effect of antibiotics. Since L. monocytogenes is a foodborne Gram-positive bacterium with a high mortality rate and has the ability to survive and replicate in adverse conditions, allowing the wide distribution of this bacterium in different environments and matrices, such as water, soil, and food products, the antimicrobial activity of T. zygis EO against strains of L. monocytogenes was evaluated. The T. zygis EO presented good antibacterial activity against L. monocytogenes with MIC value of 0.05% while showing a bactericidal effect. The EO significantly reduced the biofilm formation with inhibition percentages from 16.85 to 89.86% and also the motility, while not inducing cross-resistance to antibiotics. The concentration of 2× MIC of T. zygis EO reduced the L. monocytogenes counts (initial inoculum of ~106 CFU/mL) in the chicken juice (1.53 log CFU/mL) and the lettuce model (to below the detection limit) after two days of storage. Regarding the sanitizing of fresh vegetables, the use of 0.2% (v/v) of EO for 5 min of immersion, reduce L. monocytogenes and natural microbiota counts for values below the detection limit of the method for iceberg lettuce. For the spinach leaves, L. monocytogenes and the natural microbiota counts were reduced to 4.35 log CFU/mL and in a range of 4.47 to 5.94 log CFU/mL, respectively, when compared with the washing with water. Thus, the T. zygis EO has demonstrated promising antibacterial activity against L. monocytogenes and these results point to the potential use of the T. zygis EO as a natural food preservative or sanitiser for controlling L. monocytogenes and the natural microbiota in food products. Overall, the present study revealed significant bioactive properties of different EOs, highlighting T. zygis EO to be considered in further studies for potential use in food preservation, due to their antioxidant and antimicrobial properties as well as in the control and reduction of the pathogenicity of the L. monocytogenes and S. aureus.Durante séculos, as plantas têm sido utilizadas numa ampla variedade de aplicações, tais como o tratamento de doenças, aromatização e conservação de alimentos e perfumaria. Os óleos essenciais são substâncias voláteis aromáticas, presentes em diferentes partes das plantas, como frutas, sementes, polpa, casca ou raiz e que têm sido usados como agentes terapêuticos desde a antiguidade. De facto, estes possuem uma ampla gama de atividades biológicas, podendo ser aplicados em diferentes áreas, como química, cosmética, indústria alimentar, perfumaria e farmacêutica. O Thymus zygis é uma planta amplamente distribuída, utilizada principalmente como aromatizante culinário e o seu óleo essencial tem demonstrado propriedades bioativas, como atividade antioxidante, antibacteriana, inseticida e antiparasitária. Além disso, a potencial aplicação como conservante de alimentos tem sido descrita em diferentes matrizes alimentares, principalmente devido à sua atividade antimicrobiana contra microrganismos patogénicos e deteriorantes de alimentos. O aumento da resistência dos microrganismos aos antibióticos e o surgimento de novas doenças, exigem o desenvolvimento urgente de novos agentes antimicrobianos mais fortes e eficazes. Assim, as plantas medicinais são promissoras, pois oferecem fontes únicas e renováveis de novos compostos com propriedades bioativas. Considerando as diferentes aplicações dos óleos essenciais, este trabalho teve como objetivos estudar a composição, propriedades antioxidantes, antimicrobianas e também a citotoxicidade dos óleos essenciais de Foeniculum vulgare, Helichrysum stoechas, Mentha pulegium, Pinus pinaster, Ruta graveolens e Thymus mastichina e avaliar a composição química e as propriedades bioativas do óleo essencial de T. zygis com foco na atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus bem como o seu efeito anti-Listeria monocytogenes e aplicação em alimentos como conservante. Através da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS) verificou-se que os óleos essenciais possuem composição diferente, identificando-se diversos compostos no óleo essencial de F. vulgare (12 compostos), H. stoechas (27), M. pulegium (8), P. pinaster (24), R. graveolens (8), T. mastichina (16) e por fim no EO de T. zygis 18 compostos com o anetol, acetato de neril, pulegona, α-pineno, 2-undecanona, 1,8-cineol e timol como compostos maioritários, respetivamente. Apenas os óleos essenciais de H. stoechas, M. pulegium e T. zygis sequestraram os radicais livres de DPPH exibindo uma atividade antioxidante muito forte, enquanto todos os óleos essenciais apresentaram atividade antioxidante atuando por meio da inibição da peroxidação lipídica de acordo com o ensaio do β-caroteno. Assim, verificou-se que os óleos essenciais de H. stoechas, M. pulegium e T. zygis possuem atividade antioxidante através de pelo menos dois mecanismos de ação distintos, a sequestração de radicais livres e inibição da peroxidação lipídica. Os óleos essenciais de M. pulegium e T. zygis exibiram atividade antimicrobiana mais relevante com concentração mínima inibitória (MIC, do inglês minimum inhibitory concentration) entre os valores de 0,06 e 4 μL/mL, exceto para Pseudomonas aeruginosa, que foi a espécie mais resistente. As espécies de Candida foram as mais suscetíveis a estes óleos essenciais (halos de inibição entre 30,94 ± 5,34 e 64,35 ± 4,44 mm) e apenas os compostos voláteis destes dois óleos essenciais, libertados do disco durante a incubação, demonstraram atividade inibitória (halos de inibição entre 19,28 ± 3,45 e 65,18 ± 8.78 mm). Por outro lado, os óleos essenciais de H. stoechas e R. graveolens revelaram a atividade antimicrobiana mais fraca (halos de inibição entre 6,00 ± 0,00 e 11,82 ± 1,07 mm e MIC entre 16 e >256 μL/mL). Em relação à citotoxicidade dos compostos, esta foi avaliada considerando o seu efeito sobre uma linha celular de fibroblastos (NHDF), sendo que o efeito foi diretamente proporcional à concentração de óleos essenciais, obtendo-se maior atividade citotóxica com o óleo essencial de R. graveolens. Pelo contrário, com o óleo essencial de T. zygis com concentrações entre 0,0030 e 0,0125%, obteve-se viabilidade superior a 70% e tendo em conta a ISO 10993:5-2009, pode-se considerar que estas concentrações não são citotóxicas. Tendo em atenção o potencial antimicrobiano do óleo essencial de T. zygis e uma vez que mostrou maior atividade que os restantes óleos essenciais, decidiu-se avançar com estudos com este óleo essencial, aprofundando assim as suas atividades bioativas, principalmente a atividade antibacteriana contra S. aureus e L. monocytogenes. Considerando que S. aureus é uma bactéria Gram-positiva que causa vários tipos de infeções clínicas, e que em alguns casos pode estar associada a elevada morbilidade e mortalidade, as quais podem ser agravadas pela resistência a antibióticos, a atividade antibacteriana do óleo essencial de T. zygis foi avaliada contra estirpes desta espécie. O óleo essencial revelou atividade antimicrobiana contra estirpes de S. aureus com MIC de 0,05 e 0,1% (v/v) apresentando efeito bactericida. Para além disso, os compostos voláteis do óleo essencial de T. zygis também inibiram o crescimento destas estirpes. Relativamente ao efeito combinado com antibióticos, o óleo essencial de T. zygis demonstrou um efeito sinérgico em combinação com os antibióticos ampicilina e ciprofloxacina contra a estirpe S. aureus MRSA 12/08 e efeito aditivo com a vancomicina. Em relação às estirpes S. aureus ATCC 25923 e SA 03/10, a combinação do óleo essencial de T. zygis com os três antibióticos revelou efeito aditivo. Em alguns casos, a junção do óleo essencial de T. zygis alterou o fenótipo de resistente para suscetível ao antibiótico, de acordo com os valores de corte do Clinical and Laboratory Standards Institute, como se pode verificar para a estirpe SA 03/10 aos três antibióticos testados e para a estirpe MRSA 12/08 à ampicilina e ciprofloxacina em que os valores de MIC reduziram consideravelmente restaurando a sensibilidade a estes. Adicionalmente, o óleo essencial de T. zygis também inibiu a formação de biofilmes formados pelas estirpes de S. aureus e eliminou parcialmente os biofilmes preformados mesmo em concentrações subinibitórias. A pré-exposição de S. aureus a concentrações subinibitórias do óleo essencial de T. zygis reduziu significativamente a atividade hemolítica de S. aureus SA 03/10 (única estirpe em estudo que provocou hemólise de eritrócitos) em comparação com os respetivos controlos, de forma dose-dependente. A comunicação entre células permite o controlo da regulação e libertação de fatores de virulência por parte das bactérias e utilizando Chromobacterium violaceum como um biossensor para avaliar o potencial do óleo essencial como inibidor deste processo, os resultados mostraram que concentrações subinibitórias do óleo essencial de T. zygis inibiram significativamente a produção do pigmento violaceína sem afetar o crescimento deste biossensor. Assim, verificou-se que este óleo essencial também reduz esse processo de regulação de virulência. Resumindo, as concentrações testadas de óleo essencial de T. zygis reduzem significativamente o crescimento de S. aureus, tanto de células planctónicas como de biofilmes, potenciam o efeito de antibióticos e inibem a capacidade hemolítica e a comunicação entre células. Portanto, esses resultados demonstram promissoras propriedades bioativas do óleo essencial de T. zygis, revelando o seu potencial para ser utilizado como agente antibacteriano e/ou potenciador do efeito de antibióticos. Tendo em conta que L. monocytogenes é um dos agentes bacterianos causadores de doenças transmitidas por alimentos com mais elevada taxa de mortalidade e possui a capacidade de sobreviver e de se replicar em condições adversas vulgarmente associadas ao sector alimentar permitindo a sua ampla distribuição em diferentes ambientes e matrizes alimentares, foi avaliada a atividade antimicrobiana do óleo essencial de T. zygis contra estirpes desta bactéria. O óleo essencial de T. zygis apresentou também atividade antibacteriana contra L. monocytogenes com halos de inibição entre 41,55 ± 2,63 e 55,04 ± 3,64 mm, tal como os seus compostos voláteis (halos de inibição entre 36,13 ± 3,41 e 50,43 ± 2,59 mm), com um MIC de 0,05%, apresentando também efeito bactericida. Concentrações subinibitórias do óleo essencial reduziram significativamente a motilidade das três estirpes em estudo, reduzindo também a formação de biofilme com percentagens de inibição entre 16,85 e 89,86%, mesmo com concentrações subinibitórias. Uma pré-exposição de L. monocytogenes ao óleo essencial de T. zygis, apenas aumentou a robustez de L. monocytogenes quando sujeita a stress osmótico, não afetando a sua tolerância a outros fatores de stress, tais como a dessecação, pH ácido e elevadas temperaturas. Para além disso, a pré-exposição a óleo essencial de T. zygis não induziu resistência cruzada a antibióticos de diferentes classes, como ampicilina, cefotaxima, eritromicina, gentamicina, tetraciclina e vancomicina. Como a capacidade de invasão desta bactéria permite a passagem através das células epiteliais do intestino, provocando infeções generalizadas no hospedeiro, o óleo essencial de T. zygis foi testado em relação à capacidade de invasão em células de adenocarcinoma colorretal humano (Caco-2). A incubação com concentrações subinibitórias do óleo essencial de T. zygis não afetou o poder de invasão de L. monocytogenes, sendo assim considerado um fator neutro. Uma vez que o uso de compostos antimicrobianos sintéticos como conservantes de alimentos tem despertado a preocupação dos consumidores e tendo em atenção a atividade antimicrobiana obtida para o óleo essencial de T. zygis, avaliou-se o uso deste óleo como um conservante e desinfetante de alimentos. Verificou-se que as duas concentrações mais elevadas do óleo essencial de T. zygis (2× e 1× MIC) reduziram significativamente as contagens de L. monocytogenes (inóculo inicial de ~106 UFC/mL) num modelo de suco de frango (1,53 log UFC/mL) e no modelo de alface Iceberg (abaixo do limite de deteção), após dois dias de armazenamento em refrigeração. Em relação às amostras de leite (leite magro e leite gordo), a diferença no conteúdo lipídico influenciou a atividade antibacteriana do óleo essencial de T. zygis, sendo que apenas se obteve uma redução significativa das contagens bacterianas com a concentração mais elevada e no leite magro. Para concentrações subinibitórias do óleo essencial de T. zygis, apenas a concentração 0,5× MIC mostrou uma redução significativa e apenas no modelo de alface, a partir do quarto dia de armazenamento. Em relação à desinfeção de vegetais frescos, o uso de 0,2% (v/v) de óleo essencial por 5 min de imersão, reduz a contagem de L. monocytogenes e da microbiota natural para valores abaixo do limite de deteção do método na lavagem das folhas de alface. Nas folhas de espinafre, as contagens de L. monocytogenes e da microbiota natural foram reduzidas para 4,35 log UFC/mL e no intervalo de 4,47 a 5,94 log UFC/mL, respetivamente, quando comparadas com a lavagem apenas com água. Assim, o óleo essencial de T. zygis demonstrou atividade antibacteriana promissora contra L. monocytogenes e estes resultados apontam para o potencial uso do óleo essencial de T. zygis como conservante ou desinfetante natural de alimentos para o controlo de L. monocytogenes e da microbiota natural em produtos alimentares. No geral, o presente estudo revelou propriedades bioativas significativas de diferentes óleos essenciais, destacando o óleo essencial de T. zygis, a ser considerado em estudos futuros, devido às suas propriedades antioxidantes e antimicrobianas, bem como no controle e redução da patogenicidade de S. aureus e L. monocytogenes

Diários abertos ao mundo: os blogues dos adolescentes portugueses

O papel desempenhado pelo grupo de pares em termos relacionais durante a adolescência e a forma como transformaram a tecnologia associada aos media num distintivo geracional, através da apropriação das suas potencialidades para se manterem em contacto permanente constituem a base do presente trabalho de investigação, focado na análise específica de um desses mecanismos: os blogues. O estudo delimita a amostra a um público específico em termos etários, ao considerar apenas os adolescentes com idades compreendidas entre os 14 e os 18 anos. Poder-se-á considerar como um estudo de caso específico dentro do universo abrangente e diversificado que é o mundo dos blogues, uma vez que podem ser utilizados de diferentes formas e com diferentes funções consoante a idade e o género dos seus criadores. A metodologia de análise de conteúdo utilizada permitiu inferir que no caso dos blogues criados por adolescentes, funcionam como espaços de reflexão, partilha e interacção, onde se expressam, dão a conhecer e a comentar emoções, tendências e gostos pessoais que anteriormente pertenciam à esfera privada e que actualmente constituem mecanismos de interacção social, que conjuntamente com os mails, envio de sms através do telemóvel ou a participação nas redes sociais como o hi5, complementam as comunicações face a face na ausência dos intervenientes.The role of peer group in relational terms during the adolescence and how they transformed technology on a generation distinctive, through the appropriation of their potential to remain in constant contact, is the basis of this research work, focus on a specific analysis on one of these mechanisms: the blogs. The study limits the sample to a specific audience in terms of age, considering only the teenagers between 14 and 18 years. It could be considered as a specific case study within the broad universe that is diverse and the world of blogs, since they can be used in different ways and with different functions depending on age and gender of its creators. The content analysis methodology used allowed to infer that in the case of blogs created by teenagers, they are opportunities for reflection, sharing and interaction, sharing expressions, discuss emotions, personal tastes and trends that previously belonged to the private but currently they are mechanisms of social interaction, which together with emails, sms on mobile phone or participating in social networks like hi5, communications complement face-to-face in the absence of players

The dynamics of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis: exploring the biological basis of multi- and extensively drug resistant tuberculosis (MDR/XDRTB) as a route for alternative therapeutic strategies

Estirpes de Mycobacterium tuberculosis multi- e extensivamente resistentes, constituem uma ameaça para a saúde humana. O principal objectivo desta Tese foi estudar os fenómenos subjacentes ao desenvolvimento da resistência em M. tuberculosis, de modo a ser possível desenvolver estratégias para reduzir o seu desenvolvimento. Iniciamos o estudo com a descrição da base molecular da resistência aos antibacilares em estirpes clinicas de M. tuberculosis circulantes em Lisboa, através da determinação dos seus padrões de resistência e sua correlação com as mutações associadas à resistência. Os resultados mostraram uma clara correlação entre a presença de uma mutação e o fenótipo de resistência. A descrição dos perfis de resistência de estirpes resistentes aos antibacilares adiciona nova informação para o desenvolvimento de metodologias mais eficazes para o diagnóstico e tratamento da tuberculose. De seguida, avaliamos a contribuição dos sistemas de efluxo para o desenvolvimento da resistência aos antibacilares em M. tuberculosis. O estudo baseou-se na indução in vitro de um fenótipo de resistência à isoniazida por exposição prolongada de estirpes de M. tuberculosis à concentração crítica de isoniazida. Os resultados mostraram que o aumento da actividade de bombas de efluxo permite a manutenção de uma população resistente num doente em tratamento, da qual irão emergir mutantes geneticamente resistentes. A utilização de compostos inibidores de efluxo demonstrou ser capaz de reduzir este nível de resistência. Por último estudamos o mecanismo de acção dos compostos inibidores do efluxo, que partilham a característica comum de serem inibidores de canais iónicos, verapamil, tioridazina, clorpromazina, flupentixol e haloperidol, quer in vitro quer ex vivo. Todos os compostos apresentaram actividade sinérgica inibitória em combinação com os principais antibacilares de primeira linha e foram capazes de inibir o efluxo activo demonstrando o seu papel como inibidores de efluxo. Igualmente demostraram potente actividade bactericida que pôde ser correlacionada com a diminuição nos níveis de ATP intracelulares. Foi também detectada sobrexpressão de genes de efluxo em resposta à exposição aos antibióticos in vitro e ex vivo, indicando que a resistência aos antibióticos em macrófagos é também mediada pela sobrexpressão de bombas de efluxo, a qual pode ser inibida por inibidores de efluxo. Os compostos estudados potenciaram a actividade antimicrobiana de macrófagos infectados e induziram a acidificação do fagolisosoma, com consequente expressão de hidrolases lisossomais. Com estes resultados, foi possível propor, como mecanismo de acção para estes compostos, a inibição da cadeia respiratória micobacteriana. Esta inibição leva à dissipação do potencial de membrana, depleção de ATP, a produção de radicais de oxigénio e morte celular. Por outro lado, e em simultâneo, a disrupção da força motriz protónica (PMF) resulta na inibição dos sistemas de efluxo que dela dependem, promovendo assim a retenção dos antibióticos sujeitos a efluxo activo. No que se refere a célula hospedeira, a acidificação phagosomal estimulada por estes compostos actua em sinergismo com vários componentes da resposta imunitária do hospedeiro, restringindo assim o crescimento intracelular de M. tuberculosis. No contexto geral, demonstramos que estes compostos possuem dupla acção, uma vez que actuam quer na bactéria quer na célula hospedeira. Este trabalho contribuiu para o aumento do conhecimento sobre a resistência aos antibióticos em M. tuberculosis. O estudo do mecanismo de acção destes compostos poderá contribuir para o desenvolvimento de novos compostos e pode servir de base para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para combater a tuberculose e em particular as suas formas multirresistentes.Mycobacterium tuberculosis strains with multi- or extensive drug resistance are a major threat for human health. The main objective of this thesis was to understand the basis of the development of resistance in M. tuberculosis, in order to design strategies to circumvent its development. First we started with the description of the molecular basis of drug resistance in M. tuberculosis clinical strains circulating in Lisbon through the determination of their resistance patterns and its correlation with mutations associated with resistance. The results showed a clear correlation between the presence of conserved mutation and the resistance phenotype. The description of the resistance profiles of drug resistant strains adds new knowledge for the design of more effective tools for the diagnosis, treatment and management of tuberculosis. Next, was investigated the contribution of efflux to the emergence of drug resistance in M. tuberculosis. The study was based on the in vitro induction of an isoniazid resistant phenotype by prolonged serial exposure of M. tuberculosis strains to the critical concentration of isoniazid. The results showed that the increased activity of efflux pumps allows a sustainable resistant population to be maintained in the patient under therapy, from which genetically resistant mutants will emerge. The addition of an efflux inhibitor is able to reduce this level of resistance. Finally, the mechanism of action of the ion channel blockers and inhibitors, verapamil, thioridazine, chlorpromazine, flupenthixol and haloperidol, was evaluated both in vitro and ex vivo. All compounds exhibit synergistic inhibitory activities when combined with the main first line antituberculosis drugs, demonstrating their role as efflux inhibitors and displaying rapid and high killing activity that could be correlated with a decrease in intracellular ATP levels. Overexpression of efflux genes was detected in response to antibiotics in vitro and ex vivo, indicating that drug resistance within macrophages is also mediated by the expression of efflux pumps that can be inhibited. The compounds lead to a decrease in the intracellular mycobacterial load as a result of their ability to induce phagosome acidification with consequent expression of lysosomal hydrolases. We hypothesized that these compounds inhibit the mycobacterial respiratory chain which leads to the dissipation of membrane potential, depletion of ATP, reactive oxygen species generation and cell death. Disruption of the proton motive force (PMF), results in the inhibition of PMF-dependent efflux systems, therefore promoting the retention of antibiotics subject to active efflux. Concerning the host cell, the phagosomal acidification stimulated by these compounds synergize with several components of the host immune response, restricting M. tuberculosis intracellular growth. Altogether, we demonstrate that the compounds display a dual inhibitory effect as they target both the bacteria and the host cell. This thesis aims to contribute to the knowledge on M. tuberculosis drug resistance mechanisms. The understanding of the activity of the studied compounds will contribute for the design of new drugs and can provide the basis for the development of new therapeutic strategies to fight drug resistant tuberculosis

On the Order Type of Scattered Context-Free Orderings

We show that if a context-free grammar generates a language whose lexicographic ordering is well-ordered of type less than $\omega^2$, then its order type is effectively computable.Comment: In Proceedings GandALF 2019, arXiv:1909.05979. arXiv admin note: text overlap with arXiv:1907.1157

Justiça Preventiva : uma abordagem diferenciada para a litigiosidade

A percepção de que ao Estado incumbe corrigir as injustiças tem orientado, desde sempre, a estruturação e o funcionamento dos órgãos talhados a tal mister. Além disso, o cumprimento dessa missão privilegia a utilização de um instrumental cuja essência se mantém intocada há muito, centrada na resolução de toda sorte de conflitos por meio de procedimento ritualístico e dialético predominantemente percorrido em juízo. Ocorre que essa modelagem denota sinais de fadiga, mormente à vista do descompasso entre a estrutura judiciária, cada vez mais limitada financeiramente perante a concorrência de novas demandas sociais, e a exponencial judicialização de contendas. Ademais, a insistência na expansão orgânica das cortes e reformas legislativas processuais de cunho abreviador, apostas até então prevalentes para a modernização da prestação jurisdicional, não estão a surtir efeitos capazes de reequilibrar a balança. Segue daí a pertinência em reflexionar sobre novos rumos no enfrentamento da conflituosidade, à guisa de alternativa ao apressamento procedimental – muita vez em flerte com a diminuição de garantias fundamentais inerentes ao tempo do processo –, bem como à majoração de gastos estruturais. Conquanto seja o conflito inerente às relações interpessoais, seu potencial nocivo não deve depender de uma abordagem unicamente sanativa da justiça estatal, por mais célere e justa que se possa apresentar. Nessa ordem de ideias, é factível introduzir a prevenção como inédita opção, com base na investigação e compreensão de matrizes litigiosas, com o fito de conceber fórmulas hábeis a impedir sua proliferação ou filtrar sua judicialização: nada além de aplicar ao sistema de justiça preceitos consagrados em outras atividades estatais de semelhante estatura, tal como ocorre no trato da saúde, da educação ou da segurança públicas. Perante uma litigância exacerbada, o desenvolvimento dessa proposição acautelatória enaltece uma indispensável atuação sinérgica dos Poderes para a consecução de políticas públicas voltadas ao redimensionamento no volume de dissensões que, invariavelmente, socorrem-se da resposta jurisdicional. Para tanto, advoga-se cumprir também a cada Poder, sem prejuízo das responsabilidades correlatas a cada qual, identificar incoerências na legislação, ações ou omissões administrativas e instabilidade jurídica contributivas ao brotamento de litígios, para colorir alguns exemplos, radiografar essas incumbências propiciará aperfeiçoamento importante de gestões conjuntas à superação do problema. Outro elemento imprescindível à edificação da tese preventiva resulta da prospecção do ônus do Poder Judiciário de operar sua legitimidade extravasante à função jurisdicional no exercício de condutas administrativas de índole precautelar, hábeis a inaugurar ou capitanear projetos interinstitucionais de enfrentamento da litigiosidade. Essa ordem de ideias, contudo, determina aprofundada investigação acadêmica, designadamente à luz do Direito Público. Com efeito, a inexistência de estudos interessados em descortinar uma abordagem preventiva no enfrentamento da conflituosidade impõe cuidada construção teórica capaz de sustentar a singularidade do tema. Para mais, a imersão em conceitos elementares ao Direito Constitucional e ao Direito Administrativo é capital ao validamento dogmático do argumento de corresponsabilidade entre os Poderes, bem como da abonação da promoção e direção de políticas públicas pelo Judiciário. Nessa linha estará pautada a proposta de justiça preventiva, complementária da atuação jurisdicional, que doravante estará correlacionada com a justiça judicial, em prol de otimizar a justiça estatal como um todo. Sob a premissa de quebrantar fontes conflituais ou oferecer ferramentas suasórias de contraestímulo à judicialização, fia-se como escopo da prevenção contribuir para um ambiente social pacífico e solidário, tendo como produto mediato a preservação das instituições judiciárias por meio do equacionamento na demanda