Síntesis química y enzimática de biofenoles lipofilos del olivo con actividad antiinflamatoria. Optimización de la reacción de Krapcho

En la presente Tesis Doctoral se ha realizado la síntesis de una serie de compuestos lipófilos, a partir de biofenoles contenidos tanto en la hoja de olivo como en el aceite de oliva virgen extra (AOVE), bajo la hipótesis general de que un aumento del carácter lipófilo tiene como consecuencia una mejora en la actividad biológica del compuesto, ya que en sistemas biológicos reales se producen procesos de absorción a través de membranas celulares de naturaleza lipófila. El cumplimiento de esta hipótesis nos llevaría a la conclusión de que una mayor lipofilia de un biofenol implica una mejor biodisponibilidad y una mayor eficiencia a la hora de ejercer la acción terapéutica. Concretamente, las transformaciones descritas en esta Tesis Doctoral encaminadas a tal fin se han llevado a cabo mediante procedimientos químicos o enzimáticos, o bien mediante una combinación de ambos. En primer lugar, se ha puesto a punto un nuevo método de síntesis del fenol 3,4-dihidroxifenilglicol (DHPG), compuesto natural minoritario contenido en el AOVE, a partir de cloruro de fenacilo en 3 pasos y con un rendimiento global del 38% mediante de una ruta sintética sencilla y fácilmente escalable. En segundo lugar, la síntesis de las dos nuevas familias de derivados lipófilos 10-14 y 23-27, se ha realizado mediante esterificación con ácidos carboxílicos de 2 a 16 átomos de carbono a partir de los catecoles O-bencil protegidos 4 y 17, derivados DHPG y de HT, respectivamente. En tercer lugar, se ha establecido la utilidad sintética de nuevos extractos enzimáticos procedentes de microorganismos con marcada actividad en reacciones de transesterificación en compuestos fenólicos y carbohidratos modelo, concluyendo que los mejores resultados se obtienen por la vía de la desacilación, que resulta ser muy selectiva. Gracias a ello, se ha logrado la síntesis de HTAc 29 a partir del derivado triacetilado de HT 142, y de una nueva familia de compuestos lipófilos del DHPG 30-39 a partir del derivado tetraacetilado 2. Esta familia se caracteriza por exhibir el grupo catecol desprotegido y por la sustitución en posición bencílica de un grupo acetoxi por un grupo alcoxi que proviene del alcohol utilizado como disolvente en la etapa de desacilación. Adicionalmente, en la desacilación de disacáridos peracetilados como la trehalosa y la sacarosa, se ha observado una preferencia por la desacilación selectiva de uno de los monosacáridos dejando el segundo inalterado, permitiendo así la desimetrización de la trehalosa y el acceso a nuevos derivados como el penta-O-acetilado 42 y el tetra-O-acetilado 43 en solo dos pasos: peracilación seguido de desacilación regioselectiva. Finalmente, la desacilación selectiva del ligstrósido y la oleuropeína peracetilados 147 y 148 con estos extractos enzimáticos ha permitido la síntesis regioselectiva de los compuestos 49 y 50, acetilados únicamente en el anillo de glucosa. Utilizando una lipasa comercial (Thermomyces lanuginosus) ha sido posible la acilación regioselectiva de la posición 6 de la glucosa de la oleuropeína con acilos de 2, 4, y 8 carbonos con rendimientos aceptables (56‒74%). En cuarto lugar, algunos de los derivados sintetizados han sido ensayados en diferentes modelos de inflamación. De este modo, el glicol 3 y el HTAc 29 han demostrado ser eficientes moduladores de la respuesta inflamatoria de macrófagos peritoneales estimulados con LPS, consiguiendo modular el nivel de nitritos y la expresión de enzimas proinflamatorias en la célula. Más aún, el derivado 29, ha demostrado ser un excelente agente terapéutico en enfermedades de índole inflamatoria como la colitis ulcerosa, la artritis reumatoide y el lupus eritematoso sistémico, combatiendo la inflamación y corrigiendo el nivel de estrés oxidativo asociado a estas patologías. Siguiendo esta tendencia, estudios preliminares con macrófagos peritoneales señalan que los derivados lipófilos de la oleuropeína tienen un efecto similar al alcanzado por el HTAc 29. Tanto el peracetilado de la oleuropeína 148, como los derivados parcialmente acilados obtenidos enzimáticamente, el tetraacetilado 50 y el monoacetilado 46, son mejores que la oleuropeína, en cuanto a la modulación de la respuesta inflamatoria y el nivel de estrés oxidativo de macrófagos peritoneales. En quinto lugar, se ha optimizado la reacción de desmetoxicarbonilación de Krapcho aplicada a la oleuropeína para obtener con rendimiento aceptable la oleaceína acetilada o aceoleína 51 junto con el aglicón del oleurósido deshidratado (DOA) acetilado 52, mediante calentamiento a 150 ºC en DMSO seguido de acetilación y sin purificación previa. Esta misma estrategia biomimética ha podido ser implantada en extractos fenólicos del aceite de oliva conteniendo los aglicones monoaldehídicos de ligstrósido y oleuropeína 65 y 66, así como con los mismos aglicones purificados por separado, lo que permite no solo un nuevo acceso a oleocantal y oleaceína, sino también la posibilidad de enriquecer extractos fenólicos fáciles de obtener de AOVEs en oleocantal y oleaceína, dos compuestos de alto valor añadido y con aplicación en la industria Farmacéutica y de la Alimentación. Se han explorado diferentes vías de estabilización de la oleaceína con el objetivo de posibilitar su purificación cromatográfica, obteniéndose de esta manera el ya citado derivado acetilado de la oleaceína 51 y también los compuestos derivados de las reducciones regioselectivas 59 y 60, además de los monoacetales 61‒64. Los compuestos acetilados 51 y 52 que resultan de la reacción de Krapcho sobre la oleuropeína y posterior acetilación han sido ensayados, junto con los derivados lipófilos de ligstrósido 49 y 147, y de oleuropeína 50-52 y 148 como agentes antiproliferativos frente a diversas líneas celulares de tumores sólidos humanos. Los resultados muestran una progresiva mejora de los datos de inhibición de crecimiento celular conforme aumenta la lipofilia de los glucósidos secoiridoides. Además, tanto 51 como 52 presentan mejores resultados que el HT peracetilado en todas las líneas celulares ensayadas. En los compuestos con mejores actividades, se observa una mayor selectividad hacia las células de cáncer cérvico-uterino (HeLa) con GI50 de (8.6 ± 4.4) μM, (23 ± 4.3) μM y (15 ± 3.2) μM para 148, 51 y 52 respectivamente. Finalmente, se ha propuesto un método de cuantificación mediante 1H-RMN de los derivados aldehídicos de naturaleza secoiridoide presentes en la fracción fenólica de AOVEs, con el que se consigue la cuantificación de oleaceína 53, oleocantal 57 y los aglicones monoaldehídicos de ligstrósido 65 y oleuropeína 66 mediante la integración de las señales de los protones aldehídicos por encima de 9.0 ppm.In this PhD Thesis it is decribed the synthesis of a series of lipophilic compounds, from biophenols contained in both olive leaf and extra virgin olive oil (EVOO), under the general hypothesis that an increase in the lipophilic character results in an improvement in the biological activity of the compound, as in real biological systems absorption processes take place through lipophilic cell membranes. The fulfillment of this hypothesis would lead us to the conclusion that a greater lipophilicity of a biophenol leads to a better bioavailability and to a greater efficiency in the exercise of the therapeutic action. Specifically, the transformations described in this PhD Thesis aimed at this purpose have been carried out by chemical or enzymatic procedures, or by a combination of both methodologies. First, a novel method for the synthesis of phenol 3,4-dihydroxyphenylglycol (DHPG), a natural compound contained in EVOO, has been developed from phenacyl chloride in 3 steps and with an overall yield of 38% through a simple and easily scalable synthetic route. Second, the synthesis of two new families of lipophilic derivatives 10‒14 and 23‒27 was performed by esterification with carboxylic acids of 2 to 16 carbon atoms from O-benzyl protected catechols 4 and 17, derived from of DHPG 3 and HT 67, respectively. Third, it has been established the synthetic utility of new enzymatic extracts from microorganisms with marked activity in transesterification reactions on model phenols and carbohydrates compounds, concluding that the best results are obtained for deacylation reactions, which turns out to be very selective. As a result, the synthesis of HTAc 29 has been achieved from the triacetylated derivative of HT 142, and also a novel family of lipophilic compounds of DHPG 30-39 was obtained from peracetyl DHPG 2. This family is characterized by displaying the deprotected catechol group and by the substitution in benzylic position of an acetoxy group by an alkoxy group derived from the alcohol used as solvent in the deacylation step. Additionally, in the deacylation of peracetylated disaccharides such as trehalose and sucrose, a preference has been observed for the selective deacylation of one of the monosaccharides leaving the second unchanged, allowing the desymmetrization of trehalose and the access to new derivatives such as the penta-O-acetylated 42 and tetra-O-acetylated 43 in just two steps: peracylation followed by regioselective deacylation. Finally, selective deacylation of the peracetylated ligstroside 147 and oleuropein 148 with these enzyme extracts has allowed the regioselective synthesis of compounds 49 and 50, acetylated only in the glucose ring. The regioselective acylation with acceptable yield (56‒74%) of the O-6 position of the glucose moiety of oleuropein with acyl groups of 2, 4 and 8 carbons was achieved by using Thermomyces lanuginosus, a commercial lipase. Forth, some of the synthesized derivatives have been tested in different models of inflammation. Thus, glycol 3 and HTAc 29 have been shown to be efficient modulators of the inflammatory response of LPS-stimulated peritoneal macrophages, modulating the level of nitrites and the expression of proinflammatory enzymes into the cell. Moreover, derivative 29 has been shown to be an excellent therapeutic agent in inflammatory diseases such as ulcerative colitis, rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus, combating inflammation and efficiently correcting the level of oxidative stress associated to these pathologies. Following this trend, preliminary studies with peritoneal macrophages indicate that the lipophilic derivatives of oleuropein have a similar effect to that observed for the HTAc 29. Both the peracetylated oleuropein 148 and the partially acylated derivatives obtained enzymatically, the tetraacetylated 50 and the monoacetylated 46, are better than the oleuropein, in terms of the modulation of the inflammatory response and the level of oxidative stress of peritoneal macrophages. Fifth, the Krapcho demethoxycarbonylation reaction applied to the oleuropein has been optimized to obtain, with acceptable yield, the acetylated oleacein or aceolein 51, together with the acetylated dehydrated oleuroside aglycone (DOA) 52, by heating at 150 °C in DMSO followed by acetylation, without prior purification. The same biomimetic strategy has been applied to phenolic extracts of olive oil containing the monoaldehyde aglycones of ligstroside and oleuropein 65 and 66, as well as to the same aglycones previously separated and purified. This methodology allows not only a new access to oleocanthal and oleacein, but also the possibility of enriching phenolic extracts, easy to obtain from EVOOs, in oleocantal and oleacein, two important highly active biophenols with application in the Pharmaceutical and Food industries. Different synthetic routes for stabilizing oleacein 53 have also been explored in order to enable their chromatographic purification, obtaining the aforementioned acetylated derivative 51 and the compounds derived from regioselective reductions 59 and 60, besides to monoacetals of oleacein and oleocanthal 61‒64. Compounds 51 and 52 resulting from the Krapcho reaction on oleuropein followed by acetylation have been tested, together with the lipophilic derivatives of ligstroside 49 and 147 and oleuropein 50-52 and 148 as antiproliferative agents against various human solid tumor cell lines. The results show a progressive improvement of the cellular growth inhibition data as the lipophilicity of the secoiridoid glycosides increases. In addition, both 51 and 52 present better results than the peracetylated HT 142 in all cell lines tested. The compounds with better activity show a higher selectivity to cells of cervix-uterine cancer (HeLa) with GI50 (8.6 ± 4.4) μM, (23 ± 4.3) μM and (15 ± 3.2) μM for 148, 51 and 52 respectively. Finally, a method of quantification by 1H-NMR of the aldehyde secoiridoid derivatives present in the phenolic fraction of the EVOOs has been proposed, allowing quantification of oleacein 53, oleocanthal 57, and monoaldehyde aglycones of ligstroside 65 and oleuropein 66 by integration of the signal corresponding to aldehyde protons above 9.0 ppm.Premio Extraordinario de Doctorado U

Osteoarthritis treatment with a novel nutraceutical acetylated ligstroside aglycone, a chemically modified extra-virgin olive oil polyphenol

Recent studies have shown that dietary patterns confer protection from certain chronic diseases related to oxidative stress, the immune system and chronic low-grade inflammatory diseases. The aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory potential and the capacity to attenuate cartilage degradation using extra-virgin olive oil–derived polyphenols for the treatment of osteoarthritis. Results show that both nutraceuticals ligstroside aglycone and acetylated ligstroside aglycone showed an anti-inflammatory profile. Acetylated ligstroside aglycone significantly reduced the expression of pro-inflammatory genes including NOS2 and MMP13 at both RNA and protein levels; decreased nitric oxide release; and, importantly, reduced proteoglycan loss in human osteoarthritis cartilage explants. Our study demonstrated that a new synthetic acetylated ligstroside aglycone derivative offers enhanced anti-inflammatory profile than the natural nutraceutical compound in osteoarthritis. These results substantiate the role of nutraceuticals in osteoarthritis with implications for therapeutic intervention and our understanding of osteoarthritis pathophysiology.España, MINECO (CTQ2016-78703-P)España, Junta de Andalucía (FQM134

A Straightforward Access to New Families of Lipophilic Polyphenols by Using Lipolytic Bacteria

The chemical synthesis of new lipophilic polyphenols with improved properties presents technical difficulties. Here we describe the selection, isolation and identification of lipolytic bacteria from food-processing industrial wastes, and their use for tailoring a new set of com- pounds with great interest in the food industry. These bacteria were employed to produce lipolytic supernatants, which were applied without further purification as biocatalysts in the chemoselective and regioselective synthesis of lipophilic partially acetylated phenolic com- pounds derived from olive polyphenols. The chemoselectivity of polyphenols acylation/dea- cylation was analyzed, revealing the preference of the lipases for phenolic hydroxyl groups and phenolic esters. In addition, the alcoholysis of peracetylated 3,4-dihydroxyphenylglycol resulted in a series of lipophilic 2-alkoxy-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl acetate through an unexpected lipase-mediated etherification at the benzylic position. These new compounds are more lipophilic and retained their antioxidant properties. This approach can provide access to unprecedented derivatives of 3,4-dihydroxyphenylglycol with improved propertiesJunta de Andalucía P08-NMR-3515, P11-CVI-7427 MO, FQM134 y BIO-213European Regional Development Fund (FEDER

Effect of Influenza Vaccination Inducing Antibody Mediated Rejection in Solid Organ Transplant Recipients

Introduction: Our goal was to study whether influenza vaccination induced antibody mediated rejection in a large cohort of solid organ transplant recipients (SOTR). Methods: Serum anti-Human Leukocyte Antigen (HLA) antibodies were determined using class I and class II antibody-coated latex beads (FlowPRATM Screening Test) by flow cytometry. Anti-HLA antibody specificity was determined using the single-antigen bead flow cytometry (SAFC) assay and assignation of donor specific antibodies (DSA) was performed by virtual-crossmatch. Results: We studied a cohort of 490 SOTR that received an influenza vaccination from 2009 to 2013: 110 (22.4%) received the pandemic adjuvanted vaccine, 59 (12%) within the first 6 months post-transplantation, 185 (37.7%) more than 6 months after transplantation and 136 (27.7%) received two vaccination doses. Overall, no differences of anti-HLA antibodies were found after immunization in patients that received the adjuvanted vaccine, within the first 6 months post-transplantation, or based on the type of organ transplanted. However, the second immunization dose increased the percentage of patients positive for anti-HLA class I significantly compared with patients with one dose (14.6% vs. 3.8%; P = 0.003). Patients with pre-existing antibodies before vaccination (15.7% for anti-HLA class I and 15.9% for class II) did not increase reactivity after immunization. A group of 75 (14.4%) patients developed de novo anti-HLA antibodies, however, only 5 (1.02%) of them were DSA, and none experienced allograft rejection. Only two (0.4%) patients were diagnosed with graft rejection with favorable outcomes and neither of them developed DSA. Conclusion: Our results suggest that influenza vaccination is not associated with graft rejection in this cohort of SOTR.This study was funded by the Consejería de Salud (Grant Number: PI-0119-2012), Ministerio de Economía y Competitividad, Instituto de Salud Carlos III (Grant Numbers: GR09/0041, PI14-00165, and MPY110/18) and co-financed by European Development Regional Fund “A way to achieve Europe” ERDF, Spanish Network for the Research in Infectious Diseases (REIPI RD12/0015/0001)

Engineering a Highly Regioselective Fungal Peroxygenase for the Synthesis of Hydroxy Fatty Acids

The hydroxylation of fatty acids is an appealing reaction in synthetic chemistry, although the lack of selective catalysts hampers its industrial implementation. In this study, we have engineered a highly regioselective fungal peroxygenase for the ω-1 hydroxylation of fatty acids with quenched stepwise over-oxidation. One single mutation near the Phe catalytic tripod narrowed the heme cavity, promoting a dramatic shift toward subterminal hydroxylation with a drop in the over-oxidation activity. While crystallographic soaking experiments and molecular dynamic simulations shed light on this unique oxidation pattern, the selective biocatalyst was produced by Pichia pastoris at 0.4 g L−1 in a fed-batch bioreactor and used in the preparative synthesis of 1.4 g of (ω-1)-hydroxytetradecanoic acid with 95 % regioselectivity and 83 % ee for the S enantiomer.This work was supported by the European Union Project grant H2020-BBI-PPP-2015-2-720297-ENZOX2; the Spanish projects PID2019-106166RB-100-OXYWAVE, PID2020-118968RB-100-LILI, PID2021-123332OB-C21 and PID2019-107098RJ-I00, funded by the Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación (AEI)/doi: 10.13039/501100011033/; the “Comunidad de Madrid” Synergy CAM project Y2018/BIO-4738-EVOCHIMERA-CM; the Generalitat Valenciana projects CIPROM/2021/079-PROMETEO and SEJI/2020/007; and the PIE-CSIC projects PIE-202040E185 and PIE-201580E042. P.G.d.S. thanks the Ministry of Science, Innovation and Universities (Spain) for her FPI scholarship (BES-2017-080040) and the Ministry of Science and Innovation for her contract as part of the PTQ2020-011037 project funded by MCIN/AEI/10.13039/501100011033 within the NextGenerationEU/PRTR. D.G.-P. thanks Juan de la Cierva Incorporación contract Ref. No.: IJC2020-043725-I, funded by MCIN/AEI/10.13039/501100011033, and the EU NextGenerationEU/PRTR program. K.Ś. thanks to Ministerio de Ciencia e Innovación and Fondo Social Europeo for a Ramón y Cajal contract (Ref. RYC2020-030596-I). We thank the Synchrotron Radiation Source at Alba (Barcelona, Spain) for assistance with the BL13-XALOC beamline

Factors associated with the humoral response after three doses of COVID-19 vaccination in kidney transplant recipients

[Introduction] Kidney transplant recipients showed a weak humoral response to the mRNA COVID-19 vaccine despite receiving three cumulative doses of the vaccine. New approaches are still needed to raise protective immunity conferred by the vaccine administration within this group of high-risk patients.[Methods] To analyze the humoral response and identify any predictive factors within these patients, we designed a prospective monocentric longitudinal study of Kidney transplant recipients (KTR) who received three doses of mRNA-1273 COVID-19 vaccine. Specific antibody levels were measured by chemiluminescence. Parameters related to clinical status such as kidney function, immunosuppressive therapy, inflammatory status and thymic function were analyzed as potential predictors of the humoral response.[Results] Seventy-four KTR and sixteen healthy controls were included. One month after the administration of the third dose of the COVID-19 vaccine, 64.8% of KTR showed a positive humoral response. As predictive factors of seroconversion and specific antibody titer, we found that immunosuppressive therapy, worse kidney function, higher inflammatory status and age were related to a lower response in KTR while immune cell counts, thymosin-a1 plasma concentration and thymic output were related to a higher humoral response. Furthermore, baseline thymosin-a1 concentration was independently associated with the seroconversion after three vaccine doses.[Discussion] In addition to the immunosuppression therapy, condition of kidney function and age before vaccination, specific immune factors could also be relevant in light of optimization of the COVID-19 vaccination protocol in KTR. Therefore, thymosin-a1, an immunomodulatory hormone, deserves further research as a potential adjuvant for the next vaccine boosters.This study was supported by a grant from the Fondo de Investigación Sanitaria (FIS/PI21/00357), which is co-founded by Fondos Europeos para el Desarrollo Regional (FEDER) “Una manera de hacer Europa”. VG-R, IO-M and AB-R were supported by Instituto de Salud Carlos III (CD19/00143, FI19/00298 and CM19/00051, respectively). MP-B was supported by the Consejería de Transformación Económica, Industria, Conocimiento y Universidades [DOC_01646 to MP-B] and YP was supported by the Consejería de Salud y Familias of Junta de Andalucía through the “Nicolás Monardes” [RC-0006-2021].Peer reviewe

Educación para la ciudadanía y la convivencia Ciclo uno (Primero y Segundo) : sintiendo y pensando

El módulo que tenemos entre manos forma parte de una colección cuyo eje de acción es el fortalecimiento y desarrollo de las capacidades que promueven la participación, el empoderamiento y la movilización para el ejercicio de las ciudadanías en la etapa escolar. Su título Sintiendo y pensando: aprendamos a convivir protegiendo la vida, nos permite orientar los procesos de educación para la ciudadana y la convivencia de los niños y niñas de ciclo 1, desde la perspectiva del cuidado, el cual entendemos como una actitud esencial de amor para con nosotros y nosotras, para con las demás personas y para el planeta. En palabras de Boff, “el cuidado es una actitud fundamental, un modo-de-ser mediante el cual la persona sale de sí y se centra en el otro con desvelo y solicitud” (Boff, 2002, p.73). Favorecer vivencias, reflexiones y didácticas que promuevan en nuestros niños y niñas este sentido de cuidado, les proveerá de herramientas para llegar a la identificación, y el sentido de exigibilidad del derecho a tener una vida humanamente plena, saludable y creativa que según Nussbaum (2010a) es tener una vida digna

Educación para la ciudadanía y la convivencia Ciclo tres (Quinto, Sexto y Séptimo) : protagonistas de la realidad, dirigimos la historia

El módulo que tenemos entre manos forma parte de una colección cuyo eje de acción es el fortalecimiento y desarrollo de las capacidades que promueven la participación, el empoderamiento y la movilización social para el ejercicio de las ciudadanías en la etapa escolar. Su título, protagonistas de la realidad, dirigimos la historia, inspirado en la frase atribuida a Paulo Freire “aprender a leer la realidad para escribir la historia”, resume el sentido de sus contenidos en dos vertientes, esto es, nos permite orientar los procesos de educación para la ciudadanía y la convivencia de los niños y niñas del ciclo, con el fin de aprender a ubicarse en el medio sociocultural donde se desenvuelve su vida cotidiana, y para actuar sobre el mismo en un sentido transformador. Partimos del reconocimiento de que los seres humanos nos constituimos como tales en relaciones e interacciones. Nuestros vínculos con el resto de la humanidad y el medio natural del cual nos proveemos para existir y con el cual conformamos un todo que hace posible la vida pueden ser más o menos conscientes. La mayor parte del tiempo, estas relaciones nos pasan inadvertidas, por lo lejanas o desconocidas o porque nos acostumbramos a cerrarles los ojos, a taparnos los oídos, a huir de ellas, a no dejarnos afectar por lo que percibimos, hasta llegar a la insensibilidad en su presencia

Gestión del conocimiento. Perspectiva multidisciplinaria. Volumen 10

El libro “Gestión del Conocimiento. Perspectiva Multidisciplinaria”, Volumen 10, de la Colección Unión Global, es resultado de investigaciones. Los capítulos del libro, son resultados de investigaciones desarrolladas por sus autores. El libro es una publicación internacional, seriada, continua, arbitrada de acceso abierto a todas las áreas del conocimiento, que cuenta con el esfuerzo de investigadores de varios países del mundo, orientada a contribuir con procesos de gestión del conocimiento científico, tecnológico y humanístico que consoliden la transformación del conocimiento en diferentes escenarios, tanto organizacionales como universitarios, para el desarrollo de habilidades cognitivas del quehacer diario. La gestión del conocimiento es un camino para consolidar una plataforma en las empresas públicas o privadas, entidades educativas, organizaciones no gubernamentales, ya sea generando políticas para todas las jerarquías o un modelo de gestión para la administración, donde es fundamental articular el conocimiento, los trabajadores, directivos, el espacio de trabajo, hacia la creación de ambientes propicios para el desarrollo integral de las instituciones