Unravelling the role of Ctdnep1-Eps8L2 interaction during nuclear positioning in migrating fibroblasts

Tese de mestrado, Biologia Molecular e Genética, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2019As células eucarióticas posicionam ativamente e de forma precisa o seu núcleo no citoplasma. Este posicionamento é crucial para processos como a divisão, diferenciação e migração celulares. Durante a migração celular, o núcleo torna-se particularmente importante ao estar envolvido no estabelecimento de polaridade, integração de forças intracelulares e deformação nuclear para permitir o movimento da célula por constrições reduzidas. Estes processos dependem largamente do tipo de célula e do substrato de migração. Diferentes células iniciam a sua motilidade com o posicionamento do núcleo na zona posterior da célula, enquanto o centrossoma (estático) assume uma localização entre a frente migrante e o núcleo (onde o centrossoma se diz reorientado). Logo, surge na célula uma polarização frente migrante-centrossoma-núcleo na direção de migração. Este movimento nuclear é promovido por cabos dorsais de actina em movimento retrógrado que se ligam a proteínas do invólucro nuclear provenientes do complexo de Ligação do Nucleoesqueleto e Citoesqueleto (LINC), formando linhas Nucleares Transmembranares associadas a Actina (TAN). Apesar do complexo LINC ser o protagonista no modelo atual de acoplamento entre o núcleo e o citoesqueleto, outras proteínas têm sido identificadas na regulação do complexo LINC para a formação das linhas TAN. Contudo, o conhecimento sobre como a actina é organizada ou se existe outro mecanismo independente do complexo LINC é escasso. Recentemente no laboratório Gomes, foram identificadas duas novas proteínas envolvidas no movimento nuclear. São elas a Fosfatase 1 do Invólucro Nuclear de Domínio C-terminal (Ctdnep1) e a Proteína 2 de Substrato Tipo 8 de Recetor Cinase do Fator de Crescimento Epidérmico (Eps8L2). A Ctdnep1 (previamente designada por Dullard) é uma fosfatase localizada no invólucro nuclear e no retículo endoplasmático. Esta proteína foi descrita pela primeira vez em Xenopus laevis por participar no desenvolvimento do tubo neuronal. Atualmente, a Ctdnep1 é mais conhecida pelo seu papel na desfosforilação e ativação das Lipinas-1 e -2 em mamíferos e, consequentemente, na regulação do metabolismo global de ácidos gordos. Para esta desfosforilação ocorrer, é requerida a presença da Subunidade Reguladora da Fosfatase 1 do Invólucro Nuclear (Nep1-r1). A Eps8L2 é uma proteína do citoesqueleto pertencente à família de proteínas Eps8. Funcionalmente, a Eps8L2 é mais conhecida pelo seu papel no complexo Sos1-Abi1-PI3K-Eps8L2, necessário para a ativação da GTPase Rac, resultando na remodelação da actina no citoesqueleto. Adicionalmente, para regular a dinâmica da actina, a Eps8L2 é capaz de limitar a polarização dos filamentos de actina através do bloqueio dos terminais de rápido crescimento (atividade conhecida como capping da actina) e promover ligações cruzadas entre filamentos de actina formando estruturas mecanicamente mais resistentes (atividade conhecida como bundling da actina). A atividade de bundling da actina encontra-se amplamente descrita na manutenção dos estereocílios na cóclea. Previamente no laboratório Gomes, demonstrou-se que, em fibroblastos migrantes, o knockdown de Ctdnep1 ou Eps8L2 resulta numa deficiência no movimento retrógrado do núcleo e na reorientação do centrossoma, fenómenos relacionados com uma possível regulação da organização dos cabos dorsais de actina por Ctdnep1 e Eps8L2. Assim, na ausência destas proteínas, o principal mecanismo de posicionamento nuclear e migração celular em fibroblastos encontra-se danificado. Adicionalmente, foi identificada uma interação física e direta entre Ctdnep1 e Eps8L2. Contudo, não tinha sido totalmente explorado o modo como esta interação está relacionada com o posicionamento nuclear. Neste trabalho, caracteriza-se a interação entre Ctdnep1 e Eps8L2 relativamente à sua localização subcelular, mecanismo e papel durante a migração celular. Para estudar a localização subcelular da Ctdnep1 e da Eps8L2 em fibroblastos migrantes, realizou-se o knockin de marcadores (GFP e miRFP670, respetivamente) nas proteínas endógenas em células NIH 3T3, utilizando o sistema de Repetições Palindrómicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPR)/Proteína 9 Associada a CRISPR (Cas9). Para enriquecer a população celular em células positivas para GFP ou miRFP670, realizou-se Separação Celular Ativada por Fluorescência (FACS). Contudo, apesar de serem recolhidas entre 1000 e 2000 células positivas por knockin, não foi possível observar células positivas ao microscópio, sendo frequentemente observada uma morte celular extensa após um curto período em cultura. Adicionalmente, uma segunda seleção por FACS não enriqueceu o número de células positivas. Para testar se a Cas9 não estava a realizar o corte em dupla cadeia na sequência-alvo e, consequentemente, as células não apresentavam a edição desejada, células NIH 3T3 foram transduzidas com as sequências codificantes para a Cas9 e os gRNAs utilizados anteriormente. Por sequenciação do DNA genómico, observou-se que a Cas9 estava efetivamente a cortar as sequências genómicas na região pretendida, validando os gRNAs utilizados. Adicionalmente, para investigar se as localizações subcelulares da Ctdnep1 e da Eps8L2 são influenciadas entre si, estão a ser geradas linhas celulares com knockouts para EPS8L2 ou CTDNEP1 em células transduzidas com gRNAs que têm como alvo a região do codão de iniciação. Numa segunda abordagem ao estudo da localização subcelular, geraram-se linhas celulares NIH 3T3 a expressar estavelmente sequências codificantes para Ctdnep1-GFP, Ctdnep1_D67E-GFP (a variante mutada sem atividade de fosfatase) ou Eps8L2-GFP. Utilizando estas linhas celulares, demonstrou-se que a Ctdnep1 se localiza no invólucro nuclear e no retículo endoplasmático, independentemente da sua atividade de fosfatase. Já a Eps8L2 apresenta uma localização distribuída pelo citoplasma. Assim, tendo em conta a restrição da localização da Ctdnep1 ao invólucro nuclear e ao retículo endoplasmático, especialmente perto do núcleo, sugere-se que esta seja a região de interação entre a Ctdnep1 e a Eps8L2. Contudo, algumas células não apresentavam os mesmos padrões de expressão, sendo esta visivelmente mais baixa, traduzindo a perda da expressão das proteínas marcadas ao longo do tempo. Consequentemente, as linhas celulares não se encontravam totalmente estáveis, sendo necessária uma seleção mais restrita de células positivas para GFP. Adicionalmente, questionou-se sobre a natureza da interação direta entre Ctdnep1 e Eps8L2. Tendo em consideração a atividade de fosfatase da Ctdnep1, colocou-se a hipótese de que a Ctdnep1 desfosforila a Eps8L2, o que resulta na ativação da capacidade da Eps8L2 para promover o bundling da actina. Consequentemente, formam-se cabos de actina espessos o suficiente para uma ligação eficiente ao complexo LINC, promovendo o movimento do núcleo. Para testar esta hipótese, Eps8L2 e Ctdnep1 (wild type ou D67E) exclusivamente ou na presença da subunidade reguladora Nep1-r1 foram co-expressas em células U2OS. Por espetrometria de massa, foi possível identificar os fosforesíduos em Eps8L2 e estudar diferenças no estado de fosforilação entre condições. Mais especificamente, os fosforesíduos S479 e S480 apresentaram um sinal de fosforilação significantemente inferior na presença de Ctdnep1 e Nep1-r1, comparativamente a Ctdnep1_D67E. Assim, estas serinas apresentam-se como possíveis substratos para a desfosforilação da Eps8L2 pela Ctdnep1. Quanto ao seu papel na migração celular, através de ensaios de cicatrização de feridas, demonstrou-se que aquando do knockdown de Ctdnep1 ou Eps8L2, não existe um impacto na migração celular em 2D. Contudo, esta observação não descarta a hipótese de Ctdnep1 e Eps8L2 desempenharem papéis determinantes para a migração celular em 3D. De facto, em substratos 3D as propriedades da matriz extracelular podem impor constrições únicas na migração celular, com a consequente utilização de vias moleculares fundamentalmente diferentes da migração em 2D, para deformar ou posicionar o núcleo. Assim, a possibilidade da interação Ctdnep1-Eps8L2 ser determinante para a migração em matrizes 3D deverá ser explorada. Coletivamente, neste trabalho aprofunda-se o papel da interação entre Ctdnep1 e Eps8L2 na organização da actina, bem como, as suas implicações durante o posicionamento nuclear. Outros pormenores necessitam de ser explorados, tais como, a possível função desta interação na mecano-transdução e expressão génica, a coordenação entre a interação Ctdnep1-Eps8L2 e outras previamente descritas para a regulação da dinâmica do complexo LINC e linhas TAN ou o papel da interação na migração em matrizes 3D. Em última instância, este estudo reforça a necessidade de identificar novos intervenientes na complexa e refinada rede molecular que regula o posicionamento nuclear. A identificação e caracterização destes intervenientes é crucial para uma melhor compreensão de correlações fisiológicas importantes, particularmente entre posicionamento nuclear e doença.Positioning the nucleus within the cell is crucial for cell division, differentiation and proper migration. Different cells initiate their motility by positioning the nucleus to the cell rear, setting up a leading edge-centrosome-nucleus polarization in the direction of migration. This nuclear movement is promoted by retrograde moving dorsal actin cables that bind to the Linker of Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC) complex at the nuclear envelope, forming what is known as Transmembrane Actin-associated Nuclear (TAN) lines. In the last years, several proteins have been identified as regulators of the LINC complex for TAN lines formation. However, little is known about how actin is organized or if there is any other LINC complex-independent mechanism in this process. Recently in Gomes lab, two proteins were identified as novel players in nuclear movement: the C-Terminal Domain Nuclear Envelope Phosphatase 1 (Ctdnep1) and the Epidermal Growth Factor Receptor Kinase Substrate 8-Like Protein 2 (Eps8L2). These proteins were shown to physically and directly interact, being determinant for TAN line-dependent nuclear positioning in migrating fibroblasts by regulating dorsal actin cables organization. However, is not yet well understood how Ctdnep1-Eps8L2 interaction is coupled to nuclear positioning. Here, we further characterize this interaction regarding its subcellular localization, mechanistic basis and role in cell migration. Through the Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/CRISPR Associated Protein 9 (Cas9) system, it is attempted to tag the endogenous Ctdnep1 and Eps8L2 in NIH 3T3 cells to study its subcellular localization. However, this approach was unsuccessful, since no positively tagged cells were observed after Fluorescence-Activated Cell Sorting (FACS) selection. As an alternative, using NIH 3T3 stable cell lines expressing tagged versions of Ctdnep1 or Eps8L2, it is demonstrated that Ctdnep1 localizes to the nuclear envelope and endoplasmic reticulum (regardless of its phosphatase activity), while Eps8L2 localizes to the cytoplasm. Given that Ctdnep1 localization is restricted to the nuclear envelope and endoplasmic reticulum, especially near the nucleus, it is suggested that this should be the region where Ctdnep1 and Eps8L2 interact. Taking advantage of the CRISPR/Cas9 tools developed, currently, Eps8L2 and Ctdnep1 knockout cell lines are being generated to further inquire if the subcellular localization of the two proteins influences one another. Furthermore, it is hypothesized that Ctdnep1 may control Eps8L2 activity by dephosphorylation, regulating perinuclear actin organization and, thus, affecting nuclear positioning and cell migration. Through mass spectrometry analysis, S479 and S480 are identified as possible phosphorylation sites for Eps8L2 and, thus, potential substrates for Ctdnep1 phosphatase activity. Additionally, wound-healing assays were performed to further enquire about Ctdnep1 and Eps8L2 role in cell migration. In the present experimental conditions, Ctdnep1-Eps8L2 interaction did not present a role in 2D-cell migration. Collectively, this work provides data that further pursues the role of Ctdnep1 and Eps8L2 interaction in actin organization as well as its implications during nuclear positioning. Other details regarding this interaction should also be explored, such as its possible function in mechanotransduction and gene expression, its coordination with other previously reported mechanisms for regulating LINC complex and TAN lines dynamics or its role in 3D cell migration. Ultimately, this work sheds light on the importance of identifying new players in the complex and refined network that regulates nuclear positioning. Deciphering the mechanisms connecting the nucleus to the cytoskeleton is valuable to better understand important physiological correlations between nuclear positioning and disease

Envelhecimento saudável: o papel da alimentação e nutrição

O aumento da esperança média de vida, conduziu a um aumento da prevalência de doenças crónicas e constituem um grande desafio no sentido de desenvolver estratégias que permitam um envelhecimento com saúde e bem-estar. A alimentação constitui um dos pilares fundamentais do envelhecimento saudável, sendo reconhecido que prática de um padrão alimentar que se aproxima do padrão alimentar mediterrânico a longo prazo constitui uma proteção na medida em que priviligia a ingestão de alimentos antiinflamatórios e a reduzida ingestão de alimentos pró-inflamatórios. O consumo de alimentos pró-inflamatórios tem vindo a ser evidenciado como indutor de um risco acrescido de desenvolver cancro, doenças cardiovasculares e demência. Apesar de no plano teórico se reconhecer evidenciar o efeito protetor de alguns alimentos, são necessários mais ensaios randomizados e controlados para avaliar o risco/benefício dos alimentos, em populações maiores, durante mais tempo de seguimento. Em suma, parece ser consensual o benefício da Dieta Mediterrânica na promoção de um envelhecimento saudável, sobretudo pela sua riqueza e variedade, pois reconhece-se que o efeito sinérgico dos alimentos é supeior ao seu efeito isolado.The increase in average life expectancy has led to an increase in the prevalence of chronic diseases and is a major challenge in terms of developing strategies that allow healthy aging and well-being. Food constitutes one of the fundamental pillars of healthy aging, and it is recognized that the practice of a dietary pattern that approaches the Mediterranean dietary pattern in the long term constitutes protection in that it privileges the intake of anti-inflammatory foods and the reduced intake of pro-food. inflammatory. The consumption of pro-inflammatory foods has been shown to induce an increased risk of developing cancer, cardiovascular diseases and dementia. Although the theoretical plan recognizes the evidence of the protective effect of some foods, more randomized and controlled trials are needed to assess the risk / benefit of food, in larger populations, during longer follow-up. In short, the benefit of the Mediterranean Diet in promoting healthy aging seems to be consensual, especially for its richness and variety, as it is recognized that the synergistic effect of food is greater than its isolated effect

Gain framing increases support for measures promoting plant-based eating in university settings

Global concerns with public health, animal suffering, and environmental problems linked to meat-centric diets have increased over the last decade. One way to help address these concerns is to implement measures that reduce meat consumption and increase plant-based eating in collective meal contexts, such as catering services in schools and universities. The present study provides insight into how consumers may react to these measures. A simple experiment (within-subjects design; N = 295) tested whether framing a set of plant-forward measures in terms of gain (i.e., measures to promote or increase the consumption of plant-based meals) or loss (i.e., measures to curtail or reduce the consumption of meals with meat) impacted consumer support for these measures in university settings. The results showed that consumer support was higher for gain-framed measures compared to loss-framed measures. Furthermore, the impact of framing was higher for measures focusing on sensory cues (e.g., make plant-based meals tastier and more appealing vs. make meals with meat less tasty and less appealing) and lower for measures focusing on behavioral constraints (e.g., serve only plant-based meals vs. do not serve meals with meat). Overall, the findings suggest that framing plant-forward measures in terms of gain can be a simple and potentially effective way to increase consumer support for food sustainability transitions.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Life quality and the wellness of victims of domestic violence. study case of the Centro Social, Recreativo e Cultural de Vilar de Maçada

This research aims to present an analysis on the absence of social responses that address the problem of domestic violence in Alijó. Our main goal is not only a theoretical approach about the issue of domestic violence, regional conditions in relation to domestic violence, but also present a study on the potentialities of Centro Social Recreativo e Cultural de Vilar de Maçada, our case study, can apply for funding of an emergency housing for victims of domestic violence. This paper is divided into three parts: theoretical framework and characterization of our social organization, according to an exploratory research, structuring a strategic plan of the organization, through field research, and as final result, to present a proposal for funding and implementation of an innovative social response, according to the underlying legislation to Portugal 2020. The sample is focused on the population of Alijó municipality. To conclude, it is important to make this local approach, because of the increasing number of cases not detected and reported. Thus, the quality of life is increased, reducing the incidence of violence in the family.CG

Production and optimization of 316L stainless steel dimples by laser surface texturing using Nd: YAG laser

Surface patterning is of increasing interest in modern manufacturing processes to achieve better results in terms of wear resistance and friction of mechanical parts and tools and, consequently, to improve their lifetime in service conditions [1]. Several approaches have been used to modify the surface properties of steel components, namely deposition of coatings, sandblasting, and texturing by electron beam, electric arc, or laser ablation [1,2]. In this work, laser technology was explored to produce dimples on the surface of 316L stainless steel samples. The production of textures can have several purposes, namely in tribological applications where they can reduce wear by acting as a reservoir for the lubricant or be reinforced with other materials (e.g. ceramics or intermetallic compounds), capable of improving the surface properties [1–3]. This work presents a detailed study on the texturing of a 316L stainless steel (dimples - circle design) by an Nd: YAG laser and its surface characterization by Scanning Electron Microscopy and analysis software (Image J) for obtaining their width (diameter) and depth. The texturing parameters are discussed herein. Results show that the width of the dimples is little influenced by the scan speed and wobble, but strongly affected by the combination of laser power and number of passes. On the other hand, wobble strongly influenced the depth of the dimples.This work was supported by FCT (Fundação para a Ciência e a Tecnologia) national funds, under the national support to R&D units grant, through the grant SFRH/BD/147460/2019, the project UIDB/04436/2020 and UIDP/04436/2020 and, also by project UIDB/00285/2020

A pediatric case of Cowden Syndrome with Graves' disease

Cowden syndrome (CS) is a rare dominantly inherited multisystem disorder, characterized by an extraordinary malignant potential. In 80% of cases, the human tumor suppressor gene phosphatase and tensin homolog (PTEN) is mutated. We present a case of a 17-year-old boy with genetically confirmed CS and Graves' disease (GD). At the age of 15, he presented with intention tremor, palpitations, and marked anxiety. On examination, he had macrocephaly, coarse facies, slight prognathism, facial trichilemmomas, abdominal keratoses, leg hemangioma, and a diffusely enlarged thyroid gland. He started antithyroid drug (ATD) therapy with methimazole and, after a 2-year treatment period without achieving a remission status, a total thyroidectomy was performed. Diagnosis and management of CS should be multidisciplinary. Thyroid disease is frequent, but its management has yet to be fully defined. The authors present a case report of a pediatric patient with CS and GD and discuss treatment options.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Educação postural em crianças em idade escolar: Revisão Integrativa da Literatura

Background: Postural education is essential to promote proper body posture and prevent the adoption of incorrect postures, which can result in pain and musculoskeletal damage (1, 2, 3, 4, 5). The implementation of school-level programs has a strong influence on children's health and quality of life (6, 7). Objective: To analyze the existing evidence concerning postural education programs implemented at school level. Methodology: Through an integrative literature review, the PEO methodology (participants, exposure and results) was used. The data collection was conducted in April 2020 in the CINAHL and PubMed databases. Results: The analysis of the articles included allowed us to identify that postural education programs have benefits in terms of knowledge, static and dynamic postural parameters, backpack weight reduction, musculoskeletal pain level and shoulder misalignment. Conclusion: The evidence shows that the implementation of postural education programs, at school level, has positive results in promoting children's health.Antecedentes: La educación postural es esencial para promover una postura corporal adecuada y evitar la adopción de posturas incorrectas, que pueden provocar dolor y lesiones musculoesqueléticas (1, 2, 3, 4, 5). La implementación de programas escolares tiene una fuerte influencia en la salud y la calidad de vida de los niños (6, 7). Objetivo: Analizar la evidencia existente sobre los programas de educación postural implementados a nivel escolar. Metodología: Mediante una revisión bibliográfica integradora, se utilizó la metodología PEO (participantes, exposición y resultados). La recopilación de datos se llevó a cabo en abril de 2020, en las bases de datos CINAHL y PubMed. Resultados: El análisis de los artículos incluidos nos permitió identificar que los programas de educación postural presentan beneficios en términos de conocimiento, parámetros posturales estáticos y dinámicos, reducción de peso en la mochila, nivel de dolor musculoesquelético y desalineación del hombro. Conclusión: La evidencia muestra que la implementación de programas de educación postural, a nivel escolar, tiene resultados positivos en la promoción de la salud de los niños.Enquadramento: A educação postural é essencial para promover uma postura corporal adequada e prevenir a adoção de posturas incorretas, das quais podem resultar dor e lesões musculosqueléticas (1,2,3,4,5). A implementação de programas a nível escolar tem uma forte influência na saúde e na qualidade de vida das crianças(6,7). Objetivo: Analisar a evidência existente relativa aos programas de educação postural implementados a nível escolar. Metodologia: Através da realização de uma revisão integrativa da literatura, utilizou-se a metodologia PEO (participantes, exposição e resultados). A colheita de dados foi realizada em abril de 2020, nas bases de dados CINAHL e PubMed. Resultados: A análise dos artigos incluídos permitiu identificar que os programas de educação postural apresentam benefícios ao nível do conhecimento, dos parâmetros posturais estáticos e dinâmicos, da redução do peso das mochilas, do nível de dor musculosquelética e do desalinhamento do ombro. Conclusão: A evidência demonstra que a implementação de programas de educação postural, a nível escolar, tem resultados positivos na promoção da saúde das crianças

Qualidade do sono em pacientes insulinodependentes

Introduction: Diabetes Mellitus is a chronic disease that may be of acquired cause or congenital, which is characterized by an inability or deficiency of the body to produce insulin in sufficient quantities. Sleep disorders with type 2 diabetes constitutes risk factors that can aggravate the pathology. This happens through the insulin resistance witch interferes with the metabolic control.During sleep, in health individuals, there is a balance between insulin secretion and glucose, however in diabetics, the balance is compromised by the occurrence of hypoglycemia. Objective: To assess the impact of sleep loss on therisk of worsening diabetesin insulin-dependent patientsand to addresstherelationship between sleep quality as an influencing factor in glucose control. Materials and Methods: This study is a cross-sectional observational study and was carried out from September 2016 to June 2018. The population of this study is made up of 200 individuals and the sample was collected at Guarda Hospital and Trancoso Health Care, whose average ages is 64,80 ± 13,670 years. Results: 31% of the individuals use medication to sleep better. The mean daily insulin dose is 47,14 IU. The female gender had a higher incidence of sleep disturbances (47,5%), a high risk of OSAS (47,5%) and a higher percentage of restless legs (16,8%) compared to the male gender. The daily amount of insulin isrelated to BMI (p=0,025)and therisk of developing DM. Discussion/Conclusion: Given theresults obtained, we can conclude that both the daily amount of insulin and BMI have an important role in sleep quality and quality of life in type 2 diabetics.Introdução: A Diabetes Mellitustipo 2 é uma doença crónica que pode ser de causa adquirida ou congénita, que se carateriza por uma incapacidade ou deficiência do corpo conseguir produzir insulina em quantidade suficiente. Os distúrbios do sono em pacientes diabéticos constituem fatores de risco para o agravamento da patologia pela interferência no controlo metabólico através da síndrome de resistência à insulina. Durante o sono, em indivíduos saudáveis, existe um equilíbrio entre a secreção de insulina e glicose, no entanto nos diabéticos, este equilíbrio apresenta-se comprometido pela ocorrência de hipoglicemias. Objetivo: Avaliar o impacto da perda de sono sobre o risco de agravamento da diabetes em insulinodependentes e abordar a relação entre a qualidade de sono enquanto elemento influenciador do controlo da glicose. Materiais e métodos: Estudo do tipo observacional transversal, realizado desde setembro de 2016 a junho de 2018. A amostra é de 200 indivíduos tendo sido feita a recolha da amostra no Hospital da Guarda e no Centro de Saúde de Trancoso, cuja média de idades é de 64,80 ± 13,670 anos. Resultados: 31% dos indivíduos utiliza medicação para dormir melhor. A dose média de insulina diária é de 47,14 UI. O género feminino apresenta maior presença de distúrbios do sono (47,5%), alto risco de SAOS (47,5%) e maior percentagem de risco de síndrome das pernas inquietas (16,8%) comparativamente ao género masculino. A quantidade diária de insulina está relacionada com o IMC (p=0,025) e o risco de desenvolver SAOS (p=0,026). Discussão/Conclusão: Tendo em conta os resultados, conclui-se que a quantidade diária de insulina e o IMC têm um papel importante na qualidade do sono e qualidade de vida dos diabéticos tipo 2

A comparative analysis of mass spectrometry studies

Funding Information: Funding: R.M. is supported by Fundação para a Ciência e a Tecnologia (CEEC position, 2019–2025 investigator). This article is a result of the projects (iNOVA4Health—UIDB/04462/2020), supported by Lisboa Portugal Regional Operational Programme (Lisboa2020), under the PORTUGAL 2020 Partnership Agreement, through the European Regional Development Fund (ERDF). This work is also funded by FEDER funds through the COMPETE 2020 Programme and National Funds through FCT—Portuguese Foundation for Science and Technology under the projects number PTDC/BTM-TEC/30087/2017 and PTDC/BTM-TEC/30088/2017. Publisher Copyright: © 2021 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland.Molecular diagnostics based on discovery research holds the promise of improving screening methods for prostate cancer (PCa). Furthermore, the congregated information prompts the question whether the urinary extracellular vesicles (uEV) proteome has been thoroughly ex-plored, especially at the proteome level. In fact, most extracellular vesicles (EV) based biomarker studies have mainly targeted plasma or serum. Therefore, in this study, we aim to inquire about possible strategies for urinary biomarker discovery particularly focused on the proteome of urine EVs. Proteomics data deposited in the PRIDE archive were reanalyzed to target identifications of potential PCa markers. Network analysis of the markers proposed by different prostate cancer studies revealed moderate overlap. The recent throughput improvements in mass spectrometry together with the network analysis performed in this study, suggest that a larger standardized cohort may provide potential biomarkers that are able to fully characterize the heterogeneity of PCa. According to our analysis PCa studies based on urinary EV proteome presents higher protein coverage compared to plasma, plasma EV, and voided urine proteome. This together with a direct interaction of the prostate gland and urethra makes uEVs an attractive option for protein biomarker studies. In addition, urinary proteome based PCa studies must also evaluate samples from bladder and renal cancers to assess specificity for PCa.publishersversionpublishe