Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1

Im initiierenden Schritt der COPI-Vesikelbiogenese wird die kleine GTPase Arf1 von den beiden zur p24 Proteinfamilie gehörenden Typ I-Trans-membranproteinen p23 bzw. p24 an die Membran rekrutiert. Dort vermittelt GBF1 (Golgi-specific brefeldin A-resistance factor 1), ein sogenanntes Arf GEF (guanine nucleotide exchange factor), in Arf1 den Nukleotidaustausch von GDP nach GTP. Das nun in seinen aktiven Zustand überführte Arf1-GTP exponiert nach einer Konformationsänderung eine N-terminale amphiphatische Helix und einen Myristoylanker und bindet über diese fest an die Membran. Im Anschluss definieren Arf1-GTP und p23 bzw. p24 den sogenannten „priming complex“, über welchen das Hüllprotein Coatomer aus dem Cytosol an die Membran rekrutiert wird, was letztendlich zur Ausbildung eines COPI-Vesikels führt. Im Rahmen dieser Arbeit ist es nun erstmals gelungen, das für die COPI-Vesikelbiogenese physiologisch relevante Arf GEF GBF1, mit einem Molekulargewicht von ungefähr 200 kDa, im baculoviralen System zu exprimieren und anschließend aufzureinigen. Das rekombinante GBF1 wurde hinsichtlich seiner Fähigkeit charakterisiert, an isolierte Golgi-Membranen zu binden und an Arf1 den Nukleotidaustausch von GDP zu GTP durchzuführen. Zusätzlich wurde eine bereits beschriebene Interaktion von GBF1 mit Coatomer nachgewiesen, die in der hier vorliegenden Arbeit auf bestimmte Coatomer-Isotypen weiter eingegrenzt werden konnte. Durch Photokreuzvernetzungsstudien wurde eine direkte Interaktion von GBF1 mit p23 nachgewiesen. Sich daran anschließende Kompetitions- und Koimmunpräzipitations-Experimente zeigten, dass neben p23 auch die p24 Proteinfamilienmitglieder p24, p25, p26 und p27 in jeweils dimerer Form mit GBF1 interagieren. Wurde Arf1 in die Koimmunpräzipitations-Experimente eingeschlossen, so zeigten sich trimere Komplexe bestehend aus Arf1, GBF1 und dimeren Mitgliedern der p24 Familie. Mit Hilfe von Tryptophan Fluoreszenz Messungen in einem löslichen und liposomalen System wurde anschließend die Aktivität von GBF1 an Arf1 in der Gegenwart von monomeren und dimeren p24 Familienmitgliedern untersucht. Dabei zeigte sich, dass nur dimere p23, p24 und p27 die Aktivität von GBF1 inhibieren. Entsprechend fand sich in in vitro Experimenten eine verringerte Ausbeute an COPI-Vesikeln in der Gegenwart von p27. Neben der Inhibition von GBF1 sind p23, p24 und p27 wahrscheinlich auch für eine Inhibition der ArfGAP1 (GTPase-activating protein)-vermittelten GTP-Hydrolyse an Arf1 verantwortlich. Mit dem hier generierten, rekombinanten GBF1 steht nun eine weitere, physiologisch relevante Komponente der COPI Maschinerie für Interaktions- und Aktivitätsstudien zur Verfügung, wodurch diese Arbeit einen wichtigen Schritt zur vollständigen Aufklärung der COPI-Vesikelbiogenese liefert

Proximale Platzierung des Vascular Plugs 4® zur Embolisation der Arteria gastroduodenalis vor Y-90-Radioembolisation : ein Vergleich mit Standard-Coils

Universität Magdeburg, Dissertation, 2017vorgelegt von Sebastian Hubich aus Pößnec

ALCOHOL ELEUTEROCOCCUS EXTRACT INFLUENCES ON CARBOHYDRATES METABOLISM OF RATS WITH EXPERIMENTAL DIABETES AND EXPERIMENTAL HYPERPHAGIA

Alcohol extract of eleuterococcus is able to stabilize carbo­hydrates metabolism constants (concentration of pyruvate, urea, glucose and .-amilase activity) in blood of rats with experimental alloxan-induced diabetes and experimental hyperphagia

A Highly Immunogenic and Protective Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus Vaccine Based on a Recombinant Measles Virus Vaccine Platform.

In 2012, the first cases of infection with the Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) were identified. Since then, more than 1,000 cases of MERS-CoV infection have been confirmed; infection is typically associated with considerable morbidity and, in approximately 30% of cases, mortality. Currently, there is no protective vaccine available. Replication-competent recombinant measles virus (MV) expressing foreign antigens constitutes a promising tool to induce protective immunity against corresponding pathogens. Therefore, we generated MVs expressing the spike glycoprotein of MERS-CoV in its full-length (MERS-S) or a truncated, soluble variant of MERS-S (MERS-solS). The genes encoding MERS-S and MERS-solS were cloned into the vaccine strain MVvac2 genome, and the respective viruses were rescued (MVvac2-CoV-S and MVvac2-CoV-solS). These recombinant MVs were amplified and characterized at passages 3 and 10. The replication of MVvac2-CoV-S in Vero cells turned out to be comparable to that of the control virus MVvac2-GFP (encoding green fluorescent protein), while titers of MVvac2-CoV-solS were impaired approximately 3-fold. The genomic stability and expression of the inserted antigens were confirmed via sequencing of viral cDNA and immunoblot analysis. In vivo, immunization of type I interferon receptor-deficient (IFNAR(-/-))-CD46Ge mice with 2 × 10(5) 50% tissue culture infective doses of MVvac2-CoV-S(H) or MVvac2-CoV-solS(H) in a prime-boost regimen induced robust levels of both MV- and MERS-CoV-neutralizing antibodies. Additionally, induction of specific T cells was demonstrated by T cell proliferation, antigen-specific T cell cytotoxicity, and gamma interferon secretion after stimulation of splenocytes with MERS-CoV-S presented by murine dendritic cells. MERS-CoV challenge experiments indicated the protective capacity of these immune responses in vaccinated mice