Asymmetric Synthesis of (2S, 3S)-3-Hydroxyproline and Geissman-Waiss Lactone

2-取代-3-羟基吡咯烷骨架构成了许多天然有机化合物和生物活性物质的核心结构，具有此类结构的化合物大多具有广泛的医学和生化应用前景。此外，这类化合物还可作为合成砌块，在不对称合成中有着潜在的应用价值。因此，关于这类化合物的不对称合成一直是国际上关注的具有挑战性的课题。 本实验室以天然(S)-苹果酸为手性源，开发了手性合成砌块(S)-3-羟基吡咯烷-2-酮I和(S)-苹果酰亚胺III。本论文主要目的是拓展这两个合成砌块在天然产物和药物前体不对称合成中的进一步应用。取得的主要结果如下： 首先，从吡咯烷酮I出发（图1），不经羟基保护而直接对其进行立体选择性还原氰基化(trans:cis=7:1)...2-Subtituted 3-hydroxy pyrrolidine skeletons constitute the main structural part of many natural bioactive compounds. Many of them show potential applications in medicine and biochemistry. Moreover, being useful chirons, these compounds have the prospective for applications in asymmetric synthesis, and have attracted much synthetic attention. One aim of this thesis is to expand the scope of chiro...学位：理学硕士院系专业：化学化工学院化学系_有机化学学号：20002503

金乌贼视神经节蛋白质组分离方法的初步研究

选用TCA/丙酮沉淀法、缓冲液法、柱层析法、裂解液法和裂解液-超速离心法分别提取金乌贼视神经节蛋白质,其中蛋白质得率较高的方法有裂解液-超速离心法、裂解液法,其次为TCA/丙酮沉淀法.经双向凝胶电泳分离,并采用Melanie 4 Trial软件统计蛋白质斑点数目.发现pH 5~8范围的载体两性电解质适合于分离视神经节蛋白质组,其电泳图谱中多数蛋白质斑点清晰可见,显示出高分辩率、重复性好和易取样供质谱分析的优点,适合于开展视神经节蛋白质组学研究.裂解液-超速离心法是金乌贼视神经节最佳蛋白质提取方法

蛋白质辅助基质提高激光解吸/电离多肽离子化率和绝对强度的研究

人血清转铁蛋白(Human serum transferrin,HTF)、牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)、鲨鱼肝铁蛋白(Sphyrna zygaenaliver ferritin,SZLF)、马脾铁蛋白(Horse spleen ferritin,HSF)均能辅助基质提高激光解吸/电离胰岛素(Insulin,INS)和海兔酸性多肽(Aplysiaacidic peptide,AP)离子化率和质谱峰的绝对强度(简称为绝对强度),其中绝对强度分别提高10和4倍,这一现象不依赖于INS浓度,而与蛋白质类型和结构有关.SZLF和脱铁核SZLF(apoSZLF)辅助基质提高INS绝对强度的能力几乎相同,蛋白质中的金属离子含量对这种效应无明显影响,主要取决于蛋白质的氨基酸组成与结构.采用胶内酶解和肽指纹技术(PMF)鉴定HTF过程中,发现基质中分别添加SZLF,apoSZLF和HSF后,HTF肽片段质谱检测的质谱峰数目及绝对强度均有明显增加,进一步提高了数据库鉴定HTF的可信度

拓展基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪的检测范围

选用多壁碳纳米管(CNT)作为基质辅助激光解吸电离化飞行时间(Matrix-assisted laser desorption ionization/time of flight,MALDI-TOF)质谱仪的基质,对分子量小于0.8 ku的小分子化合物进行检测,克服了MALDI-TOF MS中的基体干扰,适合进行小分子分析.实验先在正离子模式下检测氨基酸及其衍生物,在正电场条件下清晰地观察到样品的碱金属加合峰[M+K]+和[M+Na]+分子离子峰,几乎看不到加氢的离子峰[M+H]+.又在负离子模式下以CNT作为基质对氨基酸样品进行质谱分析,得到单一[M-H]-负的分子离子峰,所得到的谱图几乎没有背景干扰,信噪比高.结果证实在负离子模式下可以方便快捷地进行氨基酸检测,从而拓宽了MALDI-TOF MS的应用范围

猪胰铁蛋白释放铁和磷酸盐的动力学特性

猪胰铁蛋白(p ig pancreas ferritin,PPF)铁核由179 phosphate/PPF和1698 Fe3+/PPF组成,平均磷铁比值为1∶9.5.PFF铁核表层由较高的磷铁比组成.选用电子光谱技术研究PPF释放铁和磷酸盐全过程,发现PPF以两种不同速率途径释放铁与磷酸盐.在弱酸条件下,PPF释放铁的速率明显高于在弱碱条件下的速率,证实PPF蛋白壳的柔性调节能力强弱是控制释放铁和磷酸盐速率的重要因素之一

基质辅助激光解吸/电离质谱法研究海兔卵多肽内切酶组成、结构与功能

选择DEAE-52纤维素和Sephadex G-150为分离介质,采用柱层析法分离纯化海兔卵多肽酶(En-dopeptidease of Aplysiaegg,AEE)。选用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定AEE纯度和亚基分子量(约39kDa)。基质辅助激光解吸/电离(MALDI-TOF)质谱技术测定AEE由单类型亚基(M)组成,其m/z比值分别为12738.17、18108.79和38221.42,即分子式为[M3+]、[M2+]和[M+]。其中AEE分子量为38221.42Da(称为AEE39),是一种含金属锌的多肽酶。以胰岛素(INS)为探针,研究AEE39酶切INS能力,其酶切产物m/z比值为1449.51、2085.84、4080.41和4165.42。自行设计INS序列分析软件,鉴定AEE39酶切INS的位点,发现易酶切位点是Leu-X(氨基酸残基),其次是Glu-X,部分Phen-X、Asn-X和Ser-X结构也可以发生酶切。通过INS和海兔吸引素的分子结构比对后,指出海兔卵中的AEE39主要功能之一是负责酶切海兔吸引素,起着海兔之间信息交往、召唤、识别和交配的重要作用。AEE39具有酶切酸性多肽(acidic pep-tide,AP)中Leu-Leu的能力,属于一种广谱性多肽内切酶

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术研究人血清转铁蛋白稳定性及裂解产物

制备质谱纯人血清转铁蛋白(HTF),供分子结构分析。选用SDS-PAGE、胶外酶解、基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)、数据库检索和比对技术鉴定铁饱和HTF、双铁HTF(HTF-2Fe3+)、单铁HTF(HTF-Fe3+)和脱铁HTF(apoHTF)的稳定性和裂解产物。以乙腈溶液作为洗脱相,发现铁饱和HTF在RP-HPLC分离纯化过程中产生裂解现象。铁饱和HTF和HTF-2Fe3+经乙腈处理后均能产生不同分子量的短肽裂解产物,指出HTF结构稳定性与络合铁离子数量有关。铁组分改善了HTF分子结构的稳定性。采用比对法,研究在乙腈作用下HTF裂解成为各种各样短肽的规律,初步阐明其裂解机理。在乙腈作用下,HTF可能通过蛋白质去折叠途径,形成不同多聚态HTF或多肽裂解产物。推测目前用于临床诊断先天性糖基化紊乱(CDG)和慢性酒精滥用(CAA)疾病低准确率的起因可能是受HTF裂解产物或多聚体的干扰

优化海兔肝蛋白质组提取与分离技术

为了提高海兔肝脏蛋白质组的提取及研究效率,本文描述和比较了3种提取海兔肝脏蛋白质组的方法:裂解液浸泡-超速离心,丙酮-TCA沉淀-裂解液浸泡,裂解液浸泡-丙酮-TCA-裂解液溶解.然后采用常规SDS-PAGE双向电泳对提取出的蛋白质进行检验,用M elan ie 4 Trial软件分析电泳图谱,通过对蛋白质分辨率和斑点总数的比较,选出一种更适合海兔肝蛋白质的提取方法.结果表明采用丙酮-TCA沉淀-裂解液浸泡法提取海兔肝蛋白质所得的双向电泳图谱不论从蛋白质斑点分辨率还是总数上都优于其他两种方法,更适合提取分离海兔肝脏蛋白质

质谱技术研究海兔大脑神经节超微量多肽内切酶和酸性多肽酶解产物

采用ESI-Q-TOF质谱分析了由27个氨基酸残基组成的酸性多肽(AP)的一级结构。选用RP-HPLC和MALDI-TOF质谱非在线技术分离与鉴定海兔大脑神经节(CG)多肽与蛋白质的组成与分布,发现CG中含有AP酶解的二聚体短肽。这些短肽序列分别为2(NKDEEQRELLKAISNLL)、2(NKDEEQRELLKAISNL)、2(SGVSLLTSNKDEEQREL)和2(LTSNKDEEQRE LL),均以L—R(氨基酸残基)方式断裂。以AP为探针,结合MALDI-TOF质谱分析技术,发现CG中含有超微量的L—R多肽内切酶,其分子量为78218·25Da。本研究中的分析方法也适合于研究其他生物体内超微量多肽及多肽酶分布与功能

监测流动水体污染程度的生物标志物研究进展

利用生物监测流动水体污染程度一直是环境科学研究领域中的热点课题之一。本文综述酶、蛋白细胞和核酸等生物标记物在监测流动水体污染程度方面的研究进展,描述铁蛋白反应器监测流动海水中重金属离子污染的特点,并介绍近年来蛋白组学技术在筛选监测环境污染程度生物标志物中的应用进展