Dissecting the role of CENP-E in the maintenance of chromosome alignment

O objetivo da mitose é garantir a correta segregação dos cromossomas de modo a originar duas células geneticamente iguais. Quando as células entram em mitose, os seus cromossomas condensam e estabelecem ligações com o fuso mitótico através dos seus cinetocóros de modo a serem dirigidos para o equador da célula. Este processo de alinhamento é um pré-requisito para a correta segregação dos cromossomas, pois erros neste processo resultam em aneuploidia e Instabilidade Cromossómica (CIN). Uma das moléculas chave neste processo de alinhamento é a CENP-E, uma proteína motora pertencente à família das Cinesinas e que se acumula nos cinetocóros durante a mitose. Apesar de estar estabelecida a função desta proteína no processo de alinhamento dos cromossomas, a sua importância para manutenção desse alinhamento é desconhecida. Com a objetivo de a elucidar, foi determinada a dose óptima de inibição de CENP-E em linhas celulares humanas com e sem CIN, usando para tal três inibidores independentes: PF-2771, GSK923295A e Compound A, que atuam através de mecanismos alostéricos distintos. Usando um rastreio de alto rendimento, foram calculadas as doses óptimas de inibição total e parcial de CENP-E e posteriormente verificada a sua ação na manutenção do alinhamento dos cromossomas através de microscopia em células vivas de alta resolução. Neste trabalho mostramos que a CENP-E é essencial para a manutenção do alinhamento dos cromossomas em células humanas com e sem CIN. A sensibilidade relativa dos inibidores é proporcional para o PF-2771 e para o GSK923295A quando comparamos linhas celulares com e sem CIN. Contudo, células diplóides são menos sensíveis à inibição da CENP-E quando usado o Compound A, sugerindo que este composto poderá ter um valor terapêutico superior no tratamento do cancro. Estes resultados permitem aprofundar o nosso conhecimento acerca do valor terapêutico dos inibidores da CENP-E que são atualmente testados em ensaios clínicos.The goal of mitosis is to ensure faithful segregation of genomic content into two identical daughter cells. As cells enter mitosis, the DNA becomes condensed into mitotic chromosomes, which must establish stable attachments to the mitotic spindle. Upon establishing proper kinetochore-microtubule attachments, chromosomes can then be guided to the center of the cell. Notably, this process of chromosome congression is a prerequisite for faithful chromosome segregation, since errors in this process lead to aneuploidy and chromosomal instability (CIN). One of the key players involved in chromosome congression is CENP-E, a kinesin-like motor protein that is enriched at kinetochores during mitosis. Despite mounting evidence demonstrating a role for CENP-E in chromosome congression, the importance of CENP-E activity once chromosomes are already aligned, is currently unknown. To this purpose, we first determined the optimal dose for inhibiting CENP-E function in both CIN and non-CIN human cell lines using three independent CENP-E inhibitors: PF-2771, GSK923295A and Compound A, which act through distinct allosteric mechanisms. Using high-throughput screening, we calculated the optimal doses required for partial and total CENP-E inhibition and then performed high-resolution live cell imaging to directly test CENP-E function in the maintenance of chromosome alignment. We show that CENP-E is essential for the maintenance of chromosome alignment in both CIN and non-CIN human cells. We find that relative sensitivity to CENP-E inhibitors is proportional for PF-2771 and GSK923295A when comparing CIN and non-CIN cell lines. However, diploid cells are less sensitive to CENP-E inhibition using Compound A, suggesting that this compound may be of higher therapeutic value for the treatment of cancer. Taken together, these results offer insight for our understanding of the therapeutic value of CENP-E inhibitors currently tested in clinical trials

Control of the physicochemical and microbiological stability of parenteral nutrition produced or manipulated in hospitals

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2017Parenteral nutrition (PN) allows the intravenous administration of the necessary nutrients to patients that do not have a functioning gastrointestinal tract, being essential for their survival. In some cases, it is advantageous that PN is produced in hospital pharmacies, however, the stability of the admixtures has to be considered. PN is a quite complex pharmaceutical preparation, highly prone to interactions between its components and physicochemical instability. Furthermore, it is often associated to infections in patients who are receiving it. It is therefore necessary to find ways of ensuring patient safety, and quality assurance and control play a key role. The aim of this work is to identify the factors which affect the stability/quality of PN and determine the ideal procedures for the compounding, quality control and storage of PN admixtures in hospitals, in order to ensure the safety and efficacy of therapy for patients and a better management of pharmaceutical services’ resources. The maximum stability period found for ternary admixtures (with lipids) was 30 days, and for the binary ones 2 months for physicochemical stability and 6 months for microbiological stability. The limiting factors are lipid peroxidation and vitamin degradation. However, the first is avoided by protection from light and vitamins can be added only before administration. Physicochemical quality control is an aspect to be improved in hospitals, which should, in addition to the analysis of macroscopic aspect, perform pH and gravimetric assays, diameter analysis of lipid droplets and determine the concentration of critical components. Contamination rates obtained in sterility controls performed right after preparation were generally low (under 2%) and sterility studies performed over time in general did not detect contaminations. Nevertheless, in studies where PN admixtures were artificially contaminated, most microorganisms multiplied, with relevance for Candida albicans, which is an opportunistic yeast. On the contrary, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus epidermidis, which can easily reach PN bags, did not grow well. Microbial growth was higher in ternary admixtures. These results show that one of the most important aspects of PN preparation is aseptic compounding following validated procedures and performed by adequately qualified and trained operators. PN should be prepared in a laminar flow chamber located in an EN/ISO 14644-1 Grade B clean room with positive pressure in relation to outer rooms, which is not done in all Portuguese hospitals yet. Furthermore, the test for sterility of the finished preparations should be performed. In conclusion, there are several factors that influence PN stability, namely its composition and the preparation/storage conditions. The obtained results reinforce the importance of an adequate preparation process and of the quality control of admixtures and suggest that, if more studies are performed, it could be possible to extend the shelf life assigned to admixtures, even if some components have to be added only before administration. It is also important to recall that PN is a pharmaceutical preparation and should therefore be controlled as such and have its stability evaluated. It would be beneficial if hospitals performed their own stability studies adapted to the characteristics of their bags and their individual needs, in order to assign to their PN admixtures a shelf life that would ensure patient safety, but that would also allow a better management of pharmaceutical resources/costs and a decrease in the waste of bags.A nutrição parentérica (PN) permite a administração por via intravenosa dos nutrientes necessários aos pacientes que não têm o trato gastrointestinal funcional, sendo essencial para a sua sobrevivência. Em alguns casos é vantajoso que seja produzida nos serviços farmacêuticos hospitalares, no entanto, é necessário ter em atenção a estabilidade das preparações. A PN trata-se de uma preparação farmacêutica bastante complexa, com uma grande propensão a interações entre os seus componentes e instabilidade físico-química. Para além disso, está muitas vezes associada a infeções nos pacientes que a recebem. É por isso necessário encontrar formas de garantir a segurança do doente, tendo a garantia e o controlo de qualidade um papel fundamental. O objetivo deste trabalho é identificar os fatores que afetam a estabilidade/qualidade da PN e determinar quais os procedimentos ideais para a produção, controlo de qualidade e conservação da PN nos hospitais, de forma a garantir a segurança e a eficácia da terapêutica para o doente e a rentabilização dos recursos dos serviços farmacêuticos. O período máximo de estabilidade encontrado para as misturas ternárias (com lípidos) foi de 30 dias, e para as binárias 2 meses para a estabilidade físico-química e 6 meses para a microbiológica. Os fatores limitantes da estabilidade parecem ser a peroxidação lipídica e a degradação das vitaminas. No entanto, a primeira é evitada protegendo a mistura da luz e as vitaminas podem ser adicionadas apenas antes da administração. O controlo de qualidade físico-química é um aspeto a melhorar nos hospitais, devendo, para além da análise do aspeto macroscópico, proceder-se a testes de pH, gravimetria, análise do tamanho das gotículas lipídicas e determinação da concentração dos componentes críticos. As taxas de contaminação obtidas nos controlos de esterilidade logo após a preparação foram no geral baixas (inferiores a 2%) e os estudos de esterilidade ao longo do tempo no geral não encontraram contaminações. No entanto, nos estudos em que se procedeu à contaminação artificial das misturas, a maioria dos microrganismos proliferou, com destaque para a Candida albicans, que é uma levedura oportunista. Pelo contrário, a Pseudomonas aeruginosa e o Staphylococcus epidermidis, que podem facilmente chegar às bolsas de PN, não cresceram bem. A proliferação microbiana demonstrou ser mais elevada nas misturas ternárias. Estes resultados mostram que um dos aspetos mais importantes da produção de PN é a preparação em condições de assepsia segundo procedimentos validados e realizada por operadores devidamente qualificados e treinados. A PN deve ser preparada numa câmara de fluxo de ar laminar localizada numa sala limpa de Grau B (EN/ISO 14644-1) com pressão positiva em relação às salas exteriores, o que ainda não acontece em todos os hospitais portugueses. Para além disso, deve ser realizado o teste de esterilidade das preparações terminadas. Em suma, são diversos os fatores que influenciam a estabilidade da PN, nomeadamente a sua composição e as condições de preparação/conservação. Os resultados encontrados reforçam a importância de um correto processo de preparação e do controlo de qualidade das misturas e apontam para que, mediante a realização de mais estudos, seja possível aumentar os prazos de utilização estipulados, ainda que, alguns dos componentes das misturas tenham de ser adicionados pouco tempo antes da administração. Importa também referir que, sendo uma preparação farmacêutica, a PN deve ser controlada como tal e, portanto, a sua estabilidade deve ser avaliada. Seria vantajoso que cada hospital realizasse estudos de estabilidade adaptados às características das suas bolsas e às suas necessidades individuais, de forma a poder atribuir um prazo de utilização às bolsas preparadas que garanta a segurança dos doentes, mas também que permita uma melhor rentabilização dos recursos/custos dos serviços farmacêuticos e a diminuição do desperdício

Relatório de estágio para obtenção de grau Mestre

Mestrado em IPB-ESTGO estágio curricular do curso de Mestrado em Engenharia Industrial, do Instituto Politécnico de Bragança foi realizado numa empresa sediada em Braga, a Amais – Soluções Lda, com uma duração de 1134 horas, onde a função estava inserida no departamento de projeto. Projetos estes que estavam diretamente relacionados com a construção civil, mais propriamente projetos de especialidades. Com o avançar dos anos, a legislação tem vindo a aumentar os seus critérios e requisitos no que toca à construção, pois cada vez mais a requisição do Engenheiro é maior assim como os desafios que lhes são direcionados. Cada dia que passa, as operações urbanísticas requerem mais burocracias, mais projetos de especialidades para os licenciamentos dos mesmos, sendo então necessário recorrer aos engenheiros, sejam eles mecânicos, civis, eletrotécnicos e entre outros. Uma das especialidades que mais tem sofrido com o aumento de requisitos, normas e atualizações é a Certificação Energética. No estágio, todas as atividades desenvolvidas são pertencentes à mesma área, mas de especialidades diferentes, o que demonstra a diversidade e tipos de projetos que são necessários para cada tipo de edifício.The curricular internship of the Master's course in Industrial Engineering, at the Instituto Politécnico de Bragança, was carried out in a company headquartered in Braga, Amais – Soluções Lda, with a duration of 1134 hours, where my function was inserted in the project department. The projects I worked on were directly related to civil construction, them being specialties projects. Over the years, the urbanistic operation has been increasing its criteria and requirements with regard to construction, as the Engineer's request is increasing, as well as the challenges addressed to them. With each passing day, legalizations demand more bureaucracy, more specialized projects for their licensing, requiring the use of engineers, being them mechanics, civil, electrotechnicians and others. One of the specialties that has suffered most from the increase in requirements, standards and updates was Energy Certification.In the internship, all activities developed belong to the same area, but with different specialties, which demonstrates the diversity and types of projects required for each type of building

Onde mora o arco-íris: jovens LGBTI, clima escolar e o papel das comunidades

A influência do território e do perfil da comunidade educativa nas experiências de jovens lésbicas, gays, bissexuais, trans e intersexo em contexto escolar tem-se constituído recentemente como objeto de análise. Esta dissertação de mestrado centrou-se nas experiências desta população no contexto educativo português, adotando como objetivo central de análise a influência do perfil das comunidades na qualidade do clima escolar. A pesquisa recorreu a uma análise secundária de dados coletados através de um inquérito por questionário disseminado em redes sociais no âmbito de uma investigação de âmbito nacional, em cuja implementação o autor participou. A partir de uma amostra de 672 respondentes, foi identificada, por um lado, informação acerca da morfologia e contextualização geográfica das comunidades escolares, e, por outro, a influência destas características na incidência de experiências de discriminação homofóbica e transfóbica. Procurou também analisar-se em que medida a adoção de medidas que referem explicitamente e de forma positiva temáticas relacionadas com orientação sexual, identidade e expressão de género e características sexuais influencia, por um lado, o apoio demonstrado por parte do pessoal docente, funcionários/as e direção da escola, e, por outro, a forma como estes/as jovens geram a visibilidade das suas identidades, um indicador central do seu sentimento de pertença e da qualidade do clima escolar. Os resultados sugerem que a adoção de medidas educativas anti discriminatórias que explicitam estes temas pode potenciar um incremento da visibilidade e bem-estar destes/as jovens, contrariando ao mesmo tempo o acesso desigual a recursos e o peso da discriminação que se faz sentir em comunidades escolares de territórios mais desfavorecidos

Análise de sensibilidade ao balanço energético de edifícios de habitação

Hoje em dia enfrentamos uma época em que as preocupações ambientais estão constantemente na ordem do dia. Neste âmbito, a União Europeia criou uma diretiva que visa, simultaneamente, reduzir a emissão de CO2 e aumentar a qualidade térmica da envolvente e qualidade do ar interior de edifícios de habitação. Em Portugal, após transposição desta diretiva europeia, existe hoje um sistema de certificação energética com requisitos de comportamento térmico e de eficiência de sistemas técnicos de edifícios. A presente dissertação foi realizada em colaboração com a InstalSoft PT, que disponibilizou toda a informação técnica de arquitetura e engenharia de um edifício de habitação real necessária ao estudo efetuado. Desta forma, na presente dissertação é efetuado o balanço energético do edifício referido de modo a analisar as metodologias regulamentares deste cálculo para edifícios de habitação. De igual forma, são realizadas análises de sensibilidade de situações hipotéticas com base no edifício real, de modo a isolar diversos parâmetros e pressupostos associados ao cálculo do balanço energético. Este estudo tem como objetivo averiguar a existência do fenómeno de sobreaquecimento na estação de arrefecimento causado pelo isolamento térmico da envolvente opaca interior e exterior. Apura-se também o efeito de sistemas técnicos de ventilação mecânica com a função de recuperação de calor no balanço energético através da comparação com ventilação natural correspondente aos níveis mínimos regulamentares. Por último, estuda-se a afetação de quatro soluções de sistemas técnicos para a função de aquecimento e preparação de água quente sanitária alimentados a diferentes fontes de energia no balanço energético de edifícios de habitação. Após a obtenção dos resultados dos estudos efetuados é feita uma análise aos resultados obtidos bem como aos parâmetros definidos pelo Regulamento de Edifícios de Habitação (REH) no âmbito do Sistema de Certificação Energética (SCE).Nowadays we face a time where the environmental concern is in everyday agenda. In this scope, the European Union created a directive which aims to reduce CO2 emissions and increase thermal quality and indoor air quality of dwellings. In Portugal, after directive’s transposition, there is today a national energy certification system with requirements of thermal behavior and efficiency of dwelling’s technical systems. The present dissertation was made in collaboration with InstalSoft PT, which made available all technical information of architecture and engineering of a real residential building necessary to this paperwork. Therefore, here is realized an energy balance of this residential building in order to examine the regulatory methodology of this calculus. Equally, there are made sensitive analysis of hypothetical situations based on the real building in order to isolate a number of parameters and conditions linked to the energy balance. This paperwork has the intention of verify the summer typical overheating in dwellings phenomena caused by the excessive thermal insolation of the internal and external opaque surrounding. In addition, this paper intends to study the effect of mechanical ventilation technical systems with the function of heat recovery in the global energy balance through comparison with natural ventilation. Last of all, there is a study of the influence of four different technical systems solutions to the function of heating and preparation of domestic hot water powered by different energy sources in the dwellings energy balance. After data collection it is made an analysis to the obtained results along with an analysis to the parameters defined by the Regulation of Residential Building (REH) in the scope of the Energy Certification System (SCE)

Link load balancing optimization of telecommunication networks: a column generation based heuristic approach

This paper deals with optimal load balancing in telecommunication networks. For a capacitated telecommunications network with single path routing and an estimated traffic demand matrix, we wish to determine the routing paths aiming at min-max optimization of link loads. To solve this problem, we propose a column (path) generation based heuristic. In the first step, we use column generation to solve a linear programming relaxation of the basic problem (obtaining a lower bound and a set of paths). In the second step, we apply a multi-start local search heuristic with path-relinking to the search space defined by the paths found in the first step. In order to assess the merits of this approach, we also implemented a search heuristic which is equivalent to the second step of the proposed one but with no constraints on the set of paths that can be used. Through a set of computational results, we show that the proposed heuristic is efficient in obtaining near optimal routing solutions within short running times. Moreover, the comparison of the two heuristics show that constraining the search space to the columns given by column generation gives better results since this solution space contains good quality solutions and, due to its size, enables to find them in short running times

Bruxismo na criança: revisão narrativa

Tese de mestrado, Medicina Dentária, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Dentária, 2020Introdução: O bruxismo é um hábito parafuncional onde ocorrem movimentos involuntários de apertar ou de ranger dentário, resultantes da hiperatividade e contrações involuntárias dos músculos mastigatórios. O Bruxismo é frequentemente classificado como de vigília, que ocorre quando o indivíduo está acordado ou do sono, quando este se encontra a dormir. O bruxismo do sono é comum na infância, sendo a parafunção mais frequente nesta faixa etária. Já o bruxismo de vigília ocorre mais em adultos. Objetivos: Elaborar uma revisão narrativa de literatura sobre o bruxismo na criança, com foco na compreensão da doença, nos seus fatores etiológicos, na sua prevalência, no seu diagnóstico e sintomas e nas terapias adequadas. Materiais e Métodos: Pesquisa de artigos científicos na base de dados eletrónica de referência MEDLINE (pubmed: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/), entre março e setembro de 2020, de artigos em português, inglês e espanhol, dos últimos 10 anos. Obtiveram-se 760 resultados. Após a leitura dos títulos e resumos foram incluídos 40 artigos. Recorreu-se a outras fontes de pesquisa secundárias, artigos e livros referenciados em bibliografia e disponíveis no motor de busca Google (www.google.com). Destes, foram incluídos 70, perfazendo um total de 108 artigos e 2 livros. Para os relevantes, obtiveram-se os textos integrais. Conclusão: A maioria dos autores defende que o bruxismo na população pediátrica tem origem multifatorial, tendo os fatores emocionais uma especial relevância. Nesta faixa etária a doença tem uma prevalência entre os 6,5% e os 55,3%. Os principais sintomas da doença são desgaste dentário e ranger noturno audível, havendo outros menos frequentes. O correto diagnóstico do bruxismo do sono em crianças deverá ser baseado nos relatos parentais, complementado com um exame clínico específico e um estudo polissonográfico. Poucos trabalhos mencionam quais as abordagens terapêuticas a seguir, apesar da grande prevalência desta patologia. As disponíveis, têm mostrado níveis de eficácia variáveis.Introduction: Bruxism is a parafunctional habit where involuntary movements of clenching or dental grinding occur, originating from hyperactivity and involuntary contractions of the masticatory muscles. Bruxism is often classified as awake bruxism, which occurs when the individual is awake, or sleep bruxism, when asleep. Sleep bruxism is quite common in childhood, being the most frequent parafunction in this age group. Awake bruxism occurs more in adults. Objectives: To elaborate a narrative review of literature on bruxism in childhood, focusing on the understanding of the disease, the etiological factors, the prevalence, its diagnosis, and symptoms and on the best treatments available. Materials and Methods: Research of scientific articles in the electronic database of reference MEDLINE (pubmed: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/), between March and September of 2020, restricted to articles in Portuguese, English and Spanish, from the last 10 years. 760 results were obtained, and 40 articles included. Secondary research sources were also used, namely articles and books referenced in the bibliography and available in the Google search engine (www.google.com). Of these, 70 were included, making a total of 108 articles and 2 books, which the full texts were obtained. Conclusion: Most authors believe that bruxism in childhood has a multifactorial origin, with emotional factors having a special relevance. In this age group the disease has a high prevalence rate, between 6.5% and 55.3%. The main symptoms of the disease are tooth wear and nocturnal sounds of grinding. The correct diagnosis of sleep bruxism in children should be based on parental reports, complemented by a specific clinical examination and a polysomnographic study. There aren’t many studies that mention which therapeutic approaches to follow, despite the high prevalence of the disease. The ones available have shown very variable levels of efficacy

Governance models for non-profit organizations: a literature review

Good corporate governance, which influences organizational performance, is the foundation of effective internal control. Adopting a governance paradigm, however, presents difficulties. By identifying and mapping processes and data, Enterprise Architecture (EA) may help with changes. Key Performance Indicators (KPI) provide important indicators for organizational activities. By employing a structured Balanced Scorecard (BSC), management may obtain a comprehensive overview of performance and make informed decisions to improve outcomes. In this article, we will present relevant concepts related to Governance Models, obtained through a comprehensive literature review. The advantages of implementing a suitable governance model and the essential tools for its development are also discussed. We will close with a summary and open research questions.This work has been supported by FCT – Fundação para a Ciência e Tecnologia within the R&D Units Project Scope: UIDB/00319/2020

O setor empresarial nas regiões ultraperiféricas portuguesas : Uma década em perspetiva

O objetivo do presente trabalho é aprofundar o conhecimento e descrever a evolução do setor empresarial na Regional Autónoma dos Açores (RAA) e na Região Autónoma da Madeira (RAM). De salientar que na União Europeia (UE) existem nove regiões ultraperiféricas (RUP), sendo a RAA e a RAM duas delas. As RUP apresentam diversas especificidades que limitam o seu desenvolvimento económico e social, mas a sua importância estratégica é significativa face à Zona Económica Exclusiva (ZEE), pelo que importa conhecer. Através de um estudo descritivo e recorrendo a dados secundários publicados pelo Serviço Regional de Estatística dos Açores, Direção Regional de Estatística da Madeira e Instituto Nacional de Estatística, foi possível verificar que na RAA e na RAM, entre 2008 e 2017, existiu inicialmente uma regressão no número de empresas e posteriormente uma recuperação até 2017. Contudo, na RAA o número total de empresas em 2017 ainda não iguala o de 2008. Acresce que em ambas as regiões os números totais de pequenas, médias e grandes empresas em 2017 ainda não perfazem os números de 2008. Quanto à forma jurídica, na RAA as empresas individuais apresentam uma diminuição da sua expressão, enquanto na RAM a tendência é inversa. Relativamente aos setores de atividade económica, ocorreram algumas variações ao longo deste período, designadamente, em ambas as regiões, o setor da construção, tem vindo a diminuir a sua expressão e o setor do alojamento, restauração e similares tem aumentado a sua expressão em relação ao global de empresas, evidenciando uma mudança de paradigma.  &nbsp

The Future Looks Good: Examining the Associations Between Coping, Psychological Distress, and Optimism

The recent pandemic and consequent lockdown had a substantial impact on mental health and optimism regarding the future. Previous research showed that levels of depression, anxiety, and stress had increased throughout the pandemic. Nonetheless, how individuals cope when faced with adversity may be associated with positive expectations regarding the future. A sample of 274 Portuguese workers (female = 54) with a mean age of 40.86 (SD = 0.70) and work experience of 19.68 years (SD = 12.07) met inclusion criteria and agreed to participate in the proposed study. They represented a variety of working classes (i.e., arts, engineering, marketers, transportation and logistic, clerks, personal trainers, managers, lawyers, accountants, directors, journalism, health care). We investigated the associations between depression, stress, anxiety, adaptive and maladaptive coping, and optimism while controlling for working experience, gender, and work type. We found that depression was related to lower levels of optimism. However, for participants scoring high on adaptive coping and anxiety, higher scores of optimism were reported. Gender, work type, and experience did not significantly influence the results. These results provide evidence through which positive mental health can be promoted after the pandemic.info:eu-repo/semantics/publishedVersio