Beyond Non-Linearity: Tracing 'Pulp Fiction'’s Structure and Meaning

This article, inspired by Taborda-Hernández’s audiovisual essay, examines Pulp Fiction’s non-linear narrative and its role in the story that is told. Quentin Tarantino’s 1994 masterpiece transformed cinematic storytelling by deviating from traditional narrative structures. Tarantino’s non-linear approach mirrors the deliberate fragmentation seen in postmodern literature, eliciting diverse audience interpretations. Taborda-Hernández’s audiovisual essay delves into Tarantino’s departure from linear storytelling, introducing an experimental linear perspective that prompts inquiries into the story’s efficacy in both linear and non-linear frameworks. This exploration highlights the complex interplay between narrative, characters, and the film’s non-linear structure. Thematic depth within non-linear storytelling enriches the viewing experience prompting reflection on the complex interweaving of human existence and morality, echoing Pulp Fiction’s multi-layered structure. This article contends that the film not only promoted but successfully achieved a continuous dialogue between the audience and the filmmaker, catalyzed by the film’s use of a non-linear structure and its consequential effects

Healthy Track : healthy route recommendation

Tese de Mestrado, Informática, 2022, Universidade de Lisboa, Faculdade de CiênciasExistem atualmente vários sistemas de recomendação de caminhos (Waze, Google Maps, etc.) que oferecem ao utilizador sugestões de caminhos entre duas localizações, com suporte para diversos meios de deslocação. Estes sistemas sugerem um ou mais caminhos tipicamente com base em critérios de distância e tempo, i.e., recomendam o(s) caminho(s) mais curto(s)/mais económico(s), por norma não integrando outros critérios da preferência e relevância para o utilizador. Nos percursos pedestres em ambientes urbanos é frequente que a escolha do utilizador não seja baseada no caminho mais curto ou mais rápido, privilegiando outros critérios, como por exemplo, níveis baixos de poluição, jardins e vegetação, segurança e iluminação. O objetivo do presente trabalho é desenvolver um sistema de recomendação de percursos pedestres, entre dois pontos num mapa, considerando múltiplos critérios relevantes e as preferências do utilizador. As contribuições deste trabalho incluem: uma revisão do estado da arte dos sistemas de recomendação, especificamente dos sistemas de recomendação de caminhos e da literatura existente sobre a navegação pedestre, com foco nas preferências dos pedestres nos seus caminhos e com uma discussão de sistemas de recomendação de caminhos pedestres existentes; a base de dados HealthyTrack, que armazena dados geográficos correspondentes a diferentes aspetos da cidade de Lisboa utilizados no cálculo de caminhos saudáveis, e que contém a funcionalidade de recomendação de caminhos com uso da extensão PgRouting; a aplicação web HealthyTrack, que fornece uma interface com mapas interativos, com utilização da biblioteca LeafletJS (uma biblioteca Javascript ou JS de mapas interativos), e permite a interação com o serviço de recomendação de caminhos, para sugerir caminhos saudáveis aos utilizadores. Inicialmente, foi realizada uma pesquisa sobre a taxonomia dos sistemas de recomendação e uma revisão do estado da arte nesta área. Os sistemas de recomendação dividem-se em 3 tipos, de acordo com a sua abordagem de recomendação: recomendações baseadas em conteúdo, onde itens recomendados ao utilizador são similares aos que preferiu no passado; recomendações baseadas em colaboração, onde os itens recomendados são aqueles que utilizadores com preferências semelhantes preferiram no passado; recomendações baseadas numa abordagem híbrida, que combina ambos os métodos anteriores. Todas estas abordagens têm as suas vantagens e desvantagens, derivadas da sua natureza. Cada uma das abordagens pode, inclusive, ser progressivamente dividida em dois tipos de técnicas de recomendação para estimativa de classificação, baseando-se em heurísticas ou modelos, e por tipo de avaliação, baseado em previsão de ranking (classificações implícitas, como cliques em links) ou regressão de classificações (classificações explícitas, como escalas de classificação de 1 a 5 para filmes, por exemplo). Depois foi efetuada uma revisão da literatura existente na área dos sistemas de navegação pedestre, para perceber as necessidades e preferências dos utilizadores nos seus caminhos. No estudo de (Golledge, 1994) reuniram-se 32 adultos que, na primeira fase em laboratório, traçaram o que achavam ser o melhor caminho no mapa de uma zona conhecida desde um ponto A a B, e na segunda fase, no terreno, percorreram um caminho de ida e volta nessa mesma zona sem recurso do mapa. Este estudo tem como objetivo perceber como os pedestres mapeiam e desenham caminhos sem recurso a guias (mapas, GPS) e quais os critérios que os pedestres consideram quando percorrem um caminho, para além da distância. O estudo realizado pelos autores (Borst et al., 2009) analisa a influência do ambiente nos caminhos de pessoas idosas, feito com um grupo de idosos residentes de 3 distritos urbanos da mesma cidade, com criação de um modelo sobre esta influência. Era lhes pedido que traçassem o caminho que normalmente percorrem nas suas viagens para 3 tarefas diferentes. Cada caminho traçado foi comparado com outros caminhos alternativos para o mesmo destino, construídos baseados em diferentes qualidades ao longo dos caminhos. No estudo de (Rodríguez et al., 2015) é feita uma análise sobre a influência do ambiente nos caminhos de raparigas adolescentes, dividida em dois grupos, um de uma área menos suburbana, com maior densidade populacional e mais pobreza, e outro local com condições inversas. Primeiro, os autores definiram “variáveis de qualidade” com base na literatura prévia, as quais caracterizam um caminho, dependentes de métricas que correspondem a diferentes aspetos dos caminhos. Por fim, cada segmento dos caminhos percorridos foi comparado com segmentos alternativos dos caminhos automaticamente gerados com uso de um algoritmo de procura. Em (Czogalla & Herrman, 2017), similarmente aos dois estudos anteriores, foi criado um modelo sobre o processo de decisão de viagem pedestre, com uma introdução do conceito de “atributo de qualidade pedestre”, ou PQA (pedestrian quality atribute), e a sua avaliação por fatores para análise das necessidades de qualidade de viagens pedestres. Este PQA corresponde à soma dos subatributos de qualidade de um caminho. De acordo com estes estudos, pode-se concluir que existe uma preferência dos pedestres por caminhos mais curtos, mais esteticamente atrativos, próximos a zonas verdes, com maior segurança e menor complexidade (menor número de cruzamentos). Seguidamente, foram analisados sistemas de recomendação de caminhos semelhantes àquele planeado para este projeto. O projeto documentado em (Fernandes, Carvalho, & Rito Lima, 2019) descreve um protótipo de um sistema de recomendação para cidades inteligentes, dependente de dados de sensores obtidos em tempo-real, com uso de uma rede de sensores sem fio (RSSF) simulada na plataforma Cupcarbon, uma plataforma open-source de simulação IoT, e para o qual reuniram um número de atributos do caminho que consideraram importantes para o sistema. Em (Ramos, Trilles, Muñoz, & Huerta, 2018), é descrita uma metodologia technology-agnostic para recomendar caminhos livres de poluição, também constituída por uma RSSF, neste caso, de qualidade de ar. Esta metodologia envolve uma análise de vários índices de qualidade de ar, a criação de um novo índice específico ao problema, e a seleção de um modelo de interpolação para criar um conjunto de “obstáculos” que representam as áreas com pior qualidade de ar da cidade de Madrid, que o sistema ignora, desenhando caminhos que evitam estas zonas Outro sistema apresentado em (Novack, Wang, & Zipf, 2018) foi implementado com o intuito de gerar caminhos pedestres “agradáveis” e personalizáveis pelos utilizadores. Este sistema utiliza dados do OpenStreetMap (OSM) para caracterizar cada segmento e um algoritmo de procura para gerar caminhos multiobjectivo, ao unir os atributos do caminho numa única fórmula de custo que considera os pesos de cada atributo, definidos pelo utilizador. Estes projetos também ajudaram a reunir os requisitos dos sistemas sobre as preferências dos pedestres, tal como mencionado anteriormente, nomeadamente, a iluminação, menor complexidade dos caminhos e fatores ambientais (como a qualidade de ar e temperatura). Paralelamente, foram analisadas APIs e bibliotecas de mapas interativos para JS, já que um dos objetivos deste projeto é construir uma interface web para o sistema HealthyTrack. Com uso da API dos Google Maps, foram criadas umas páginas web com mapas, para testar o uso de ferramentas de mapas interativos na web. Por fim, foi decidido que seria melhor usar Leaflet para implementar as funcionalidades de mapas interativos da aplicação. Depois disto, foi implementada a base de dados PostgreSQL HealthyTrack, com instalação da extensão PostGIS (para a gestão de dados geográficos). Selecionou-se esta base de dados por ser a solução mais popular para armazenar dados geográficos (com possibilidade de extensão com outras funcionalidades GIS). Esta base de dados contém as tabelas com os dados necessários para armazenar aspetos dos caminhos que são essenciais para as recomendações, tais como a tabela de dados de qualidade de ar e a tabela com as localizações das zonas verdes de Lisboa. Contém também a rede de estradas utilizada para criar os caminhos, que serão criados com uso dos segmentos de rua desta tabela. O sistema de recomendação de caminhos tem por base um algoritmo de pathfinding (procura de caminhos), utilizado para a construção de caminhos com uso da extensão PgRouting, na base de dados. Com esta extensão, a rede de estradas pode ser transformada num grafo, para depois se fazerem queries de modo a obter caminhos mais curtos. Para visualizar os resultados das queries de caminhos o PgRouting foi instalado também no QGIS, que foi utilizado, em geral, para facilitar a gestão de dados do sistema. Finalmente, foi implementada a aplicação web para o sistema HealthyTrack, baseada em NodeJS, com uso de ExpressJS que fornece o serviço de recomendação de caminhos. Com uso do Leaflet no lado cliente, os mapas interativos e resultados de pedidos de recomendação de caminhos são apresentados. Por fim, foram realizadas umas experiências onde a funcionalidade de recomendação de caminhos pelo sistema HealthyTrack foi validada, sendo possível verificar que os caminhos mais verdes e mais limpos são normalmente distintos dos caminhos mais rápidos, priorizando os critérios de qualidade respetivos. Para concluir e refletir sobre o possível trabalho futuro nesta área, possíveis avanços incluem melhorar as fórmulas de custo, já que estas são algo rudimentares, explorar outros fatores de qualidade de caminho, como por exemplo, níveis de iluminação das ruas (abrangido pelo critério de segurança), estética dos caminhos, fatores tais como meteorologia e hora do dia (que poderiam ser utilizados, por exemplo, de dia, para evitar exposição excessiva a raios UV, ou para evitar a chuva nos caminhos, e para priorizar níveis altos de iluminação a noite), complexidade dos caminhos (número de cruzamentos), qualidade e declive do piso (especialmente em subidas) e níveis de poluição sonora. Para além disto, também se poderia explorar a possibilidade de o utilizador adicionar múltiplas paragens a um caminho. Outro aspeto a investigar no futuro poderia ser a combinação de vários critérios numa só fórmula de custo, como foi feito no sistema implementado por (Novack et al., 2018), com possibilidade de personalização por parte do utilizador dos seus caminhos. Por fim, aspetos a melhorar na interface da aplicação web ou a adicionar a futuras interfaces incluem a adição de um tutorial para uso das funcionalidades e para contexto sobre cada caminho, e mostrar informação sobre cada caminho quando se faz hover ou clique por cima deste, por exemplo (informação sobre o tempo de viagem, complexidade do caminho, etc.), dando especial importância em informar sobre a vantagem de escolher esse caminho (mais limpo, mais verde, etc.).Currently, there exist many route recommendation systems, e.g., Waze, Google Maps, among others, which offer the user suggestions for routes between two locations, supporting several means of transportation (e.g., car, foot and public transportation). These systems propose one or more routes often based on distance, cost and duration criteria, i.e., they recommend the fastest and/or most economic route(s) (where gas cost, toll charging and/or ticket purchasing is considered). Additionally, these systems may rely on other route characteristics, such as real-time traffic information, to improve the quality of recommendation provided to the user. These general use route recommender systems, which are very focused on public and private transportation, are, however, limited to economic criteria, disregarding other types of preference criteria for the user. For pedestrian courses in urban surroundings, it’s common that the user’s choice of route isn’t the fastest/most direct/most economic, as they often prioritize other criteria, favoring routes where they are exposed to lower levels of pollution, more fresh air, vegetation and aesthetic scenery and, especially at night, less safety hazards and more lighting. The goal of this project is to develop a route recommendation system for pedestrian courses, between two points on a map, considering multiple relevant criteria and users’ preferences. The developed system, called HealthyTrack, allows the user to request route recommendations from two points selected on the map, presenting the user with a faster route and two alternatives, a route that prioritizes air quality and another that prioritizes proximity to green spaces. This solution is focused on promoting the health of pedestrians and is based on their preferences and needs

A alienação escolar como fator preditor dos problemas de comportamento em alunos do 2º e 3º ciclo de escolaridade

Dissertação de mestrado em Psicologia da Educação, Desenvolvimento e Aconselhamento, apresentada à Faculdade de Psicologia e de Ciências da Educação da Universidade de CoimbraAo constructo de alienação está associado a falta de um sentimento de pertença, uma separação de quatro mundos: a família, os amigos, o trabalho e a escola (Bronfrenbrenner, 1986). A presente investigação procura perceber as características e expressões desta condição em contexto escolar, assumindo como objetivo principal o estudo da relação entre a alienação escolar e os problemas de comportamento, bem como a existência de um valor preditivo da alienação face a estes mesmos problemas. Para tal, recolheu-se uma amostra de 410 sujeitos (56.6% do sexo feminino e 43.4% do sexo masculino), entre os 10 e os 15 anos (M= 12.88; DP=1.44). O instrumento eleito para avaliar as dimensões da alienação face à escola foi a Escala de Alienação Escolar (EAE), e para a avaliação dos problemas de comportamento, de cariz externalizante e internalizante, utilizou-se o Questionário de Capacidades e Dificuldades (SDQ-Por), um instrumento de autorrelato que visa analisar a forma como o adolescente perceciona o seu comportamento. Os resultados obtidos sugeriram, uma associação entre a alienação escolar e os problemas de comportamento, particularmente com os de tipo externalizante. As variáveis sociodemográficas que mais parecem predizer esta relação são o sexo, com os rapazes a apresentar pontuações mais elevadas; a idade, com os adolescentes mais velhos (13-15 anos) a mostrarem-se mais propensos; e o nível socioeconómico, com adolescentes oriundos de um nível socioeconómico baixo e cujos pais se encontram desempregados a obter scores mais altos. Deixa-se em aberto para estudos futuros uma compreensão mais profunda da relação entre a alienação escolar e os problemas de cariz internalizante, visto que não se registaram associações estatisticamente significativas. Também o papel do comportamento pró-social enquanto variável protetora na expressão do problema levanta questões a explorar.The alienation construct is associated to a lack of belonging, a four world’s separation: family, friends, work and school (Bronfrenbrenner, 1986). This investigation aims to understand the characteristics and expressions of this condition in school context, assuming as main goal the study of the relation between school alienation and behavioral problems, as well as the existence of an alienation’s predictive value towards them. For that purpose, a sample of 410 subjects (56.6% female subjects and 43.4% male subjects), between ages 10 and 15 (M=12.88; SD=1.44). The selected instrument to evaluate alienation dimensions towards school was the School Alienation Scale (EAE). To evaluate externalizing and internalizing behavioral problems, the Strengths & Difficulties Questionnaire (SDQ) was used, a self-report instrument to analyse how the adolescent perceives his/her behavior. The obtained results do suggest an association between school alienation and behavioral problems, specially with the externalizing type. The sociodemographic variables which seems to better predict this relation are sex, with boys presenting higher scores; age, with the oldest teens (13-15 years) obtaining higher scores; and sociodemography, with adolescents coming from a low socioeconomic status and which parents are currently unemployed, obtaining higher scores. Future studies must attend in a deeper compreension of the relation between school alienation and externalizing behavioral problems, considering the inexistence of significative statistical associations. The role of prossocial behavior as a protective variable in the problem’s expression also brings questions to explore in future works

'It’s not just Instagram models' : exploring the gendered political potential of young women’s Instagram use

With over one billion monthly users worldwide (Constine, 2018) and being embedded in the everyday lives of many young people, Instagram has become a common topic of discussion both in popular media and scholarly debates. As young women are amongst the predominant active users of Instagram (WeAreSocial, 2019) and the demographic stereotypically associated with online self-representation (Burns, 2015), Instagram carries an underlying gendered political potential. This is manifested through online political practices such as hashtag activism (Highfield, 2016), as well as through Instagram’s use of user-generated content to challenge existing politics of representation, broadening the scope of who is considered photographable (Tiidenberg, 2018). This article explores how this gendered political potential is understood by young women using Instagram. This research is based on 13 in-depth interviews with a theoretical sample of female ‘ordinary’ Instagram users (i.e., not celebrities or Insta-famous), aged 18–35. Our findings illustrate how the perception of political potential is grounded in the participants’ understanding of Instagram as an aesthetically-oriented platform (Manovich, 2017). Most participants recognised the potential for engaging in visibility politics (Whittier, 2017), representing a wider diversity of femininities often absent from popular media. However, this was seen as tempered by the co-existence of idealised beauty conventions and the politics of popularity within social media (Van Dijck & Poell, 2013). Furthermore, this political potential is accompanied by the possibility of receiving backlash or being dismissed as a slacktivist (Glenn, 2015). As Instagram becomes a central part of contemporary visual cultures, this article seeks to critically explore the nuanced ways in which young women’s everyday experiences of Instagram intersect with broader cultural and political questions of gender representation

application to adverse drug reactions investigation

Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, 2022, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.A identificação e caracterização de polimorfismos genéticos em genes envolvidos na farmacocinética e/ou na farmacodinâmica pode proporcionar um conhecimento profundo sobre as diferenças inter-individuais na resposta aos fármacos, permitindo otimizar a seleção dos medicamentos e o ajuste da dose, para uma melhoria da eficácia do tratamento e minimizando a ocorrência de reações adversas. Neste estudo, recorremos a várias metodologias (MLPA; PCR-longo e sequenciação de Sanger) para detetar variantes nos genes CYP2C19 e CYP2D6, caracterizar o seu genótipo e inferir o fenótipo num grupo de indivíduos portugueses com terapia antidepressiva e/ou antipsicótica. Estes dois genes codificam para enzimas importantes no metabolismo dos referidos fármacos. O estudo do gene CYP2C19 revelou 44,64% de metabolizadores normais, 4,46% metabolizadores ultra-rápidos, 27,68% metabolizadores rápidos, 22,32% metabolizado-res intermédios e cerca de 1% de metabolizadores lentos. Relativamente ao CYP2D6, o estudo revelou que 55,36% da população em estudo são metabolizadores normais, 12,50% são metabolizadores intermédios, cerca de 1% são metabolizadores lentos e igual percentagem são metabolizadores ultra-rápidos. Em 30,36% da população em estudo, não foi possível determinar o fenótipo. Daqui se infere que pelo menos 7% da população apresentam fenótipos extremos que implicariam optar, caso se dispusesse dos dados de farmacogenética antes do início do tratamento, por uma medicação alternativa cujas vias de destoxificação não envolvessem os genes em estudo; além disso, em mais de 50% da população estudada haveria espaço para melhoria da terapêutica com base no ajuste da dose. Permanecem dificuldades em caracterizar certos haplótipos e híbridos mais complexos com as metodologias de genética molecular mais comuns, sendo a sequenciação por nanoporo uma abordagem com potencial de solucionar o problema visto permitir, numa só corrida, fazer sequenciar, identificar variantes pontuais, e rearranjos de elevada complexidade e simultaneamente haplotipar.The identification and characterization of genetic polymorphisms in genes involved in pharmacokinetics and/or pharmacodynamics can provide in-depth knowledge about inter-individual differences in response to drugs, allowing optimization of drug selection and dose adjustment, for improvement on treatment efficacy and minimizing adverse drug reactions. In this study, we used several methodologies (MLPA; long-PCR and Sanger sequencing) to detect variants in CYP2C19 and CYP2D6 genes, to characterize their genotype and infer the phenotype in a group of Portuguese patients on antidepressant and/or antipsychotic therapy. These genes code for important enzymes involved in the metabolism of these drugs. The CYP2C19 gene study revealed 44.64% normal metabolizers, 4.46% ultra-rapid metabolizers, 27.68% rapid metabolizers, 22.32% intermediate metabolizers and about 1% of poor metabolizers. For CYP2D6, the study revealed that 55.36% of the individuals are normal metabolizers, 12.50% are intermediate metabolizers, about 1% are poor metabolizers and an equal percentage are ultra-rapid metabolizers. In 30.36% of the study population, the phenotype could not be determined. This suggests that at least 7% of the population have extreme phenotypes that would require, if pharmacogenetic data were available preemptively, an alternative medication whose detoxification pathways do not involve these two genes. Further, in more than 50% of the studied population there would be opportunity for therapeutic improvement based on dose adjustment. Difficulties remain in the characterization of more complex haplotypes and hybrids with common molecular genetic methodologies, therefore nanopore sequencing is an approach that has the potential to solve this problem, as it allows, in a single run, sequencing, identification of variants, and highly complex rearrangements, as well as haplotyping.Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge (INSA)

Development of a Cellulose Acetate Multisensorial Membrane

Biological fluids are the most measured media to monitor metabolites like glucose. Glucose measuring is important since it requires routine track for pa-tients undergoing self-testing, like patients diagnosed with pathologies that re-quire daily control of these metabolites or people who have problems with blood collection like haemophiliacs. It can prove to be painful and stressful collecting samples since most methods are invasive. The well-being and life quality of these patients can be improved by per-forming non-invasive tests to body fluids at the surface of the skin without ever losing biochemical profiling. Sweat and saliva can be collected more frequently this way, proving less painful and less stressful to the patients. By combining different biosensing functionalities in a unique membrane, in order to make it multisensorial, and integrate it in a wearable device which can be used on the skin’s surface as a band-aid, it’s possible to perform auto diagnosis keeping in mind a reduced cost policy, portability and ecology. In this work, cellulose acetate membranes, produced by electrospinning, were used in the construction of electrochemical devices and these were tested for pH and different concentrations of glucose

Anaplasma phagocytophilum and human granulocytic anaplasmosis in Portugal

Anaplasma phagocytophilum e anaplasmose granulocítica têm vindo a merecer um crescente interesse na comunidade científica, facto demonstrado pelo crescente número de publicações que surgiram nas duas últimas décadas, particularmente desde que foram documentados os primeiros casos de anaplasmose granulocítica humana (AGH). O reconhecimento da importância de A. phagocytophilum em termos de Saúde Pública na América do Norte e na Europa, associado à recente detecção do agente em Portugal, pôs em evidência a necessidade de estudos mais detalhados sobre a emergência deste Anaplasmataceae e de AGH no nosso país. Inicialmente baseado num treino metodológico em Unidades de Investigação especializadas em Anaplasmataceae, o presente trabalho permitiu a transferência da tecnologia correntemente aplicada ao estudo de A. phagocytophilum e consequentemente o desenvolvimento desta linha de investigação no Centro de Estudos de Vectores e Doenças Infecciosas, Instituto Nacional de Saúde Dr. Ricardo Jorge (CEVDI/INSA). Ao estabelecer as bases para um estudo concertado em A. phagocytophilum e AGH, este trabalho tornou possível uma abordagem abrangente a aspectos essenciais da ecobiologia deste Anaplasmaceae e da doença que lhe está associada, focando-se na identificação de potenciais ixodídeos vectores, de mamíferos envolvidos no ciclo natural do agente, quer como reservatórios quer como hospedeiros susceptíveis, recolhendo evidências que apontam para a possibilidade de exposição do homem a este agente em Portugal. Os estudos levados a cabo nos ixodídeos demonstram o envolvimento de duas espécies de Ixodes no ciclo de A. phagocytophilum, concretamente Ixodes ricinus na Ilha da Madeira e I. ventalloi no continente. A detecção de ADN do agente em I. ricinus vem reforçar estudos anteriores, sugerindo a sua persistência na Ilha da Madeira. Esta tese acrescenta ainda um novo dado ao conhecimento da história natural de A. phagocytophilum, com a primeira detecção de infecção em I. ventalloi. O facto de alguns dos artrópodes infectados terem sido obtidos a partir de gatos domésticos, não só acrescenta este mamífero à lista nacional de hospedeiros vertebrados parasitados por I. ventalloi mas sugere também o seu potencial envolvimento no ciclo de transmissão de A. phagocytophilum. A análise molecular dos dados obtidos evidencia ainda a existência de diferentes genótipos deste Anaplasmaceae nos ixodideos portugueses. As sequências nucleotídicas obtidas sugerem a proximidade genética entre A. phagocytophilum detectado em I. ricinus na Ilha da Madeira e estirpes isoladas de humanos na América do Norte, bem como de sequências detectadas na Europa Central e do Norte. No entanto estes genótipos divergem das sequências nucleotídicas obtidas a partir do I. ventalloi no continente, que representa um novo genótipo de patogenia não determinada.São também apresentadas evidências serológicas da exposição a A. phagocytophilum ou a outro agente antigenicamente semelhante em ratinhos Mus spretus, cavalos e canídeos domésticos no continente. A análise molecular das amostras biológicas obtidas a partir das populações em estudo permitiu a detecção da primeira infecção activa por A. phagocytophilum em vertebrados portugueses, com a identificação de ADN do agente num dos cavalos seropositivos. Sendo as sequências nucleotídicas obtidas semelhantes à das estirpes associadas aos casos de infecção em humanos, é reforçada uma vez mais a possibilidade de AGH ocorrer em Portugal. Esta tese refere ainda a identificação de outra Anaplasmataceae filogenicamente próxima de A. phagocytophilum - A. platys, detectada em canídeos seropositivos, evidenciando a possibilidade de ocorrerem reacções cruzadas entre estes dois agentes. Estes dados salientam a importância da vigilância em termos veterinários da ocorrência não só de anaplasmose granulocítica mas também de trombocitopénia cíclica infecciosa canina como causa de doença associada a ixodídeos em Portugal. Para averiguar a possibilidade de exposição humana a A. phagocytophilum foram realizados estudos serológicos e moleculares retrospectivos e prospectivos, em amostras biológicas recebidas no CEVDI/INSA durante 2000-2006 para o diagnóstico laboratorial de pacientes com suspeita de doença associada a ixodídeos. Os resultados provam a existência de reacções serológicas positivas na população estudada, incluindo alguns casos que satisfazem os critérios serológicos para definição de AGH, embora sem evidência de infecção activa. Adicionalmente, alguns dos doentes seropositivos apresentaram evidência de infecção causada por outros agentes transmitidos por ixodídeos ou por bactérias relacionadas, nomeadamente borreliose de Lyme, febre Q e bartonelose. Embora estes resultados possam ser interpretados como falsos positivos resultantes de reacções cruzadas, a possibilidade de se tratarem de co-infecções ou exposições anteriores a vários agentes transmitidos por ixodídeos do género Ixodes também deverá ser considerada. Em suma, estes resultados apontam para a necessidade de desenvolver o diagnóstico de A. phagocytophilum, nomeadamente no que diz respeito à aplicação de técnicas directas de detecção do agente, bem como à integração dos dados do diagnóstico laboratorial em casos de suspeita de doença associada a Ixodes spp. Embora muitos dos aspectos focados neste trabalho requeiram uma investigação mais detalhada, esta tese contribui positivamente para a compreensão das questões fundamentais relacionadas com a ocorrência de A. phagocytophilum e o seu potencial como agente de doença em Portugal. Termina-se com a esperança de que estes primeiros passos ajudem a delinear novas linhas de investigação no âmbito do estudo da anaplasmose granulocítica e outras doenças emergentes associadas a espécies do género Ixodes.Anaplasma phagocytophilum and granulocytic anaplasmosis are of increasing interest to the scientific community as indicated by the expanding number of reports published in the past two decades, and especially since the emergence of the first cases of human granulocytic anaplasmosis (HGA). The growing recognition of the Public Health importance of A. phagocytophilum in North America and in Europe, along with its recent detection in Portugal has signalled the need for more detailed studies that address the emergence of HGA and its causative agent in our country. Initially based on an methodological training in research units dedicated to Anaplasmataceae, this work enabled the transfer of technology as currently applied to A. phagocytophilum research and made possible the development of a new line of investigation at Centro de Estudos de Vectores e Doenças Infecciosas, Instituto Nacional de Saúde Dr. Ricardo Jorge (CEVDI/INSA). By establishing the foundations for concerted study on A. phagocytophilum and HGA, the work described herein has facilitated development of a broad approach toward fundamental issues in Anaplasmataceae ecobiology and disease by focusing attention on identification of potential ixodid vectors, mammals likely to be involved in the infectious agent’s life cycles either as reservoirs or affected hosts, and garnered the evidence indicating the potential for human exposure in Portugal. The studies conducted in ixodid ticks proves the involvement of two Ixodes species in A. phagocytophilum cycles, including Ixodes ricinus on Madeira Island and I. ventalloi on the mainland. The detection of A. phagocytophilum DNA in I. ricinus reinforces prior studies and suggests its persistence on Madeira Island. This thesis also adds new data to the understanding of the natural history of A. phagocytophilum by providing the first evidence of infections in I. ventalloi ticks. The fact that some infected arthropods infest domestic cats not only mandates the inclusion of these mammals on the national list of vertebrate hosts parasitized by I. ventalloi ticks, but also shows their potential complicity in A. phagocytophilum maintenance. Moreover, molecular data shows the existence of A. phagocytophilum variant genotypes in Portuguese ticks. Partial gene sequences from infected ticks demonstrates nucleotide polymorphisms that support a close relationship of A. phagocytophilum on Madeira Island I. ricinus to North American strains isolated from humans as well as genotypes detected in Central and Northern Europe. Yet, these variants diverge from those found in mainland I. ventalloi, which represents a new genotype of undetermined pathogenicity. Serological evidence of exposure to A. phagocytophilum or a close related agent is shown in Mus spretus mice, horses, and dogs in mainland. Molecular analysis of biological samples from these animal populations provides the first definitive evidence of A. phagocytophilum active infection in Portuguese vertebrates with detection of its DNA in one seropositive horse from mainland Portugal, where the A.phagocytophilum genotype found is closely related to strains isolated from humans, suggesting the potential for HGA in Portugal. This thesis further extends study to identification of another closely related Anaplasma species, and its potential for serological cross-reactions with A. phagocytophilum, as evident with the detection of A. platys DNA in seropositive dogs. These data also underscore the importance of veterinarians maintaining vigilance for detection of not only granulocytic anaplasmosis but also canine infectious cyclic thrombocytopenia as causes of tick-borne diseases in Portugal. Both prospective and retrospective serological and molecular investigations of human exposure to A. phagocytophilum were performed on samples received at CEVDI/INSA for the laboratory diagnosis of patients with suspected tick-borne diseases during 2000-2006. The results provide evidence for seropositive Portuguese patients, including cases that fulfil serological criteria for HGA, although active infections were not detected. Moreover some seropositive patients had additional evidence of other tick-borne agents or related bacteria infections, including Lyme borreliosis, Q fever and bartonellosis. Although possibly false positive cross-reactions to shared antigens, these reactions potentially could be the result of active dual infections, or past exposure to several agents transmitted by Ixodes species. Overall, these results argue for continued development of improved A. phagocytophilum diagnostics, especially direct detection techniques, and integrated analysis of diagnostic tests for patients with suspected Ixodes-borne disease. Although many aspects introduced and explored here will require expanded and more detailed investigations, this thesis contributes positively to a fundamental understanding of the extent to which A. phagocytophilum occurs in Portugal and its potential as a disease agent. It is hoped that these beginning studies will help to delineate new lines of research that more fully address granulocytic anaplasmosis and other emerging Ixodes-borne diseases