Estrogen’s Role on Female Biased Systemic Lupus Erythematosus

Autoimmune diseases are more prevalent in women while infectious diseases occur more often in men. Immune system responses differ between genders which suggest that sexual hormones are involved. Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with one of the greatest female sex bias. The etiology of the disease remains poorly defined. Gene-environment interactions are constantly being identified with epigenetics increasingly appearing as a crucial element in the pathogeneses of the disease. Sexual hormones are thought, for a long time, to be involved in the development of the disease given the sexual bias it presents. The monography pretends to evaluate estrogen’s role on the female SLE bias. As the predominant female hormone, and taking into account that the hormonal changes occurring in women relate to disease progression, it is a strong candidate to explain the higher women incidence and prevalence of the disease. Thought the female to male ratio is greater in the reproductive years it is still present in all ages. Other factors are probably rendering the female gender more susceptible to SLE, not ruling out estrogen as a large influent. Estrogen receptor a (ERa) emerges as a central player on immune system mediation by 17ß-estradiol (E2). Evidence on an aberrant cytokine profile on disease development is emerging and it seems to be dependent on ERa expression. The ER also modulates Toll-like Receptor (TLR) signalling and dendritic cells (DC) activity as does with B and T cells. These cells’s maturation and selection respond to E2 influence and their activity and survival are enhanced by its presence. TLR9 and minichromosome maintenance (MCM) proteins are also noteworthy as mediators of E2 action on immune cells. DNA methylation changes also involving ERa promoter region seem to participate in disease development. Different aspects of immune regulation can be modulated by the female hormone estrogen towards an increased system activation and reactivity. Other sexual hormones action on immune system should be studied in order to compare results and better understand the sexual bias in SLE.As doenças auto-imunes são mais prevalentes em mulheres enquanto as doenças infeciosas ocorrem mais nos homens. As respostas imunitárias diferem entre géneros o que sugere o envolvimento das hormonas sexuais. O Lupus Eritematoso Sistémico (LES) é uma doença autoimune com um dos maiores enviesamentos femininos permanecendo a sua etiologia pouco clara. Interações entre genes e ambiente continuam a ser identificadas com a epigenética surgindo como um elemento crucial na patogénese da doença. A hipometilação do ADN em genes implicados na autoimunidade parece ser mediada pelo estrogénio com implicações no desenvolvimento da patologia. Pensa-se, há já algum tempo, que as hormonas sexuais estão envolvidas na patogenia do LES dado o evidente enviesamento feminino que apresenta. A monografia pretende avaliar o papel do estrogénio neste mesmo enviesamento. Sendo a principal hormona feminina e tendo em conta que as variações nos seus níveis se correlacionam com a progressão e atividade da doença, é uma forte candidata à explicação da sua elevada incidência e prevalência nas mulheres. Apesar do rácio mulher:homem ser maior durante os anos reprodutivos, verifica-se em todas as idades. Outros fatores estão provavelmente a tornar o género feminino mais suscetível ao LES, não descartando o estrogénio como grande influente. O recetor a do estrogénio (REa) surge como o principal interveniente na modulação do sistema imunitário pelo 17ß-estradiol (E2). Recentes evidências atribuem também a um padrão de citocinas alterado o desenvolvimento da doença, padrão este que parece ser modulado pela expressão do REa. O recetor também modula a sinalização pelos Toll-like Receptors (TLR) e a atividade das células dendríticas (CD) assim como das células B e T. Merecem também destaque como mediadores da ação do estrogénio nas células imunes o TLR9 e as proteínas de manutenção de minicromossoma (MCM). O estrogénio parece modular diferentes aspetos da regulação imunitária no sentido de uma maior ativação e reatividade do sistema. Outras hormonas sexuais deverão ser estudadas no sentido de comparar resultados e melhor compreender o enviesamento feminino do LES

Family business in Portugal: analysis of the financial indicators evolution

The impact that family firms have on the economy of a country has been quiet relevant. A great part of the companies all over the world is family business. Moreover, these firms have a significant influence on the countries’ gross domestic product, employment rates and consumer price index. Therefore, family business has been of great interest by researchers. The family business definition, objectives and goals, performance and financial structure are aspects that have been under study for several years. Furthermore, one of the main subjects is the differences and similarities between family firms and non-family firms. Authors from distinct countries have analysed if family companies outperform or underperform non-family ones, and the impact that the family has on the business performance. This thesis aims to analyse the evolution of financial indicators in Portuguese companies between 2010 and 2016. Considering the existing gap in this field, this research was developed with the data given by the "Associação das Empresas Familiares". This Portuguese association intends to support and defend the family firm’s interests. Accordingly, it is interesting for this organization to have studies about its associates. The data extraction resulted in a population of 450 family companies. In order to understand better this population, an exploratory data analysis was done. Then, the financial evolution of these firms along the seven years was studied. Finally, the conclusions about the progress and financial development of these businesses were made.O impacto que as empresas familiares têm na economia de um país tem sido notável. Uma grande parte das empresas do mundo são empresas familiares. Além disso, estas firmas têm uma influência significativa no produto interno bruto, nas taxas de emprego e no índice de preços ao consumidor de todos os países. Por consequência, os investigadores sempre demonstraram ter bastante interesse nas empresas familiares. A definição de empresa familiar, os objetivos, o desempenho e a estrutura financeira destas empresas são assuntos estudados há vários anos. Ademais, um dos principais temas é o estudo das diferenças e semelhanças entre empresas familiares e não familiares. Autores de diferentes países analisaram a comparação de desempenho entre estes dois tipos de empresas e o impacto que a família tem sobre o mesmo. O objetivo desta tese é analisar a evolução de indicadores financeiros de empresas familiares Portuguesas entre 2010 e 2016. Considerando a falta de informação sobre este assunto, este estudo foi desenvolvido com os dados fornecidos pela Associação das Empresas Familiares. Esta associação Portuguesa tem o propósito de apoiar e defender os interesses das firmas familiares. Por esse motivo, torna-se interessante para esta organização que existam estudos sobre os seus associados. A extração dos dados resultou numa população de 450 empresas. Com o objetivo de perceber melhor esta população, uma análise exploratória foi realizada. De seguida, foi estudada a evolução financeira destas empresas ao longo dos sete anos. Finalmente, as conclusões sobre o progresso e desenvolvimento financeiro destas empresas foram feitas

Diagnosis, Prognosis and Personalized Treatment of Cystic Fibrosis

Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica) Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2018Cystic Fibrosis (CF) is the most common lethal autosomal recessive genetic disorder in Caucasian populations. CF is caused by over 2000 mutations in the Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator (CFTR) gene, that encodes a cAMP-activated and phosphorylation-regulated chloride (Cl-) and bicarbonate (HCO3-) channel expressed at the apical membrane of epithelial cells. Malfunction of mutant CFTR leads to dysregulation of ion and fluid homeostasis across several epithelia, resulting in dehydration and obstruction of ducts, atrophic epithelia, gland hypertrophy, inflammation and tissue fibrosis. The airways disease, characterized by an impaired mucociliary clearance and recurrent cycles of infection, inflammation and scarring, that cause progressive loss of lung function, remains the major cause of morbidity and mortality among CF patients. A classification system of CFTR mutations according to the respective functional defect elicited on the CFTR protein has been proposed and these classes (I-VII) have been evolving as theratypes, i.e., groups of mutations that are expected to be rescued by the same therapeutic strategy. Small-molecule drugs have recently been approved for treatment of CF patients carrying selected mutations, namely VX-770 (or ivacaftor, marketed as Kalydeco®), a potentiator of the CFTR channel, and combinations of this potentiator with correctors of the folding/ trafficking defects of the most frequent mutant (F508del-CFTR), namely VX-809 (lumacaftor, which in combination with ivacaftor is known as Orkambi®) and VX-661 (tezacaftor, known as Symdeco® when combined with ivacaftor). However, for patients carrying orphan mutations – very rare and un- or mischaracterized variants – it is unknown whether they can benefit from already approved therapies and it is unlikely that further therapeutic efforts will be made towards correction of these mutants. Against this background and given the fact that CF severity is also partially dependent on other non-CFTR related genetic modifiers and non-genetic factors such as environmental determinants, patient-personalized approaches are becoming the gold standard for CF diagnosis, prognosis and therapeutic advice. In this MSc project, we first aimed to assess CFTR function in native tissues and primary cultures from CF/CF-suspicion patients carrying different (rare) mutations through (i) Ussing chamber measurements of CFTR-mediated Cl- secretion in rectal biopsies, (ii) Forskolin(Fsk)-induced swelling (FIS) assays of 3D-intestinal organoids derived from these biopsies and (iii) Ussing chamber measurements in isolated human nasal epithelial cells (HNECs) to establish a CF diagnosis and possible prognosis for the studied patients. Our second goal was to repurpose the approved CFTR modulator drugs by testing them in the patient-derived primary cultures and using the above approaches to assess CFTR rescue after incubation with these drugs. Finally, we aimed to identify which among the CFTR function parameters used provide the best correlations with CF-relevant outcomes from patients, so as to further establish them as robust biomarkers for CF diagnosis, prognosis and personalized treatment. We were able to support a diagnosis for 25/26 studied patients, with 14 being CF (mild) (i.e., with residual CFTR function) and 8 being CF (severe) (i.e., no residual CFTR function). For the remainder 3 patients, a non-CF diagnosis was proposed due to detection of high levels of Cl- secretion and presentation of a normal or inconclusive clinical phenotype. We were also able to detect rescue of CFTR function by at least one of the current CF-approved drugs, with potential for clinical benefit, for 7/13 patients’ samples assessed, some of which carry mutations outside of the approved drug labels (e.g. S955P). In the end, the cAMP and cholinergic co-activated CFTR-mediated current measured in rectal biopsies correlated best with donor-matched CFTR-dependent organoid swelling at 0.8 μM Fsk, and both these parameters also correlated strongly with more established CF biomarkers, namely the sweat chloride and fecal elastase E1 values. Overall, our results further validate the use of CFTR function measurements in rectal biopsies and 3D-intestinal organoids as personalized predictive tools for CF.A Fibrose Quística (FQ) é a doença autossómica recessiva letal mais comum em populações de origem Caucasiana, e afeta cerca de 85.000 pessoas em todo o mundo. Esta doença é causada por mais de 2000 mutações no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator), que codifica para um canal de cloreto (Cl-) e bicarbonato (HCO3-) expresso na membrana apical das células epiteliais e que é ativado pelo cAMP e regulado por fosforilação. A CFTR atua também na regulação de outros canais epiteliais como o canal epitelial de sódio (Na+) ENaC (Epithelial sodium channel). A disfunção da proteína CFTR leva à desregulação da homeostase iónica e hídrica em vários tecidos epiteliais, resultando na desidratação e obstrução de ductos, atrofia epitelial, hipertrofia de glândulas, inflamação crónica e fibrose dos tecidos. No caso particular das vias respiratórias, a deficiente secreção de Cl- pela CFTR e a hiperabsorção de Na+ pela ENaC leva à desidratação do líquido que reveste as superfícies respiratórias, aumentando a viscosidade das secreções e comprometendo o mecanismo de limpeza mucociliar, levando à mucoestase. Isto resulta em colonizações bacterianas recorrentes, obstrução das vias áereas, inflamação crónica e deterioração do tecido, que levam à perda progressiva da função pulmonar, que continua a ser a maior causa de morbilidade e mortalidade para os pacientes com FQ. O elevado número de mutações descritas no gene CFTR tem sido categorizado com base no respetivo defeito funcional causado ao nível da proteína em sete classes, numeradas de I-VII, que têm evoluído para teratipos, i.e., conjuntos de mutações que poderão ser corrigidas pela mesma estratégia terapêutica. Mutações de classe I originam tipicamente um codão stop prematuro no mRNA do CFTR, levando à sua degradação e à redução da expressão duma variante truncada da proteína CFTR; mutações de classe II resultam num defeito do enrolamento tridimensional da proteína (misfolding), levando à sua retenção e degradação no retículo endoplasmático, resultando na sua ausência na membrana apical; mutações de classe III interferem com a regulação do canal da CFTR, reduzindo drasticamente a sua probabilidade de abertura e transporte de iões; mutações de classe IV levam a constrangimentos no poro do canal com a consequente redução da respetiva condutância; mutações de classe V são tipicamente associadas a mecanismos de splicing alternativo que levam à produção de transcritos normais e aberrantes do gene CFTR em diferentes rácios, levando a uma significativa redução dos níveis de proteína normal; mutações de classe VI desestabilizam a CFTR na membrana plasmática, reduzindo assim sua função; mutações de classe VII são chamadas de “irrecuperáveis”, uma vez que causam defeitos tão significativos no CFTR que não podem ser farmacologicamente corrigidos, como, por exemplo, grandes deleções do gene. Estas últimas resultam na ausência de transcritos do CFTR e consequentemente não existe qualquer expressão da proteína. Recentemente, foram desenvolvidas e aprovadas pequenas moléculas para o tratamento de pacientes com FQ que possuem mutações específicas no CFTR, nomeadamente o VX-770 (ou ivacaftor), um potenciador da CFTR que leva ao aumento da probabilidade de abertura do canal, e tratamentos combinatórios deste potenciador com as moléculas VX-809 (ou lumacaftor) ou VX-661 (ou tezacaftor), corretoras de defeitos do tráfego do canal. Estes medicamentos estão comercializados como Kalydeco® (VX-770), Orkambi® (VX-809/770) e Symdeco® (VX-661/770), respetivamente. No entanto, para pacientes que possuem mutações órfãs – mutações raras cujo defeito funcional causado na CFTR é indefinido ou está mal caracterizado – ainda não se sabe se poderão beneficiar das terapias já aprovadas. Além disso, não é expectável que venham a ser desenvolvidos esforços direcionados para o desenvolvimento de terapias específicas para estas mutações, devido ao baixo número de pacientes que as expressam, associado à sua elevada distribuição geográfica. Dado isto, e o facto de que a gravidade da FQ é também parcialmente dependente doutros fatores genéticos não associados ao CFTR (p.ex., genes modificadores) e fatores não-genéticos (p.ex., ambientais), as abordagens personalizadas ao paciente individual, que têm em conta além do genótipo do CFTR e do defeito funcional que é causado na proteína, têm-se tornado no padrão-ouro para o diagnóstico, prognóstico e aconselhamento terapêutico da FQ. Um conjunto de metodologias inovadoras têm vindo a ser desenvolvidas na área da FQ, permitindo a análise laboratorial de células/tecidos derivados do próprio paciente para seleção pré-clínica de pacientes que respondam positivamente a tratamentos já aprovados. O primeiro objetivo deste projeto de Mestrado foi avaliar a função da CFTR em tecidos nativos e culturas primárias de pacientes com FQ ou suspeita de FQ, apresentando diferentes mutações no gene CFTR, com principal foco em pacientes com mutações raras ou ultra-raras. Isto foi realizado através de (i) medições electrofisiológicas da secreção de Cl- mediada pela CFTR em biópsias rectais de pacientes usando a câmara de Ussing, (ii) ensaios do inchamento induzido por Forscolina (FIS – Forskolin(Fsk)-induced swelling), um ativador da CFTR que atua no aumento dos níveis intracelulares de cAMP, em culturas primárias de organóides intestinais 3D derivados destas biopsias rectais e (iii) medições electrofisiológicas da atividade da CFTR em culturas primárias de células epiteliais nasais isoladas dos pacientes, usando também a câmara de Ussing, a fim de estabelecermos um diagnóstico e possível prognóstico de FQ para os pacientes estudados. O nosso segundo objetivo foi reaproveitar os fármacos já aprovados para a correção de defeitos na CFTR, testando-os nas culturas primárias dos pacientes e usando novamente as metodologias supramencionadas para avaliar o resgate da função da CFTR após incubação com estas moléculas. Através disto, pretendíamos determinar qual a melhor terapia para cada paciente, de uma forma personalizada, bem como identificar mutações órfãs que respondessem positivamente aos tratamentos já aprovados. Finalmente, o nosso último objetivo foi identificar qual/quais de entre os parâmetros de avaliação da função da CFTR usados correlacionaria melhor com os resultados clínicos dos pacientes, permitindo validá-lo(s) como biomarcadores robustos para o diagnóstico, prognóstico e tratamento personalizado da FQ. Através da nossa análise pudemos apoiar um diagnóstico para 25/26 pacientes estudados, tendo classificado 14 como pacientes com FQ não-clássica (i.e., com função residual da CFTR) e 8 com FQ clássica/severa (i.e., sem função da CFTR). Para os restantes 3 pacientes, propusemos a exclusão de um diagnóstico de FQ, devido à detecção de níveis elevados de secreção de Cl- mediada pela CFTR nas suas biópsias rectais (i.e., função normal), a par de uma apresentação clínica não sugestiva de FQ. A análise por FIS dos organóides intestinais 3D dos pacientes, após incubação com os fármacos aprovados para a correção de disfunções da CFTR mutada, permitiu determinar a ocorrência do resgate da função da CFTR por pelo menos um desses fármacos (VX-770, VX-809/770 ou VX-661/770), com baixo, médio ou elevado potencial para benefício clínico, para 7/13 pacientes analisados, permitindo o reaproveitamento destas terapias para estes pacientes, alguns dos quais possuem mutações para as quais os fármacos não estão (ainda) aprovados (p.ex., S955P). Por fim, os nossos resultados da análise de correlações entre os parâmetros da função da CFTR usados neste projecto, mostraram ser a corrente dependente da CFTR, co-activada pelo cAMP e estímulos colinérgicos, detetada na análise de biópsias rectais em câmara de Ussing, o parâmetro que melhor se correlaciona com o inchamento dependente da CFTR dos organóides intestinais 3D, induzido por uma concentração de Fsk de 0.8 μM. Além disso, estes dois parâmetros funcionais também correlacionaram mais significativamente com outros biomarcadores de FQ melhor estabelecidos na área, nomeadamente as concentrações de Cl- no suor e os valores de elastase fecal E1. Globalmente, os nossos resultados validam o uso das medições da função da CFTR em biópsias rectais e organóides intestinais 3D como ferramentas personalizadas preditivas para a FQ

Alvos terapêuticos na Doença de Alzheimer: relevância da BACE I e o desenvolvimento de inibidores desta secretase

Monografia realizada no âmbito da unidade de Estágio Curricular do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de CoimbraA Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa progressiva e irreversível que apresenta duas lesões características: depósitos β-amilóide (Aβ) e tranças neurofibrilares (NFTs). Clinicamente, a DA é caracterizada por perda progressiva e gradual de memória e de outras funções cognitivas. A hipótese globalmente aceite para a patogénese da DA baseia-se na teoria da cascata amilóide e subsequente patologia de tau, uma vez que a toxicidade amilóide induz a hiperfosforilação da proteína tau. A descoberta recente de biomarcadores pré-clínicos é importante para o diagnóstico da DA em fases precoces da doença. Ao longo dos anos as investigações para a cura da DA têm sido incessantes, contudo ainda não existem terapêuticas capazes de impedir a progressão da doença. A BACE 1 (β-secretase) é a enzima que inicia a produção de Aβ, e é apontada como um alvo terapêutico primordial no tratamento da DA. A inibição da BACE 1 apresenta consequências benéficas na diminuição das concentrações Aβ. Durante a última década o foco tem sido o desenvolvimento de inibidores com boas propriedades farmacológicas que inibam eficazmente a BACE 1. Alguns inibidores mostraram-se eficazes nos estudos pré-clínicos e entraram recentemente em ensaios clínicos, sendo o MK-8931 o que se encontra em fase mais avançada. O potencial terapêutico da inibição de BACE.I pode ser a chave para um tratamento eficaz da DA no futuro.Alzheimer’s Disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease and its hallmarks consist in amyloid-β deposits (Aβ) and neurofibrillary tangles (NFTs). Clinically, AD is characterized by progressive memory loss and other cognitive deficits. The globally accepted hypothesis to explain DA is based on the amyloid-β cascade theory and subsequent tau pathology, since amyloid toxicity induces tau protein hyper-phosphorylation. The recent discovery of pre-clinical biomarkers can be used to diagnose AD at an early stage. Over the years, the research for AD cure has been relentless, however there are still no effective therapies available to prevent the advance of the disease. BACE 1 (β-secretase), the enzyme that leads to the production of Aβ in the brain, is considered to be a major therapeutic target in treating Alzheimer ’s Disease. Inhibition of BACE 1 shows beneficial effects in lowering cerebral Aβ concentrations. During the last decade the focus has been in the development of inhibitors with drug-like properties that can effectively inhibit BACE 1. Some BACE 1 inhibitors have shown safety and efficacy in preclinical studies, and have recently entered human clinical trials. Thus far, MK-8931 has advanced the farthest and is in phase 3. The therapeutic potential of inhibiting BACE 1 may be the key to an effective treatment of AD in the future

Atitudes e perspectivas de conflitos com o lobo no centro de Portugal

Portuguese wolf populations suffered a decrease during the 20th century mainly due to the expansion of road network, increasing number of forest fires, decrease of wild prey populations, and human persecution. This is particularly worrying in Central Portugal, South of River Douro, where populations are small, highly fragmented and isolated, with little genetic variability and instable reproduction, and low density of wild prey. Conflict in this area is aggravated by high levels of livestock depredation, where livestock makes up for more than 90% of wolves diet. This antagonizes Humans towards wildlife, that typically respond by recurring to activities such as illegal pouching or poisoning in order to solve their problem. This problematic is recognized as the first cause of large carnivores’ persecution and population decline. By surveying individual attitudes toward wolves in central Portugal, we believe that it is possible to understand and even predict behaviour towards the specie. This was done using a questionnaire to sample local population, a total of 222 questionnaires from three interest groups (general public, N=119; livestock owners, N=88; and hunters, N=24) were analysed. We measured Attitude, Fear and Knowledge Index, tested correlation between Index and examined which variables influenced Attitudes and Fear. Attitudes towards wolves were positive, even though Fear high and Knowledge was low. We also found that attitudes tend to be more positive with the decrease of fear and the increase of knowledge, and fear tends to decrease with the increase of knowledge. The main variable influencing attitudes negatively was found to be Fear, and age for the livestock owners, where people older than 60 years old tend to have more negative attitude. As for Fear the main influenceable variables belong to the female gender, a low knowledge index and the knowledge/having suffered from wolf depredation. These results can be used to increase locals’ tolerance, by creating tailored conservational measures together with all the stakeholders’ groupDurante o século XX, a população portuguesa de lobos sofreu um decréscimo devido à expansão rodoviária, aumento de fogos florestais, diminuição de presas selvagens e à perseguição humana. Isto é particularmente preocupante no centro de Portugal, a sul do rio Douro, onde as populações são pequenas, altamente fragmentadas e isoladas, com baixa variabilidade genética e reprodução instável e baixa densidade de presas selvagens. Nesta área, os conflitos são agravados devido aos altos níveis de predação a gado doméstico, que constitui mais de 90% da dieta dos lobos. Este tipo de comportamentos dificulta as interações entre os humanos e a vida selvagem, instigando muitas vezes, comportamentos como a caça ilegal ou envenenamento para solucionar o “problema”, sendo esta a principal causa de perseguição e decréscimo das populações de grandes carnívoros. Avaliando as atitudes individuais para com o lobo no centro de Portugal, acreditamos ser possível perceber e prever comportamentos para com a espécie. Recorremos a um questionário para amostrar a população local, um total de 222 questionários de três grupos alvo (publico geral, N= 119; donos de gado, N= 88; e caçadores, N= 24) foram analisados. Medimos os Índices de Atitude, Medo e Conhecimento, testamos a correlação entre índices e examinamos quais as variáveis que influenciavam as Atitudes e o Medo. As atitudes para com o lobo são positivas, apesar do índice de Medo ser elevado e o Conhecimento baixo. Também descobrimos que as atitudes tendem a ser mais positivas quando o medo é baixo e o conhecimento alto. As principais variáveis que influenciam as atitudes negativamente são o medo e a idade no caso dos donos de gado, em que pessoas mais velhas que 60 anos tinham atitudes negativas. Em relação ao medo, as principais variáveis que o influenciam são pessoas do género feminino, o baixo índice de conhecimento e ter conhecimento/sofrido ataques a gado doméstico. Estes resultados podem ser utilizados para aumentar a tolerâncias dos locais, criando medidas conservacionista personalizadas em conjunto com todos os grupos de interesseMestrado em Ecologia Aplicad

Studies on cytotoxic activity of organometallic complexes of Mo(II) with α-diimines

Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2012De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), milhões de pessoas vivem com o diagnóstico de cancro e esta é uma das doenças que causa mais mortes, a nível mundial (cerca de 8 milhões de mortes por ano). Se esta tendência não for invertida, estima-se que em 2030, 12 milhões de pessoas morram devido ao cancro. A investigação nesta área tão importante é, inquestionavelmente, necessária. Foram identificados mais de 200 tipos diferentes de cancro, todos caracterizados pelo crescimento e proliferação descontrolados de células anormais. Atualmente, a quimioterapia, radioterapia e cirurgia são os principais tipos de tratamento do cancro, sendo a quimioterapia a opção mais comum e com mais resultados favoráveis. Os fármacos usados na quimioterapia possuem, cada vez mais, alvos biológicos específicos, como proteínas e enzimas ou o DNA de células cancerígenas, tentando não afetar as células normais e saudáveis. Na segunda metade do século XX, houve um grande avanço na história da quimioterapia com a descoberta da cisplatina que, ainda hoje em dia, juntamente com os seus análogos são os fármacos mais utilizados no tratamento de tumores sólidos, devido à sua elevada eficácia. No entanto, estes compostos de platina apresentam diversas limitações, nomeadamente resistência das células tumorais aos compostos e elevada toxicidade destes. Contudo, a descoberta da cisplatina levou à investigação da atividade anti-tumoral de outros compostos com centros metálicos, como o molibdénio, ruténio, ouro, ferro, entre outros. Foram feitos vários estudos citotóxicos com compostos contendo molibdénio, tendo sido comprovadas as suas propriedades anti-tumorais. No entanto, o seu mecanismo de ação encontra-se ainda por esclarecer. Este trabalho teve como objetivo o estudo das propriedades anti-tumorais de cinco complexos organometálicos de molibdénio(II), [Mo(η3-C3H5)Br(CO)2{1,4-X-fenil-2,3-naftalenodiazobutadieno}], com X = H (C1), Me (C2), OMe (C3), Cl (C4) e COOH (C5). Estes complexos foram sintetizados por reação do precursor de molibdénio(II) [Mo(η3-C3H5)Br(CO)2(MeCN)] (P0) com diferentes ligandos bidentados azotados da família das α-diiminas (L1 – L5) e foram caracterizados por FTIR e 1H NMR. Realizaram-se ensaios de voltametria cíclica para estudar as propriedades de oxidação/redução dos complexos C1 – C5. Nos voltamogramas cíclicos obtidos para cada complexo, foram observadas ondas de oxidação de maior intensidade e uma onda de redução de menor intensidade. As oxidações estão associadas ao processo de oxidação de Mo(II) a Mo(III) e as reduções ocorrem no ligando, de acordo com a composição das HOMOs e LUMOs dos complexos calculadas por DFT (do inglês, Density Functional Teory). Os complexos apresentam em geral um comportamento de oxidação irreversível, comprovado pela diferença (ΔE) de potencial de oxidação (Epox) e potencial de redução (Epred), ΔE = Epox - Epred > 0.059. Realizaram-se estudos de citotoxicidade destes compostos em diversas linhas celulares tumorais humanas: HeLa (células endoteliais do cancro do colo do útero), MCF-7 e MDA (células epiteliais do cancro da mama), SW480 e Caco-2 (células epiteliais do cancro do cólon) utilizando o ensaio de viabilidade celular MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio). Os resultados de IC50 obtidos (concentração necessária para inibir metade do crescimento celular) mostram que estes complexos têm uma elevada atividade citotóxica in vitro nas linhas tumorais estudadas, com valores de IC50 a variar entre 3,2 e 27,1 μM em células HeLa. Nas células SW480 obtiveram-se valores de IC50 entre 0,6 e 50 μM e para as células MCF-7, IC50 a variar entre 25 e 98,4 μM. Observou-se uma possível resistência das linhas celulares MDA-MB-231 e Caco-2 células aos compostos, traduzido por um menor efeito anti-tumoral, e refletido em valores de IC50 maiores que 100 μM. O complexo C3 é o mais citotóxico, uma vez que apresenta o menor valor de IC50, dos cinco compostos, em todas as linhas celulares estudadas. Por outro lado, o complexo C5 é o que tem o maior valor de IC50 em todas as linhas celulares testadas, sendo o que tem um efeito anti-tumoral mais baixo. Uma vez que a maioria dos complexos organometálicos têm como alvo o DNA das células tumorais, foram feitos ensaios de titulação de calf thymus DNA (CT DNA) usando espectrofotometria de UV-Vis para detetar a interação destes complexos de molibdénio(II) com o DNA, de modo a tentar elucidar o seu mecanismo de ação. Os espectros obtidos para cada complexo mostraram uma diminuição da intensidade da absorvência dos complexos (hipocromismo), acompanhada de um desvio para o vermelho (batocromismo), medidos a um determinado comprimento de onda, após a adição (e consequente aumento de concentração) de CT DNA. Isto indica uma interação dos compostos de molibdénio(II) com o CT DNA. Foram calculados os valores da constante de ligação intrínseca (Kb) entre o CT DNA de cada complexo, obtendo-se maiores valores de Kb para os complexos C3 e C5 (Kb = 4.47 х 104 M-1 e 6.53 х 104 M-1, respetivamente) e o menor valor para o complexo C2 (Kb = 2.11 х 104 M-1). Assim sendo, os complexos C3 e C5 interagem mais fortemente com o DNA e o complexo C2 apresenta a interação mais fraca com esta molécula biológica. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram a identificação de complexos organometálicos de molibdénio(II) como potenciais agentes anti-tumorais, a partir dos estudos de atividade citotóxica em diferentes linhas celulares, e o esclarecimento de um dos possíveis mecanismos da sua ação em células cancerígenas, através da interação destes com o DNA, levando à inibição do crescimento das células tumorais e, consequente morte celular. Muitos mais estudos teriam de ser realizados para compreender melhor a interação destes compostos, não só com o DNA, mas com os outros constituintes celulares (enzimas, proteínas, membranas, etc), de modo a poder investigar a potencialidade destes compostos C1 a C5 em quimioterapia. Este fato pode trazer novas perspetivas a esta área de investigação, de modo a ultrapassar as limitações existentes nos fármacos atualmente usados na quimioterapia. Com efeito, estes compostos organometálicos de Mo(II) apresentam propriedades químicas diferentes das dos complexos em fases mais avançadas de desenvolvimento ou mesmo em utilização clínica. A utilização destes ligandos bidentados azotados da família das α-diiminas e a possibilidade de combinar outros novos ligandos ao molibdénio constituem uma mais valia no tratamento no cancro.Five molybdenum(II) complexes, [MoBr(η3-C3H5)(CO)2{1,4-(4-X)phenyl-2,3-naphthalenediazabutadiene}], X = H (C1), Me (C2), OMe (C3), Cl (C4) and COOH (C5), were synthesized and characterized by FTIR and 1H NMR spectroscopy. Their redox properties were studied by cyclic voltammetry and strong oxidation waves and less intense reduction waves were observed in the cyclic voltammograms. The difference between the oxidation and reduction potentials (ΔE = Epox - Epred > 0.059) indicated irreversible processes, namely Mo(II) to Mo(III) oxidations and reductions occurring at the ligand. The cytotoxic activity of C1 – C5 was studied in vitro against several cancer cell lines (HeLa, MCF-7, MDA-MB-231, SW480 and Caco-2), using a colorimetric assay, MTT (3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide). All the complexes display a powerful cytotoxic activity in vitro against HeLa (with IC50 values ranging from 3.2 to 27.1 μM) and a smaller antitumoral effect against MDA-MB-231 and Caco-2 cells (IC50 > 100 μM). C3 is the most cytotoxic complex, with lowest IC50, while C5 has the highest IC50 value, in all cell lines tested. The interaction of these molybdenum(II) complexes with CT DNA was studied, using absorption titration spectroscopy, in order to elucidate their mechanism of action. The absorption spectra of C1 – C5 showed a decrease in the intensity of the absorbance (hypochromism), accompanied by a small red-shift (batochromism) with increasing CT DNA concentration, which indicates an interaction of the complexes with CT DNA. The intrinsic binding constant values (Kb) show that C3 and C5 bind strongly to the CT DNA (Kb = 4.47 х 104 M-1 and 6.53 х 104 M-1, respectively) and C2 has the weakest interaction with CT DNA (Kb = 2.11 х 104 M-1). These results support the capability of these molybdenum(II) complexes for potential application in chemotherapy

Developement of a job rotation algorithm to reduce occupational exposure in the automotive industry

Musculoskeletal disorders remain the most reported occupational health workplace problem, affecting workers in all sectors of economic activity. The automotive industry is one of the industries with the highest prevalence of musculoskeletal symptoms, mainly due to the biomechanical risk factors that workers are exposed to during their workday. As this industry is one of the largest industrial forces that has contributed significantly to the growth of the global economy, it is crucial to develop efficient solutions that can be implemented in workplaces to improve working conditions by eliminating or reducing workers' exposure to the main biomechanical risk factors. The present dissertation attempts to understand the short-term relationships between biomechanical risk factors and musculoskeletal symptoms in the automotive assembly line, in addition to providing an organizational strategy that uses a mathematical approach to mitigate exposure to the same risk factors and reduce the prevalence/incidence of musculoskeletal disorders. Therefore, this dissertation presents three main investigations. The first study with a cohort design determines the short-term associations between biomechanical risk factors and musculoskeletal symptoms in the upper limbs and low back in an automotive plant. The workers were divided into low and high-risk groups for various risk factors. The results suggested that workers who were in the high-risk group had a higher likelihood to report adverse effects on their musculoskeletal symptoms at the end of a work week, particularly when exposed to certain risk factors, such as: posture for symptoms in the neck, right wrist, and left shoulder. The second study proposes a mathematical formulation based on a genetic algorithm that considers the assessment of biomechanical risk factors (EAWS) in the workplace, workers’ qualifications, and organizational aspects inherent in the operation of the production line. The algorithm is based on three criteria: enhancing diversity, ensuring team homogeneity, and reducing exposure to biomechanical risk factors. The success of the algorithm in meeting these criteria has been verified. In addition, when comparing the results of the algorithm with the results of manual job rotation plans (created by a team leader), it was shown that the mathematical solution was more efficient, not only in relation to the three criteria, but also in terms of time spent on this task. Finally, the third study complements the second by comparing the results obtained via the genetic algorithm with the data obtained through the rotation plans made by team leaders of several teams on the assembly lines. Therefore, the aim of this study was to XIX evaluate the effectiveness of the algorithm in creating job rotation plans compared to the manual process of team leaders in terms of diversity, homogeneity, exposure, shift working sequence quality and matrix quality. The job rotation plans of 7 teams (89 workers) from the assembly area were included in the sample. Exposure was the only criterion that did not show significant differences between the two methods, however, all variables at the individual level showed high values in the limits of agreement. The values of diversity, homogeneity, shift working sequence quality, and matrix quality of the job rotation plan generated by the genetic algorithm were on average higher than the values of the team leaders’ job rotation plan. These results show that implementing the genetic algorithm has a promising potential to create job rotation plans that reduce musculoskeletal disorders in the automotive industry and as well as to reduce the time associated with the team leader completing this task.As lesões músculo-esqueléticas continuam a ser o principal problema de saúde reportado no local de trabalho, afetando trabalhadores em todos os setores de atividades. A indústria automóvel é um dos setores com maior prevalência de sintomatologia músculo-esquelética, principalmente devido aos fatores de risco biomecânicos a que os trabalhadores estão expostos durante o seu dia de trabalho. Sendo esta indústria uma das maiores forças industriais, que contribuí de forma significativa para o crescimento da economia global e nacional, é fulcral desenvolver soluções eficientes para implementar nos postos de trabalho por forma a melhorar as suas condições, eliminando ou reduzindo a exposição dos trabalhadores aos principais fatores de risco biomecânicos. A presente dissertação procura compreender os efeitos a curto prazo dos fatores de risco biomecânicos sobre a sintomatologia músculo-esquelética na linha de montagem de uma indústria automóvel, e providencia uma estratégia organizacional, recorrendo a uma abordagem matemática, para mitigar a exposição a condições de trabalho adversas e reduzir a incidência de lesões e sintomatologia músculo-esqueléticas. Para a concretização desta dissertação, foram desenvolvidos três estudos. O primeiro estudo, com um desenho prospetivo e uma amostra de 228 trabalhadores, determinou as associações a curto prazo entre os fatores de risco biomecânicos e a sintomatologia músculo-esquelética nos membros superiores e na região lombar numa fábrica da indústria automóvel. Os trabalhadores foram divididos em grupos de baixo e elevado risco para os diferentes fatores de risco. Os resultados sugerem que ao final de uma semana de trabalho, os trabalhadores que pertencem ao grupo de alto risco têm uma predisposição superior para reportarem efeitos desfavoráveis na sua sintomatologia músculo-esquelética, principalmente quando sujeitos a determinados fatores de risco, como é o caso da postura para a sintomatologia no pescoço, punho direito e ombro esquerdo. O segundo estudo propõe uma formulação matemática com base num algoritmo genético, que tem em conta a avaliação dos fatores biomecânicos presentes nos postos de trabalho (EAWS), a qualificação dos trabalhadores e aspetos organizacionais inerentes ao funcionamento da linha de produção. O algoritmo baseia-se em três critérios: melhorar a diversidade da exposição aos fatores de risco, garantir a homogeneidade da equipa e reduzir a exposição aos fatores de risco biomecânicos. O sucesso do algoritmo no cumprimento destes critérios foi verificado. Adicionalmente, quando se compararam os resultados do algoritmo com os resultados dos XXI planos de rotação criados manualmente por um team leader, verificou-se que a solução matemática despendia menos tempo na concretização da tarefa. Por fim, o terceiro estudo complementa o segundo comparando os resultados obtidos pelo algoritmo genético e os dados obtidos pelos planos de rotação gerados pelos team leaders de várias equipas da linha de montagem. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar a eficácia do algoritmo em gerar planos de rotação, quando comparado com o processo manual realizado pelos team leaders quanto à diversidade, homogeneidade, exposição, sequência de estações de trabalho e qualidade da matriz. Os planos de rotação de 7 equipas (89 trabalhadores) da área da montagem foram incluídos na amostra. A análise de grupo demonstrou que a exposição é o único critério que não apresenta diferenças significativas entres os dois métodos, no entanto, a nível individual todas as variáveis apresentaram valores elevados nos limites de concordância. Os valores de diversidade, homogeneidade, sequência de postos de trabalho e qualidade da matriz do plano de rotação gerado pelo algoritmo genético são, em média, superiores quando comparados com os valores do plano de rotação do team leader. Estes resultados revelam um potencial promissor na implementação do algoritmo genético para a criação de planos de rotação para diminuir o tempo associado à realização desta tarefa pelo team leader, mas também no seu papel ativo na redução das lesões músculo-esqueléticas na indústria automóvel

The citizen as a source of information: a case study on Jornal da Tarde, RTP

Indispensable to news production, sources of information are complex and provide an interesting case review. Without them a journalist’s work would be next to impossible to perform since those sources are able to reinforce and give credibility to the news. In a time when the citizen’s participation in public service media is gaining more and more importance, this study aims to understand the kind of representation and prominence given to the citizen in the Portuguese television Public Service. In addition to understanding the presence of the citizen in Jornal da Tarde, RTP (Radio and Television of Portugal) the goal is to make a connection between the role of the Portuguese television Public Service and the need, or not, to call upon non-official voices to support the credibility and even the veracity of the topic in hand. In which topics the citizen’s voice is more present and which testimonials are more sought after by RTP are some of the topics under discussion. In order to do that – identify the news in which the citizen’s voice was used and to find answers to the given question – a content analysis of 21 broadcasts of Jornal da Tarde was performed

Determinants of capital structure : large Portuguese companies, 1984-1988

Mestrado em FinançasEsta dissertação pretende verificar quais as variáveis que influenciam nas decisões relacionadas com a estrutura de capital. O objectivo deste trabalho é estudar um período de 5 anos em Portugal – 1984 a 1988, para 50 grandes empresas portuguesas. As variáveis selecionadas são baseadas em estudos anteriores neste tema: tamanho, rendibilidade, nível de crescimento, estrutura do activo, vantagens fiscais e risco de negócio. Os resultados empíricos mostraram uma significância estatística positiva entre a estrutura do activo e o nível de endividamento. Por outro lado, a dimensão mostrou uma significância estatisticamente negativa com o nível de endividamento. Em relação às outras variáveis selecionadas, os resultados não indicaram nenhuma influência com as decisões na estrutura de capital.This dissertation aims to verify what variables influence the decisions in the capital structure. The objective is to study a gap in a 5-year period in Portugal – 1984 to 1988. This study uses the financial reports of 50 large Portuguese manufacturing firms during this period. The variables were selected based on previous research in this area: size, profitability, level of growth, asset structure, fiscal advantages and business risk. The empirical results showed a statistically positive significant relationship between the asset structure and leverage. On the other hand, size had a statistically negative significant relationship with leverage. All the other variables showed insignificant relationship in the debt level in a firm