The potential of mobility as a service to deliver sustainable value and implications for business models

Mobility is one of the greatest environmental challenges we face today. Therefore, there is increasing pressure to transition to a more sustainable urban mobility system, giving rise to Mobility-as-a-Service as a potential solution to reverse private car ownership. It consists of a digital interface that integrates existing transport modes and offers users the possibility to plan, book, and pay for upcoming trips. However, the complexity of this concept imposes several questions regarding its potential to deliver what it promises to. Therefore, the objective of this thesis is to understand the potential of this service to deliver sustainable value and the implication this has on its business models. The approach applied was qualitative exploratory research by conducting semi-structured interviews with industry experts. The findings reveal that the sustainability of Mobility-as-a-Service depends on (1) its ability to capture the segment of private car users to be profitable in the long run, (2) the extension of the public transport network with other forms of collective mobility to achieve social inclusion, and (3) the innovation of existing business models from vehicle suppliers and manufacturers to integrate environmentally sustainable objectives. Achieving these three goals requires stakeholders to engage in a reciprocal and mutually beneficial relationship. This research contributes to a holistic understanding of the ecosystem business model by considering the needs of key stakeholders.A mobilidade é um dos maiores desafios ambientais que enfrentamos hoje em dia. Por conseguinte, existe uma pressão crescente para a transição para um sistema de mobilidade urbana mais sustentável, dando origem à Mobilidade-como-um-Serviço como uma potencial solução para inverter o uso do carro particular. Consiste numa interface digital que integra os modos de transporte existentes e oferece aos utilizadores a possibilidade de planear, reservar e pagar viagens. No entanto, a complexidade deste conceito impõe várias questões quanto ao seu potencial para entregar aquilo que promete. Portanto, o objetivo desta tese é compreender o potencial deste serviço para criar valor sustentável e a implicação que isto tem no seu modelo de negócio, através da realização de entrevistas semi-estruturadas a experts da indústria. Os resultados revelam que a sustentabilidade da Mobilidade-como-um-Serviço depende (1) da sua capacidade de captar o segmento de utilizadores de carro particular de forma a ser rentável a longo prazo, (2) da extensão da rede de transportes públicos com outras formas de mobilidade coletiva para alcançar a inclusão social, e (3) da inovação dos modelos de negócio existentes dos fornecedores e fabricantes de veículos para integrar objetivos ambientalmente sustentáveis. A realização destes três objetivos exige que as partes interessadas se empenhem numa relação recíproca e mutuamente benéfica. Esta investigação contribui para uma compreensão holística do modelo empresarial do ecossistema, ao considerar as necessidades dos principais interessados

Técnicas de obturação termoplásticas: onda contínua de calor e carrier based

O Tratamento Endodôntico Não Cirúrgico, é composto por diferentes fases, entre as quais se destacam o acesso endodôntico, instrumentação, desinfeção e a obturação. Depois de uma abertura cuidadosa, é importante ter o canal instrumentado e conformado para facilitar a irrigação e garantir uma correta desinfeção, o que combinado com uma obturação hermética e tridimensional irá garantir uma maior taxa de sucesso. As técnicas termoplásticas, ao utilizarem um material termoplástico em conjunto com o cimento, permitem preencher melhor os espaços e o acesso a zonas com anatomias mais complexas. O objetivo deste trabalho foi efectuar uma pesquisa bibliográfica para analisar e comparar duas técnicas de obturação: a Onda Contínua de Calor e a Carrier Based. Com a realização deste trabalho encontramos que devido à especificidade do caso clínico e às características anatómicas há influencia na escolha da técnica de obturação.Non-surgical Endodontic Treatment consists of different phases, among which stand out endodontic access, instrumentation, disinfection and a filling. After a careful opening, it is important to have the channel instrumented and shaped to facilitate irrigation and ensure proper disinfection, which combined with a hermetic and three-dimensional seal to ensure a higher success rate. The thermoplastic techniques, when using a thermoplastic material in conjunction with the cement, better accessory of the spaces and access to zones with more complex anatomies. The objective of this work is to perform a bibliographical research to analyze and compare two techniques of obturation: a Continuous Wave and a Carrier Based. With the accomplishment of this work and its specification of the clinical case and the anatomical characteristics in the influence of the choice of the technique of obturation

Melatonin as metabolic regulator of sertoli cells

Melatonin cooperates with insulin in the regulation of glucose homeostasis. Within the testis, glucose metabolism in the somatic Sertoli cell (SC) is pivotal for spermatogenesis. Since the effects of melatonin on male reproductive physiology remain largely unknown, we hypothesized that melatonin may affect spermatogenesis by modulating SCs metabolism, interacting with insulin. To test our hypothesis SCs were cultured in the absence or presence of insulin or melatonin (or both) and metabolite production/consumption was determined by proton nuclear magnetic resonance (1H-NMR). Protein levels of glucose transporters (GLUT1 and GLUT3), phosphofructokinase 1, lactate dehydrogenase (LDH) and monocarboxylate transporter 4 were determined by Western blot. LDH activity was also assessed. Melatonin-only treated SCs showed increased glucose consumption via modulation of GLUT1 expression, but decreased LDH protein expression and activity, which resulted in lower lactate production. Moreover, melatonin-only exposed SCs produced and accumulated less acetate than insulin-exposed cells. Notably, the combined treatment (insulin plus melatonin) increased acetate production by SCs, but intracellular acetate content remained lower than in insulin-only exposed cells. Finally, intracellular redox state was normalized in SCs by melatonin exposure, as reflected by the intracellular lactate/alanine ratio. Interestingly, SCs exposed to insulin plus melatonin produced more lactate and normalized the expression of some glycolysis-related enzymes and transporters. These findings illustrate that melatonin regulates SCs metabolism and thus, may affect spermatogenesis. Since lactate produced by SCs provides nutritional support and has an anti-apoptotic effect in developing germ cells, melatonin supplementation may be an effective therapy for diabetic male individuals facing subfertility/infertility.A melatonina, juntamente com a insulina, cooperam na regulação da homeostase da glucose. Nos testículos, o metabolismo das células de Sertoli é essencial para a espermatogénese. Uma vez que os efeitos da melatonina na fisiologia reprodutiva masculina permanecem largamente desconhecidos, neste trabalho colocamos como hipótese que a melatonina pode afetar a espermatogénese através da modulação do metabolismo das células de Sertoli, interagindo com a insulina. Para testar esta hipótese foram feitas culturas de células de Sertoli na presença ou ausência de insulina ou melatonina (ou ambos) e a produção/consumo de metabolitos foi determinada através da técnica de ressonância magnética nuclear. Os níveis proteicos dos transportadores de glucose (GLUT1 e GLUT3), fosfofrutoquinase, lactato desidrogenase (LDH) e transportador monocarboxilado 4 foram determinados através da técnica de Western Blot. A atividade da LDH foi também avaliada. As células de Sertoli tratadas somente com melatonina revelaram um aumento no consumo de glucose através da modulação da expressão do GLUT1, mas diminui os níveis proteicos e a atividade da LDH, o que resulta numa baixa produção de lactato. Além disso, as células de Sertoli expostas somente à melatonina produziram e acumularam menos acetato do que as células expostas à insulina. É de salientar que o tratamento combinado da insulina com melatonina aumenta a produção de acetato pelas células de Sertoli, contudo, o conteúdo intracelular em acetato permanece mais baixo do que nas células expostas somente à insulina. Finalmente, o estado redox foi normalizado nas células de Sertoli tratadas com melatonina, conforme refletido pelo rácio lactato/alanina intracelular. É de notar que nas células de Sertoli expostas à insulina mais melatonina a produção de lactato aumenta e é normalizada a expressão de algumas enzimas, bem como de transportadores, envolvidos na glicólise. Estes resultados demonstram a relevância da melatonina na regulação do metabolismo das células de Sertoli, o que por sua vez pode afetar a espermatogénese. Uma vez que o lactato produzido pelas células de Sertoli fornece suporte nutricional e tem um efeito anti-apoptótico nas células germinativas, uma terapia com melatonina pode ser efetiva para indivíduos diabéticos com problemas relacionados com infertilidade

Formulation of sustainable concentrated rinse-off products

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2020, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.Contexto: Nos últimos trinta anos, os produtos de higiene concentrados têm sido alvo de especial atenção, como alternativa mais ecológica aos produtos de higiene tradicionais. Tal deve-se às inúmeras vantagens que a versão concentrada apresenta, já que a redução da quantidade de água do produto permite uma redução do conteúdo nominal, o que leva ao menor uso de material de acondicionamento primário, bem como à possibilidade de transporte de mais unidades de produto numa só viagem, e portanto menos viagens e uma redução da carga transportada, com menores consumos de combustível e consequentemente a uma diminuição da pegada ambiental. Contudo, a investigação e desenvolvimento de produtos de higiene sustentáveis é um trabalho extenso que requer conhecimentos sobre a totalidade do ciclo de vida do produto e em especial uma profunda compreensão da teoria dos comportamentos de tensioativos e de como formular para se atingirem os atributos desejados do produto. O objetivo deste estudo foi adquirir conhecimentos sobre a microestrutura de misturas simples de tensioativos a várias concentrações, visando manter as características de desemprenho e de eficácia a que os consumidores estão habituados. Materiais e Métodos: Quatro tensioativos diferentes foram utilizados sendo dois tensioativos aniónicos, um tensioativo anfotérico e outro não-iónico replicando as misturas mais básicas presentes no mercado. Prepararam-se 60 formulações com concentrações e rácios diferentes de tensioativos. Posteriormente, procedeu-se à avaliação das suas características macroscópicas e da sua microestrutura, através da observação ao microscópio ótico com luz polarizada. Os valores de viscosidade e pH foram também determinados. Resultados: A aparência macroscópica dos sistemas de tensioativos variou de uma solução aquosa transparente até um gel de alta viscosidade opaco. Nas concentrações mais baixas de tensioativo total (10-20%) obtiveram-se soluções isotrópicas, de fluxo Newtoniano e baixa viscosidade. Com um aumento da concentração total de tensioativo verificou-se um aumento da viscosidade e um comportamento pseudoplástico do gel com aparecimento de propriedades de birrefringência e anisotropia e anisotropia ao microscópio ótico de luz polarizada, o que indica a presença de cristais líquidos nas misturas. Conclusão: Foi alcançado o objetivo de formular produtos de higiene com uma concentração significativamente reduzida em comparação com as opções tradicionais. Obtiveram-se soluções de cristais-líquidos de tensioativos. Não obstante, tratam-se de resultados preliminares que necessitam de mais estudos para alcançar os resultados desejados.Purpose: Concentrated rinse-off products have, for the past three decades, been receiving more attention as a means of providing a more ecological alternative to traditional wash-off products, because of their advantages when it comes to sustainability. Reducing the amount of water transported allows the reduction of the products volume, leading to more product unities being distributed in one trip and therefore less trips, and weight, leading to lower fuel consumptions and thus a decrease on the carbon footprint, as well as reduction of packaging material. However, research and development of sustainable rinse-off products is a strenuous job that requires knowledge of the entire life cycle of the product and in particular a understanding of surfactant science, and how to manipulate formulations to attain the desired product attributes. The purpose of this study was to acquire knowledge about the microstructure and rheological behaviour of simple surfactant mixture and various concentrations, their microstrutures and rheology, while aiming to maintain the performance characteristics desired by consumers, in terms of product use, mildness and foaming. Materials and Methods: Four different surfactants were used, two anionic surfactants as primary surfactants and one amphoteric and another non-ionic surfactant, used as secondary surfactants, replicating basic surfactant blends on the market. Thus, 60 formulations were prepared with different surfactant combinations at different ratios. Subsequently, the formulations were observed under the microscope with polarized light, their macroscopic characteristics were identified, and their viscosity and pH were obtained. Results: The physical appearance of these systems varied from transparent aqueous solution to an opaque gel with high viscosity. At low concentrations of total surfactant (10-20%), isotropic solutions, presenting a low viscosity Newtonian flow were present. As total surfactant concentration was increased an increase in viscosity was observed and the gels became shear-thinning, presenting birefringence when observed under microscope polarised light, which indicated the presence of liquid crystals in the blends. Conclusion: The goal to obtain concentrated surfactant systems was achieved, and surfactant liquid crystals were obtained. This study provides possible explanations regarding the results obtained and points out factors that should be tackled to overcome the formulations problems.Com o patrocínio da Faculdade de Farmácia, Universidade de Lisboa e College of Fashion London, University of Arts

Investigating the role of foxj1a+ ependymal cells in zebrafish splinal cord regeneration using lineage tracing and cell ablation approaches

Tese de mestrado em Biologia Molecular e Genética, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2017As lesões da espinal medula afectam actualmente milhões de pessoas em todo o mundo, que se deparam com um agravamento radical da sua qualidade de vida que, na maioria dos casos, não poderá ser recuperada. A Organização Mundial de Saúde define “lesão da espinal medula” como a perda total ou parcial de função neural provocada por um trauma ou uma patologia da espinal medula, resultando na diminuição do controlo motor abaixo do local da lesão assim como na perda de sensibilidade e regulação do sistema nervoso autónomo. A resposta clínica padrão actual tem como objectivo apenas tentar impedir o alastramento da lesão e consiste na realização de cirurgias para estabilizar a estrutura da coluna vertebral e descomprimir o local da lesão, seguidas de tratamento com metilprednisolona. No entanto, dado que o ambiente da lesão em mamíferos é extremamente inibitório para a ocorrência de regeneração, novos estudos têm tentado obter soluções terapêuticas que actuem na promoção de um ambiente pró-regenerativo, assim como na protecção dos tecidos que permanecerem intactos e funcionais após a lesão. A maior parte destas novas terapêuticas tem como objectivo prevenir o aparecimento de fenómenos associados à chamada lesão secundária ou de mitigar o seu efeito, dado que estes são em grande parte responsáveis pelo grau da lesão a longo prazo. Ao contrário do que se considerou durante décadas, investigações dos últimos 20 anos têm demonstrado que existem determinadas áreas no sistema nervoso central em que ocorre a formação de novos neurónios durante a vida adulta. Verificou-se também que existem células com capacidades estaminais neurais nestas e noutras zonas do sistema nervoso central, o que sugere que algumas células no adulto poderão ser estimuladas a originar novos neurónios e glia após uma lesão. As células ciliadas que revestem o interior do canal central na espinal medula, designadas células ependimárias, são um exemplo disso. Vários estudos observaram que estas células ependimárias respondem a uma lesão na espinal medula através da proliferação e migração para o local da lesão, onde originam astrócitos e oligodendrócitos; no entanto, são também capazes de originar neurónios quando cultivadas in vitro. O seu perfil de expressão inclui vários marcadores associados a células estaminais neurais, apoiando observações que indicam estas células como as únicas a possuir capacidades multipotentes no nicho do canal central. Pelo facto de serem as únicas células multiciliadas no canal central, as células ependimárias de mamífero podem ser identificadas pela expressão do factor de transcrição Foxj1, conhecido pelo seu papel como regulador da ciliogénese. O peixe-zebra (Danio rerio) já é conhecido como modelo em biologia do desenvolvimento há mais de 30 anos, mas a sua utilização para o estudo da regeneração de tecidos e órgãos é bastante mais recente. As extraordinárias capacidades de regeneração deste organismo, aliadas à bateria de métodos genéticos e moleculares desenvolvidos e adaptados para este modelo, tornaram o peixe-zebra num aliado inestimável para entender processos regenerativos e compará-los com a situação dos mamíferos, cujas capacidades regenerativas são muito inferiores. As características biológicas do peixe-zebra são particularmente apelativas, por exemplo para geração de linhas transgénicas: são capazes de gerar um grande número de embriões – transparentes, que permitem a observação de fenótipos relativamente cedo – e atingem a maturidade aos 3 meses, acelerando o processo de geração da linha. Os métodos desenvolvidos para a geração de peixes transgénicos também têm demonstrado elevados níveis de sucesso, especialmente o sistema Tol2, que se baseia na injecção do DNA desejado juntamente com mRNA que codifica para uma transposase; esta reconhece sequências específicas que flanqueiam o DNA injectado e insere-o no genoma do embrião. Entre as várias estruturas que o peixe-zebra consegue regenerar encontra-se a espinal medula, que obtém uma recuperação funcional quase completa um mês após a lesão. Este resultado deve-se tanto ao crescimento de axónios seccionados como à formação de novos neurónios no local da lesão, mecanismos promovidos por um ambiente pró-regenerativo. Os novos neurónios e células da glia são produzidos por células que revestem o canal central da espinal medula, tendo por isso função de epêndima, mas que também apresentam outras características morfológicas reminiscentes das células da glia radial, progenitores neurais durante o desenvolvimento (tanto em peixe-zebra como em mamífero). A utilização de marcadores moleculares para identificação destas células tem sido controversa, mas existe um marcador que poderá ser utilizado de forma clara. Devido à sua função ependimária, estas células possuem cílios e expressam por isso o factor de transcrição Foxj1a, um dos ortólogos do Foxj1 de mamífero. Será por isso importante desenvolver ferramentas que permitam estudar o papel que as células foxj1a+ da espinal medula do peixe-zebra desempenham após uma lesão, que pode ser realizado através da identificação da sua descendência (experiência de lineage tracing) e da sua função real no contexto de uma lesão promovendo a sua ablação específica. Este trabalho apresentava assim como objectivo principal o estabelecimento de linhas transgénicas estáveis em peixe-zebra que permitissem efectuar de forma eficaz e separadamente: 1) a marcação permanente das células foxj1a+ e da sua descendência; 2) a ablação específica das células foxj1a+, em ambos os casos após uma lesão da espinal medula. Para a geração da linha para lineage tracing foram testados três constructs separadamente, mas apenas com um deles foi possível observar passagem evidente do transgene para embriões F1. Ainda assim, o sucesso desta transgénese foi inferior ao reportado para o método utilizado. Os outros dois constructs apresentaram percentagens muito baixas de embriões positivos e de níveis de expressão dos transgenes após injecção, mesmo depois de tentativas de optimização, e de todos os que cresceram até atingir maturidade não foram detectados peixes fundadores de forma inequívoca. Para a geração da linha para ablação das células foxj1a+ foram testados dois constructs com os quais não foi possível obter um número suficiente de embriões positivos para crescer. O primeiro foi abandonado quando se observou que várias características do plasmídeo em que estava inserido não seriam adequadas para manter um nível de expressão adequado à experiência, como a falta da sequência Kozak e do sinal de poliadenilação a flanquear a sequência codificante. O segundo foi desenhado de forma a optimizar todas as sequências para promover uma expressão eficiente do transgene, contendo sequências de reconhecimento da transposase e sequências regulatórias a 5’ e 3’ da sequência codificante vindas de um plasmídeo utilizado como controlo positivo para as injecções, assim como a sequência codificante de uma proteína fluorescente (como repórter) que apresentara bons níveis de expressão com o promotor foxj1a. Não obstante, este construct parece não ter sido integrado no genoma dos embriões em que foi injectado dado que praticamente toda a expressão observada às 24 horas-pós-fertilização tinha sido perdida 4 dias depois. As razões que levaram ao insucesso na obtenção de embriões positivos após a injecção são desconhecidas para a maioria dos constructs testados, mas poderão estar relacionadas com mutações não detectadas nas regiões regulatórias ou nas sequências de reconhecimento da transposase, que impediriam a correcta expressão do construct ou a sua inserção no genoma, respectivamente. A experiência de lineage tracing concebida baseia-se na utilização do sistema de recombinação CreERT2/LoxP, que utiliza uma versão modificada da enzima Cre a que foi acrescentado um receptor de estrogénio. Esta modificação adiciona um passo de controlo temporal à experiência visto que é necessário activar a CreERT2 com administração da droga 4-OHT para que a enzima possa efectuar a recombinação entre locais LoxP e assim promover a marcação de células foxj1a+. O segundo objectivo deste trabalho foi então a optimização do protocolo de activação da CreERT2, que foi conseguido pela primeira vez neste laboratório. Inicialmente foram utilizados embriões que expressavam a CreERT2 e a cassete repórter na maioria das células (expressão induzida pelo promotor de uma proteína heat shock), tendo-se verificado que a eficácia da recombinação foi directamente influenciada pela concentração de 4-OHT administrada. A remoção do córion dos embriões por adição de pronase também promoveu este efeito ao permitir um acesso mais rápido da droga aos tecidos. Embriões e larvas F1 dos fundadores obtidos com a injecção de um dos constructs para lineage tracing foram também utilizados para testar a activação da CreERT2, mas neste caso não se observou a ocorrência de recombinação em células foxj1a+, mesmo após a sua proliferação ter sido induzida através da realização de uma lesão na espinal medula. Devido ao insucesso em gerar linhas transgénicas funcionais neste trabalho, será necessário utilizar novos métodos e/ou novos constructs para obter ferramentas biológicas que permitam no futuro compreender a função das células foxj1a+ durante a regeneração da espinal medula no peixe-zebra.Spinal cord injury (SCI) is a disabling condition affecting millions of people worldwide. In order to improve functional recovery, new therapies are being devised to counteract the non-regenerative environment of the mammalian spinal cord. Ependymal cells (EC) of the spinal cord central canal have been proven to hold neural stem cell properties in vitro, suggesting that a pro-neurogenic fate could potentially be promoted in vivo after a lesion. The zebrafish Danio rerio has proved a valuable tool for developmental studies and, in recent years, for regenerative processes due to its remarkable ability to regenerate several organs and tissues. After SCI new neurons and glia are generated by the cells lining the central canal, which hold a strong resemblance to mammalian EC. Both mammalian and zebrafish EC have in common the expression of the transcription factor responsible for cilia formation: Foxj1/Foxj1a. However, no study has been performed to discover the progeny of zebrafish foxj1a+ cells after a lesion or their functional role in regeneration. This work aimed at generating stable transgenic zebrafish lines that allowed the investigation of foxj1a+ ependymal cell progeny after SCI, using lineage tracing, and also their specific ablation with a suicide gene. A total of three constructs for lineage tracing lines and two constructs for cell ablation lines was injected with transposase mRNA into one-cell stage embryos but only one of the lineage tracing constructs resulted in clear germline transmission to F1 embryos. All the other four constructs proved very difficult to generate stable expression in injected embryos as well as an adequate number of positives, even after several optimization attempts. Reasons for this lack of transgenesis efficiency are not completely understood but may include inadequate coding sequence features, undetected problems in untranslated regions, or obstacles to transposition such as mutations in transposase recognition sequences. Since the lineage tracing is based on the CreERT2/LoxP technology, optimization of CreERT2 activation was also performed. It was found that recombination efficiency is directly influenced by 4-OHT concentration and enhanced by treatment with pronase. However, when using a lineage tracing line no recombination was detected in foxj1a+ cells even after induced proliferation, prompting the need to validate CreERT2 function in this line

Environmental correlates of European rabbit (Oryctolagus cuniculus) activity

Dissertação de mestrado em EcologiaO coelho-europeu (Oryctolagus cuniculus) é endêmico da Península Ibérica, onde é considerado uma espécie-chave e uma espécie cinegética. As suas populações estão em declínio há décadas, com sérias implicações no funcionamento do ecossistema e na economia ibérica. Estratégias de recuperação foram implementadas, mas com sucesso limitado, enfatizando a necessidade de uma compreensão mais profunda da ecologia do coelho-europeu. Utilizando armadilhas fotográficas em várias propriedades de caça no sul de Portugal, foram investigados os fatores ambientais relacionados com o nível de atividade diário do coelho europeu, e sua sobreposição de atividade e sincronização com a dos predadores mamíferos coexistentes. Os coelhos reduziram seu nível de atividade em resposta à temperatura diária máxima, provavelmente para assegurar uma termorregulação eficaz. Os efeitos negativos da densidade no nível de atividade do coelho estão provavelmente relacionados a uma adaptação para maximizar a ingestão de alimento enquanto minimizam o risco de predação. Finalmente, os coelhos apresentaram alto nível de atividade associado a picos de atividade menos intensos nos habitats constituídos por matos, o que sugere uma estratégia para a redução da probabilidade individual de risco de predação. Por outro lado, nos montados, eles revelaram um menor nível de atividade diário. Isto está de acordo com a hipótese “risk allocation”, que postula que as presas que vivem num ambiente de risco moderam o seu nível de atividade, aumentando a atividade durante breves pulsos de segurança. Além disso, ao não responder à atividade do predador, mas à estrutura do habitat e ao tamanho do seu grupo, sugere que os coelhos europeus possam responder mais à perceção de risco do que ao próprio risco de predação. Esses resultados fornecem novas ideias sobre as respostas de predadores de coelho, importantes para definir estratégias de conservação para sua recuperação.The European rabbit (Oryctolagus cuniculus) is endemic of the Iberian Peninsula, where it is considered a keystone and an emblematic game species. Its populations have been declining for decades, with serious implications to ecosystem functioning and to Iberian economy. Recovery strategies have been implemented but with limited success, stressing the need for a deeper understanding of European rabbit ecology. Using camera trapping on multiple game estates in south Portugal, I investigated the environmental factors related to European rabbit diel activity level, and its activity overlap and synchrony with that of coexisting mammalian predators. Rabbits reduced their activity level as a response to maximum daily temperature, likely to ensure effective thermoregulation. The negative density-dependence effects on rabbit activity level is related probably to an adaptation to maximize the food intake while minimizing predation risk. Finally, European rabbits where found to had high activity level associated to less intense activity bursts in scrubland habitats, which suggest a strategy for the reduction of individual probability of predation risk. Conversely, in agroforestry, they revealed a lower diel activity level diel. This is in accordance with the risk allocation hypothesis, which postulates that prey living in a risky environment moderate their activity level, increasing activity during brief pulses of safety. Furthermore, by not responding to predator activity but rather to habitat structure and to their group size, suggests that European rabbits’ may respond to the perception of risk more than to predation risk itself. These results provide new insights into rabbit anti-predator responses, important to define conservation strategies for its recovery

Identification of regulatory polymorphisms associated with breast cancer risk

Dissertação de Mestrado, Ciências Biomédicas, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2014O cancro da mama é uma das patologias oncológicas mais comuns, e causa de morte mais frequente entre as mulheres. Trata-se de uma doença complexa com fatores genéticos e não genéticos envolvidos na sua etiologia. Até ao momento, o conhecimento adquirido acerca do risco genético não explica mais do que dois terços dos casos de cancro familiares permanecendo ainda por explicar cerca de 65% a 70%. Com os recentes avanços na tecnologia de microarrays e nos estudos de associação realizados a nível de genoma inteiro (genome-wide association studies, GWAS), têm surgido evidências que sugerem que as variantes cis-reguladoras podem ser importantes para o risco de cancro da mama. Variantes cis-reguladoras são polimorfismos que regulam a expressão de genes. Podem-no fazer através da modificação de elementos reguladores como, por exemplo: afetando a ligação de fatores de transcrição em promotores e elementos intensificadores Essas variantes são frequentes na população e contribuem para a variabilidade intra e inter -espécies. Com base nestas evidências, a nossa hipótese consiste em que a maioria dos polimorfismos comuns e associados a risco ainda por identificar podem ser também cis-reguladores. Deste modo, a procura para a restante suscetibilidade genética do cancro da mama deve centrar-se nas variantes com maior potencial cis-regulador. As variantes cis-reguladoras podem ser identificadas de diferentes formas, como por exemplo através de loci de características quantitativas de expressão (expression quantitative trait loci, eQTL) e análises de expressão diferencial alélica (differential allelic expression, DAE) em indivíduos heterozigóticos. DAE é uma abordagem que compara os níveis relativos de expressão dos dois alelos do mesmo gene em indivíduos heterozigóticos, utilizando um SNP transcrito (tSNP). Esta técnica tem revelado ser bastante eficaz, uma vez que compara os níveis de transcritos dos alelos dentro do mesmo contexto celular e de haplótipos, pelo que a influência de efeitos trans é eliminada (por exemplo concentração de fatores de transcrição no núcleo). Este trabalho teve dois grandes objetivos: o primeiro, a validação da dos resultados de DAE nos polimorfismos cis-reguladores identificados num estudo anteriormente realizado pela Prof. Ana Teresa Maia; o segundo, a identificação de novos loci envolvidos no risco para o cancro da mama. No estudo para validação da DAE, foi medida a quantidade relativa da expressão dos dois alelos de 10 SNPs, previamente identificados como apresentando DAE (rs2526935; rs10503416; rs10513376; rs7600326; rs6494466; rs10016; rs13265801; rs9250; rs8097892; rs1384) e de 4 SNPs sem DAE (rs2834653; rs710945; rs1477017 e rs10521). Foram utilizadas 18 amostras de tecido mamário de indivíduos saudáveis e os níveis da DAE foram determinados utilizando a técnica de PCR em tempo real específica alélica. As distribuições de DAE foram comparadas aplicando um Teste t de Student (t-test), o qual compara as médias da distribuição de rácios de DAE. No total dos 10 SNPs com DAE validámos 6 SNPs que eram consistentes com os resultados observados anteriormente. Apenas um de quatro SNPs sem evidências da DAE mostrou consistência com os resultados anteriores. Para o estudo de identificação de novos loci foi aplicada uma abordagem inovadora, a qual consiste no cruzamento de dados para cancro da mama publicados nos GWAS com os nossos dados de DAE. Esse cruzamento de dados é feito de acordo com a localização cromossómica, distância física (janelas de ±250kb a partir da variante com DAE) e padrões de desequilíbrio de ligação (linkage disequilibrium, LD). Com este exercício pretendemos testar se esta abordagem pode ajuda a priorizar os loci candidatos de GWAS para validação e posteriores análises funcionais. Este cruzamento de dados permitiu identificar vários loci que contêm SNPs associados com risco para cancro da mama e SNPs com DAE. Para uma análise inicial selecionaram-se dois loci: 17q22 (TOM1L1/COX11/STXBP4) e 12q24 (AACS), com base nos cenários de DAE, LD entre o tSNP de DAE e o SNP do GWAS. Esses dois loci foram inicialmente analisados para potenciais elementos reguladores e evidência funcional (promotores, intensificadores e ligação de fatores de transcrição) nos locais onde se encontram os candidatos a variantes cis-reguladoras. Para essa análise foram utilizadas uma base de dados, RegulomeDB, e um navegador de informação genómica, Genome Browser, que contêm informações sobre hipersensibilidade à desoxirribonuclease (DNAse), TFBS, e regiões promotoras, evidências obtidas em estudos in silico e/ou in vitro para variantes codificadoras e não codificadoras. No locus 17q22, foram encontrados 12 SNPs em sobreposição com regiões que contêm marcadores para elementos funcionais, tais como promotores e intensificadores. Sugerindo que esses podem possivelmente ter um efeito funcional através da regulação da expressão do gene. Posteriormente, analisaram-se os SNPs para a estrutura de LD nessa região e para identificação dos haplótipos na população os quais podem ser responsáveis pelo aumento ou diminuição na expressão dos genes. Foram identificados quatro haplótipos comuns associados com diferenças nos níveis de expressão. No locus 12q24, o tipo de análises realizadas foram as mesmas descritas para o outro locus. Para o locus 12q24 foram encontrados 13 SNPs em sobreposição com regiões contendo elementos reguladores o que sugere um possível efeito funcional na regulação da expressão dos genes. Todos SNPs foram também analisados para a estrutura de LD e identificação de haplótipos. Com base nessa análise, foram identificados quatro haplótipos comuns associados com as diferenças nos níveis de expressão. Essas variantes candidatas a serem cis-reguladoras foram selecionadas com base em análises in silico, utilizando ferramentas para a previsão de potenciais locais de ligação de fatores de transcrição. Posteriormente, 3 SNPs foram analisadas funcionalmente in vitro, numa linha celular de cancro da mama (HCC1954). Como os genes presentes em cada um dos loci mostraram evidências para a presença de variantes cis-reguladoras, decidiu-se validar os níveis de DAE em tecido de mama normal e compará-las com os níveis de DAE no sangue. Para essa análise usou-se um tSNP para cada gene (rs17817901 no COX11 e rs7138557 no AACS). Validaram-se os resultados da DAE, no tecido da mama, e para o AACS e observou-se que esses não são comparáveis com os níveis da DAE no sangue. Os nossos resultados não suportam, portanto, o uso de sangue em estudos de DAE em substituição para o tecido da mama, na aplicação futura em estudos de predisposição ao cancro da mama. Para averiguar se a DAE em ambos os loci está realmente associada com o risco de cancro de mama, foi realizado um estudo de caso-controlo. Foi encontrada uma associação significativa neste estudo, o que sugere que DAE em ambos os loci deve ser futuramente explorado como instrumento de previsão de risco para cancro da mama. Futuramente, uma análise mais aprofundada da regulação destes genes poderá levar também à compreensão da biologia de predisposição ao tumor e contribuir para o desenvolvimento de terapias futuras, especialmente na área da medicina personalizada

Condi : from spices to powder desserts

Condi is an established Portuguese brand in the powder dessert category, with a twenty-year history. It offers a portfolio comprising many product categories and overall the company produces and imports around 500 different product references. Condi has been focusing on differentiating the flavours and creating a product portfolio that best fits the needs of retailers and consumers. This case study presents an overview of the company as well as an analysis of the consumer trends and the powder dessert industry in Portugal. On the one hand, it is an industry where there are opportunities to innovate in new products in specific categories. On the other hand, the economic instability in the country, the power of multinational brands and the rise of a few private labels may compromise Condi’s performance and growth in its domestic market. The purpose of this case is to give the information necessary so that the reader may be able to make a decision about the path the company should take in the near future, within three possible choices. Firstly, it has been diversifying its product portfolio but focusing in one particular category, the powder mix for desserts. Should it continue this strategy or should it prioritize other categories? Secondly, should the company focus on increasing its market share within the main retailers? Finally, should Condi’s priority be the internationalization, investing in a more committed international mode (considering it exports since 1992) and/or extending the sale to other foreign markets?A Condi é uma marca Portuguesa estabelecida na categoria de sobremesas em pó, com vinte anos de história. Oferece um portfolio que inclui muitas categorias e, no geral, produz e importa cerca de 500 referências de produtos. A Condi tem vindo a apostar na diferenciação de sabores e na criação de um portfolio de produtos que melhor se adapta às necessidades dos retalhistas e consumidores. Este estudo de caso apresenta uma visão geral da empresa, bem como uma análise das tendências de consumo e da indústria de sobremesas em pó em Portugal. Por um lado, este é um sector onde existem oportunidades de inovação em novos produtos de categorias específicas. Por outro lado, a instabilidade económica no país, o poder das marcas multinacionais e o surgimento de algumas marcas próprias podem comprometer o desempenho e crescimento da Condi no mercado interno. O objectivo do caso é dar as informações necessárias para que o leitor seja capaz de tomar uma decisão sobre o caminho que a empresa deve escolher no futuro, entre três possíveis escolhas. Primeiro, a empresa tem vindo a diversificar o seu portfolio de produtos, mas tem-se focado numa categoria específica, as misturas em pó para sobremesas. A empresa deve continuar esta estratégia ou deve priorizar outras categorias? Segundo, a empresa deve concentrar-se em aumentar a sua participação nos principais retalhistas? Finalmente, a internacionalização deve ser a prioridade da Condi, investindo noutros modos de expansão (considerando que exporta desde 1992) e/ou estendendo a venda para outros mercados estrangeiros

As cesarianas em Portugal continental: fatores explicativos

Mestrado em EconomiaEste trabalho analisa a indução da procura por parte dos médicos obstetras/ ginecologistas e os fatores explicativos das cesarianas em Portugal Continental. Com base em dados do INE agregados em NUTS II, para o período de 2002 a 2010. Estimou-se um modelo Binomial Negativo para Dados em Painel. Concluímos que as mães com idade entre os 20-34 anos, as mães empregadas e desempregadas ou inativas, e o número de médicos obstetras/ ginecologistas tendem a afetar de forma positiva e significativa a taxa de cesarianas em Portugal Continental.This study examines the induction of demand by obstetricians/ gynecologists and explanatory factors for cesarean section in Portugal. Based on INE data aggregated at NUTS II, for the period 2002 to 2010. Estimated a Negative Binomial model for Panel Data. We conclude that the mothers aged 20-34 years, mothers employed and unemployed or inactive, and the number of obstetricians/ gynecologists tend to affect positively and significantly the rate of cesarean delivery in Portugal