Pathogen- and Host-Directed Antileishmanial Effects Mediated by Polyhexanide (PHMB)

BACKGROUND:Cutaneous leishmaniasis (CL) is a neglected tropical disease caused by protozoan parasites of the genus Leishmania. CL causes enormous suffering in many countries worldwide. There is no licensed vaccine against CL, and the chemotherapy options show limited efficacy and high toxicity. Localization of the parasites inside host cells is a barrier to most standard chemo- and immune-based interventions. Hence, novel drugs, which are safe, effective and readily accessible to third-world countries and/or drug delivery technologies for effective CL treatments are desperately needed. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS:Here we evaluated the antileishmanial properties and delivery potential of polyhexamethylene biguanide (PHMB; polyhexanide), a widely used antimicrobial and wound antiseptic, in the Leishmania model. PHMB showed an inherent antileishmanial activity at submicromolar concentrations. Our data revealed that PHMB kills Leishmania major (L. major) via a dual mechanism involving disruption of membrane integrity and selective chromosome condensation and damage. PHMB's DNA binding and host cell entry properties were further exploited to improve the delivery and immunomodulatory activities of unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotides (CpG ODN). PHMB spontaneously bound CpG ODN, forming stable nanopolyplexes that enhanced uptake of CpG ODN, potentiated antimicrobial killing and reduced host cell toxicity of PHMB. CONCLUSIONS:Given its low cost and long history of safe topical use, PHMB holds promise as a drug for CL therapy and delivery vehicle for nucleic acid immunomodulators

Enrichment of stirred yogurts with folic acid encapsulated in pH-responsive mesoporous silica particles: Bioaccessibility modulation and physico-chemical characterization

[EN] In this work, we have studied the ability of a mesoporous silica support loaded with folic acid and functionalized with amines (S1) to modulate the bioaccessibility of the vitamin after its incorporation in stirred yoghurts with different fat contents. Due to the novelty of using mesoporous silica supports in food matrixes, the influence of S1 addition on the physicochemical, rheological and lactic acid bacteria viability of these yoghurts during 21 days of refrigerated storage at 4 °C was also evaluated. The in vitro digestion procedure showed that S1 was capable of inhibiting the release of folic acid in acidic solution at pH 2 (stomach) and controllably release their contents in neutral pH (intestine), thereby modulating the bioaccessibility. Moreover, the physicochemical and microbiological assays revealed that enrichment generally does not alter the physicochemical properties (pH, colour, syneresis and rheology) of either type of yoghurt and does not cause any effect on lactic acid bacteria survival.Authors gratefully acknowledge the financial support from the Ministerio de Economia y Competitividad (Projects AGL2012-39597-C02-01, AGL2012-39597-C02-02 and MAT2012-38429-C04-01) and the Generalitat Valenciana (project PROMETEO/2009/016). E.P.E. and M.R.R. are grateful to the Ministerio de Ciencia e Innovacion for their grants (AP2008-00620, AP2010-4369). Electron Microscopy Service of the UPV is also acknowledged.Pérez-Esteve, É.; Ruiz Rico, M.; Fuentes López, A.; Marcos Martínez, MD.; Sancenón Galarza, F.; Martínez-Máñez, R.; Barat Baviera, JM. (2016). Enrichment of stirred yogurts with folic acid encapsulated in pH-responsive mesoporous silica particles: Bioaccessibility modulation and physico-chemical characterization. Food Science and Technology. (72):351-360. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2016.04.061S3513607

Uso de Candida utilis para revalorización de cascarilla obtenida en el beneficio de café

Con la finalidad de efectuar la transformación de desecho-cascarilla obtenida en el beneficio de café a un producto de valor agregado se llevó a cabo un enriquecimiento proteico. Con el fin de disminuir y/o prevenir problemas de contaminación ambiental se propone el uso de este subproduto como materia prima para el enriquecimiento mediante el crecimiento de levadura Candida utilis. La caracterización en composición del sustrato mediante pruebas de humedad, proteína, pH y azúcares permitió denotar a la materia prima como sujeto para enriquecimiento proteico que proporcionara una fuente alternativa de proteína, energía y fibra. El estudio del proceso de crecimiento y desarrollo microbiano en medio líquido arrojó 72 hrs. como tiempo óptimo del proceso de generación del inóculo. Al valorarse los efectos de humedad, densidad de carga y concentración inicial en el proceso de enriquecimiento en un reactor intermitente (lecho sólido) se obtuvo que las mejores condiciones para el enriquecimiento, dado un porcentaje de proteína inicial de ~0.9%, fueran las siguientes: Humedad de sustrato = 80% Concentración celular inicial (inóculo) = 2.1 % Densidad de Carga = 18 kg/m2 El porcentaje de enriquecimiento proteico alcanzó entre 8.0 y 9.0% al concluir la experimentación a estas condiciones. Palabras clave: Candida utilis, proteína, microbiología, desecho café

Modelo macrófago humano-amastigote para la identificación de aislados quimio-resistentes de leishmania, prueba de concepto

Introduction: This work used a human-amastigote macrophage model as a tool to recreate in vitro infection caused by isolates from patient’s with therapeutic failure and assess its usefulness in the identification of chemo-resistant Leishmania isolates. Objectives: (1) Evaluate in vitro a human-amastigote macrophage model and (2) determine its usefulness in the identification of Leishmania isolates with chemo-resistant phenotype. Methods: A purification protocol based on the ability of monocytes to adhere to plastic was evaluated. Monocytes purified from human blood were infected with metacyclic promastigotes of reference species and Leishmania isolates from three patients with antimonial therapeutic failure. The percentage of initial infection and the leishmanicidal effect of glucantime, amphotericin-B and pentamidine were determined; the leishmanicidal capacity was correlated with the levels of nitric oxide production in each condition studied. Results: Results suggest that the human-amastigote macrophage model recreates in vitro the infection caused by reference species, or isolates from patients with therapeutic failure. In addition, they suggest that (1) an effective IC50 for glucantime and pentamidine could not be defined in monocytes infected with the isolate VE98MR and (2) an effective IC50 for pentamidine but nor for glucantime could be defined in monocytes infected with the isolate VE96ZC. On the contrary, an effective decrease in the percentage of infection susceptible to amphotericin-B was observed for all isolates and reference strains. The leishmanicidal effect did not correlate with significant increases in nitric oxide production. Conclusion: The human-amastigote macrophage model used constitutes a proof of concept to identify as potentially chemo-resistant isolates L. (L.) amazonensis (VE98MR) and L. (L.) mexicana (VE96ZC), but not L (L.) amazonensis (VE2000MM).Introducción: Este trabajo utilizó un modelo macrófago humano-amastigote como herramienta para recrear in vitro la infección causada por aislados de pacientes con fracaso terapéutico y valorar su utilidad en la identificación de aislados de Leishmania con fenotipo quimio-resistente. Objetivos: (1) Evaluar un modelo in vitro de macrófago humano-amastigote y (2) Determinar su utilidad en la identificación de aislados de Leishmania con fenotipo quimio-resistente. Métodos: Se evaluó un protocolo de purificación basado en la capacidad de los monocitos de adherirse al plástico. Monocitos purificados de sangre humana fueron infectados con promastigotes metacíclicos de especies de referencia y aislados de Leishmania de tres pacientes con falla terapéutica a antimoniales. Se determinó el porcentaje de infección inicial y el efecto leishmanicida de glucantime, anfotericina–B y pentamidina; se correlacionó la capacidad leishmanicida con los niveles de producción de óxido nítrico en cada condición estudiada. Resultados: Los resultados sugieren que el modelo macrófago humano-amastigote empleado recrea in vitro la infección causada por especies de referencia, o con aislados de pacientes con fracaso terapéutico. Adicionalmente sugieren que en monocitos infectados (1) con el aislado VE98MR no puede definirse una IC50 para glucantime ni para pentamidina y (2) con el aislado VE96ZC no puede definirse una IC50 para glucantime mas si para pentamidina. De igual forma, se evidencia una disminución efectiva del porcentaje de infección susceptible a anfotericina-B, para todos los aislados y cepas de referencia. El efecto leishmanicida no se correlaciona con aumentos significativos de la producción de óxido nítrico. Conclusiones: El modelo macrófago humano-amastigote empleado constituye una prueba de concepto que permitió identificar como aislados potencialmente quimio-resistentes a L. (L.) amazonensis (VE98MR) y L. (L.) mexicana (VE96ZC), mas no al aislado L. (L.) amazonensis (VE2000MM)

SIMULACIÓN DE UNA TRASFORMACIÓN DE UN SISTEMA ASIMÉTRICO TRIFÁSICO A UN SISTEMA ROTORICO DE DOS EJES

Este artículo presenta la simulación, utilizando una herramienta computacional, mediante un modelo para la transformación de variables trifásicas a sistemas de referencia qd0 estacionarios y rotacionales, con el uso de simulaciones computacionales. Este modelo se basa en las transformaciones clásicas de Clarke y Park de la transformación de las corrientes de un sistema asimétrico trifásico a un sistema de dos ejes estacionario y de este último a uno rotatorio, para su estudio tanto en condiciones estables como transitorias, para la componente fundamental o un múltiplo de esta. Luego de la transformación, el comportamiento de las componentes fasoriales obtenido al aplicar las Transformaciones qd0, así como del orden del armónico presente en la variable bajo estudio. se graficarán la forma de onda de las componentes obtenidas para su análisis y discusión. El método empleado es el método de las Componentes Simétricas