El paper de les fosfatases àcides en la malaltia de Glässer

En aquesta tesi es va proposar identificar i caracteritzar els gens responsables de l'activitat fosfatasa àcida en el bacteri Gram negativa Haemophilus parasuis. La seva importància resideix en el fet que aquests enzims juguen un paper fonamental en nombrosos processos, inclosa la patogènesi bacteriana. H. parasuis és l'agent etiològic de la malaltia de Glässer, cada vegada més comuna. Per primera vegada s'ha identificat i caracteritzat dues fosfatases d'aquest bacteri, però cal estudiar-les més en profunditat.En esta tesis se propuso identificar y caracterizar los genes responsables de la actividad fosfatasa ácida en la bacteria Gram negativa Haemophilus parasuis. Su importancia reside en que estas enzimas juegan un papel fundamental en numerosos procesos, incluida la patogénesis bacteriana. H. parasuis es el agente etiológico de la enfermedad de Glässer, cada vez más común. Por primera vez se ha identificado y caracterizado dos fosfatasas de esta bacteria, pero es necesario estudiarlas más en profundidad

Estudio bacteriológico y caracterización molecular por eric-pcr del haemophilus parasuis en granjas porcinas intensivas de Colombia

Haemophilus parasuis es un microorganismo emergente y considerado patogénico, por colonizar tempranamente porcinos luego de finalizar la inmunidad materna. Convirtiéndose en el principal impacto económico en la industria porcícola, por los altos costos en tratamientos con antibióticos y la alta mortalidad en animales, en la etapa aguda de la enfermedad. En Colombia no se han realizado estudios previos de este microorganismo, por esta razón el objetivo de esta investigación fue estudiar bacteriológicamente y caracterizar molecular por ERIC-PCR, aislamientos de Haemophilius parauis en granjas porcinas intensivas de Colombia. Para ello, se colectaron 445 muestras de porcinos de las cuales se asilaron positivamente 33 (7,41%) por cultivo y 42 (9,4%) por PCR, en 77 granjas porcícolas.Magíster en Ciencias BiológicasMaestrí

Identification of a class B acid phosphatase in Haemophilus parasuis

An acid phosphatase activity was detected in the supernatant of Haemophilus parasuis, a Gram-negative pleomorphic bacillus and the causative agent of Glässer’s disease in pigs. To identify the gene responsible for the secreted activity, a genomic library of H. parasuis strain ER-6P was produced in Escherichia coli. Screening of the library allowed identifi cation of two homologs to known phosphatases: PgpB and AphA. PgpB was predicted to be located in the bacterial membrane through six transmembrane domains while AphA was predicted to have a signal peptide. The aphA gene was cloned and expressed in E. coli. Characterization of H. parasuis AphA indicated that this protein belongs to the class B nonspecifi c acid phosphatases. AphA contained sequence signatures characteristic of this family of phosphatases and its activity was inhibited by EDTA. The optimal pH of recombinant AphA differed from that of the phosphatase activity found in H. parasuis supernatants. In addition, the phosphatase activity from H. parasuis supernatants was not inhibited by EDTA, indicating that H. parasuis AphA does not account for the phosphatase activity observed in the supernatants. Our results demonstrate the presence of a class B acid phosphatase (AphA) in H. parasuis and suggest that the bacterium would also secrete another, as yet unidentifi ed phosphatase. [Int Microbiol 2014; 17(3):141-147]Keywords: Haemophilus parasuis · non-specifi c acid phosphatases · phosphatase activity · Glässer’s diseas

Evaluación de desenlace: trasplante meniscal versus segunda meniscectomía

Introducción: El incremento de pacientes sintomáticos de rodilla y la osteoartrosis en jóvenes con limitadas posibilidades terapéuticas después de una meniscectomía, genera la búsqueda de alternativas terapéuticas. A pesar que es poco utilizado en Colombia, el trasplante meniscal es una propuesta para el manejo sintomático. Según cifras norteamericanas, se practican entre 700.000 a 1.500.000 artroscopias de rodilla anualmente, el 50% termina en meniscectomía y de este un 40% persisten sintomáticos. Métodos: Estudio de cohorte retrospectivo, con el objetivo de evaluar dolor (Escala Visual Análoga-EVA) y funcionalidad (Escala de Tegner y Lysholm) en los pacientes a quienes se les realizó trasplante meniscal o meniscectomía por segunda vez, entre los años 2007 a 2015. Resultados: A partir de los 6 meses la EVA mostró una tendencia a la mejoría en el grupo de trasplante meniscal, pasando de Moderado a Leve (p: <0.000). La Escala de Tegner y Lysholm cambió de Pobre a Bueno en el grupo de segunda meniscectomía (p= 0.008) y de Bueno a Excelente en el grupo trasplantado (p=0.225). La calificación promedio de la EVA en el grupo de trasplante presentó mejoría (p=<0.000), a diferencia del grupo de segunda meniscectomía (p=0.591). La escala de Tegner y Lysholm, mostró significancia estadística con tendencia a la mejoría en el grupo de segunda meniscectomía. Discusión: Los resultados muestran que con trasplante meniscal hay mejoría del dolor y la funcionalidad versus un segunda meniscectomía. Para fortalecer la evidencia de este tratamiento son necesarios estudios prospectivos complementarios.Introduction: The increase in symptomatic knee patients and osteoarthrosis in young patients with limited therapeutic options after a meniscectomy generates an unmet need to search for alternative treatment. Although meniscal allograft is unfrequently used in Colombia, it is an alternative for symptomatic patient management. In the US, annually are practiced between 700.000 and 1.500.000 knee arthroscopies, 50% correcting meniscal tears with 40% of symptomatic persistence after this procedure. Methods: Retrospective cohort study evaluating the clinical outcome (pain and functionality) of patients with a second knee meniscectomy or meniscal transplant using Visual Analogue Pain Scale (VAPS) and Tegner y Lysholm scale, between 2007 and 2015. Results: Meniscal allograft VAPS score after 6 months, showed a trend toward improvement, changing from Moderate to Mild (p: <0.000). Tegner and Lysholm Scale changed from Poor to Good in second meniscectomy patients (p= 0.008) and from Good to Excellent in the meniscal allograft group (p=0.225). VAPS average score showed improvement on meniscal allograft patients (p=<0.000), unlike second meniscectomy group (p=0.591). Tegner and Lysholm Scale showed statistical significance only prone to improvement on second meniscectomy group. It is required a prospective cohort in order to analyze the outcomes of meniscal allografts. Discussion: Results showed an improvement in pain and functionality outcomes with meniscal allograft versus second meniscectomy. In order to strengthen the evidence, complementary prospective studies are needed

New Proposal of Epiphytic Bromeliaceae Functional Groups to Include Nebulophytes and Shallow Tanks

The Bromeliaceae family has been used as a model to study adaptive radiation due to its terrestrial, epilithic, and epiphytic habits with wide morpho-physiological variation. Functional groups described by Pittendrigh in 1948 have been an integral part of ecophysiological studies. In the current study, we revisited the functional groups of epiphytic bromeliads using a 204 species trait database sampled throughout the Americas. Our objective was to define epiphytic functional groups within bromeliads based on unsupervised classification, including species from the dry to the wet end of the Neotropics. We performed a hierarchical cluster analysis with 16 functional traits and a discriminant analysis, to test for the separation between these groups. Herbarium records were used to map species distributions and to analyze the climate and ecosystems inhabited. The clustering supported five groups, C3 tank and CAM tank bromeliads with deep tanks, while the atmospheric group (according to Pittendrigh) was divided into nebulophytes, bromeliads with shallow tanks, and bromeliads with pseudobulbs. The two former groups showed distinct traits related to resource (water) acquisition, such as fog (nebulophytes) and dew (shallow tanks). We discuss how the functional traits relate to the ecosystems inhabited and the relevance of acknowledging the new functional groups

Impact of common cardio-metabolic risk factors on fatal and non-fatal cardiovascular disease in Latin America and the Caribbean: an individual-level pooled analysis of 31 cohort studies

Background: Estimates of the burden of cardio-metabolic risk factors in Latin America and the Caribbean (LAC) rely on relative risks (RRs) from non-LAC countries. Whether these RRs apply to LAC remains un- known. Methods: We pooled LAC cohorts. We estimated RRs per unit of exposure to body mass index (BMI), systolic blood pressure (SBP), fasting plasma glucose (FPG), total cholesterol (TC) and non-HDL cholesterol on fatal (31 cohorts, n = 168,287) and non-fatal (13 cohorts, n = 27,554) cardiovascular diseases, adjusting for regression dilution bias. We used these RRs and national data on mean risk factor levels to estimate the number of cardiovascular deaths attributable to non-optimal levels of each risk factor. Results: Our RRs for SBP, FPG and TC were like those observed in cohorts conducted in high-income countries; however, for BMI, our RRs were consistently smaller in people below 75 years of age. Across risk factors, we observed smaller RRs among older ages. Non-optimal SBP was responsible for the largest number of attributable cardiovascular deaths ranging from 38 per 10 0,0 0 0 women and 54 men in Peru, to 261 (Dominica, women) and 282 (Guyana, men). For non-HDL cholesterol, the lowest attributable rate was for women in Peru (21) and men in Guatemala (25), and the largest in men (158) and women (142) from Guyana. Interpretation: RRs for BMI from studies conducted in high-income countries may overestimate disease burden metrics in LAC; conversely, RRs for SBP, FPG and TC from LAC cohorts are similar to those esti- mated from cohorts in high-income countries

Identification and partial characterization of acid phosphatases from Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis es una bacteria Gram negativa común en el tracto respiratorio superior de cerdos sanos y es el agente etiológico de la enfermedad de Glässer, que se caracteriza por poliserositis fibrinosa y poliartritis. En los últimos años, la prevalencia de las infecciones respiratorias, incluyendo la producida por H. parasuis, ha aumentado debido a prácticas de manejo de los animales, como el destete precoz, y a la aparición de virus inmunosupresores. Poco se sabe acerca de la patogénesis y los factores de virulencia de H. parasuis y esto complica el control de la enfermedad. Las fosfatasas ácidas son ubicuas en organismos eucariotas y procariotas y han recibido mucha atención con la finalidad de entender sus estructuras, funciones y mecanismos catalíticos. En bacterias Gram negativas estos enzimas tienen un papel esencial en numerosos procesos, incluyendo la patogénesis bacteriana. Resultados previos de nuestro grupo demostraron la presencia de fosfatasa ácida secretada en sobrenadantes de ciertas cepas de H. parasuis. De especial interés fue la observación de que la secreción de la fosfatasa se perdía tras pases de la bacteria en el laboratorio, indicando un papel de este enzima en la infección. Por lo tanto el objetivo principal de esta tesis fue identificar y caracterizar los genes responsables de esta actividad fosfatasa. El análisis de una genoteca de la cepa virulenta H. parasuis ER-6P permitió la identificación de 2 clones con actividad fosfatasa. Estos clones contenían los genes aphA y pgpB, respectivamente. El clonaje y análisis posterior de estos genes confirmó que codificaban dos fosfatasas. Específicamente, AphA muestra características típicas de fosfatasas ácidas bacterianas de clase B, incluyendo el dominio catalítico típico (motivo F-D-I-D-D-TV-L-F-S-S-P, localizado en el N-terminal y el motivo Y-G-D-[AS]-D-X-D-[IV] localizado cerca del C-terminal), un peso molecular teo rico de 24,33 KDa e inhibicio n por EDTA. Las fosfatasas ácidas bacterianas de clase B son un grupo de enzimas que forman homotetra meros y esta n presentes en una minorí a de bacterias, que incluye pato genos importantes. Por otro lado, PgpB es una fosfatasa de fosfatidilglicerofosfato, con seis dominios transmembrana, que pueden explicar su localización celular en la bacteria. Ambas proteínas, AphA y PgpB, mostraron un pH óptimo distinto que la actividad fosfatasa secretada por H. parasuis al sobrenadante. En un intento de purificar la fosfatasa secretada, sobrenadantes de H. parasuis fueron fraccionado por cromatografía de flujo por tamaño y las fracciones con actividad fosfatasa fueron analizadas por SDS-PAGE y MALDI-TOF-TOF. La proteína hipotética HPS_05483 se identificó en las fracciones con actividad fosfatasa, pero su expresión nativa recombinante no fue posible. Sin embargo, sí pudo ser purificada con una cola de His y se detectaron anticuerpos frente a ella en cerdos infectados, indicando que ésta proteína se expresa durante la infección. Se produjeron anticuerpos monoclonales (Acm) frente a un sobrenadante de H. parasuis con actividad fosfatasa y una selección inicial detectó Acm frente a Apha. Sin embargo, se debe realizar una selección más exhaustiva de los hibridomas para identificar Acm específicos frente a la fosfatasa del sobrenadante de H. parasuis. Finalmente, se estudió el efecto de sobrenadantes con actividad fosfatasa sobre los macrófagos. La expresión de marcadores de superficie de macrófagos alveolares CD163, SLAI, SLAII, sialoadhesina y SWC3 no se vio afectada por incubación con sobrenadantes de H. parasuis o sobrenadante de un clon que secretaba AphA. En conclusión, hemos identificado y caracterizado parcialmente dos fosfatasas de H. parasuis, AphA y PgpB. Sin embargo, más estudios son necesarios para determinar si la proteína hipotética HPS_05483 es realmente una fosfatasa. El papel de estos enzimas en la biología de H. parasuis debería ser estudiado en más profundidad.The Gram-negative bacterium Haemophilus parasuis is common in the upper respiratory tract of healthy swine and is the etiological agent of Glässer´s disease, which is characterized by fibrinous polyserositis and polyarthritis. In the last few years the prevalence of respiratory infections, including those by H. parasuis, has increased due to management practices, as early weaning, and the emergence of immunosuppressive viruses. Little is known about the pathogenesis and virulence factors of H. parasuis and this complicates the control of the disease. Acid phosphatases are ubiquitous in eukaryotic and prokaryotic organisms and much attention has been given to these enzymes in order to understand their structures, functions, and catalytic mechanisms. In many Gram-negative bacteria these enzymes have been determined to play a critical role in numerous processes, including pathogenesis. Previous results by our group showed the presence of a secreted acid phosphatase in the culture supernatant of some strains of H. parasuis. Interestingly, the secretion of the phosphatase activity was lost after passages of the bacteria in the laboratory, indicating a role of this enzyme in the infection. Therefore the main objective of this thesis was to identify and characterize the genes responsible for this secreted phosphatase activity. Screening of a genomic library from the virulent strain ER-6P of H. parasuis identified 2 clones with phosphatase activity. These clones contained genes aphA and pgpB, respectively. The subsequent cloning and analysis of the genes demonstrated that their products were in fact phosphatases. Specifically, AphA presented characteristics of bacterial class B acid phosphatases, including the typical catalytic domain (motif F-D-I-D-D-TV-L-F-S-S-P, located in the N-terminal moiety, and Y-G-D-[AS]-D-X-D-[IV] located near the C-terminus), a predicted molecular weight of 24.33 KDa and inhibition by EDTA. Bacterial class B acid phosphatases are a group of homotetrameric enzymes, which are present in a minority of bacteria, most of which are important pathogens. PgpB is a phosphatidylglycerophosphate phosphatase, with six transmembrane domains in the predicted protein, which would explain its location in the bacterial cell. Both proteins, AphA and PgpB, showed a different optimal pH than the activity secreted by H. parasuis into the supernatant. In an attempt to purify the phosphatase from the H. parasuis supernatant, a size exclusion chromatography was performed and fractions with phosphatase activity were analyzed by SDS-PAGE and MALDI-TOF-TOF. A hypothetical protein HPS_05483 was identified in the fractions with phosphatase activity, but cloning and native expression of the gene was not achieved. However, the protein HPS_05483 was purified as a His-tagged protein and antibodies in infected pigs were detected against it, indicating that this protein is expressed during infection. Monoclonal antibodies (mAb) were produced against a phosphatase-positive supernatant from H. parasuis and an initial screening of the mAb identified several hybridomas with reaction against AphA. Further screenings are needed to identify mAb against the secreted phosphatase found in the supernatant of H. parasuis. Finally, the effect of the phosphatase-positive supernatant on porcine alveolar macrophages was studied. The level of macrophage surface markers CD163, SLAI, SLAII, sialoadhesin and SWC3 was not affected by incubation with supernatants from H. parasuis or supernatant from a clone secreting AphA. In conclusion, we have identified and partially characterize 2 phosphatases of H. parasuis, AphA and PgpB. More studies are needed to determine if the hypothetical protein HPS_05483 is in fact a phosphatase. The role of these enzymatic activities in the biology of H. parasuis needs to be further studied

El paper de les fosfatases àcides en la malaltia de Glässer

En aquesta tesi es va proposar identificar i caracteritzar els gens responsables de l'activitat fosfatasa àcida en el bacteri Gram negativa Haemophilus parasuis. La seva importància resideix en el fet que aquests enzims juguen un paper fonamental en nombrosos processos, inclosa la patogènesi bacteriana. H. parasuis és l'agent etiològic de la malaltia de Glässer, cada vegada més comuna. Per primera vegada s'ha identificat i caracteritzat dues fosfatases d'aquest bacteri, però cal estudiar-les més en profunditat.En esta tesis se propuso identificar y caracterizar los genes responsables de la actividad fosfatasa ácida en la bacteria Gram negativa Haemophilus parasuis. Su importancia reside en que estas enzimas juegan un papel fundamental en numerosos procesos, incluida la patogénesis bacteriana. H. parasuis es el agente etiológico de la enfermedad de Glässer, cada vez más común. Por primera vez se ha identificado y caracterizado dos fosfatasas de esta bacteria, pero es necesario estudiarlas más en profundidad

Listeria monocytogenes in carcases of holstein cattle in a slaughterhouse of the sabana de Bogotá (Colombia)

Listeria monocytogenes is a pathogenic mocroorganism recognized as the cause of health problems in humans and animáis, mainly originated by ingestión of contaminated meat and dairy producís. (Jp to now, no studies in order to determine carease infection grades of bovines have been carried out in Colombia, therefore, the objetive of this research was to establish its presence in Holstein careases, since this breed is a population of high infection risk. From a population of 1600 careases, 133 were examined and only three (2.26%) were found positive to Listeria monocytogenes. This type of meat is mainly consumed by the population with lower incomes, which combined with other risk factors, may constitute a very serious public health problem.Listeria monocytogenes es un microorganismo patógeno, reconocido como el causante de problemas de salud, tanto en seres humanos como en animales, los cuales se originan principalmente por ingestión de productos lácteos y cárnicos. En Colombia no se han realizado estudios para establecer el grado de contaminación con este microorganismo de canales de bovinos, por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue determinar su presencia en carcasas de vacas de raza Holstein, por ser una población sometida a mayores factores de riesgo de contaminación. De un universo de 1600 canales, se examinaron 133, de las cuales se encontraron tres (2,26%) positivas a L. monocytogenes. Este tipo de carne es consumida principalmente por poblaciones de menores ingresos, lo cual, unido a otros factores de riesgo, se puede constituir en un problema grave de salud pública.Incluye referencias bibliográfica

Identification and partial characterization of acid phosphatases from Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis es una bacteria Gram negativa común en el tracto respiratorio superior de cerdos sanos y es el agente etiológico de la enfermedad de Glässer, que se caracteriza por poliserositis fibrinosa y poliartritis. En los últimos años, la prevalencia de las infecciones respiratorias, incluyendo la producida por H. parasuis, ha aumentado debido a prácticas de manejo de los animales, como el destete precoz, y a la aparición de virus inmunosupresores. Poco se sabe acerca de la patogénesis y los factores de virulencia de H. parasuis y esto complica el control de la enfermedad. Las fosfatasas ácidas son ubicuas en organismos eucariotas y procariotas y han recibido mucha atención con la finalidad de entender sus estructuras, funciones y mecanismos catalíticos. En bacterias Gram negativas estos enzimas tienen un papel esencial en numerosos procesos, incluyendo la patogénesis bacteriana. Resultados previos de nuestro grupo demostraron la presencia de fosfatasa ácida secretada en sobrenadantes de ciertas cepas de H. parasuis. De especial interés fue la observación de que la secreción de la fosfatasa se perdía tras pases de la bacteria en el laboratorio, indicando un papel de este enzima en la infección. Por lo tanto el objetivo principal de esta tesis fue identificar y caracterizar los genes responsables de esta actividad fosfatasa. El análisis de una genoteca de la cepa virulenta H. parasuis ER-6P permitió la identificación de 2 clones con actividad fosfatasa. Estos clones contenían los genes aphA y pgpB, respectivamente. El clonaje y análisis posterior de estos genes confirmó que codificaban dos fosfatasas. Específicamente, AphA muestra características típicas de fosfatasas ácidas bacterianas de clase B, incluyendo el dominio catalítico típico (motivo F-D-I-D-D-TV-L-F-S-S-P, localizado en el N-terminal y el motivo Y-G-D-[AS]-D-X-D-[IV] localizado cerca del C-terminal), un peso molecular teo rico de 24,33 KDa e inhibicio n por EDTA. Las fosfatasas ácidas bacterianas de clase B son un grupo de enzimas que forman homotetra meros y esta n presentes en una minorí a de bacterias, que incluye pato genos importantes. Por otro lado, PgpB es una fosfatasa de fosfatidilglicerofosfato, con seis dominios transmembrana, que pueden explicar su localización celular en la bacteria. Ambas proteínas, AphA y PgpB, mostraron un pH óptimo distinto que la actividad fosfatasa secretada por H. parasuis al sobrenadante. En un intento de purificar la fosfatasa secretada, sobrenadantes de H. parasuis fueron fraccionado por cromatografía de flujo por tamaño y las fracciones con actividad fosfatasa fueron analizadas por SDS-PAGE y MALDI-TOF-TOF. La proteína hipotética HPS_05483 se identificó en las fracciones con actividad fosfatasa, pero su expresión nativa recombinante no fue posible. Sin embargo, sí pudo ser purificada con una cola de His y se detectaron anticuerpos frente a ella en cerdos infectados, indicando que ésta proteína se expresa durante la infección. Se produjeron anticuerpos monoclonales (Acm) frente a un sobrenadante de H. parasuis con actividad fosfatasa y una selección inicial detectó Acm frente a Apha. Sin embargo, se debe realizar una selección más exhaustiva de los hibridomas para identificar Acm específicos frente a la fosfatasa del sobrenadante de H. parasuis. Finalmente, se estudió el efecto de sobrenadantes con actividad fosfatasa sobre los macrófagos. La expresión de marcadores de superficie de macrófagos alveolares CD163, SLAI, SLAII, sialoadhesina y SWC3 no se vio afectada por incubación con sobrenadantes de H. parasuis o sobrenadante de un clon que secretaba AphA. En conclusión, hemos identificado y caracterizado parcialmente dos fosfatasas de H. parasuis, AphA y PgpB. Sin embargo, más estudios son necesarios para determinar si la proteína hipotética HPS_05483 es realmente una fosfatasa. El papel de estos enzimas en la biología de H. parasuis debería ser estudiado en más profundidad.The Gram-negative bacterium Haemophilus parasuis is common in the upper respiratory tract of healthy swine and is the etiological agent of Glässer's disease, which is characterized by fibrinous polyserositis and polyarthritis. In the last few years the prevalence of respiratory infections, including those by H. parasuis, has increased due to management practices, as early weaning, and the emergence of immunosuppressive viruses. Little is known about the pathogenesis and virulence factors of H. parasuis and this complicates the control of the disease. Acid phosphatases are ubiquitous in eukaryotic and prokaryotic organisms and much attention has been given to these enzymes in order to understand their structures, functions, and catalytic mechanisms. In many Gram-negative bacteria these enzymes have been determined to play a critical role in numerous processes, including pathogenesis. Previous results by our group showed the presence of a secreted acid phosphatase in the culture supernatant of some strains of H. parasuis. Interestingly, the secretion of the phosphatase activity was lost after passages of the bacteria in the laboratory, indicating a role of this enzyme in the infection. Therefore the main objective of this thesis was to identify and characterize the genes responsible for this secreted phosphatase activity. Screening of a genomic library from the virulent strain ER-6P of H. parasuis identified 2 clones with phosphatase activity. These clones contained genes aphA and pgpB, respectively. The subsequent cloning and analysis of the genes demonstrated that their products were in fact phosphatases. Specifically, AphA presented characteristics of bacterial class B acid phosphatases, including the typical catalytic domain (motif F-D-I-D-D-TV-L-F-S-S-P, located in the N-terminal moiety, and Y-G-D-[AS]-D-X-D-[IV] located near the C-terminus), a predicted molecular weight of 24.33 KDa and inhibition by EDTA. Bacterial class B acid phosphatases are a group of homotetrameric enzymes, which are present in a minority of bacteria, most of which are important pathogens. PgpB is a phosphatidylglycerophosphate phosphatase, with six transmembrane domains in the predicted protein, which would explain its location in the bacterial cell. Both proteins, AphA and PgpB, showed a different optimal pH than the activity secreted by H. parasuis into the supernatant. In an attempt to purify the phosphatase from the H. parasuis supernatant, a size exclusion chromatography was performed and fractions with phosphatase activity were analyzed by SDS-PAGE and MALDI-TOF-TOF. A hypothetical protein HPS_05483 was identified in the fractions with phosphatase activity, but cloning and native expression of the gene was not achieved. However, the protein HPS_05483 was purified as a His-tagged protein and antibodies in infected pigs were detected against it, indicating that this protein is expressed during infection. Monoclonal antibodies (mAb) were produced against a phosphatase-positive supernatant from H. parasuis and an initial screening of the mAb identified several hybridomas with reaction against AphA. Further screenings are needed to identify mAb against the secreted phosphatase found in the supernatant of H. parasuis. Finally, the effect of the phosphatase-positive supernatant on porcine alveolar macrophages was studied. The level of macrophage surface markers CD163, SLAI, SLAII, sialoadhesin and SWC3 was not affected by incubation with supernatants from H. parasuis or supernatant from a clone secreting AphA. In conclusion, we have identified and partially characterize 2 phosphatases of H. parasuis, AphA and PgpB. More studies are needed to determine if the hypothetical protein HPS_05483 is in fact a phosphatase. The role of these enzymatic activities in the biology of H. parasuis needs to be further studied