Leukaemia Inhibitory Factor (LIF) inhibits cancer stem cells tumorigenic properties through hippo kinases activation in gastric cancer

Cancer stem cells (CSCs) present chemo-resistance mechanisms contributing to tumour maintenance and recurrence, making their targeting of utmost importance in gastric cancer (GC) therapy. The Hippo pathway has been implicated in gastric CSC properties and was shown to be regulated by leukaemia inhibitory factor receptor (LIFR) and its ligand LIF in breast cancer. This study aimed to determine LIF’s effect on CSC properties in GC cell lines and patient-derived xenograft (PDX) cells, which remains unexplored. LIF’s treatment effect on CSC markers expression and tumoursphere formation was evaluated. The Hippo kinase inhibitor XMU-MP-1 and/or the JAK1 inhibitor Ruxolitinib were used to determine Hippo and canonical JAK/STAT pathway involvement in gastric CSCs’ response to LIF. Results indicate that LIF decreased tumorigenic and chemo-resistant CSCs, in both GC cell lines and PDX cells. In addition, LIF increased activation of LATS1/2 Hippo kinases, thereby decreasing downstream YAP/TAZ nuclear accumulation and TEAD transcriptional activity. LIF’s anti-CSC effect was reversed by XMU-MP-1 but not by Ruxolitinib treatment, highlighting the opposite effects of these two pathways downstream LIFR. In conclusion, LIF displays anti-CSC properties in GC, through Hippo kinases activation, and could in fine constitute a new CSCs-targeting strategy to help decrease relapse cases and bad prognosis in GC.Ministry of Tertiary Education, Research and Innovation/[]//FranciaLigue Nationale Française Contre le Cancer (French National League against Cancer)/[]//FranciaUniversidad de Costa Rica/[]/UCR/Costa RicaMinisterio de Ciencia, Innovación, Tecnología y Telecomunicaciones/[]/MICITT/Costa RicaFrench National Cancer Institute/[PLBio 2014-152]/INCa/FranciaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto de Investigaciones en Salud (INISA

TAZ Controls Helicobacter pylori-Induced Epithelial–Mesenchymal Transition and Cancer Stem Cell-Like Invasive and Tumorigenic Properties

Helicobacter pylori infection, the main risk factor for gastric cancer (GC), leads to an epithelial–mesenchymal transition (EMT) of gastric epithelium contributing to gastric cancer stem cell (CSC) emergence. The Hippo pathway e ectors yes-associated protein (YAP) and transcriptional co-activator with PDZ binding motif (TAZ) control cancer initiation and progression in many cancers including GC. Here, we investigated the role of TAZ in the early steps of H. pylori-mediated gastric carcinogenesis. TAZ implication in EMT, invasion, and CSC-related tumorigenic properties were evaluated in three gastric epithelial cell lines infected by H. pylori. We showed that H. pylori infection increased TAZ nuclear expression and transcriptional enhancer TEA domain (TEAD) transcription factors transcriptional activity. Nuclear TAZ and zinc finger E-box-binding homeobox 1 (ZEB1) were co-overexpressed in cells harboring a mesenchymal phenotype in vitro, and in areas of regenerative hyperplasia in gastric mucosa of H. pylori-infected patients and experimentally infected mice, as well as at the invasive front of gastric carcinoma. TAZsilencing reduced ZEB1 expression andEMTphenotype, and strongly inhibited invasion and tumorsphere formation induced by H. pylori. In conclusion, TAZ activation in response to H. pylori infection contributes to H. pylori-induced EMT, invasion, and CSC-like tumorigenic properties. TAZ overexpression in H. pylori-induced pre-neoplastic lesions and in GC could therefore constitute a biomarker of early transformation in gastric carcinogenesis.Ligue Nationale Française Contre le Cancer (French National League against Cancer)/[]//FranciaUniversidad de Costa Rica/[]/UCR/Costa RicaMinisterio de Ciencia, Innovación, Tecnología y Telecomunicaciones/[]/MICITT/Costa RicaFrench National Cancer Institute/[PLBio 2014-152]/INCa/FranciaLigue Contre le Cancer/[]//FranciaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto de Investigaciones en Salud (INISA

Characterization of macrophage infiltration and polarization by double fluorescence immunostaining in mouse colonic mucosa

We recently characterized the association between DNA damage and immunoresponse in vivo in colonic mucosa of mice infected with a Salmonella Typhimurium strain expressing a genotoxin, known as typhoid toxin. In this protocol, we describe how to assess the extent and features of infiltrating macrophages by double immunofluorescence. Total macrophage population was determined using an F4/80 antibody, whereas the specific M2-like population was assessed using a CD206 antibody. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Martin et al. (2021)

Detection of DNA damage by alkaline comet assay in mouse colonic mucosa

We recently characterized the association between DNA damage and immunoresponse in vivo in colonic mucosa of mice infected with a Salmonella Typhimurium strain expressing a genotoxin, known as typhoid toxin. In this protocol, we describe the specific steps for assessing DNA damage by the alkaline comet assay of colonic mucosal samples. The description of the comet assay protocol follows the international guidelines (Minimum Information for Reporting on the Comet Assay [Moller et al., 2020]). For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Martin et al. (2021)

Bacterial genotoxins induce T cell senescence

Several types of pathogenic bacteria produce genotoxins that induce DNA damage in host cells. Accumulating evidence suggests that a central function of these genotoxins is to dysregulate the host's immune response, but the underlying mechanisms remain unclear. To address this issue, we investigated the effects of the most widely expressed bacterial genotoxin, the cytolethal distending toxin (CDT), on T cells—the key mediators of adaptive immunity. We show that CDT induces premature senescence in activated CD4 T cells in vitro and provide evidence suggesting that infection with genotoxin-producing bacteria promotes T cell senescence in vivo. Moreover, we demonstrate that genotoxin-induced senescent CD4 T cells assume a senescence-associated secretory phenotype (SASP) which, at least partly, is orchestrated by the ATM-p38 signaling axis. These findings provide insight into the immunomodulatory properties of bacterial genotoxins and uncover a putative link between bacterial infections and T cell senescence

Évaluation des risques liés à la consommation de nitrates et nitrites: Avis révisé de l’AnsesRapport d’expertise collective

Citation suggérée : Anses. (2022). Evaluation des risques liés à la consommation de nitrates et nitrites. (Saisine 2020-SA-0106). Maisons-Alfort : Anses, 275 p.Le contexte de cette expertise est présenté ci-après selon les termes de la saisine émanant de la DGAL, la DGS et la DGCCRF .« La présence de nitrites dans l’organisme peut conduire à l’oxydation de l'hémoglobine réduisant la capacité des globules rouges à transporter l'oxygène. Elle peut également contribuer à la formation d’autres composés, tels que les nitrosamines, dont certains sont cancérogènes.Il existe différentes sources d’exposition des consommateurs aux nitrites et notamment :i) La conversion de nitrates présents dans certaines denrées alimentaires, en nitrites.Les nitrates se retrouvent dans l'eau notamment en raison de leur utilisation en production primaire. Ils sont naturellement présents dans certaines denrées alimentaires, en particulier dans les légumes-feuilles comme les épinards ou la laitue. Chez l’Homme, une partie des nitrates consommés peut être convertie en nitrites par les bactéries présentes dans la cavitébuccale.ii) La présence non intentionnelle de nitrites dans les denrées alimentaires.Les nitrites peuvent notamment être présents dans les légumes mais à des teneurs généralement très inférieures aux nitrates.iii) L’utilisation de nitrites et de nitrates en tant qu’additifs dans les denrées alimentaires.Les nitrites de potassium et de sodium (E249, E250) et les nitrates de sodium et de potassium (E251, E252) sont couramment utilisés pour préserver la viande et d'autres produits périssables. Ils contribuent également à limiter la prolifération de microorganismes nuisibles, en particulier Clostridium botulinum, responsable du botulisme. Il s’agit d’additifs alimentairesautorisés dans l’Union européenne. A ce titre, ils ont fait l’objet de travaux scientifiques d’évaluation pour caractériser les risques liés à leur utilisation.Actuellement la réglementation européenne prévoit une teneur maximale d’incorporation de 150 mg/kg pour les produits de viande transformés, hors produits traditionnels. Pour les produits traditionnels dont la production est moindre en volume que les produits fabriqués par les industriels et qui contribuent donc moins à l’exposition des consommateurs, laréglementation prévoit une teneur de nitrites et nitrates résiduels pouvant aller jusqu’à 250 mg/kg. La teneur résiduelle varie selon différents facteurs liés au procédé de transformation (température de transformation, pH, présence d’acide ascorbique, etc.) et ne dépend pas uniquement de la teneur initialement incorporée. Les autorités danoises ont, pourleur part, souhaité maintenir un niveau d’emploi plus faible, à 60 mg/kg, qu’ils avaient fixé avant l’harmonisation européenne.L’association du fer-héminique avec les nitrites ajoutés a notamment été envisagée comme une explication du risque accru observé de développement de cancers du côlon ou du rectum lié à la consommation de certains produits carnés (données CIRC-INCa 2018)[2]. Le ferhéminique contenu dans la viande favoriserait la conversion des nitrites en nitrosamines, substances classées cancérogène probable (groupe 2A).Pour répondre à la demande des consommateurs, l’industrie a développé des solutions qu’elle présente comme alternatives à l’utilisation de sels nitrés (raccourcissement des DLC, bouillons de légumes, extraits de végétaux, etc.). En outre, des opérateurs s’engagent de manière plus globale à diminuer l’utilisation des additifs conformément aux objectifs définis par leprogramme national de l’alimentation et de la nutrition (PNAN).Dans le cadre de la réévaluation des additifs, l’Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA) a rendu des avis en juin 2017[3] et conclu, sur la base des éléments de preuve disponibles, que les niveaux de sécurité existants pour les nitrites et les nitrates ajoutés en tant qu’additifs à la viande et à d'autres aliments constituaient une protection adéquate pour les consommateurs.Plus précisément :■ S’agissant des nitrates en tant qu’additif, et en ayant recours à des données dites réalistes (c’est-à-dire, les niveaux de concentration effectivement observés dans les aliments), les experts ont estimé que l'exposition des consommateurs aux nitrates utilisés comme additifs alimentaires était inférieure à 5% de l'exposition globale aux nitrates dans les aliments et ne dépassait pas la DJA ;■ S’agissant des nitrites en tant qu’additif, les experts ont estimé que l'exposition se situait dans des limites sûres pour tous les groupes de population, à l'exception d'un léger dépassement chez les enfants dont le régime alimentaire est riche en aliments contenant ces additifs.De plus, le panel de l’EFSA soulignait, lorsque l’ensemble des sources d’expositions alimentaires (présence naturelle dans les aliments, contamination environnementale, utilisation en tant qu’additifs) étaient prises en compte :1. pour les nitrates, des dépassements de la DJA pour l’ensemble des groupes d’âges (hypothèse d’exposition moyenne à haute) ;2. pour les nitrites, des dépassements de la DJA pour l’ensemble des groupes d’âges sous l’hypothèse d’exposition haute, et pour des groupes d’âges spécifiques (nourrissons, jeunes enfants et enfants) sous l’hypothèse d’une exposition moyenne.L’EFSA a également émis des recommandations pour pallier certaines incertitudes. »En ce qui concerne les nitrates, des travaux ont été engagés à l’Anses afin de caractériser les expositions par voie alimentaire (notamment légumes et eau destinée à la consommation humaine) propres à la France dans le cadre de la saisine 2015-SA-0029. Ces travaux résultent d’une saisie de l’Anses par l’association Eaux et rivières de Bretagne (le 15/01/2015), par laCoordination rurale (le 19/01/2015) puis par la FNSEA (le 26/01/2015) sur les impacts sanitaires des nitrates présents dans l’alimentation et dans l’environnement. En effet, les habitudes alimentaires, de même que la présence de nitrates dans les aliments (légumes notamment) et l’eau, peuvent différer sensiblement des données européennes utilisées par l’EFSA. Cela est particulièrement vrai pour l’eau de consommation humaine distribuée dont les paramètres caractérisant sa qualité physico-chimique varient en fonction des ressources exploitées et des traitements mis en œuvre. Ces travaux avaient pour but d’apprécier, au plan national, la situation d’exposition de la population aux nitrates au regard des repères toxicologiques. Les résultats permettraient d’identifier les situations méritant attention, de façon à recommander des mesures, en particulier grâce à l’identification des aliments (y compris l’eau de boisson) les plus contributeurs à l’exposition aux nitrates en France. Ces travaux sont complétés par la présente expertise

Avis de l'Anses relatif à l’étude de l’exposition aux nitrates par les eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) des réseaux de distribution dans le cadre de la mise en demeure de la Commission européenne au regard de dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH en France

Citation suggérée : Anses. (2022). Avis de l’Anses relatif à l’étude de l’exposition aux nitrates par les eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) des réseaux de distribution dans le cadre de la mise en demeure de la Commission européenne au regard de dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH en France (Saisine 2021-SA-0176). Anses (Maisons-Alfort), 58 p.La Directive 98/83/CE1, qui sera abrogée en 2023, et la Directive 2020/21842, relatives à la qualité des eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) ont fixé, pour le paramètre « nitrates », une limite de qualité (LQ) à 50 mg L-1 dans les EDCH, limite qui est complétée par la vérification que la somme de la concentration en nitrates (en mg L-1) divisée par 50 et de celle en nitrites (en mg L-1) divisée par trois soit inférieure à un. L’arrêté du 11 janvier 2007 modifié, relatif aux limites et références de qualité des eaux brutes et des EDCH, transpose ces exigences en droit français. Cette limite de qualité est en accord avec les lignes directrices définies par l’Organisation mondiale de la santé (OMS) et est fondée sur des donnéesépidémiologiques mettant en avant des cas de méthémoglobinémie chez le nourrisson (OMS 2017).La présente saisine intervient dans le contexte d’une mise en demeure de la France par la Commission européenne sur le non-respect de la Directive 98/83/CE pré-citée concernant le paramètre « nitrates ». La lettre de saisine précise que « cette mise en demeure concerne en particulier sept régions (Bourgogne Franche Comté, Centre Val de Loire, Grand Est, Hauts de France, Ile de France, Occitanie, Pays de la Loire) et 20 départements de France, où des dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH ont été observés sur 213 unités de distribution (UDI) depuis plusieurs années voire dizaines d’années pour certaines [...].Dans le cadre des échanges réguliers avec la Commission européenne, cette dernière a demandé aux autorités françaises d’évaluer l’impact sanitaire, sur les populations concernées, de ces expositions chroniques à des concentrations en nitrates dans l’eau dépassant la limite de qualité, en particulier pour les populations desservies par des unités de distribution pour lesquelles le calendrier de retour à la conformité n’est pas encore établi (soit 27 542 habitants alimentés par 116 UDI). »Par ailleurs, l’Anses a été saisie le 29 juin 2020 par la Direction générale de la santé (DGS), la Direction générale de l’alimentation (DGAL) et la Direction générale de la concurrence, de la consommation et de la répression des fraudes (DGCCRF), d’une demande d’avis relatif aux risques associés à la consommation de nitrites et nitrates (saisine 2020-SA-0106). Dans le cadre de cette saisine, l’Anses doit, entre autres, réévaluer la pertinence de la valeur toxicologique de référence de l’EFSA et al. (2017) et évaluer les risques sanitaires liés à l’exposition alimentaire aux nitrates, incluant la consommation d’EDCH. Ces travaux ont étéfinalisés début juillet 2022. Le périmètre de la présente saisine recoupe donc partiellement celui de la saisine 2020-SA-0106 relative aux risques associés à la consommation de nitrites et nitrates.[Saisine liée n° 2020-SA-0106

Avis de l'Anses relatif à l’étude de l’exposition aux nitrates par les eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) des réseaux de distribution dans le cadre de la mise en demeure de la Commission européenne au regard de dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH en France

Citation suggérée : Anses. (2022). Avis de l’Anses relatif à l’étude de l’exposition aux nitrates par les eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) des réseaux de distribution dans le cadre de la mise en demeure de la Commission européenne au regard de dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH en France (Saisine 2021-SA-0176). Anses (Maisons-Alfort), 58 p.La Directive 98/83/CE1, qui sera abrogée en 2023, et la Directive 2020/21842, relatives à la qualité des eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) ont fixé, pour le paramètre « nitrates », une limite de qualité (LQ) à 50 mg L-1 dans les EDCH, limite qui est complétée par la vérification que la somme de la concentration en nitrates (en mg L-1) divisée par 50 et de celle en nitrites (en mg L-1) divisée par trois soit inférieure à un. L’arrêté du 11 janvier 2007 modifié, relatif aux limites et références de qualité des eaux brutes et des EDCH, transpose ces exigences en droit français. Cette limite de qualité est en accord avec les lignes directrices définies par l’Organisation mondiale de la santé (OMS) et est fondée sur des donnéesépidémiologiques mettant en avant des cas de méthémoglobinémie chez le nourrisson (OMS 2017).La présente saisine intervient dans le contexte d’une mise en demeure de la France par la Commission européenne sur le non-respect de la Directive 98/83/CE pré-citée concernant le paramètre « nitrates ». La lettre de saisine précise que « cette mise en demeure concerne en particulier sept régions (Bourgogne Franche Comté, Centre Val de Loire, Grand Est, Hauts de France, Ile de France, Occitanie, Pays de la Loire) et 20 départements de France, où des dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH ont été observés sur 213 unités de distribution (UDI) depuis plusieurs années voire dizaines d’années pour certaines [...].Dans le cadre des échanges réguliers avec la Commission européenne, cette dernière a demandé aux autorités françaises d’évaluer l’impact sanitaire, sur les populations concernées, de ces expositions chroniques à des concentrations en nitrates dans l’eau dépassant la limite de qualité, en particulier pour les populations desservies par des unités de distribution pour lesquelles le calendrier de retour à la conformité n’est pas encore établi (soit 27 542 habitants alimentés par 116 UDI). »Par ailleurs, l’Anses a été saisie le 29 juin 2020 par la Direction générale de la santé (DGS), la Direction générale de l’alimentation (DGAL) et la Direction générale de la concurrence, de la consommation et de la répression des fraudes (DGCCRF), d’une demande d’avis relatif aux risques associés à la consommation de nitrites et nitrates (saisine 2020-SA-0106). Dans le cadre de cette saisine, l’Anses doit, entre autres, réévaluer la pertinence de la valeur toxicologique de référence de l’EFSA et al. (2017) et évaluer les risques sanitaires liés à l’exposition alimentaire aux nitrates, incluant la consommation d’EDCH. Ces travaux ont étéfinalisés début juillet 2022. Le périmètre de la présente saisine recoupe donc partiellement celui de la saisine 2020-SA-0106 relative aux risques associés à la consommation de nitrites et nitrates.[Saisine liée n° 2020-SA-0106

Avis de l'Anses relatif à l’étude de l’exposition aux nitrates par les eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) des réseaux de distribution dans le cadre de la mise en demeure de la Commission européenne au regard de dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH en France

Citation suggérée : Anses. (2022). Avis de l’Anses relatif à l’étude de l’exposition aux nitrates par les eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) des réseaux de distribution dans le cadre de la mise en demeure de la Commission européenne au regard de dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH en France (Saisine 2021-SA-0176). Anses (Maisons-Alfort), 58 p.La Directive 98/83/CE1, qui sera abrogée en 2023, et la Directive 2020/21842, relatives à la qualité des eaux destinées à la consommation humaine (EDCH) ont fixé, pour le paramètre « nitrates », une limite de qualité (LQ) à 50 mg L-1 dans les EDCH, limite qui est complétée par la vérification que la somme de la concentration en nitrates (en mg L-1) divisée par 50 et de celle en nitrites (en mg L-1) divisée par trois soit inférieure à un. L’arrêté du 11 janvier 2007 modifié, relatif aux limites et références de qualité des eaux brutes et des EDCH, transpose ces exigences en droit français. Cette limite de qualité est en accord avec les lignes directrices définies par l’Organisation mondiale de la santé (OMS) et est fondée sur des donnéesépidémiologiques mettant en avant des cas de méthémoglobinémie chez le nourrisson (OMS 2017).La présente saisine intervient dans le contexte d’une mise en demeure de la France par la Commission européenne sur le non-respect de la Directive 98/83/CE pré-citée concernant le paramètre « nitrates ». La lettre de saisine précise que « cette mise en demeure concerne en particulier sept régions (Bourgogne Franche Comté, Centre Val de Loire, Grand Est, Hauts de France, Ile de France, Occitanie, Pays de la Loire) et 20 départements de France, où des dépassements chroniques de la limite de qualité du paramètre « nitrates » dans les EDCH ont été observés sur 213 unités de distribution (UDI) depuis plusieurs années voire dizaines d’années pour certaines [...].Dans le cadre des échanges réguliers avec la Commission européenne, cette dernière a demandé aux autorités françaises d’évaluer l’impact sanitaire, sur les populations concernées, de ces expositions chroniques à des concentrations en nitrates dans l’eau dépassant la limite de qualité, en particulier pour les populations desservies par des unités de distribution pour lesquelles le calendrier de retour à la conformité n’est pas encore établi (soit 27 542 habitants alimentés par 116 UDI). »Par ailleurs, l’Anses a été saisie le 29 juin 2020 par la Direction générale de la santé (DGS), la Direction générale de l’alimentation (DGAL) et la Direction générale de la concurrence, de la consommation et de la répression des fraudes (DGCCRF), d’une demande d’avis relatif aux risques associés à la consommation de nitrites et nitrates (saisine 2020-SA-0106). Dans le cadre de cette saisine, l’Anses doit, entre autres, réévaluer la pertinence de la valeur toxicologique de référence de l’EFSA et al. (2017) et évaluer les risques sanitaires liés à l’exposition alimentaire aux nitrates, incluant la consommation d’EDCH. Ces travaux ont étéfinalisés début juillet 2022. Le périmètre de la présente saisine recoupe donc partiellement celui de la saisine 2020-SA-0106 relative aux risques associés à la consommation de nitrites et nitrates.[Saisine liée n° 2020-SA-0106

Targeting colon luminal lipid peroxidation limits colon carcinogenesis associated with red meat consumption

Red meat is probably carcinogenic to humans (WHO/IARC class 2A), in part through heme iron-induced lipoperoxidation. Here, we investigated whether red meat promotes carcinogenesis in rodents and modulates associated biomarkers in volunteers, speculating that an antioxidant marinade could suppress these effects via limitation of the heme induced lipid peroxidation. We gave marinated or non-marinated beef with various degrees of cooking to azoxymethane-initiated rats, Min mice, and human volunteers (crossover study). Mucin-depleted foci were scored in rats, adenoma in Min mice. Biomarkers of lipoperoxidation were measured in the feces and urine of rats, mice, and volunteers. The organoleptic properties of marinated meat were tested. Fresh beef increased colon carcinogenesis and lipoperoxidation in rats and mice and lipoperoxidation in humans. Without an adverse organoleptic effect on meat, marinade normalized peroxidation biomarkers in rat and mouse feces, reduced peroxidation in human feces and reduced the number of Mucin-depleted foci in rats and adenoma in female Min mice. This could lead to protective strategies to decrease the colorectal cancer burden associated with red meat consumption