A função da proteína CEP164 na ciliogenese em Drosophila melanogaster

Mestrado em Biotecnologia - Biotecnologia Industrial e AmbientalCilia/flagella are microtubule (MT)-based oraganelle emanating from the surface of many eukaryotic cells. They are involved in a variety of processes including cell motility, fluid flow, and sensing processes. The skeleton of cilium, called axoneme, is templated from the basal body, a modified mature centriole required for centrosome formation. Mutations in human genes disrupting the function or structure of these organelles cause several human disorders, including infertility, ciliopathies, and cancer. In Drosophila melanogaster, cilia are present in the neurons and in the sperm. Defects in these structures and/or in its functions lead to clear phenotypes, such as delayed development, uncoordination and sterility. CEP164, a centrosomal protein, localizes at the distal appendages of the mature centriole. Mutations in CEP164 gene, in humans, cause Nephronophthisis, a ciliopathy that causes organ degeneration. The aim of this work consists of studying the CEP164 role in ciliogenesis and cilia function in sensory neurons and sperm in D. melanogaster. For that, we used two strategies: one involving knock down of CEP164 in neurons and sperm using the Gal4/UAS system, and other the generation of new excition alleles of CEP164 to study the effect of CEP164 in the fruit fly. In D. melanogaster olfactory neurons, CEP164 localizes at the connceting cilia, a transition zone equivalent structure. We observed by RNAi knock down that CEP164 is important for adult fly proper coordination. The cilia structures were affected in those flies, however, the fertility of those males was not affected.Os cílios/flagelos são organelos constituídos por microtúbulos que emanam da superfície da maioria das células eucariotas. Estes estão envolvidos numa variedade de processos incluindo motilidade celular, movimento de fluidos e mecanismos de perceção de estímulos externos. O esqueleto de um cílio, designado axonema, é determinado por um corpo basal, que consiste num centríolo maduro/mãe modificado necessário para a formação de centrossomas. Mutações em genes humanos que interfiram na função ou estrutura desses organelos causam doenças como infertilidade, ciliopatias e cancro. Em Drosophila melanogaster, os cílios estão presentes nos neurónios e no esperma. Defeitos nestas estruturas e/ou na sua função leva a fenótipos como desenvolvimento tardio, falta de coordenação e esterilidade. A CEP164, uma proteína centrossomal, localiza-se nos apêndices distais do centríolo maduro. Mutações no gene CEP164, em humanos, causam nefronoptise, uma ciliopatia que causa a degeneração dos órgãos. O objectivo deste trabalho consiste no estudo da função da proteína CEP164 na ciliogenese e no papel dos cílios nos neurónios sensoriais e no esperma em D. melanogaster. Para tal, foram utilizadas duas estratégias: uma que envolve a depleção da proteína CEP164 em neurónios e no esperma utilizando o sistema Gal4/UAS, e a outra consistiu na criação de novos alelos de excisão de CEP164 para estudar o efeito desta proteína na mosca da fruta. Nos neurónios olfativos de D. melanogaster, a CEP164 localiza-se na base dos cílios, numa estrutura equivalente á zona de transição dos axonemas. Observou-se através de depleção por RNAi que a CEP164 é importante para a coordenação apropriada na mosca. A estrutura dos cílios foi afectada nessas moscas, contudo a fertilidade dos machos não foi afectada

REVISÃO SOBRE BENEFÍCIOS DA HIDROTERAPIA EM PACIENTES COM SEQUELAS DE ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL

Stroke is defined as a sudden change in neurological function, caused by a deprivation of blood flow in a certain area of the brain, preventing the supply of oxygen (02) and glucose in the tissue, causing damage to it. It is estimated that annually 20 million new cases of stroke occur worldwide, of this total mortality can reach five million people. This is one of the main causes of death and disability in society in recent decades. Hydrotherapy has been emphasizing over the years among physiotherapists and researchers as one of the most used therapeutic resources for physical rehabilitation and prevention of functional alterations. The present study aims to identify in the literature the benefits of hydrotherapy for patients with CVA sequelae through the physical properties of water, thus reducing the sequelae left by this pathology. A descriptive qualitative bibliographical research was carried out based on material already published, mainly composed of books, magazines, periodicals and materials made available on the Internet. In this perspective hydrotherapy is an innovative treatment technique, being scientifically studied in several types of treatments, and that offers benefits that go well beyond the rehabilitation. It is concluded with these studies that hydrotherapy can improve the quality and life expectancy of these patients. Promoting a faster return to your daily life activities, leaving them more independent as possible.Acidente Vascular Cerebral (AVC) é definido como uma alteração súbita da função neurológica, ocasionada por uma privação de fluxo sanguíneo em determinada área do cérebro, impedindo o fornecimento de oxigênio (02) e glicose no tecido, proporcionando danos ao mesmo. Estima-se que, anualmente, 20 milhões de novos casos de AVC ocorrem no mundo, sendo que, desse total, a mortalidade pode chegar a cinco milhões de habitantes. Constitui-se assim uma das principais causas de óbitos e incapacidade na sociedade nas últimas décadas. A hidroterapia vem se destacando ao longo dos anos entre os fisioterapeutas como um dos recursos terapêuticos mais utilizados para a reabilitação física e prevenção das alterações funcionais. O presente estudo tem como objetivo identificar na literatura pesquisas que relatem os benefícios da hidroterapia para pacientes com sequelas de AVC, destacando, por meio das propriedades físicas da água, a redução dos efeitos causados pelas sequelas dessa patologia. Foi realizada uma pesquisa bibliográfica, de natureza qualitativa descritiva, elaborada a partir de material já publicado, constituído principalmente de livros, revistas, artigos de periódicos e materiais disponibilizados na internet. Nesta perspectiva, a hidroterapia é uma técnica inovadora de tratamento, sendo sua aplicação cientificamente estudada em diversas patologias que oferece benefícios que vão muito além da reabilitação. Conclui-se, com análise desses estudos, que a hidroterapia pode proporcionar melhoras na qualidade e na perspectiva de vida dos pacientes com sequelas de AVC, promovendo um retorno mais rápido as suas atividades da vida diária, deixando-os mais independentes

The impact of the use of coconut meal on the nutritional value of the nile tilapia (Oreochromis niloticus Linnaeus, 1857)

O uso do farelo de coco pode representar uma fonte alternativa na alimentação de peixe. Por esse motivo avaliaram-se os reflexos de sua utilização sobre o valor nutricional do filé de tilápia-do-nilo. O experimento foi realizado em um delineamento inteiramente ao acaso com 4 tratamentos (T1 - 0%, T2 - 10%, T3 - 20% e T4 - 30% de inclusão de farelo de coco) e cinco repetições. Foram determinados a composição centesimal, o teor de colesterol e os teores de ácidos graxos. Observou-se diferença (p < 0,05) entre T1 e T3, T2 e T3 para os teores de umidade; entre T2 e T3 para os lipídios; T1 apresentou diferença com relação aos demais tratamentos referentes aos carboidratos; e quanto aos teores de cinzas foi observada diferença de T1 e T2 entre T3 e T4. Os teores de colesterol apresentaram um aumento gradual significativo. Com relação aos ácidos graxos, observou-se diferença (p < 0,05) entre os tratamentos referentes aos C10:0; C12:0; C14:0; C18:1; C18:3 (gama); C20:3; e C22:6 numa proporção tal que não determinou diferença na qualidade nutricional do produto.The use of coconut meal may represent an alternative source to fish feeding. The purpose of this work was to assess the impact of the use of coconut meal in Nile tilapia feeding and on the nutritional value of the fish fillets. The experiment was conducted in a completely randomized design with 4 treatments (T1 - 0%, T2 - 10%, T3 - 20%, and T4 - 30% for the inclusion of coconut meal) with five repetitions. The proximate composition, cholesterol, and fatty acids were determined. There was a difference (p < 0.05) between the treatments T1 and T3 and between T2 and T3 with regard to moisture levels; between T2 and T3 with regard to lipids; T1 and all the other treatments with regard to carbohydrates, and finally between T1 and T2 and between T3 and T4 with regard to ash. The cholesterol level showed a significant gradual increase following the increase in the inclusion of coconut meal. There was also a difference (p < 0.05) between the treatments concerning the following fatty acids: C10:0; C12:0; C14:0; C18:1; C18:3 (gama); C20:3 , and C22:6 , but the nutritional quality of the product was not affected.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Saberes e práticas do usuário da atenção básica sobre dengue

Background and objective: Dengue is an infectious viral disease transmitted by the bite of the Aedes aegypti mosquito that usually has a benign evolution, but can bring serious problems to the population. Considered a serious public health problem worldwide, it mainly affects tropical countries, where the climate and sanitary conditions favour the development and proliferation of the transmitter. Control of the disease is related to the elimination of the means that allow the development and proliferation of mosquitoes. The research aimed to know the perception of users of primary care (AB) on dengue and the actions taken in home to prevent them. Method: This is a qualitative study, conducted with 12 users of the health service that took place at a Basic Health Unit of the Eastern/Southeastern Regional Health Board of the city of Teresina PI, located in the neighborhood that, according the Municipal Health Foundation, has the highest incidence of the disease. Results: Two categories emerged: “Dengue, synonymous with disease to the Basic user of Attention” and “Dengue prevention as a means of protection”. The study found how much the users of Unified Health System know about the disease and its means of development – it’s known by many of the users the main ways of preventing the disease and that these are related to the hygiene of home care with standing water in plants, vases, tires and bottles. Conclusions: Permanent education of health users and surveillance is a determining factor in dengue control, making health professionals and health care users the key players in the process of health and prevention of Dengue.RESUMO Objetivos: objetivou-se no estudo conhecer a percepção dos usuários da Atenção Básica (AB) sobre a dengue; identificar as ações desenvolvidas na AB para a prevenção da dengue e descrever quais as ações do usuário da AB no combate à dengue. Metodologia: Trata se de um estudo de abordagem qualitativa, realizado com 12 usuários do serviço de saúde, que teve como cenário uma Unidade Básica de Saúde da Diretoria Regional de Saúde Leste/Sudeste do município de Teresina-PI, localizada no bairro que, segundo a Fundação Municipal de Saúde, possui maior incidência da doença. A coleta de dados deu-se através de entrevistas com um roteiro semi estruturado, gravados e transcritos na íntegra. Para tratamento do material foi utilizada a técnica de análise temática. Resultados: Com isso foi possível à formação de duas categorias: Dengue: sinônimo de doença para o usuário da Atenção Básica e Dengue: prevenção como forma de proteção. Conclusões: Observou-se que a dengue é uma patologia transmissível, vetorizada, causadora de graves problemas de saúde, sendo o Aedes aegypti seu principal transmissor, além do reconhecimento da prevenção como forma de proteção da doença. Abordaram ainda as ações de promoção da saúde desenvolvidas pelos profissionais da saúde

Saberes e práticas do usuário da atenção básica sobre dengue

RESUMO Objetivos: objetivou-se no estudo conhecer a percepção dos usuários da Atenção Básica (AB) sobre a dengue; identificar as ações desenvolvidas na AB para a prevenção da dengue e descrever quais as ações do usuário da AB no combate à dengue. Metodologia: Trata se de um estudo de abordagem qualitativa, realizado com 12 usuários do serviço de saúde, que teve como cenário uma Unidade Básica de Saúde da Diretoria Regional de Saúde Leste/Sudeste do município de Teresina-PI, localizada no bairro que, segundo a Fundação Municipal de Saúde, possui maior incidência da doença. A coleta de dados deu-se através de entrevistas com um roteiro semi estruturado, gravados e transcritos na íntegra. Para tratamento do material foi utilizada a técnica de análise temática. Resultados: Com isso foi possível à formação de duas categorias: Dengue: sinônimo de doença para o usuário da Atenção Básica e Dengue: prevenção como forma de proteção. Conclusões: Observou-se que a dengue é uma patologia transmissível, vetorizada, causadora de graves problemas de saúde, sendo o Aedes aegypti seu principal transmissor, além do reconhecimento da prevenção como forma de proteção da doença. Abordaram ainda as ações de promoção da saúde desenvolvidas pelos profissionais da saúde

Atividade moduladora de extratos etanólico e hexânico de raiz de Costus cf. arabicus sobre drogas antimicrobianas

The bacterium Escherichia coli is known to produce enterotoxins causing diarrheal diseases. Some species of Staphylococcus are recognized as etiological agents of many animal and human opportunistic infections. Pseudomonas aeruginosa is the main cause of nosocomial infections, mainly affecting immunocompromised patients. Candidiasis is the most frequent opportunistic mycosis, frequently caused by Candida albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata, and C. krusei. Medicinal plants have been the source of many remedies used in the clinical practice. In this study, the hexane and methanol extracts of Costus cf. arabicus were assayed to the antibacterial activity alone or associated with aminoglycosides and antifungal drugs. Synergism of the ethanol and hexane were verified by the microdilution method. A synergistic effect of the two extracts combined with the aminoglycosides and antifungal agents was demonstrated. It is therefore suggested that the extracts from Costus cf. arabicus could be used as a source of natural products with resistance-modifying antimicrobial activity, providing a new mechanism against the problem of bacterial and fungal resistance to drugs.A bactéria Escherichia coli é conhecida por produzir enterotoxinas capazes de causar diarréia. Algumas espécies de Staphylococcus são agentes etiológicos de muitas infecções oportunistas em animais e humanos. Pseudomonas aeruginosa é a principal causa de infecções hospitalares, acometendo principalmente pacientes imunocomprometidos. Candidíase é a micose oportunista mais comum, muitas vezes causada por Candida albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata e C. krusei. As plantas medicinais têm sido a fonte de muitos remédios tradicionais aplicados na prática clínica. Neste trabalho, os extratos hexânico e etanólico de Costus cf. arabicus foram testados quanto a sua atividade antibacteriana de forma isolada e em combinação com aminoglicosídeos e antifúngicos. O sinergismo dos extratos etanólico e hexânico foi verificado pelo método de microdiluição. Foi observado um efeito sinérgico de ambos os extratos quando combinados com os aminoglicosideos e antifúngicos. Sugere-se, portanto, que os extratos de Costus cf. arabicus poderiam ser usados como uma fonte de produtos naturais com atividade modificadora de resistência a drogas antimicrobianas, fornecendo um novo mecanismo contra o problema da resistência bacteriana e fúngica a drogas

Profiles of Parental Burnout Around the Globe: Similarities and Differences Across 36 Countries

Parental burnout (PB) is a pervasive phenomenon. Parenting is embedded in cultural values, and previous research has shown the role of individualism in PB. In this paper, we reanalyze previously collected data to identify profiles based on the four dimensions of PB, and explore whether these profiles vary across countries’ levels of collectivistic-individualistic (COL-IND) values. Our sample comprised 16,885 individuals from 36 countries (73% women; 27% men), and we used a latent profile approach to uncover PB profiles. The findings showed five profiles: Fulfilled, Not in PB, Low risk of PB, High risk of PB and Burned out. The profiles pointed to climbing levels of PB in the total sample and in each of the three country groups (High COL/Low IND, Medium COL-IND, Low COL/High IND). Exploratory analyses revealed that distinct dimensions of PB had the most prominent roles in the climbing pattern, depending on the countries’ levels of COL/IND. In particular, we found contrast to be a hallmark dimension and an indicator of severe burnout for individualistic countries. Contrary to our predictions, emotional distance and saturation did not allow a clear differentiation across collectivistic countries. Our findings support several research avenues regarding PB measurement and intervention

Networking and Participatory Research Promoting Quality of Life and Well-Being in Portuguese-Speaking African Countries

Spread across the planet each human being, individually or in community, aspires for well-being and quality of life, according to the ideal of each one. However, we all believe that there are always ways to live better. For many people the measurement of a better life translates into the guarantee of social rights, the right to basic services, good land, seed and sufficient nutritious food for their community members. The Mechanism to Facilitate the Participation of Universities in the Food and Nutrition Security Council of the Community of Portuguese Speaking Countries is a cooperative academic network fomented by the Community of Portuguese Speaking Countries (CPLP) with support from the Food and Agriculture Organization of the United Nations. This mechanism works with teaching, research and extension in the CPLP Food and Nutrition Security Strategy. The pillars of CPLP Strategy are the strengthening of the governance of public policies on Food and Nutrition Security at all levels of government, social protection based on guaranteeing access to food and family farming with a strategy to increase the availability of good quality food, promoting social and environmental sustainability. CPLP University Mechanism has provided training processes for technicians who work in public policies for Food and Nutrition Security and has contributed to the strengthening of postgraduate programs in Portuguese-speaking African countries. As consequence, it has favored participatory research and mixed methods as a theoretical methodological approach. Therefore, it seeks to focus on the territories of Food and Nutrition Security practices to transform reality, as recommended by CPLP Strategy, however, with the autonomous assumptions of the collaborative network. This chapter presents how local researchers perceive the results of a process of inducing an academic network to transform the local reality and promote Food and Nutrition Security in the context of the CPLP

Novel approaches on the characterization of the wastewater resistome : possible implications on human health and water quality management

Antibiotic resistant bacteria and antibiotic resistance genes are considered contaminants of emerging concern, nowadays widely disseminated in the environment. Urban wastewater treatment plants are major recipients and reservoirs for these contaminants. In urban these plants, wastewater is subjected to different types of treatment that reduce the levels of antibiotic resistant bacteria and antibiotic resistance genes, although not completely. Considering that most of the bacteria are not culturable and that this fraction might harbor antibiotic resistance genes, culture-independent methods are currently used to assess antibiotic resistance in the environment. Among these methods, quantitative PCR is considered the gold standard used to quantify antibiotic resistance genes in environmental samples, although the lack of harmonized methods seriously limits the reliable comparison of results obtained in different laboratories. Among the antibiotic resistant bacteria emitted by wastewater treatment plants, Enterobacteriaceae represent an important fraction and among these Klebsiella pneumoniae deserve special attention. Indeed, K. pneumoniae is a bacterial species that besides the clinical importance when associated to humans, can also be found in the environment, in soils, plants, water, and wastewater. The capacity of this bacterial species to thrive in different environments and in humans and animals increases its significance in terms of human health threat might constitute a human health threat. However, the traits that might be maintained or lost during the transit of K. pneumoniae through clinical and environmental contexts are still unknown. This thesis aimed to 1) advance the knowledge regarding the use of harmonized analytical quantitative PCR methods that might enable reliable comparisons of genes quantification ; 2) design a cell-based internal standard that could be used in different laboratories to assess losses during water samples filtration, DNA extraction and quantitative PCR quantification; and 3) contribute to a better understanding of the ecology of K. pneumoniae and infer about possible dynamics between clinic and environmental niches, with special focus on genetic diversity and antibiotic resistance stability. To tackle the first aim, genetic determinants encoding resistance to sulfonamides (sul1 and sul2), quinolones (qnrS), and β-lactams (blaTEM) and the 16S rRNA gene were monitored in DNA extracts supplied by partners who were investigating wastewater treatment processes, at full- or pilot-scale. In parallel, the influence on genes quantification of DNA shipment, quantitative PCR protocols, standards and equipment was studied in an interlaboratory comparison. These results and the literature available justified the efforts to meet the second aim. An internal standard, consisting in a cloned gene fragment not found in wastewater samples was designed and tested. This internal standard is to be used to spike wastewater or water samples aiming to control DNA losses during the processing of the sample and DNA extraction process. The emission of antibiotic resistant bacteria by wastewater treatment plants is an issue of concern, however it is not clear if these bacteria will survive and maintain their features once in the environment. To investigate this topic, K. pneumoniae was used as a model species and two distinct research approaches were used. A group of 3 rd generation cephalosporin-resistant K. pneumoniae isolates (25 wastewater; 34 clinical) was compared based on phenotypic, genotypic and genomic analyses (n=22) and a broader group of genomes collected from a public database (21 countries, 61 environmental; 78 clinical) was compared based on a core and pangenome approach and profiles of antibiotic and metal resistance, virulence, efflux systems, oxidative stress and quorum sensing traits. According to the results obtained and their analysis, it was concluded that wastewater treatment efficiency and wastewater quality regarding antibiotic resistance emissions should always be measured based on absolute abundance (per volume), rather than in relative abundance (per total bacteria). The interlaboratory comparison seemed to be reliable, although DNA extract quality and stability during shipment, as well as consumables and equipment specificities, may be critical for the monitoring findings. The use of a cell-based internal standard may contribute to overcome those limitations. This internal standard permitted to estimate the water matrix effect which was associated with an underestimation that ranged 0.1–0.9 log gene copy number mL−1 of sample, irrespective of the water type. Clinical and wastewater isolates were indistinguishable based on phenotypic and genotypic characterization, although distinct lineages may prevail in clinical or environmental settings. Genetic determinants related to efflux, oxidative stress or quorum sensing functions were common to clinical and wastewater isolates, while antibiotic and metal resistance or virulence genes, were variable across the genomes and associated with mobile genetic elements, mostly transposons, insertion sequences or integrative and conjugative elements. The analysis of a larger and geographically more diverse group of genomes, suggested that antibiotic and metal resistance and virulence gene alleles were more prevalent and diverse in clinical isolates, while some quorum sensing, efflux systems and oxidative stress genetic determinants alleles were more prevalent and diverse in environmental isolates. The studies performed unveil a promising opportunity to implement comparable and reliable antibiotic resistance monitoring schemes. The harmonization of some procedures and the use of internal standards will enable worldwide comparisons of antibiotic resistance genes in wastewaters, and therefore improve and promote surveillance studies worldwide. The double evidence that antibiotic resistance features observed in clinical K. pneumoniae are maintained in the environment and that it is among the environmental isolates that stress dwelling features seem to be more diverse, supports the high capacity of K. pneumoniae for spreading through wastewater or in the environment, enhancing the risks of transmission back to humans.As bactérias resistentes a antibióticos e os seus genes de resistência a antibióticos são considerados contaminantes emergentes, hoje amplamente disseminados no meio ambiente. As estações de tratamento de águas residuais domésticas são importantes recetores e emissores destes contaminantes. Nestas estações, os esgotos são submetidos a diferentes tipos de tratamento que embora reduzam os níveis de bactérias resistentes a antibióticos e genes de resistência a antibióticos, não evitam que haja ainda fortes cargas emitidas para o meio recetor. Tendo em conta que a maioria das bactérias não é cultivável e que essa fração de bactérias pode conter genes de resistência a antibióticos, os métodos independentes de cultivo têm vindo a ser usados para avaliar a ocorrência de resistência aos antibióticos no ambiente. o método quantitativo de Polymerase Chain Reaction (qPCR) é um dos preferidos para quantificar genes de resistência a antibióticos em amostras ambientais. Contudo, é reconhecido que a harmonização de métodos será decisiva para que se possa comparar de modo confiável os resultados obtidos em diferentes partes do mundo. Entre as bactérias resistentes a antibióticos emitidas por estações de tratamento de águas residuais, as da família Enterobacteriaceae representam uma fração importante e entre estas as da espécie Klebsiella pneumoniae merecem atenção especial. De facto, K. pneumoniae é uma espécie bacteriana que além da importância clínica quando associada aos humanos, também pode ser encontrada no meio ambiente, em solos, plantas, água e águas residuais. A capacidade de membros desta espécie de proliferar em diferentes ambientes e em humanos e animais pode constituir uma ameaça à saúde humana. No entanto, as características que podem ser mantidas ou perdidas durante a transição de K. pneumoniae por um contexto clínico ou ambiental ainda são desconhecidas. Esta tese teve como objetivo 1) avançar no conhecimento relativamente ao uso de métodos analíticos harmonizados de qPCR que possam permitir comparações confiáveis da quantificação de genes; 2) desenvolver um padrão interno baseado em células que pudesse ser usado em diferentes laboratórios para normalizar resultados e avaliar as perdas durante o processamento das amostras de água, extração de DNA e quantificação por qPCR; e 3) contribuir para um melhor conhecimento da ecologia de K. pneumoniae e inferir sobre as possíveis dinâmicas entre nichos clínicos e ambientais, com especial foco na diversidade genética e estabilidade da resistência a antibióticos. Para atingir o primeiro objetivo, determinantes genéticos que codificam resistência a sulfonamidas (sul1 e sul2), quinolonas (qnrS) e β-lactâmicos (blaTEM) e o gene 16S rRNA foram monitorizados em extratos de DNA fornecidos por parceiros que estavam a investigar processos de tratamento de águas residuais, à escala real ou em sistemas piloto. Paralelamente, foi estudada a influência do transporte de DNA, protocolos, padrões e equipamento de qPCR na comparação da quantificação de genes em ensaios interlaboratoriais. Estes resultados e a literatura disponível justificaram os esforços para atingir o segundo objetivo. Um padrão interno, que consistia num fragmento de um gene que não se encontra no ambiente, clonado em Escherichia coli, foi desenvolvido e testado. Este padrão interno deverá ser adicionado a amostras de água residual ou água com o objetivo de controlar as perdas de DNA. A emissão de bactérias resistentes a antibióticos por estações de tratamento de águas residuais é uma questão preocupante, contudo não é claro se estas bactérias sobreviverão e manterão as suas características uma vez libertadas no meio ambiente. Para investigar este tópico, K. pneumoniae foi usada como espécie-modelo e duas abordagens de investigação distintas foram utilizadas. Um grupo de isolados de K. pneumoniae resistentes a cefalosporinas de 3ª geração (25 de águas residuais; 34 clínicas) foi comparado com base em características fenotípicas, genotípicas e genómicas (n = 22). Em paralelo, um grupo mais amplo de genomas obtidos de uma base de dados pública (21 países; 61 ambientais, 78 clínicos) foi comparado com base na análise do pangenoma e nos perfis de características de resistência a antibióticos e metais, virulência, sistemas de efluxo, stresse oxidativo e quorum sensing. De acordo com os resultados obtidos e sua interpretação, concluiu-se que a eficiência do tratamento e a qualidade de águas residuais, em relação à resistência a antibióticos, devem ser sempre medidas com base na abundância absoluta (por volume), e não na abundância relativa (por total de bactérias). A comparação inter-laboratorial pareceu ser confiável, embora a qualidade e estabilidade dos extratos de DNA durante o transporte, bem como as especificidades dos consumíveis e do equipamento, possam ser críticos para os resultados de monitorização. O uso de um padrão interno baseado em células poderá contribuir para superar estas limitações. Este padrão interno permitiu estimar o efeito de matriz da água, que esteve associado a uma subestimativa que variou de 0.1–0.9 log do número de cópias do gene por mililitro de amostra, independentemente do tipo de água. Os isolados clínicos e de águas residuais foram indistinguíveis com base na caracterização fenotípica e genotípica, embora os dados sugerissem que linhagens distintas possam prevalecer em contexto clínico ou ambiental. Os determinantes genéticos relacionados com funções de efluxo, stresse oxidativo e quorum sensing estavam presentes em isolados clínicos e de águas residuais, enquanto que a resistência a antibióticos e metais ou genes de virulência variavam de estirpe para estirpe, estando associados a elementos genéticos móveis, principalmente transposões, sequências de inserção ou elementos integrativos e conjugativos, respetivamente. A análise de um grupo maior e geograficamente mais diverso de genomas sugeriu que os alelos dos genes de virulência e resistência a antibióticos e metais são mais prevalentes e diversos em isolados clínicos, enquanto alguns alelos de determinantes genéticos relacionados com quorum sensing, sistemas de efluxo e stresse oxidativo são mais prevalentes e diversos em isolados ambientais. Os estudos realizados são promissores relativamente à possibilidade de implementar esquemas inter-laboratoriais de monitorização de resistência a antibióticos que forneçam resultados comparáveis e confiáveis. A harmonização de alguns procedimentos e o uso de padrões internos permitirão comparações de quantificação de genes de resistência a antibióticos em águas residuais e, portanto, melhorar e promover estudos de vigilância mundialmente. A dupla evidência de que as características de resistência a antibióticos observadas em K. pneumoniae clínicas são mantidas no meio ambiente e que é entre os isolados ambientais que as características de tolerância ao stresse parecem ser mais diversas, sugere a alta capacidade de K. pneumoniae para se disseminar a partir de águas residuais e no ambiente, aumentando os riscos de transmissão ao ser humano