Charakterisierung der Funktion des switch-associated protein 70 (SWAP-70) in der N-Formylpeptid-vermittelten Signaltransduktion muriner neutrophiler Granulozyten

Diese Arbeit charakterisierte erstmals die funktionelle Bedeutung von SWAP-70 in der N-Formylpeptid-vermittelten Signaltransduktion muriner neutrophiler Granulozyten, die aus dem Knochenmark stammen. Für die Untersuchungen wurden neutrophile Granulozyten von Wildtyp- und homozygoten Swap-70-defizienten-Mäusen verwendet. Im Vordergrund der Untersuchungen standen zelluläre Antworten, die durch das N-Formylpeptid fMLP ausgelöst wurden. Es wurde gezeigt, dass SWAP-70 über die Regulierung der CD11b-Genexpression die Lokalisierung von CD11b auf der Zelloberfläche beeinflusst. Wahrscheinlich moduliert SWAP-70 unter anderem über die veränderte Oberflächenlokalisierung von CD11b die Adhäsion der Zellen an Fibrinogen. Eine weitere charakteristische Antwort muriner neutrophiler Granulozyten, in die SWAP-70 eingebunden ist, stellt die ROS-Produktion dar. Die fMLP-stimulierte ROS-Produktion der Swap-70-/--Zellen war gegenüber den WT-Zellen um ca. 50 % verringert. Die Vorstimulierung mit LPS oder TNF zeigte nach fMLP-Zugabe ebenfalls eine um 50 % verringerte ROS-Produktion der Swap-70-/--Zellen. Im Gegensatz zur ROS-Produktion und zur Adhäsion hatte SWAP-70 weder einen Einfluss auf die in vitro-Migration noch auf die Aktinpolymerisierung. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass SWAP-70 die Aktivierung intrazellulärer Signalmoleküle beeinflusst. SWAP-70 differenzierte in murinen neutrophilen Granulozyten zwischen der Rac1- und der Rac2-GTPase und begünstigte die Aktivierung der Rac2-GTPase. Die Rac1-GTPase wurde hingegen nicht beeinflusst. Es konnte außerdem gezeigt werden, dass SWAP-70 die Aktivierung der MAP-Kinasen p42/p44 und p38 begünstigt. Im Gegensatz zu den MAP-Kinasen wurde die Aktivierung der Proteinkinase AKT nicht von SWAP-70 beeinflusst. Zusammenfassend kann festgehalten werden, dass SWAP-70 ein Bestandteil der N-Formylpeptid-vermittelten Signaltransduktion muriner neutrophiler Granulozyten ist

Biomarkers of brain injury after cardiac arrest; a statistical analysis plan from the TTM2 trial biobank investigators

Background: Several biochemical markers in blood correlate with the magnitude of brain injury and may be used to predict neurological outcome after cardiac arrest. We present a protocol for the evaluation of prognostic accuracy of brain injury markers after cardiac arrest. The aim is to define the best predictive marker and to establish clinically useful cut-off levels for routine implementation. Methods: Prospective international multicenter trial within the Targeted Hypothermia versus Targeted Normothermia after Out-of-Hospital Cardiac Arrest (TTM2) trial in collaboration with Roche Diagnostics International AG. Samples were collected 0, 24, 48, and 72 hours after randomisation (serum) and 0 and 48 hours after randomisation (plasma), and pre-analytically processed at each site before storage in a central biobank. Routine markers neuron-specific enolase (NSE) and S100B, and neurofilament light, total-tau and glial fibrillary acidic protein will be batch analysed using novel Elecsys® electrochemiluminescence immunoassays on a Cobas e601 instrument. Results: Statistical analysis will be reported according to the Standards for Reporting Diagnostic accuracy studies (STARD) and will include comparisons for prediction of good versus poor functional outcome at six months post-arrest, by modified Rankin Scale (0–3 vs. 4–6), using logistic regression models and receiver operating characteristics curves, evaluation of mortality at six months according to biomarker levels and establishment of cut-off values for prediction of poor neurological outcome at 95–100% specificities. Conclusions: This prospective trial may establish a standard methodology and clinically appropriate cut-off levels for the optimal biomarker of brain injury which predicts poor neurological outcome after cardiac arrest

Iron oxide nanoparticles as carriers for DOX and magnetic hyperthermia after intratumoral application into breast cancer in mice: impact and future perspectives

© 2020 by the authors.There is still a need for improving the treatment of breast cancer with doxorubicin (DOX). In this paper, we functionalized magnetic nanoparticles (MNPs) with DOX and studied the DOX-induced antitumor effects in breast cancer cells (BT474) in the presence of magnetic hyperthermia (43 °C, 1 h). We show that i) intratumoral application of DOX-functionalized MNPs (at least at a concentration of 9.6 nmol DOX/100 mm3 tumor volume) combined with magnetic hyperthermia favors tumor regression in vivo, and there is evidence for an increased effect compared to magnetic hyperthermia alone or to the intratumoral application of free DOX and ii) the presence of the pseudopeptide NucAnt (N6L) on the MNP surface might well be beneficial in its function as carrier for MNP internalization into breast cancer cells in vitro, which could further augment the possibility of the induction of intracellular heating spots and cell death in the future.The described work was carried out within the project “Multifunctional Nanoparticles for the Selective Detection and Treatment of Cancer” (Multifun), funded by the European Commission (Nr. 262943) and in parts by the European Union’s Horizon 2020 research and innovation program under grant agreement No 685795 and the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (SAF2017-87305-R). IMDEA Nanociencia acknowledges support from the ‘Severo Ochoa’ Programme for Centres of Excellence in R&D (MINECO, Grant SEV-2016-0686)