Identification and pharmacological evaluation of surrogate ligands of cannabinoid receptors

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019Os recetores acoplados à proteína G (GPCRs) constituem a maior família de recetores membranares, sendo essenciais no controlo de processos fisiológicos e patofisiológicos, como cancro, hipertensão, entre outros. O número de fármacos direcionados para estes recetores tem vindo a aumentar, contando com mais de 475 aprovados pela FDA. Neste estudo focámo-nos em quatro recetores: Recetor Canabinoide 1 (CB1) e 2 (CB2) e recetor acoplado à proteína G 18 (GPR18) e 55 (GPR55), dois recetores órfãos. CB1 e CB2 pertencem à classe A da família de GPCRs. A expressão de CB1 é elevada no sistema nervoso central, enquanto que CB2 é abundante em órgãos periféricos com função imunitária. GPR55 pertence à classe A da família de GPCRs, sendo sugerido como alvo terapêutico na diabetes, obesidade, osteoporose e cancro. GPR18 pertence também à classe A e poderá ser alvo em terapias para cancro e doenças inflamatórias. O objetivo deste estudo consistiu na identificação e avaliação farmacológica de ligandos destes recetores. Estudos anteriores do nosso laboratório identificaram alguns compostos, de uma biblioteca de compostos in-house, capazes de modular a atividade destes recetores. Tendo por base a estrutura molecular destes, fizemos o screening do efeito antagonista e agonista destes novos compostos, pertencentes também à nossa biblioteca. Seguidamente ao screening inicial, foram realizados estudos de seletividade e potência, recorrendo a ensaios de recrutamento de β-arrestina, ligação de radioligandos e acumulação de cAMP. Para o GPR18 foram testadas duas séries de compostos (biblioteca de compostos 1 e 2), enquanto que para o CB2 foi testada apenas uma série de compostos (biblioteca de compostos 3). Os estudos de seletividade foram realizados com GPR55 e CB1, respetivamente. Os nossos resultados identificaram um composto promissor para GPR18 (EC50(composto56)=0.0302±0.004 μM) e um para CB2 (Ki(composto76)=0.339±0.061 µM). No entanto, mais testes devem ser executados, de forma a clarificar se estes compostos conseguem efetivamente modular a atividade destes recetores. Futuramente, será necessária a realização de novos estudos, permitindo compreender como estes compostos modulam a atividade destes recetores e otimizar a mesma, com objetivo de desenvolver novas moléculas a serem usadas como terapêuticas em várias disfunções relacionadas com CB1, CB2, GPR18 e GPR55.G protein-coupled receptors (GPCRs) constitute the largest family of membrane receptors. Essential for the control of several physiologic and pathophysiologic processes, such cancer, hypertension, abnormal bone development, and others, GPCRs are one of the most studied families of receptors. The number of drugs targeting these receptors has been increasing, counting with more than 475 FDA approved drugs. In this work we focused in four GPCRs: Cannabinoid Receptor 1 (CB1) and 2 (CB2), two cannabinoid receptors, G protein coupled receptor 18 (GPR18) and 55 (GPR55), two orphan receptors. CB1 and CB2 belong to the GPCR family class A. CB1 is highly expressed in the central nervous system (CNS), while CB2 is abundant in peripheral organs with immune function. GPR55 belongs to the GPCR family class A, and it is suggested as a therapeutic target in obesity, diabetes, osteoporosis and cancer. GPR18 also is a class A GPCR, and may be a therapeutic target in inflammatory diseases, cancer, and intraocular high pressure. Therefore, the aim of this study was to identify and evaluate pharmacologically surrogate ligands of these cannabinoid receptors. Previous studies from our lab also identified some compounds, from the in-house library, that were able to modulate these receptors’ activity. Based on these molecular structures, we screened the agonist and antagonist effect of these new compounds, from our in-house library. For that initial screening was performed, followed by selectivity and potency studies, using the β-arrestin recruitment assay, radioligand binding assay and cAMP accumulation assay. For GPR18, two series of compounds were tested (compound library 1 and 2), while for CB2 only one series of compounds (compound library 3) were tested. Selectivity studies were performed using with GPR55 and CB1, respectively. Our results identified one promising compound for GPR18 (EC50(compound 56)=0.0302±0.004 μM) and another one for CB2 (Ki(compound 76)=0.339±0.061 µM). In the future, more studies need to be done to understand how these compounds modulate these receptors’ activity and to optimize their activity, with the goal of developing new molecules that could be used as a therapeutic approach to several diseases related with dysfunctions in CB1, CB2, GPR18 and GPR55.Universidade de Bonn, Hospital Cuf Descobertas, Farmácia João XX

Determination of MIC and Disk Diffusion Quality Control Guidelines for Meropenem–Vaborbactam, a Novel Carbapenem/Boronic Acid β-Lactamase Inhibitor Combination

Meropenem–vaborbactam is a carbapenem/cyclic boronic acid β-lactamase inhibitor combination primarily active against Gram-negative bacilli, including those harboring class A serine carbapenemases such as Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). A Clinical and Laboratory Standards Institute M23-A4 (Tier 2) quality control study established broth microdilution and disk diffusion ranges for reference strains. Two KPC-producing K. pneumoniae ATCC strains are recommended for quality control testing

Animal sexual abuse - a reality in Portugal and Spain

The sexual abuse of animals has persisted prehistoric times and is currently studied in the disciplines of history, medicine, psychiatry, veterinary medicine and law. The Portuguese legislation has no explicit reference to sexual contact with animals and the Spanish legislation had recently added "sexual exploitation of animals" which could be interpreted as implying the element of profit. The principal aim of this thesis is to prove that cases of animal sexual abuse in Portugal and Spain are not so infrequent as we may believe. We aim to establish the incidence and frequency of cases of sexual abuse detected by veterinarians in Portugal and Spain and to show that people are actively searching for zoophilic content online in these two countries. An online survey was made and directed to Spanish and Portuguese veterinarians. Our results left no doubt about the existence of such abuses in Portugal and Spain (8.2% of veterinarians in our study had encountered or at least suspected of cases of sexual abuse). Moreover, our analyses via Google Trends proved that people are currently looking for zoophilic content online. With that said, we hope to authenticate the urgent need to change legislation to protect the victims of these abuses and to encourage other investigators to focus on this neglected subject.El abuso sexual de animales ha persistido en tiempos prehistóricos y actualmente se estudia en las disciplinas de historia, medicina, psiquiatría, medicina veterinaria y derecho. La legislación portuguesa no hace referencia explícita al contacto sexual con los animales y la legislación española ha añadido recientemente la "explotación sexual" de los animales, que podría interpretarse como un elemento de beneficio. El objetivo principal de este trabajo es probar que los casos de abuso sexual de animales en Portugal y España no son tan infrecuentes como podemos creer. Nuestro objetivo es establecer la incidencia y frecuencia de casos de abuso sexual detectados por veterinarios en Portugal y España y demostrar que las personas buscan activamente contenidos zoofílicos online en estos dos países. Se realizó una encuesta online dirigida a veterinarios españoles y portugueses. Nuestros resultados no dejaron dudas sobre la existencia de estos abusos en Portugal y España (el 8,2% de los veterinarios en nuestro estudio habían encontrado o por lo menos sospechaban de casos de abuso sexual). Por otra parte, nuestros análisis a través de Google Trends demostraron que la gente está buscando contenido online zoofílico. Dicho esto, esperamos demostrar la urgente necesidad de cambiar la legislación para proteger a las víctimas de estos abusos y animar a otros investigadores a centrarse en este tema poco estudiado

Diarreias

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas MonizAtualmente a diarreia é considerada uma das maiores causas de morbilidade e mortalidade nas crianças, sendo que cerca de 5000 crianças morrem por dia comoresultado de doenças diarreicas. Nas últimas três décadas, graças aos esforços realizados, os países em desenvolvimento conseguiram reduzir a taxa de mortalidade e foram vários os fatores que contribuíram para isso tais como, a distribuição e o uso generalizado de soluções de reidratação oral (SRO). Em países desenvolvidos os episódios de diarreia chegam aos 111 milhões e 220 milhões anuais. Torna-se necessário conhecer a etiologia, tratamentos e medidas não farmacológicas para que as repercussões da diarreia não sejam mortais e sejam tratadas atempadamente sem complicações posteriores. O projeto “MyNewGut, iniciado em dezembro de 2013, poderá revolucionar e desenvolver intervenções alimentares, que permitirão um maior controlo das funções do microbioma intestinal, prevenindo distúrbios relacionados com a alimentação e comportamentais. Este projeto ao conhecer detalhadamente o microbioma poderá ser útil em novas indicações terapêuticas na diarreia

Folatos em pseudocereais: efeito da cozedura e maltagem

Os pseudocereais, amaranto, quinoa e trigo-sarraceno, são plantas com sementes que podem ser utilizadas e processadas como cereais. São sementes isentas de glúten, sendo por isso importante na dieta de indivíduos com hipersensibilidade a essa proteína, como os celíacos. O folato é um termo genérico para tetrahidrofolato (THF) (formas naturais). A deficiência nutricional de folato é comum em indivíduos com baixa ingestão, má absorção, e mulheres grávidas por aumento de exigência neste nutriente. Foram recolhidas amostras, de cada pseudocereal, durantes os anos de 2013 e 2014 (n=7). As amostras foram sujeitas a cozedura (tradicional e a vapor) e a maltagem. Para a determinação simultânea de formas naturais de folatos, ácido fólico (FA), 5-metiltetrahidrofolato (5-MTHF), tetrahidrofolato (THF), 5-formiltetrahidrofolato (5-CHOTHF) e 10-formiltetrahidrofolato (10-CHOTHF), foi utilizado um cromatógrafo líquido de ultra eficiência com deteção por espectrometria de massa num triplo quadrupolo (UPLC-MS/MS). As amostras foram sujeitas a um processo de extração tri-enzimático (α-amilase, protease e soro de rato) precedido de dissolução com tampão bicarbonato 0,005 M (1% ácido ascórbico, 0.5% DTT) a pH 7.2. As amostras antes de serem injetadas foram sujeitas a um processo de ultrafiltração com filtros de 5 KDa de poro. O método inclui a utilização de padrões internos de referência, marcados isotopicamente (13C5 FA e 13C5 5-MTHF). Foi utilizada uma coluna AcQuity HSS T3 1.8 µm 2.1 x 150 mm da Waters e como fase móvel, 0.1 % ácido fórmico (A) e acetonitrilo (B) em gradiente. A temperatura da coluna foi de 45 ˚C com fluxo de 0.35 mL/min. A forma predominante de folato encontrada em todas as amostras foi o 5-MTHF. A quinoa é o pseudocereal que apresenta os valores mais elevados da soma das diferentes formas (294 ± 20,8 mg /100 g), seguido respetivamente pelo amaranto (246 ± 30,9 mg/100 g) e trigo-sarraceno (139 ± 8,51 mg/100 g). O processo de maltagem apresenta para o amaranto e trigo- sarraceno a taxa de retenção mais elevada (100%), o mesmo se observou na quinoa para o processo de cozedura tradicional. Podemos concluir que o processo de maltagem não alteram significativamente o teor de folatos totais

Molecular typing of antimicrobial-resistant Shiga-toxin-producing Escherichia coli strains (STEC) in Brazil

Antimicrobial resistance patterns and molecular characteristics were determined in thirty-two Shiga-toxin-producing Escherichia coli (STEC) strains previously identified in São Paulo State associated with human infections (n = 21) and in cattle feces (n = 11). the highest resistance rates were identified for tetracycline (100%), streptomycin (78%) and trimethoprim sulfamethoxazole (56%). Eleven STEC strains showed resistance to ampicillin and carried bla(TEM) that was confirmed as bla(TEM-1) in one representative isolate. the class 1 integrase gene (intI1) was detected in seven (22%) strains, and most of them belonged to the O111:H8 serotype. the class 1 integron was located on plasmids in five of the seven STEC strains, and conjugation assays confirmed the plasmid support of those resistant determinants. STEC strains were genetically classified into the B I group, and PFGE analysis showed that most of the strains in each serogroup were grouped into the same cluster (80-97% similarity). the presence of a class 1 integron and bla(TEM-1) genes is described for the first time among STEC isolates in Brazil and clearly represents a public health concern. (C) 2010 Institut Pasteur. Published by Elsevier Masson SAS. All rights reserved.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Universidade Federal de São Paulo, Dept Microbiol Immunol & Parasitol, BR-04023062 São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Div Infect Dis, BR-04023062 São Paulo, BrazilJMI Labs, N Liberty, IA USAUniversidade Federal de São Paulo, Dept Microbiol Immunol & Parasitol, BR-04023062 São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Div Infect Dis, BR-04023062 São Paulo, BrazilWeb of Scienc

A study of commercially available complementary foods for infants and young children under 36 months

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Estudos de caracterização do perfil nutricional da quinoa (Chenopodium quinoa): macronutrientes, minerais e elementos vestigiais

Objetivo: Caracterizar o teor de macronutrientes e de componentes inorgânicos da quinoa (Chenopodium quinoa), utilizando metodologias validadas que assentam em pressupostos de controlo da qualidade rigorosos, permitindo a sua inclusão na tabela de composição de alimentos portugueses e nas restantes bases de dados que aderiram à plataforma EuroFIR.Este trabalho foi realizado no âmbito do projeto de investigação “Desarrollo de Alimentos andinos procesados: una alternativa para la conservación de la biodiversidad” (PICT-nº 2245), financiado pelo Ministerio de Ciencia y Tecnología de Argentina e do protocolo de colaboração cientifica assinado entre o INSA e o Universidade Nacional de Jujuy

Bromine, a contaminant of emerging concern in Portuguese cabbage

O bromo é um dos principais halogéneos da tabela periódica e tem vindo a ser classificado como contaminante de preocupação emergente, porque devido à sua bio-magnificação pode constituir um risco para a saúde humana. Os compostos bromados são contaminantes não biodegradáveis que se acumulam nos diferentes níveis tróficos da cadeia alimentar. O objetivo deste trabalho foi avaliar os teores de bromo em amostras de couve portuguesa (Brassica Oleracea var. costata DC), uma hortícola do género brássica bastante consumida pela população portuguesa. Foram recolhidas cento e dezassete amostras durante o período 2015-2017 em diferentes locais representativos de cada distrito de Portugal, em dois períodos de colheita. O teor de bromo foi determinado por espectrometria de massa com plasma indutivo acoplado (ICP-MS), precedido por uma extração alcalina com Tetrametilhidróxido de amónia (TMAH). Os valores de bromo encontrados na primeira colheita estavam compreendidos entre 0,5 e 14,5 mg/kg e na segunda colheita os valores observados estavam compreendidos entre 1,0 e 7,8 mg/kg. As amostras foram organizadas de acordo com a Nomenclatura de Unidades Territoriais NUTS II para Portugal e constatou-se que as regiões com valores mais elevados de bromo foram a Região do Algarve e a Região Autónoma da Madeira. Em comparação com o LMR (limite máximo de resíduos) para os teores do ião brometo em alimentos da espécie brássica (30 mg/kg) verificou-se que nenhuma das amostras analisadas ultrapassou esse valor estipulado. No entanto, serão necessários estudos adicionais sobre a avaliação da exposição, bem como sobre a toxicologia deste contaminante, para que entidades reguladoras possam avaliar a pertinência da revisão da legislação em vigor.Bromine is one of the principal halogens of the periodic table and has been classified as a contaminant of emerging concern because due to its biomagnification it may pose a risk to human health. Brominated compounds are non-biodegradable contaminants that accumulate at different trophic levels in the food chain. The main goal of this work was to evaluate the bromine contents in samples of Portuguese cabbage (Brassica Oleracea var. Costata DC), a vegetal of the Brassica genus that is widely consumed by the Portuguese population. One hundred and seventeen samples were collected between 2015-2017 in different representative locations of each district of Portugal. This was done in two harvest periods. The Bromine contents were analysed by inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS), preceded by an alkaline extraction with 25% ammonium tetramethylhydroxide (TMAH). The Bromine amounts found in the first crop were between 0.5 and 14.5 mg/kg and in the second crop between 1.0 and 7.8 mg/kg. The samples were organized according to the Nomenclature of NUTS II Territorial Units for Portugal and it was found that the regions with the highest bromine contents were the Algarve Region and the Autonomous Region of Madeira. Compared to the MRL (maximum residue limit) for bromide ion contents in foods of the Brassica species (30 mg/kg), none of the analysed samples exceeded this legislated value. However, further studies on the exposure assessment as well as the toxicology of this contaminant will be required, so that regulatory authorities can assess the relevance of the review of existing legislation.Este trabalho teve o apoio financeiro do Projeto PRO-METROFOOD, o qual recebeu financiamento do programa de investigação e inovação Horizonte 2020 da União Europeia ao abrigo do contrato de subvenção 739568.info:eu-repo/semantics/publishedVersio