Escherichia colille tehokkaiden efluksipumppuinhibiittoreiden tehoseulontamenetelmän optimointi

Tausta: Maailman terveysjärjestö WHO linjasi vuonna 2014 julkaisemassaan raportissa, että antibioottiresistenssi on todellinen maailmanlaajuinen terveysuhka, jonka vastaiset toimet on käynnistettävä. Uusien antibioottien löytäminen ja kehittäminen Gram-negatiivisten bakteerien aiheuttamiin tulehduksiin on haastavaa, sillä Gram-negatiivisilla bakteereilla on luontainen puolustusmekanismi tappavia vierasaineita vastaan. Gram-negatiivisilla bakteereilla on soluseinärakenteessaan ylimääräinen kalvorakenne (ulkokalvo), joka vaikeuttaa lääkeaineiden kulkeutumista soluseinän läpi. Lisäksi Gram-negatiivisille bakteereille, kuten E. colille, on ominaista efluksipumput, joiden yli-ilmentäminen soluseinärakenteessa on seuraus efluksipumppujen pumppauskapasiteetin ylittymisestä esimerkiksi bakteereiden altistuessa pitkäjatkoisesti matalille, bakteerikasvua estämättömille antibioottipitoisuuksille. Tutkituin ja runsaimmin E. colissa esiintyvä monilääkeresistentti efluksipumppu on kolmiosainen AcrAB-TolC-proteiinikompleksi, joka ulottuu koko soluseinärakenteen läpi, pumpaten solun sisältä solunulkoiseen tilaan laajan kirjon rakenteellisesti toisistaan poikkeavia yhdisteitä, aiheuttaen lopulta ristilääkeaineresistenssiä useammalle eri antibioottiryhmälle. Onkin ehdotettu, että nykyisten antibioottien teho voitaisiin palauttaa yhdistämällä lääkehoitoon efluksipumppuinhibiittori (EPI), jolloin terapeuttinen antibioottipitoisuus voitaisiin solunsisäisesti saavuttaa uudelleen. Tavoitteet: Tehoseulontamenetelmän koeolosuhteiden ja positiivisen kontrollin määrittäminen uusien EPIen löytämiseksi. Menetelmä koostuu korkean efluksiaktiivisuuden omaavasta E. coli -kannasta sekä yhdestä EPIstä ja yhdestä antibiootista, molemmat yksittäisellä pitoisuudella testattuna. Tutkimuksessamme valikoitunut EPI toimii tehoseulontamenetelmän positiivisena kontrollina. Menetelmät: Seitsemän E. coli -kannan efluksiaktiivisuus määritettiin Hoechst 33342 (H33342) -kumuloitumiskokeella, sekä ilman että yhdessä viiden EPIn kanssa. Samaa menetelmää hyödynnettiin annos-vastekokeissa, joissa EPIen optimaalinen annos selvitettiin. Matalin bakteerikasvua estävä lääkeainepitoisuus (MIC-arvo) määritettiin mikrolaimennosmenetelmällä CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) -ohjeiston mukaisesti. Antibiootin ja EPIn keskinäistä synergismiä ja EPIn kykyä laskea antibiootin MIC-arvoa tutkittiin 96-kuoppalevyllä Biomek i7 -robotiikkaa hyödyntäen. Datan analysoimiseen käytettiin Microsoft Exceliä sekä IBM SPSS Statistics -tilasto-ohjelmaa (versio 25). Tulokset ja pohdinta: E. coli ATCC 25922 -kannalla oli korkein efluksiaktiivisuus kaikista villityypin patogeenisistä ja ei-patogeenisistä E. coli -kannoista. H33342-kumuloitumiskoe yhdessä viiden EPIn kanssa kuitenkin osoitti, että uropatogeeninen E. coli BAA1161 nosti solunsisäistä H33342:n vakaan tilan pitoisuutta voimakkaimmin. Meflokiini osoittautui potenteimmaksi EPIksi H33342-kumuloitumiskokeeseen valikoituneilla pitoisuuksilla testattuna. Odotusten vastaisesti meflokiini nosti H33342:n vakaan tilan pitoisuutta myös E. coli JW5503 -kannassa (ΔtolC). Siten tulos saattaisi viitata siihen, että meflokiini vaikuttaa epäselektiivisesti muillakin tavoin tai vaihtoehtoisesti toimii inhibiittorina useammalle eri efluksipumppualatyypille. Annos-vastekokeet E. coli JW5503 -kannalla ehdottivat CCCP:n ja meflokiinin optimaalisiksi annoksiksi 1.25 g/ml ja 0.5 g/ml. Meflokiinin annos osoittautui kuitenkin liian matalaksi kuudella muulla E. coli -kannalla testattuna ja siten synergiatestiin valikoitiin korkeammat pitoisuudet meflokiinia siten, että kokeessa testattu maksimipitoisuus meflokiiniä oli puolet sen MIC-arvosta. Antibakteerisessa herkkyysmäärityksessä E. coli BAA1161 osoittautui ainoaksi resistentiksi kannaksi, ja MIC-suhdeluvut (villityypin MIC/mutantin MIC) tetrasykliinille ja piperasilliinille olivat 512 ja 2048. Piperasilliini ja ofloksasiini, joiden MIC-suhdeluku oli vähintään 4 ainakin kahdella eri E. coli -kannalla, valikoituvat lopulta synergiatestiin. Meflokiini laski piperasilliinin MIC-arvoa 16-kertaisesti ja CCCP jopa 32-kertaisesti E. coli BAA1161 -kannalla. Johtopäätökset: E. coli BAA1161 valikoitui kannaksi uusien EPIen tehoseulontamenetelmään, koska suurin nousu H33342:n vakaan tilan pitoisuudessa havaittiin E. coli BAA1161 -kannalla. Lisäksi E. coli BAA1161 oli ainoa kanta, jolla osoitettiin olevan antibioottiresistenssiä, joka vastaavasti saatiin kumoutumaan EPIen vaikutuksesta. Meflokiinin (16 g/ml) kyky tehostaa piperasilliinin antibakteerista vaikutusta selittyi todennäköisesti efluksipumppuinhibitiolla, ei meflokiinin antibakteerisella teholla. Piperasilliini (256 g/ml) oli sen sijaan ainoa antibiootti, jonka antibakteerinen teho voimistui meflokiinin ja CCCP:n vaikutuksesta.Background: The World Health Organization (WHO) outlined in their report published in 2014 that antimicrobial resistance (AMR) is a real public health threat worldwide and the actions against it should be taken. Otherwise, the post-antibiotic era where common community-acquired infections can lead to death, could hypothetically become true. The discovery and development of novel antibiotics (ATBs) against Gram-negative bacteria (GNB)-related infections is difficult due to a dual defence mechanism: the extra protection barrier called the outer membrane and efflux pumps which GNB utilize to protect themselves against external noxious compounds. Efflux pumps are expressed at the basal level in GNB, such as E. coli, but when exposed to sub-inhibitory concentrations of ATBs and the intrinsic extruding capacity is exceeded, GNB start overexpressing these “so-called” multi-drug resistance (MDR) efflux pumps. The most abundant and studied MDR efflux pump in E. coli is a tripartite protein complex AcrAB-TolC which traverse through the bacterial cell envelope and is capable of extruding a broad range of structurally unrelated compounds, thus leading to cross-resistance against several classes of ATBs. It has been suggested that antibacterial activity of existing ATBs could be restored again by inhibiting increased efflux activity through efflux pump inhibitors (EPIs). Objectives: Define the optimal assay conditions and a positive control (EPI) to be used in high throughput screening (HTS) of novel EPIs. The assay consists of one E. coli strain of clinical relevance with high intrinsic efflux activity, one ATB and one EPI, both of them at specific concentrations defined during this study. Methods: The intrinsic efflux activities of seven E. coli strains were studied by Hoechst 33342 (H33342) accumulation assay, both in the absence and presence of five commercially available EPIs. The same assay was used in the dose-response studies in which an optimal concentration of EPIs was identified for further to be utilized in the checkerboard assays. The minimum inhibitory concentrations (MICs) were determined by broth microdilution method according to Clinical and Laboratory Standards Institute. The synergistic effects of ATB and EPI in terms of decreasing the intrinsic MIC value of the ATB were determined in the checkerboard assays partially performed by the Biomek i7 Automated Workstation. The data was analysed by using Microsoft Excel and IBM SPSS Statistics, version 25. Results and discussion: E. coli ATCC 25922 had statistically significantly the highest efflux activity of all wild-type pathogenic and non-pathogenic E. coli strains. However, when H33342 accumulation assay was carried out in conjunction with EPIs, E. coli BAA1161 (uropathogenic strain) had the highest median increase in the intracellular level of H33342. Mefloquine showed to be the most potent of all EPIs at the tested concentrations. However, mefloquine increased the intracellular H33342 accumulation even in efflux-deficient E. coli JW5503 (ΔtolC), thus possible additional modes of action or inhibitory activity towards other efflux pumps might exist. Dose-response studies carried out in ΔtolC E. coli JW5503 suggested that CCCP at 1.25 g/ml and mefloquine at 0.5 g/ml were the optimal concentrations. However, for mefloquine, when tested at 0.5 g/ml, the intracellular level of H33342 was not increased in six remaining E. coli strains. Therefore higher concentrations up to ½ MIC were tested in the checkerboard assays. In the antibacterial susceptibility testing, E. coli BAA1161 was the only strain showing resistance to tetracycline and piperacillin, resulting in MIC ratios (MIC wild-type/MIC mutant) of 512 to 2048. Piperacillin and ofloxacin, which showed a MIC ratio of 4 in two E. coli strains, were chosen to the checkerboard assays in which mefloquine reduced the intrinsic MIC of piperacillin by 16-fold and CCCP by 32-fold in E. coli BAA1161. Conclusions: E. coli BAA1161 was chosen to be used as a model strain in HTS due to the highest median increase in intracellular H33342 accumulation and also for being the only strain with resistance towards the ATBs tested. Mefloquine (16 g/ml) was the EPI of choice for the positive control in HTS because the synergistic effects observed between piperacillin and mefloquine were most probably explained by efflux pump inhibition and not by antibacterial activity of mefloquine itself. Piperacillin (256 g/ml) was selected to be used as an ATB in HTS because it was the only ATB which was potentiated by the tested EPIs

Laatuvirhe ja sen seuraamukset käytetyn asunnon kaupassa

Asuntokauppa on yksi elämämme tärkeimmistä ja taloudellisesti vaikuttavimmista oikeustoimista. Monesti hyväksi uskomassamme asunnossa voi esiintyä virheitä. Tutkimuksen lähtökohtana on erityisesti käytetyn asunnon laatuvirhe. Tarkoituksena on tuoda esille asuntokauppalain laatuvirheperusteet, joista säännellään asuntokauppalain 6:11§:ssa. Käytetystä asunnosta puhutaan yleensä silloin, kun asuntoa on jo käytetty asumiseen. Yleisimmät käytetyn asunnon asuntokauppariidat koskevat juurikin asunnon laatuvirheitä. Tyypillisiä laatuvirheitä ovat myyjän erilaiset tietovirheet sekä salaiset virheet. Konkreettinen esimerkki laatuvirheestä on yleensä hometalo, mutta muitakin virheperusteita esiintyy. Myyjä vastaa, että myytävä asunto on sopimuksenmukainen. Myyjän vastuuseen kuuluu, että asunto vastaa tietoja, jotka myyjän on antanut ostajalle. Myös myyjän tiedonantovelvollisuuden laiminlyönti on yksi virheperuste, josta katsotaan asunnossa olevan virhe, etenkin jos tieto on omiaan vaikuttamaan kaupasta päättämiseen. Asunnossa voi olla lisäksi virhe, josta kaupan kumpikaan osapuoli ei ole tietoinen. Tällaista virhettä kutsutaan piileväksi eli salaiseksi virheeksi. Ostajalle on asetettu salaisen virheen osalta toleranssiraja eikä hän voi täten vedota kuitenkaan merkityksettömiin virheisiin. Käytetyn asunnon kaupassa toleranssiraja on asetettu korkeammalle, sillä usein käytetyissä asunnoissa esiintyy virheitä. Laatuvirheitä käsitellään käytetyn asunnon kaupassa kokonaisvaltaisesti. Jokainen asunto on yksilöllinen ja virhearviointiin vaikuttavat monet seikat. Asunnon ikä, hinta ja mahdolliset siihen tehdyt peruskorjaukset otetaan huomioon lopullisessa tulkinnassa. Asuntokaupassa osapuolille on asetettu velvollisuuksia, kuten ennakkotarkastusvelvollisuus, tiedonantovelvollisuus ja lojaliteettivelvollisuus. Velvollisuuksien täyttäminen on ensiarvoisen tärkeää, sillä niiden laiminlyönti voi aiheuttaa vastuun virheestä. Tutkimuksen tarkoitus ei ole kommentoida vastuukysymyksiä, mutta tutkielman luonteen vuoksi vastuukysymykset nousevat ajoittain esille.fi=Opinnäytetyö kokotekstinä PDF-muodossa.|en=Thesis fulltext in PDF format.|sv=Lärdomsprov tillgängligt som fulltext i PDF-format

Kajoa ja kahlitse : Naisiin kohdistuva väkivalta italialaisessa mediakuvastossa

Tässä tutkielmassa käsitellään naisiin kohdistuvan väkivallan representaatioita italialaisessa mediakuvastossa. Tutkielmassa selvitetään, millaista kuvaa väkivallasta annetaan, millaisia syitä ja seurauksia väkivallalle esitetään ja miten käsityksiä sukupuolesta tuotetaan erilaisissa mediateksteissä. Lisäksi tutkielmassa tuodaan esiin mediakuvaston erilaisia valta- ja arvoasetelmia sekä analysoidaan näiden pohjalta muodostuvaa kuvaa italialaisesta yhteiskunnasta. Tutkielma rakentuu kolmen pääteeman kautta, joita ovat väkivallan intersektionaalisuus, tilallisuus ja ideologiat. Teemoista ensimmäinen tarkastelee väkivaltaan vaikuttavia risteäviä identiteettikategorioita, toinen väkivallan ilmenemisen tiloja ja kolmas väkivallankäyttöön liitettyjä tunteita. Tutkielmassa tehdään kriittistä diskurssianalyysia nostamalla esiin aineistossa ilmeneviä väkivallan selitysmalleja ja haastamalla niiden vallitsevia näkemyksiä. Aineisto koostuu italialaisesta mediakuvastosta, jota on koottu puolen vuoden ajan aikavälillä 01.06.2015–30.11.2015. Media-aineistoon on valikoitu väkivaltaa faktapohjaisesti selittämään pyrkivät julkaisut, kuten uutiset ja dokumentit. Pääaineisto koostuu kahdesta Italian suurimmasta sanomalehtijulkaisusta, Corriere della Serasta ja La Repubblicasta, sekä parisuhdeväkivaltaa käsittelevästä draamadokumenttisarjasta Amore Criminale. Tutkimustulokset osoittavat, että italialaisessa mediassa käsitys kahdesta perinteisestä toisiaan täydentävästä sukupuolesta elää vahvana. Väkivallan ymmärrys rakentuu näiden sukupuoli- ja seksuaalisuuskäsitysten varaan ja on siten heteronormatiivista. Aineistossani uusinnetaan kuvaa Italiasta patriarkaalisena kulttuurina, jossa miehellä on ylin päätäntävalta, jolloin esimerkiksi perheväkivalta näyttäytyy miehelle kuuluvana kuritusoikeutena. Naisen arvo määräytyy perinteisten vaimon ja äidin roolien kautta, joskin nämä roolit vaikuttavat eri tavoin väkivallan suhtautumistapoihin. Vaimoon kohdistettu väkivalta on oikeutetumpaa, mutta jos naisella on lapsia, väkivaltaan suhtaudutaan jyrkemmin ja äidin roolin tärkeyttä ja pyhyyttä korostaen. Tutkimukseni perusteella italialaisissa mediadiskursseissa vallitsee ainakin kaksi eri tapaa, joilla mahdollistetaan naisiin kohdistuvaa väkivaltaa. Näistä ensimmäinen korostaa väkivallan sattumanvaraisuutta ja hallitsemattomuutta, toinen puolestaan vierittää vastuuta väkivallasta sen kohteelle. Väkivalta sidotaan osaksi tunteita, päihde- tai mielenterveysongelmia, jolloin väkivallan tekijän ei edellytetä hallitsevan tekojaan. Väkivaltaa kohdanneita naisia syyllistetään väkivallasta esimerkiksi heidän luonnettaan, siveyttään tai toimintatapojaan kyseenalaistamalla. Tutkimuksessa esiin nouseva heteronormatiivisuus peittää alleen naisten oman väkivaltaisuuden ja uusintaa jakoa väkivaltaisten miesten ja väkivallasta kärsivien naisten välillä. Tutkielman lopputulos on, että naisiin kohdistuvan väkivaltaongelman taustalla piilee sukupuolten välinen epätasa-arvo, jossa nainen nähdään lähtökohtaisesti miestä alempiarvoisena. Väkivallan olemassaolo ja jatkuminen mahdollistuvat alistavien käytänteiden ja epätasa-arvoa uusintavien diskurssien kautta

Automaattisen testerin kehitys tablettitietokoneiden näyttöjen tuotannontestaukseen

Tiivistelmä. Elektronisen laitteen valmistus on monivaiheinen prosessi, jossa virheitä voi tulla monessa eri vaiheessa. Laadun varmistamiseksi laitteita testataan useassa eri vaiheessa valmistuksen aikana. Yksi tärkeä testattava ominaisuus on tabletin näyttö, jolle suoritetaan kasauksen loppuvaiheessa visuaalinen tarkistus vikojen ja laadullisten ongelmien havaitsemiseksi. Tablettien näyttöjen resoluutio on suuri ja osa näytöissä esiintyvistä vioista on hyvin pienikokoisia tai muuten vaikeasti havaittavia. Lisäksi visuaaliseen tarkistukseen tuotannossa käytettävissä oleva aika on rajallinen. Ihmisvoimin suoritettuna tarkistustyö on yksitoikkoista ja vaatii suurta tarkkuutta sekä hyvää keskittymistä, jolloin virheitä tulee helposti. Silmämääräisesti suoritettuna tarkistuksen laatu vaihtelee suuresti eri testaajien välillä ja samakin testaaja voi tulla samasta viasta erilaiseen lopputulokseen eri aikana. Tämän ongelman ratkaisemiseksi tässä työssä kehitettiin automaattinen konenäköön perustuva testiasema, jossa tablettitietokoneen näyttö kuvataan kameralla käyttäen erilaisia testikuvia ja kuvat analysoidaan tietokoneella. Testioperaattorille esitetään tarkistuksen tulokset ja mahdollisesti löydettyjen vikojen sijainnit. Jokaisesta testatusta laitteesta tallennetaan raportti tuotannontestauksen tietokantaan. Testijärjestelmään kehitettiin testit, joilla voidaan havaita mm. näytön luminanssin epätasaisuuksia, epäpuhtauksia näyttöpaneelin välikerroksissa, toimimattomia alueita, viivavikoja, kirkkaita tai tummia pisteitä, matalan kontrastin vikoja ja naarmuja näytön pinnassa. Työssä kehitettiin testiasemalle ohjelmisto, joka sisältää analyysit näiden vikojen paikantamiseksi. Lisäksi kehitettiin testisekvensseri, jonka kautta testausta ohjataan, tuloksia kerätään ja testien etenemistä voidaan seurata. Ohjelmistoon kehitettiin myös moduulit testattavan laitteen ohjaamiseksi, tuloksien esittämiseksi testioperaattorille ja tuloksien raportoimiseksi tuotannontestauksen tietokantaan. Työn loppuvaiheessa esitetään järjestelmän toiminnan verifiointi piirretyin vikakuvin ja lisäksi tehtaalla tuotannossa noin viidellä sadalla testatulla laitteella. Alustavien kokemuksien perusteella testiaseman toteutus onnistui hyvin ja asetetut tavoitteet saavutettiin.Implementation of automatic test system for display testing of mobile devices in production. Abstract. Manufacturing of an electronic device is a process with multiple steps where errors can occur at many places. To ensure the quality of the finished product, the devices are tested at many different phases throughout the production process. Display is one of the key parts for which a visual inspection is done also at the end of the assembly process to detect different types of defects. Modern tablet computers have a high-resolution display. Many of the defects are small or low in contrast and thus difficult to detect by naked eye. The time available for visual inspection in production is limited and locating the small faults requires a lot of attention making it easy to miss a defect. For these reasons visual inspection of displays made by human operators has high variance in the quality of the inspection. The inspection results may vary greatly between different inspectors and the conclusions of the same operator may be different at different times. As a solution to this problem, an automatic visual inspection system was developed in this thesis. In the automatic system the display of the tablet is photographed with a camera using different test pictures and the pictures are analyzed with a computer. The results of the inspection and the locations of the possible faults are presented to the test operator. A report of each test run is stored in the production testing database. In this work the software for the automatic inspection system was developed. Tests were developed for locating different types of defects such as luminance nonuniformity, impurities between different layers of the display assembly, nonfunctional areas, line faults, bright or dark spots, low contrast faults and scratches at the display surface. A test sequencer was developed to control of the testing, collecting results, and visualizing the testing progress to the test operator. Software modules were also developed to controlling the device under test, presenting results to the test operator, and reporting results to the database. Finally, a test and verification of the system function was performed, and the system was deployed at the factory where it has been tested with about five hundred devices. Based on the experiences from factory implementation of the test system was successful and the initial targets were satisfied

Kotakentistä jälleenrakennuksen aikaan. Saijan maisema-alueen hoito- ja käyttösuunnitelma

Saijan kylä on luokiteltu maakunnallisesti arvokkaaksi maisemakokonaisuudeksi ympäristöministeriön vuonna 1993 julkaisemassa Arvokkaat maisema-alueet; maisematyöryhmän mietintö II -teoksessa. Lapin ympäristökeskus käynnisti Saijan maisema-alueen hoito- ja käyttösuunnitelman laatimisen helmikuussa 2006. Suunnitelman tavoitteeksi asetettiin alueen maisemallisesti arvokkaiden tekijöiden tunnistaminen ja niiden kunnostus- ja hoitosuunnitelmien kirjaaminen yhteistyössä maanomistajien ja paikallisten päättäjien kanssa. Hoitosuunnitelman tarkoituksena on opastaa kylän maanomistajia ja parantaa heidän mahdollisuuksiaan saada tulevaisuudessa kunnostus- ja hoitotukia. Keskeisenä tavoitteena oli myös maisema-aluepäätöksen valmistelu maakunnallisesti arvokkaalle Saijan kylän alueelle. Suunnitelma laadittiin yhteistyössä Saijan kyläläisten ja paikallisten toimijoiden kanssa. Suunnitelmassa ei anneta yksityiskohtaisia ohjeita ja määräyksiä, vaan tarkoituksena on korostaa Saijan kylämaiseman olennaisia piirteitä ja niiden huomioimista eri toimenpiteitä suunniteltaessa ja toteutettaessa

Future of the Finnish engineering education : a collaborative stakeholder approach

The dissertation sheds light on how to develop the Finnish engineering education to face the anticipated challenges of the future based primarily on the views of the key stakeholders. The research questions are: What kind of a framework can be developed for selecting participants for a group communication process of key stakeholders when aiming at capturing future prospects and enhancing development of engineering education nationally, in this case in the context of Finland (RQ 1)? What are the future prospects and development proposals for the Finnish engineering education based on the views of the key stakeholders on the past, present and future, as well as literature and statistics describing the long-term development and present (RQ 2)? The study can be regarded as a strategic prospective foresight study, the subsequent focus being on option and commitment reasonability. The primary sources of knowledge are three stakeholder group communication processes: an anonymous Argument Delphi, an Open Futures Search event, and the work process of the National Collaboration Group for the Finnish Engineering Education. The theoretical discussion for developing the participant selection framework consists of stakeholder concept and identification, creation of knowledge, and member and group characteristics. By combining this with empirical experiences gathered during stakeholder processes, the researcher develops a framework for participant selection. The key findings of the study regarding future prospects of the Finnish engineering education and key proposals for action are summarized in eight statements. The researcher argues that the most severe skills shortages of engineering graduates compared to future needs are in collaborative learning skills. The study contains a proposal for a conceptual model for enhancing the collaborative learning skills of graduates. The study suggests that face-to-face group communication has potential for providing several benefits over anonymous group communication in futures studies. The researcher claims that the most important advantage is the possibility to mobilize both individual- and collective-driven social learning cycles through face-to-face dialogue that enables grasping of tacit knowledge, and through presencing the emerging self-transcending knowledge. However, because of the problem of groupthink, the researcher maintains that anonymous group communication is a useful additional tool in initiating change and bringing potentially conflicting and delicate issues up to discussion, and thereby improving identification of different options for the future. The research contribution of the study is three-fold. First, the results of the study have high practical value for the development of the Finnish engineering education. Second, the framework developed for participant selection and the experiences gathered during the three group communication processes with stakeholders, are useful in developing engineering education also outside Finland. Third, the researcher contributes to the development of futures research methodologies by discussing the differences in knowledge creation between anonymous and face-to-face group communication methodologies

Pirun työpaikkakiusaaminen

Tämä pro gradu -tutkielman tavoitteena on tuoda uutta näkökulmaa työpaikkakiusaamisen ilmiöön tarkastelemalla sitä pirullisena ongelmana sekä pohtimalla sen yhteyttä pahan emergenssiin. Pirulliset ongelmat ovat vaikeasti määritettäviä ja monitahoisia ongelmia, joita ei määritelmänsä mukaan voida yksiselitteisesti tai lopullisesti ratkaista. Pirullisiin ongelmiin liittyy vahvasti subjektiivisuus, sillä niissä on mukana useita osallisia, joilla kaikilla on eriäviä näkökulmia niin itse ongelmasta kuin sen mahdollisesta ratkaisemisesta. Pahan emergenssi puolestaan haastaa ajatusta syyllisyydestä sekä siitä, että pahat teot tai huono käytös ovat peräisin pahantahtoisten ihmisten toiminnasta. Emergenssin keskeinen väite on, että kokonaisuuden ominaisuuksia ei voida pelkistää osien ominaisuuksin, jolloin pahoja lopputulemia voi syntyä myös hyväntahtoisten ihmisten normaalista toiminnasta. Tämä pro gradu -tutkielma on kvalitatiivinen tutkimus, jossa on käytetty menetelmänä traditionaalista kirjallisuustutkimusta, sillä se mahdollistaa eri tutkimuskohteisen integroimisen ja yhtymäkohtien etsimisen. Tässä työssä integroidaan pirulliset ongelmat ja pahan emergenssi työpaikkakiusaamisen kontekstiin. Tutkielman aineisto koostuu pääasiassa kansainvälisistä ja suomalaisista vertaisarvioiduista tieteellisistä julkaisuista, mutta työssä on hyödynnetty soveltuvin osin myös kotimaisia väitöskirjoja sekä toimitettuja teoksia. Työssä on käytetty teoriaohjaavaa sisällönanalyysia. Tutkielman pääkysymys on, millaisena ilmiönä työpaikkakiusaaminen näyttäytyy, jos sitä tarkastellaan pirullisena ongelmana ja pahan emergenssin valloille pääsynä. Tutkimuskysymystä lähestytään tunnistamalla työpaikkakiusaamisen pirullisia piirteitä sekä etsimällä yhteyttä pahan emergenssiin. Pahan emergenssin ja pirullisten ongelmien näkökulmasta työpaikkakiusaaminen on monitahoinen ja kompleksinen ongelma, johon liittyy eri osallisia ja jota normaalit toimintamallit voivat ruokkia. Tutkielma tukee ajatusta, että työpaikkakiusaamista ei tulisi tarkastella vain kohteen ja (oletetun) tekijän välisenä ongelmana, vaan kollektiivisena ilmiönä, johon liittyy paljon eri tekijöitä, näkökulmia, osallisia, intressejä sekä toiminta- ja vuorovaikutusmalleja. Sekä syyllisyys että kiusaamisen kokemus ovat subjektiivisia, joten pelkän syyttelyn sijaan työpaikkakiusaamista tulee lähestyä kokonaisvaltaisesti ja osallistavasti sekä pyrkiä tunnistamaan niitä pieniä arkipäiväisiä tekijöitä ja käytösmalleja, jotka huomaamattomasti houkuttelevat työyhteisön jäseniä negatiivisiin käytösmalleihin

Direct protection of cultured neurons from ischemia-like injury by minocycline

Minocycline, a tetracycline antibiotic, is now known to protect cells via an anti-inflammatory mechanism. We further explored this effect using an in vitro model of ischemia-like injury to neurons. Coculturing neurons with microglia, the brain's resident immune cell, modestly increased cell death due to oxygen and glucose deprivation (OGD), compared to neurons alone. Treatment of cocultures with minocycline decreased cell death to a level significantly lower than that of neurons alone. Treatment of cocultures with minocycline or inhibitors of various immune mediators, also led to decreased cell death. Importantly, treatment of neuron cultures without added microglia with these same inhibitors of tissue plasminogen activator, matrix metalloproteinases, TNF-alpha and inducible nitric oxide synthase as well as minocycline also led to decreased cell death. Thus, anti-inflammatory treatments appear to be directly protective of neurons from in vitro ischemia

Accelerating drug discovery for Alzheimer's disease: best practices for preclinical animal studies

Animal models have contributed significantly to our understanding of the underlying biological mechanisms of Alzheimer's disease (AD). As a result, over 300 interventions have been investigated and reported to mitigate pathological phenotypes or improve behavior in AD animal models or both. To date, however, very few of these findings have resulted in target validation in humans or successful translation to disease-modifying therapies. Challenges in translating preclinical studies to clinical trials include the inability of animal models to recapitulate the human disease, variations in breeding and colony maintenance, lack of standards in design, conduct and analysis of animal trials, and publication bias due to under-reporting of negative results in the scientific literature. The quality of animal model research on novel therapeutics can be improved by bringing the rigor of human clinical trials to animal studies. Research communities in several disease areas have developed recommendations for the conduct and reporting of preclinical studies in order to increase their validity, reproducibility, and predictive value. To address these issues in the AD community, the Alzheimer's Drug Discovery Foundation partnered with Charles River Discovery Services (Morrisville, NC, USA) and Cerebricon Ltd. (Kuopio, Finland) to convene an expert advisory panel of academic, industry, and government scientists to make recommendations on best practices for animal studies testing investigational AD therapies. The panel produced recommendations regarding the measurement, analysis, and reporting of relevant AD targets, th choice of animal model, quality control measures for breeding and colony maintenance, and preclinical animal study design. Major considerations to incorporate into preclinical study design include a priori hypotheses, pharmacokinetics-pharmacodynamics studies prior to proof-of-concept testing, biomarker measurements, sample size determination, and power analysis. The panel also recommended distinguishing between pilot 'exploratory' animal studies and more extensive 'therapeutic' studies to guide interpretation. Finally, the panel proposed infrastructure and resource development, such as the establishment of a public data repository in which both positive animal studies and negative ones could be reported. By promoting best practices, these recommendations can improve the methodological quality and predictive value of AD animal studies and make the translation to human clinical trials more efficient and reliable

Minocycline reduces microgliosis and improves subcortical white matter function in a model of cerebral vascular disease

This is the author accepted manuscript. The final version is available from Wiley via the DOI in this record.Chronic cerebral hypoperfusion is a key mechanism associated with white matter disruption in cerebral vascular disease and dementia. In a mouse model relevant to studying cerebral vascular disease, we have previously shown that cerebral hypoperfusion disrupts axon-glial integrity and the distribution of key paranodal and internodal proteins in subcortical myelinated axons. This disruption of myelinated axons is accompanied by increased microglia and cognitive decline. The aim of the present study was to investigate whether hypoperfusion impairs the functional integrity of white matter, its relation with axon-glial integrity and microglial number, and whether by targeting microglia these effects can be improved. We show that in response to increasing durations of hypoperfusion, the conduction velocity of myelinated fibres in the corpus callosum is progressively reduced and that paranodal and internodal axon-glial integrity is disrupted. The number of microglial cells increases in response to hypoperfusion and correlates with disrupted paranodal and internodal integrity and reduced conduction velocities. Further minocycline, a proposed anti-inflammatory and microglia inhibitor, restores white matter function related to a reduction in the number of microglia. The study suggests that microglial activation contributes to the structural and functional alterations of myelinated axons induced by cerebral hypoperfusion and that dampening microglia numbers/proliferation should be further investigated as potential therapeutic benefit in cerebral vascular disease.We gratefully acknowledge the support of Alzheimer's Research UK (ARUK) in funding this project and for providing a small grant via the ARUK Scotland Network Centre. SS is funded by an ARUK PhD studentship. Funding support from the Alzheimer's Society is also gratefully acknowledged. BMcC was funded by grants from the BBSRC and MRC. We would also like to acknowledge Abcam for the supply of TMEM119 antibody and technical support