Upscaling and consistent sialylation of plant produced antibodies

Mestrado em Engenharia Agronómica - Instituto Superior de AgronomiaGlycoproteins are a major part of biopharmaceutical products. For their production, a high level of homogeny is required, not only for the protein but also for attached glycans, since these oligossacharides influence protein function. For this goal, plants emerge as an ideal biopharmaceutical production platform. By infiltrating adult plant leaves with a suspension of Agrobacterium tumefaciens containing a plasmid for the gene of interest, a high amount of protein can be produced in a short period. In this study, the production of two antibodies in genetically glycoengineered Nicotiana benthamiana was described. These antibodies, Rituximab and KBPA, served as models for Immunoglobulin groups G and M. Additionally, co-infiltration of the genes for these antibodies with glycoengineering constructs allowed for specific glycan structures attached to these proteins. Finally, the down-regulation of β-N-acetylhexosaminidase 3 with RNAi technology was described, inhibiting the effect of this glycosidase on plant produced proteins

Antibodies immobilization

Human Cytomegalovirus (HCMV) is a herpes virus that establishes a lifelong latent infection which, in most of the immunocompetent individuals is normally subclinical. Severe infections occur more frequently in immunocompromised ones, or those with immature immune system, for which can be fatal. Glycoprotein B (gB) is the dominant antigen of HCMV envelope being regarded as a promising component in the establishment of new diagnostic tests. Nowadays there are several diagnosis methods, however, these are expensive, or/and require long time to perform, or/and need skilled operators, or even leads to the possibility of false results. So, in previously work, a disposable immunosensor was developed based on electrochemical silver oxidation as response for gB concentration increasing, using screen-printing carbon electrodes. This method allows a faster and inexpensive way to detect that viral protein. Despite that, a lack on device reproducibility and sensitivity, due to the randomly antibody adsorption was found. It is known that the oriented immobilization has become critical for optimized antigen detection on solid surfaces; therefore, those results lead us to employ other immobilization techniques to improve the immunosensor performance. In this work the immobilization of antibodies was carried out through glutaraldehyde cross-linking, by covalent immobilization using diazonium salts and finally by using the boronic acid affinity towards the carbohydrate present on the antibody molecules. The results were conclusive only for the cross-linking, which has disadvantages when compared with adsorption. Additionally, the importance of the gB on diagnosis tests for HCMV, lead us to study its isolated electrochemical behavior. Questionable results were found demonstrating the impossibility of its use in the determination of gB in biological samples.O Citomegalovírus humano (HCMV) é um herpes vírus que pode originar infeções primárias, a partir das quais a reativação poderá ser frequente. Quando os hospedeiros deste agente viral são indivíduos imunocompetentes, é geralmente associada uma latência do HCMV que eventualmente poderá resultar em sintomas subclínicos. No entanto, em indivíduos imunocomprometidos, tais como os portadores do vírus da imunodeficiência humana (HIV) e os sujeitos a terapêuticas imunossupressoras ou ainda em indivíduos cujo sistema imune é imaturo, como é o caso de fetos e recém-nascidos, a infeção adquire proporções graves, podendo resultar na morte dos mesmos. Este vírus apresenta um invólucro rico em proteínas virais das quais a glicoproteína B (gB) se destaca, pois está presente em aproximadamente 100% dos indivíduos infetados, sendo também reconhecida por desencadear a produção de anticorpos neutralizantes que levam à eliminação das células infetadas. Assim, esta proteína pode ser vista como um componente essencial no diagnóstico da infeção por HCMV. A definição de um diagnóstico ideal para o HCMV tem sido difícil de implementar devido às desvantagens apresentadas pelos métodos existentes, que se baseiam em informações clinicas e imunológicas. Definido como método convencional, o isolamento do vírus em culturas de fibroblastos, obtido a partir de biópsias ou de fluidos dos hospedeiros, tem associadas as desvantagens de exigir assepsia total e longos períodos de tempo para a sua execução. Para contrapor as dificuldades desta técnica, um método idêntico, o “Shell-vial”, reduz o tempo do ensaio através de um passo de centrifugação que aumenta a penetração do HCMV nos fibroblastos, que por sua vez pode ser avaliada por imunofluorescência. No entanto, o sucesso deste método continua a depender das condições assépticas usadas. Por outro lado, o PCR (“Polimerase Chain Reaction”), analisa amostras clínicas com uma rápida performance e elevada sensibilidade, conseguida na amplificação de ADN viral. Contudo, o elevado custo e a dificuldade de realização contrapõem-se ao seu uso como técnica de diagnóstico corrente. Outra técnica, ELISA (“Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”), deteta a presença de anticorpos específicos no sangue, o que pode levar a falsos positivos devido a reações cruzadas com o fator reumatoide, anticorpos antinucleares e outros membros da família herpesviridae. Usado para medir a afinidade e avidez do anticorpo para o antigénio viral, o “Western Blotting” apresenta uma baixa disponibilidade comercial conjugada também com a possibilidade de falsos positivos. Por último, testes citológicos/histológicos permitem observar inclusões virais em biópsias de tecidos do hospedeiro, contudo apresentam igualmente uma baixa sensibilidade tendo apenas 50% de sucesso na identificação de falsos negativos. Todos os métodos têm associadas desvantagens quanto a falsos resultados, ou equipamentos e/ou procedimentos caros, que podem estar ou não relacionados a uma difícil manipulação e elevado tempo de realização. Desta forma, para contrariar estes inconvenientes, num estudo anteriormente realizado neste grupo de investigação, foi desenvolvido um imunossensor eletroquímico descartável para a deteção do HCMV, tendo por base uma imunorreação do tipo sandwich na qual o anticorpo secundário estava marcado com nanopartículas de ouro (AbNPs). Esta marcação permitiu a posterior deposição catalítica de nanopartículas de prata (AgNPs), que geraram um sinal eletroquímico na sua redissolução anódica por voltametria de pulso diferencial. O uso de elétrodos serigrafados (SPEs) como base para o immunosensor, acrescenta vantagens tais como a miniaturização, baixo custo, versatilidade e principalmente a possibilidade de uso como “point of care”. Adicionalmente, a facilidade de produção destes dispositivos por impressão sequencial de camadas de tintas, oferece vantagens na manipulação de padrões e geometrias conforme o pretendido. O maior desafio na construção deste tipo de biossensores, passa pela imobilização dos anticorpos na superfície dos elétrodos. Está descrito na literatura que a imobilização de anticorpos de forma orientada resulta numa melhor exposição dos locais de ligação aos antigénios, exibindo melhores capacidades de ligação e posterior deteção dos mesmos. De facto, foram detetadas algumas limitações relacionadas com este passo de construção do imunossensor, uma vez que os anticorpos anti-HCMV se encontravam adsorvidos de uma forma aleatória na superfície do elétrodo de trabalho. Desta forma, as moléculas de anticorpo apresentam uma orientação nem sempre ideal afetando a reprodutibilidade e a sensibilidade do dispositivo na resposta a concentrações de gB do HCMV. Assim, com o objetivo de melhorar as características do immunosensor descartável, neste trabalho foram aplicadas várias técnicas para a imobilização dos anticorpos anti-HCMV, tais como a reticulação, imobilização covalente através de sais de diazónio e por último usando a afinidade do ácido borónico para os açúcares presentes nas moléculas de anticorpo. O glutaraldeído, usado como agente reticulante, permitiu a imobilização das moléculas de anticorpo anti-HCMV na superfície dos SPEs. O sistema mostrou responder às concentrações incubadas de gB, levando a respostas dependentes das mesmas. Comparativamente aos resultados obtidos para a adsorção, a reticulação demonstrou ter associadas algumas desvantagens em termos de reprodutibilidade e de sensibilidade, devido à imposição da ligação dos anticorpos pelos domínios de ligação ao antigénio. Por outro lado, em condições favoráveis, a adsorção pode resultar numa orientação favorável dos anticorpos, uma vez que as moléculas têm a liberdade para se adaptarem à superfície pela conjugação de diversos fatores, nomeadamente a sua reorientação favorável na zona de saturação. Quanto à imobilização covalente foram encontradas interferências na ativação da superfície dos elétrodos. As vias condutoras de prata presentes nos elétrodos serigrafados geram uma espécie desconhecida de prata que impossibilita o estudo da eficiência de imobilização, levando a uma incompatibilidade com o método de deteção usado no imunossensor. Por fim, uma primeira abordagem foi realizada para a imobilização dos anti-HCMV através da afinidade do ácido borónico para os resíduos de açúcar presentes na estrutura dos anticorpos. Os resultados preliminares demonstraram ser promissores para uma futura aplicação neste imunossensor. Finalmente, a reconhecida importância da gB no diagnóstico do HCMV remeteu-nos para o estudo do seu comportamento eletroquímico. Este estudo permitiu ainda inferir sobre a possibilidade de esta proteína viral interferir no sinal obtido durante a redissolução anódica das AgNPs no immunosensor. A análise foi primeiramente conduzida em SPE, os quais não possibilitaram a procura de um sinal associado à gB, permitindo no entanto concluir que não há interferência desta molécula no imunoensaio. Quando aplicado num sistema eletroquímico convencional, a gB gerou um sinal em meio tamponado, o que não se confirmou quando aplicado a amostras reais (urina)

Automated reasoning with uncertainties

In this work we assume that uncertainty is a multifaceted concept which admits several different measures, and present a system for automated reasoning with multiple representations of uncertainty. Our focus is on problems which present more than one of these facets and therefore in which a multivalued representation of uncertainty and the study of its possibility of computational realisation are important for designing and implementing knowledge-based systems. We present a case study on developing a computational language for reasoning with uncertainty, starting with a semantically sound and computationally tractable language and gradually extending it with specialised syntactic constructs to represent measures of uncertainty, preserving its unambiguous semantic characterisation and computability properties. Our initial language is the language of normal clauses with SLDNF as the inference rule, and we select three facets of uncertainty, which are not exhaustive but cover many situations found in practical problems: vagueness, statistics and degrees of belief. To each of these facets we associate a specific measure: fuzzy measures to vagueness, probabilities on the domain to statistics and probabilities on possible worlds to degrees of belief. The resulting language is semantically sound and computationally tractable, and admits relatively efficient implementations employing ff \Gamma fi pruning and caching

Value co-creation: a study of life quality at an university in the south Brazil

This article aimed to analyze the life quality in a private higher education institution, from the point of view of students, through the value co-creation in higher education. Methodologically, research is characterized as a case study, and the unit of analysis was a University located in the Rio Pardo/RS Valley, in the south of Brazil where five students from the courses of administration and accounting sciences were selected to apply the research. The data collection was done through interviews, carried out through there is a script of questions previously established. The results highlight that the life quality in the university is directly related to the co-creation, on the one hand there is the desire to learn from the students and on the other the quality of the information that is passed on to them. The research also shows that the quality of life in the University is directly linked to student satisfaction and value creation, resulting from individual or joint actions (institution, professor and student)

Especulação imobiliária no bairro Altiplano Cabo Branco na cidade de João Pessoa - PB.

This research addresses the real estate speculation, very common phenomenon in several Brazilian cities. Currently primarily due to the vertical, the usual symbol of modernization and progress, combined with major cities, it is also linked to the accumulation and reproduction of capitalism. The neighborhood of Highland Cabo Branco, located in the eastern part of the city of João Pessoa-PB, is an example of vertical integration, modernization and urbanization, in which land speculation consolidates and increases gradually. Seek to understand the importance of vertical integration processes, which influence on the speculation of the Altiplano Cabo Branco process, contributing to the process of socio - urban space.A presente pesquisa aborda a especulação imobiliária, fenômeno muito comum em diversas cidades brasileiras. Atualmente tendo como principais fatores a verticalização, o costumeiro símbolo de modernização e progresso, associadas às grandes cidades, como também é vinculado à acumulação e reprodução do Capitalismo. O bairro do Altiplano Cabo Branco, localizado na zona Leste da cidade de João Pessoa-PB, é um exemplo de verticalização, modernização e urbanização, no qual a especulação imobiliária se consolida e aumenta gradativamente. Procuramos compreender a importância dos processos de verticalização, que influência no processo de especulação do Altiplano Cabo Branco, contribuindo com o processo de segregação sócio - espacial urbana

Effects of cultural characteristics on building an emotion classifier through facial expression analysis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Facial expressions are an important demonstration of humanity's humors and emotions. Algorithms capable of recognizing facial expressions and associating them with emotions were developed and employed to compare the expressions that different cultural groups use to show their emotions. Static pictures of predominantly occidental and oriental subjects from public datasets were used to train machine learning algorithms, whereas local binary patterns, histogram of oriented gradients (HOGs), and Gabor filters were employed to describe the facial expressions for six different basic emotions. The most consistent combination, formed by the association of HOG filter and support vector machines, was then used to classify the other cultural group: there was a strong drop in accuracy, meaning that the subtle differences of facial expressions of each culture affected the classifier performance. Finally, a classifier was trained with images from both occidental and oriental subjects and its accuracy was higher on multicultural data, evidencing the need of a multicultural training set to build an efficient classifier. (C) 2015 SPIE and IS&TFacial expressions are an important demonstration of humanity's humors and emotions. Algorithms capable of recognizing facial expressions and associating them with emotions were developed and employed to compare the expressions that different cultural gro24219FAPESP - FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULOCNPQ - CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICOFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)FAPESP [2011/22749-8, 2014/04020-9]CNPq [307113/2012-4]2011/22749-8; 2014/04020-9307113/2012-

Multiplatform IPTV client with automatic channels personalization

Mestrado em Engenharia de Computadores e TelemáticaOs serviços de distribuição de conteúdos multimédia via Internet estão a crescer e a evoluir exponencialmente. Os serviços que se propõem entregar os conteúdos multimédia mais adequados às preferências do cliente necessitam de possuir a capacidade de aprender os perfis dos utilizadores em múltiplas vertentes. Os perfis dos utilizadores necessitam de ser classificados a diversos níveis: pessoais, contextuais e tecnológicos. Perante esta classificação multidimensional dos clientes, o serviço irá compor de forma automática canais de televisão personalizados ao cliente e ao contexto em que este está inserido nos diversos momentos. Assim, os terminais do cliente deverão, para além das capacidades de visualização dos conteúdos multimédia, permitir a interacção explícita do utilizador com o serviço mas também toda a interacção implícita que fornecerá informação contextual ao servidor. Esta dissertação insere-se num trabalho mais amplo de criação de um serviço de IPTV com personalização automática de canais e classificação de conteúdos. Em paralelo com o desenvolvimento de um servidor de IPTV, existiu necessidade de criar um cliente móvel multiplataforma. Este cliente irá permitir ao utilizador a reprodução dos conteúdos multimédia e a iteração (explícita e implícita) com o servidor. Esta dissertação apresenta a metodologia e processo de criação de um cliente IPTV que possa ser executado em múltiplas plataformas e em diversos tipos de dispositivos.Internet services that provide the distribution of multimedia contents are growing exponentially and evolving in a constant way. Services that intend to deliver the multimedia contents that are more appropriate to the client preferences need to have the ability to learn the user profiles on multiple contexts. User profiles need to be learned an classified at different levels: personal, contextual and technological. Given this multi-dimensional classification of customers, the service will automatically compose television channels that are customized to the client and to the context where it is inserted at different moments in time. Thus, the client terminals should, in addition to the visualization capabilities of multimedia contents, allow the explicit interaction with the service, but also provide all implicit interactions that provide contextual information to the server. This work is part of a larger developing project that aims to create an IPTV service with automatic channel personalization and contents rating. In parallel with the development of an IPTV server, it was necessary to create a multiplatform mobile client able to fully interact with it. This client will allow users to visualize multimedia contents and interact (explicitly and implicitly) with the server. This dissertation presents the methodology and process of creating an IPTV client that can run on multiple platforms and in different types of device

Um estudo sobre a motivação na percepção dos estudantes dos cursos de Ciências Contábeis e Ciências Econômicas da UFPB campus I

Motivation is essential for students who want to become a professional through their studies at a university. Thus, research was needed to know at what level of motivation students are. The objective of this work was to make a comparative study, based on the Self-Determination Theory, the motivation level of beginning and finishing students of the Accounting and Economic Sciences courses at UFPB Campus I. For the development of this work we used bibliographic research. The descriptive research strategy was used, and the data collection instrument used was the Academic Motivation Scale (EMA), designed by Vallerand et al. (1989). For data analysis a comparison was made between the study developed by Andrade (2018) with the students of Accounting Sciences at UFPB campus I and this study that was applied to the course of Economics at UFPB with a sample of 59 students from this course. There were, even in a minimal portion of responses, students from the Accounting and Economic Sciences courses who reported being unmotivated. These results show the attention that this portion, although small, needs to have on the part of teachers to reach their goals. However, the overall results show that students in both courses are motivated by the course they have chosen and thus strive to extract as much information as possible to succeed in their working life.A motivação é imprescindível ao discente que almeja se tornar um profissional por meio dos seus estudos em uma universidade. Dessa forma, fez-se necessário uma pesquisa para saber em qual nível de motivação os estudantes se encontram. O objetivo desse trabalho foi realizar um estudo comparativo, tomando por base a Teoria da Autodeterminação, o nível de motivação de estudantes iniciantes e concluintes dos cursos de Ciências Contábeis e Ciências Econômicas da UFPB Campus I. Para o desenvolvimento do presente trabalho foram utilizadas pesquisas bibliográficas de caráter descritivo, foi empregada a estratégia de pesquisa de levantamento e o instrumento de coleta de dados utilizada foi a Escala de Motivação Acadêmica (EMA), idealizado por Vallerand et al. (1989). Para análise dos dados foi realizada uma comparação entre o estudo desenvolvido por Andrade (2018) com os alunos de Ciências Contábeis da UFPB campus I e esse estudo que foi aplicado ao curso de Ciências Econômicas da UFPB com uma amostra de 59 alunos desde curso. Houve, mesmo que em uma parcela mínima de respostas, alunos dos cursos de Ciências Contábeis e Ciências Econômicas que relataram estarem desmotivados. Estes resultados mostram a atenção que essa parcela, ainda que pequena, precisa ter por parte dos docentes para alcançarem seus objetivos. No entanto, os resultados de uma forma geral mostram que os discentes de ambos os cursos se encontram motivados com o curso que escolheram e dessa forma se empenham para extrair o máximo de informações para lograr êxito em sua vida profissional