Lipoplexes recouverts d’acide hyaluronique pour le ciblage d’ARN interférant à des cellules tumorales surexprimant le récepteur CD44

Recent progresses in the preclinical and clinical use of small interfering RNA (siRNA) have shown their potential as an inhibitor of protein synthesis in many diseases such as cancer. The administration of siRNA encounters a number of problems related to their rapid degradation in biological media, and their difficulty in penetrating targeted cells due to their hydrophilicity and negative charge. A key to improving the therapeutic efficacy of these molecules is based on the use of vectors. In this thesis, lipoplexes that can protect siRNA against degradation and facilitate their transport into target cells were developed and optimized. To do this, lipoplexes covered with HA were formulated for active vectorization of siRNA to tumor cells overexpressing the receptor CD44.In the first part of this thesis, the formation of lipoplexes was studied, and the parameters influencing their supramolecular organization. Insertion of HA within the liposome structure during vesicle formation resulted in the increase in liposome size as a function of HA concentration. Their complexation with siRNA has further increased the size of the particles obtained. The addition of siRNAs when forming lipoplexes caused a displacement of a portion of the HA-DOPE conjugate from the lipoplexes structure, as shown by capillary electrophoresis. The isothermal titration calorimetry and X-ray diffraction studies showed that a rearrangement of the lipid bilayers occur under the effect of electrostatic interactions with siRNAs, leading to the formation of oligolamellar vesicles, which was visually confirmed by cryo-microscopy. Finally, the proper positioning of the HA on the surface of the lipoplexes and its ability to specifically bind to the CD44 receptors has been demonstrated by the surface plasmon resonance technique.In the second part of this thesis, cellular uptake and intracellular localization of HA-lipoplexes were assessed by flow cytometry and fluorescence microscopy, and showed that lipoplexes modified by HA are internalized more rapidly than unmodified lipoplexes, and once in the cells, they are mainly localized within the endosomes. The ability of lipoplexes to transport intact siRNA molecules to the cytoplasm was confirmed by 81% of luciferase in vitro expression inhibition on the lung cancer cell line A549-luc. In vivo, treatment with HA-lipoplexes carrying anti-luciferase siRNA led to a statistically significant decrease in expression of luciferase, which was confirmed by reducing the mRNA expression of luciferase in lungs of animals treated with HA-lipoplexes. The analysis of the distribution of lipoplexes in the lungs showed that lipoplexes modified with HA are distributed more evenly in the lung tissue than unmodified lipoplexes.In the third part of this thesis, the movement of siRNA HA-lipoplexes in the mucus was studied to assess the feasibility of administering these particles directly to the lungs. Studies using the technique of "multiple particle tracking (MPT)" showed that the presence of HA combined with the addition of siRNA allowed the preparation of two lipoplexes formulations with efficient mucus-penetration, HA-lipoplexes and PEG/HA-lipoplexes.In conclusion, an efficient siRNA lipoplex system for inhibiting gene expression targeted TO the CD44 receptorS has been developed. The results confirm that the HA-lipoplexes are able to effectively release in vitro and in vivo the siRNA molecules in the cytoplasm of cells.Des progrès récents dans l’utilisation préclinique et clinique des petits ARN interférents (siRNA) ont montré leur potentiel en tant qu’inhibiteur de la synthèse protéique dans de nombreuses pathologies comme le cancer. L’administration des siRNA rencontre un certain nombre de problèmes liés à leur dégradation rapide dans les milieux biologiques, ainsi qu’à leur difficulté à pénétrer au sein des cellules cibles en raison de leur hydrophilie et de leur charge négative. Une des clés de l’amélioration de l’efficacité thérapeutique de ces molécules repose sur l’emploi de vecteurs. Au cours de cette thèse, des lipoplexes capables de protéger les siRNA contre la dégradation et de favoriser leur transport jusqu’aux cellules cibles ont été développés et optimisés. Pour ce faire, des lipoplexes recouverts d’HA ont été formulés pour la vectorisation active de siRNA vers des cellules tumorales surexprimant le récepteur CD44. Dans la première partie de cette thèse, la formation des lipoplexes a été étudiée, ainsi que les paramètres influençant leur organisation supramoléculaire. L'insertion de l'HA dans la structure du liposome au moment de la formation des vésicules a entraîné une augmentation de la taille des liposomes en fonction de la concentration d’HA. Leur complexation avec les siRNA a encore augmenté la taille des particules obtenues. L’ajout des acides nucléiques lors de la formation des lipoplexes a provoqué un déplacement d'une partie du conjugué HA-DOPE de la structure des lipoplexes, comme montré par électrophorèse capillaire. La titration calorimétrique isotherme et les études de diffraction des rayons X ont démontré que, sous l’effet des interactions électrostatiques avec les siRNA, un réarrangement des bicouches lipidiques a lieu, conduisant à la formation de vésicules oligolamellaires, confirmé visuellement par cryo-microscopie. Enfin, le positionnement convenable de l’HA sur la surface des lipoplexes et sa capacité de se lier spécifiquement aux récepteurs de CD44 ont été démontrés par la technique de résonance plasmonique de surface. Dans la deuxième partie de cette thèse, la capture cellulaire et localisation intracellulaire des lipoplexes-HA ont été évalués par cytométrie en flux et microscopie de fluorescence, et ont montré que les lipoplexes modifies par l’HA sont internalisés plus rapidement que les lipoplexes non modifiés, et une fois dans des cellules, ils sont localisés principalement à l’intérieur des endosomes. La capacité des lipoplexes à transporter des molécules de siRNA intactes au cytoplasme a été confirmée par 81 % d'inhibition d'expression de luciferase in vitro sur la lignée cellulaire de cancer du poumon A549-luc. In vivo, le traitement avec les lipoplexes-HA transportant un siRNA anti-luciferase a mené à une diminution statistiquement significative de l’expression de luciferase, ce qui a été confirmé par la réduction de l'expression d’ARNm de la luciferase dans le poumon des animaux traités avec les lipoplexes-HA. L'analyse de la distribution des lipoplexes dans les poumons a montré que les lipoplexes modifiés par l’HA sont distribués de façon plus importante et plus homogène dans le tissu pulmonaire que les lipoplexes non modifiés. Dans la troisième partie de cette thèse, la diffusion des lipoplexes-HA de siRNA dans le mucus a été étudié, afin d’évaluer la faisabilité de l’administration pulmonaire de ces particules. Les études utilisant la technique de « multiple particle tracking (MPT) » ont montré que la présence d’HA combinée à l'ajout de siRNA ont permis l’obtention de deux formulations de lipoplexes présentant une pénétration efficace dans le mucus, les lipoplexes-HA and les lipoplexes-PEG/HA. En conclusion, un système efficace de lipoplexes utilisant siRNA pour l'inhibition de l'expression génique ciblant les récepteurs CD44 a été développé. Les résultats obtenus confirment que les HA-lipoplexes sont capables de libérer efficacement le siRNA dans le cytoplasme des cellules in vitro et in vivo

Educação física inclusiva: formação e capacitação dos professores da rede municipal de Içara/SC

Trabalho de Conclusão de Curso, apresentado para obtenção do grau de Lienciatura no curso de Educação Física da Universidade do Extremo Sul Catarinense, UNESC.O objetivo desta pesquisa foi analisar como se dá a formação e a capacitação em Educação Física inclusiva dos professores da rede municipal de ensino de Içara/SC. Para isso foi feita uma pesquisa de campo em escolas de diferentes regiões da rede municipal de Içara, sendo entrevistados 10 professores. Analisando as respostas do questionário percebemos que a formação inicial dos professores de Educação Física é insuficiente quando se trata de inclusão de alunos com deficiência. Evidenciou-se também que o município não oferece capacitação e formação continuada para tratar deste tema. Desta forma, conclui-se que a educação inclusiva não se efetiva de maneira qualificada, pois, sem formação adequada prejudica-se o processo ensino aprendizagem

O impacto econômico da estratégia de patentear na indústria farmacêutica brasileira: uma aplicação da teoria dos jogos

TCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro Sócio-Econômico. Economia.Essa monografia trata da questão da inovação na indústria farmacêutica brasileira, destacando o papel das patentes em seu processo inovativo. Para analisar a questão das patentes no setor farmacêutico brasileiro, será utilizada a Teoria dos Jogos como instrumento de análise. Dessa forma, será possível identificar, também, as estratégias dos agentes econômicos (players) envolvidos, que são: uma firma farmacêutica multinacional e uma firma farmacêutica nacional, que desejam aumentar seu market share do mercado brasileiro. As patentes são definidas como um título de propriedade temporária sobre uma invenção ou modelo de utilidade, concedidos pelo Estado aos inventores detentores de direitos sobre a criação. A teoria neo-schumpeteriana acredita que as patentes têm papel fundamental na dinâmica capitalista, visto que dá condições às firmas de se apropriarem de ganhos a serem obtidos com as inovações. Após verificar-se a dinâmica e a forma de patentear do setor farmacêutico brasileiro, os resultados encontrados foram que o processo de patenteamento brasileiro, por ser burocrático e oneroso, somado à falta de autossuficiência tecnológica do setor, não é visto como a melhor opção; é menos custoso optar pelo licenciamento, por exemplo. Assim, pode-se concluir que a jogada que melhor representa a realidade do setor farmacêutico brasileiro é a combinação: firma multinacional opta por “patentear” o medicamento, no Brasil e assim, a firma nacional escolhe “licenciar” esse mesmo medicamento, levando-se em consideração o fato da falta de investimento na atividade de P&D por parte da indústria farmacêutica brasileir

Determina??o voltam?trica de amilorida utilizando voltametria de pulso diferencial

Amilorida, (AMI) 3,5-diamino-6-cloro-N-(diaminometilideno)pirazina-2-carboxamida ? um natriur?tico relativamente fraco, conservador de pot?ssio, com atividade antihipertensiva. Este agente natriur?tico pode ser funcional como subst?ncia dopante. Nos esportes, os diur?ticos s?o usados principalmente pela r?pida diminui??o do ganho de peso corporal para diferentes categorias de peso e pela redu??o da concentra??o de medicamentos na urina, diluindo-os por meio da r?pida produ??o de um volume elevado de urina, levando a uma menor possibilidade de detectar outras subst?ncias dopantes. Portanto, a determina??o de AMI na urina exige m?todos altamente sens?veis. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar o perfil eletroqu?mico da AMI usando voltametria c?clica (CV) e desenvolver um m?todo eletroanal?tico para sua determina??o na urina e soro humano usando voltametria de pulso diferencial (DPV) e utilizando o eletrodo de carbono v?treo (GCE). Os voltamogramas c?clicos daAMI no GCE em tamp?o Britton-Robinson (BR) de 0,1 mol L-1 pH 2,0 mostraram um pico an?dico irrevers?vel bem definido a +1,30 V e um processo redox revers?vel com um pico an?dico a +0,15 V e um cat?dico pico a -0,12 V. Com base nesse processo redox revers?vel, um m?todo de DPV simples, sens?vel e de baixo custo foi otimizado para an?lise do medicamento. As condi??es operacionais ideais do m?todo proposto foram: potencial de acumula??o Eacc = 1,35 V, tempo de acumula??o tacc = 40 s, amplitude de pulso = 70 mV, taxa de varredura = 10 mVs-1 e tamp?o BR de pH 1,5 como eletr?lito de suporte em um faixa de varredura de 0,4 a -0,1 V. A faixa de concentra??o linear foi de 9,9 a 90,9 ?mol L-1 de AMI com limites de detec??o (LOD) e quantifica??o (LOQ) de 5,19 ?mol L-1 e17,3 ?mol L-1, respectivamente.An?lises voltam?tricas realizadas intra e interdia foram avaliadas para demonstrar a precis?o do m?todo estudado, apresentando desvios padr?es relativos (DPR) inferiores a 5,0%. A exatid?o do m?todo proposto foi analisada atrav?s de estudos de adi??o e recupera??o, apresentando valores de recupera??o de AMI de 99,2 ? 3,6% a 106,3 ? 4,0% para a urina e 82,3 ? 9,3% a 106,3 ? 10,8% para o soro.O m?todo proposto se apresentou vantajoso para a determina??o de AMI devido ? boa sensibilidade, precis?o e exatid?o.Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES)Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2020.Amiloride, (AMI) 3,5-diamino-6-chloro-N-(diaminomethylidene)pyrazine-2-carboxamide is a potassium-conserving relatively weak natriuretic with anti-hypertensive activity. This natriuretic agent can be functional as a doping substance. In sports, diuretics are used mainly for rapid diminution of corporal weight gain for different weight categories and for the reduction of the concentration of medical drugs in urine by diluting the latter by means of the rapid production of an elevated volume of urine, leading to a smaller possibility of detecting other doping substances. Therefore, AMI determination in urine demands highly sensitive methods. Thus, the aim of this work was to study the electrochemical profile of AMI using Cyclic Voltammetry (CV) and to develop an electroanalytical method for their determination in human serum and urine using differential pulse voltammetry (DPV) and the glassy carbon electrode (GCE). The cyclic voltammograms of AMI at the GCE in 0.1 mol L-1 Britton? Robinson (BR) buffer pH 2.0 showed a well-defined irreversible anodic peak at +1.30 V and a reversible redox process with an anodic peak at +0.15 V and a cathodic peak at -0.12 V. Based on this reversible redox process, a simple, sensitive and low cost DPV method was optimized for analysis of the drug. The optimal operational conditions of the proposed method were: accumulation potential Eacc= 1.35 V, accumulation time tacc= 40 s, pulse-amplitude = 70 mV, scan rate = 10 mVs-1 and BR buffer of pH 1.5 as a supporting electrolyte in a scanning range of 0.4 to -0,1 V. The linear concentration range was found to be 9.9 to 90.9 ?mol L-1 AMI with limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) of 5.19 ?mol L-1 and 17.3 ?mol L-1, respectively. Voltammetric analyzes performed intra and interday were evaluated to demonstrate the accuracy of the studied method, presenting relative standard deviations (RSD) below 5.0%. The accuracy of the proposed method was analyzed through addition and recovery studies, showing AMI recovery values from 99.2 ? 3.6% to 106.3 ? 4.0% for urine and 82.3 ? 9.3 % to 106.3 ? 10.8% for the serum. The proposed method proved to be advantageous for the determination of AMI due to its good sensitivity, precision and accuracy

Os temas transversais em livros didáticos de ELE

IX Congresso Brasileiro de Hispanistas realizado nos dias 22 a 25 agosto 2016Um dos objetivos da educação, segundo a LDB (1996), é fornecer ao aluno o “preparo para o exercício da cidadania”. Para os PCNs (1997), a prática da cidadania não estaria restrita aos direitos civis e políticos do cidadão, mas permearia as suas relações de trabalho, de saúde e de educação e se estenderia aos meios sociais em que o indivíduo circule. Kleiman e Moraes (1999) alertam que a escola é formada por professores especializados que não conseguem perceber a relação do conteúdo da sua disciplina com o conteúdo das demais disciplinas e com a prática da cidadania. Os conteúdos escolares, assim, são tratados como fim, e não como meio para os alunos agirem enquanto cidadãos no mundo. Moreno (1999) propõe que a educação seja feita com base nos temas transversais. Esses temas são conteúdos de cunho social que não pertencem a disciplina alguma, mas que encontram em todas um espaço para a sua abordagem (YUS, 1998), o que gera um trabalho interdisciplinar. Como disciplina, o espanhol, então, deve ser abordado em sala de aula de acordo com os objetivos da educação supracitados. Assumindo que o livro didático é, por vezes, a única fonte de consulta do professor e que ele pode influenciar nas identidades e na tomada de consciência dos alunos (TÍLIO, 2012), o objetivo deste trabalho é investigar como são abordados os temas transversais em livros didáticos (LD) de língua espanhola. Para tal, pretendese apresentar uma análise comparativa das propostas presentes no LD encaminhado aos discentes e no manual do professor, em dois LD aprovados no PNLD 2015: Cercanía Joven 1 e Enlaces 1.UNILA­-UNIOEST

O papel do aspecto lexical na aquisição do PB/L1 e de PB/L2 por falantes de espanhol

IX Congresso Brasileiro de Hispanistas realizado nos dias 22 a 25 agosto 2016As noções de aspecto gramatical – segundo a classificação de Comrie (1976) – e lexical – conforme Vendler (1967) – interagem entre si no processo de aquisição, de modo que seria o aspecto lexical que controlaria o processo de aquisição das morfologias de aspecto gramatical e de tempo. Essa proposição se refere à Hipótese da Primazia do Aspecto (ANDERSEN E SHIRAI, 1996). Em relação à aquisição de uma segunda língua (L2), Ramsay (1990) e BardoviHarlig (1992) demonstram que a sequência de aparecimento da morfologia de perfectivo e imperfectivo se assemelha à sequência de uma primeira língua (L1). Diante disso, nosso objetivo é apresentar um estudo piloto sobre a influência do aspecto lexical na aquisição da morfologia verbal do português do Brasil (PB), visando a: (i) traçar o padrão dessa língua na interação entre os aspectos lexical e gramatical (ii) comparar esses resultados a dados de (a) aquisição de PB/L1 e de (b) aprendizes de PB/L2, falantes de espanhol. Para tal, aplicaremos um teste de contexto com preenchimento de lacunas, assumindo as seguintes partes da hipótese adotada: (1) inicialmente, os falantes/aprendizes usam marcação de perfectivo com verbos de culminação e de processo culminado, eventualmente estendendo seu uso para atividades e verbos de estado; (2) em línguas que codificam a distinção perfectivoimperfectivo, os falantes/aprendizes usam o passado imperfectivo depois do passado perfectivo, e a marcação do imperfectivo é feita inicialmente com verbos de estado e atividades, somente depois estendendo o seu uso a verbos de processo culminado e culminaçãoUNILA­-UNIOEST

MÍDIA, REPRESENTAÇÃO E RAÇA: o negro na telenovela Avenida Brasil

A televisão tem-se destacado como a mídia massiva brasileira predominante que, por sua vez, tem a telenovela como principal produto. No prisma da mediação informacional, a mensagem reproduzida pela telenovela é capaz de incitar a reflexão da audiência acerca de problemáticas das identidades culturais de gênero, raça, faixa etária, classe social, dentre outros. O objetivo deste estudo foi o de analisar a representação do negro na telenovela Avenida Brasil. Para tanto, a priori, remetemo-nos à revisão de literatura nas áreas de Comunicação, Estudos Culturais e Sociologia; a posteriori, analisamos os dados a partir de três abordagens de representação: numérica, papel/função social e interação entre os personagens (negros e brancos). Os resultados da pesquisa desvelam a invisibilidade numérica dos negros e a estigmatização desses personagens por funções e comportamentos socialmente discriminados

O impacto da cultura de convergência nos acervos arquivísticos digitais: o caso do Centro de Pesquisa e Documentação de História Contemporânea do Brasil

A contemporaneidade é marcada pela comunicação, interação e socialização da informação através da Internet, portal de entrada do ciberespaço. Assim, as mídias ganham destaque pelo impacto causado na sociedade sob o fenômeno da cultura de convergência. Perante essas implicações culturais, as organizações se apropriam de ferramentas midiáticas no intuito de aprimorar seus processos comunicacionais para a aproximação com os seus consumidores/usuários. Nesse contexto, o presente estudo tem o objetivo de analisar o impacto da cultura de convergência no acervo arquivístico digital do Centro de Pesquisa e Documentação de História Contemporânea do Brasil (CPDOC). Em termos metodológicos, a priori, recorremos à revisão de literatura nas áreas da Ciência da Comunicação, Ciência da Informação, Tecnologias da Informação e Comunicação, Sociologia e Filosofia. A posteriori, voltamo-nos à exploração do caso do acervo arquivístico do CPDOC e o uso que faz das mídias para a disseminação dos seus conteúdos e interação com os usuários, no prisma da cultura de convergência. Os resultados da pesquisa desvelaram o elo promissor entre os processos e teorias comunicacionais nos serviços oferecidos pelos arquivos. No caso do CPDOC, a convergência de mídias se operacionaliza para o fluxo de conteúdos por diferentes canais de comunicação (boletins informativos com os newsletters, redes sociais e outros) assumindo formas distintas de recepção. Na recepção da informação por um nicho específico, os indivíduos da rede de compartilhamento são ao mesmo tempo atores e espectadores (direta e indiretamente) dos processos de comunicação, ou seja, eles são colaboradores e participantes da partilha de informações, experiências e saberes

Bronchial remodeling in asthma

The relationship between structure and function in asthma has been extensively studied. All the compartments of the airway have been shown to have some structural alterations contributing to functional defects. The structural alterations are thought to be a consequence of the chronic inflammation present in asthmatic airways, leading ultimately to remodeling. The decline of the ventilatory function over time in some asthmatic patients may be a consequence of airway remodeling. In this review, the authors describe the phenomena leading to airway remodeling and discuss the role of inflammatory mediators involved in this process. The structural alterations of the asthmatic airways are presented and the possible correlated functional defects are discussed.É sabido que certos pacientes asmáticos apresentam perda parcial e irreversível da função respiratória ao longo do tempo. Postula-se que o processo inflamatório crônico em vias aéreas, característico da doença, poderia, através da liberação de diversos mediadores inflamatórios, ocasionar alterações estruturais irreversíveis nas vias aéreas e conseqüente piora da broncoconstrição, contribuindo assim para o fenômeno de perda de função pulmonar. A este processo creditou-se o nome de remodelamento brônquico. Nesta revisão descrevem-se os mecanismos propostos para o remodelamento brônquico, o papel dos diversos mediadores inflamatórios envolvidos e as diversas alterações patológicas observadas em vias aéreas asmáticas. Para cada alteração estrutural descrita, discute-se a possível conseqüência funcional. O entendimento do remodelamento brônquico é importante para o melhor manejo dos pacientes com asma e para a prevenção da deterioração funcional definitiva.Universidade de São Paulo Faculdade de Medicina Departamento de PatologiaUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Escola Paulista de MedicinaUNIFESP, EPMSciEL