O cuidar em Enfermagem: importância atribuída pelos alunos do 4º ano da licenciatura em Enfermagem

Monografia apresentada à Universidade Fernando Pessoa para obtenção do grau Licenciada em EnfermagemDe acordo com Collière (1999), desde o início da história da Humanidade que o cuidar é imperativo no sentido de garantir a continuidade da vida do grupo e da espécie. Ao longo dos tempos o cuidar esteve esplícito ao “Ser humano” inserido numa comunidade. A enfermagem nasce como a profissão que cuida do ser humano doente ou são, ao longo do ciclo vital e dos grupos sociais que se integra, de forma que recuperem e mantenham a saúde com qualidade. Considera-se desta forma importante desenvolver um estudo no âmbito da Licenciatura em Enfermagem intitulado " O Cuidar em Enfermagem: importância atribuída pelos alunos do 4º ano da Licenciatura em Enfermagem”, tendo como objectivo, conhecer a importância que os mesmos atribuem ao cuidar em Enfermagem. Após a pesquisa bibliográfica, foi delineado o enquadramento teórico. Desta forma, considerou-se pertinente desenvolver: a conceptualização da profissão de Enfermagem, uma breve evolução histórica do acto de cuidar, o cuidar em Enfermagem, o conceito de cuidar segundo Jean Watson e os seus pressupostos, a relação de ajuda no cuidar em Enfermagem, a dictomia entre cuidar e tratar e por fim uma breve referência aos alunos de Enfermagem. Optou-se por um estudo descritivo- exploratório, baseado na metodologia quantitativa. A amostra é constituída por setenta alunos do curso de Enfermagem do 4º ano de uma instituição de ensino superior. Como instrumento de recolha de dados optou-se por um questionário, que foi aplicado no período de 20 a 22 de Maio de 2008. Os resultados obtidos permitiram concluir que a maioria dos alunos ( 90%) atribui muita importância ao cuidar em Enfermagem, bem como às intervenções realizadas ao doente que abrangam carácter holístico. O presente projecto de graduação contribuiu para a evolução dos nossos conhecimentos em enfermagem e da nossa capacidade de reflexão crítica. O conhecimento dos métodos e das técnicas de investigação irão permitir a realização futura de outros trabalhos neste âmbito. According to Collière (1999), since the beginning of the story of mankind that aiding is imperative in the sense of securing continuity of life on group and species. Through times nursing has been explicit to the “human being” inserted on a community. Nursing born as a profession that takes care of the human being, sick or not, thru is life cycle and the social groups he is inserted, to make sure they maintain and have a good health quality. So we consider that is important to develop a study in the graduating of nursery intituled” the caring in nursery: relevance in caring by the students of the 4th year in graduating nursery: having the goal of purpose, meet the importance of caring in nursery. After bibliographic research, was defined the theory fitness. This way was pertinent to develop: the conceptualizing in the profession of nursery, a brief story evolution of nursing, the caring in nursing according to jean Watson and his assumptions. The matter of helping in nursery, the dichotomy between caring and treating, and at last a brief mention to the nursery students. Has been choosing by a descriptive- exploratory, based on a quantitative methodology. The sample is made by seventy students of the 4th year in the course of nursery of an institution of superior education. As an instrument of research of data, we had chosen a questioner that was applied in 20 up to 22 of May of 2008. The obtained results allowed us to conclude that the massive majority (90%) gives a great importance of caring in nursery, as well as the interventions made to the patient that includes holistic care. The actual graduating project has contributed to the evolution of our knowledge in nursery and our critical judgment capacity. The knowledge of the methods and investigation technique will allow us to make in the future more research works in this field

A traição e a contaminação mental: efeito no perpetrador

Dissertação de mestrado, Psicologia Clínica e da Saúde, Faculdade de Ciências Humanas e Sociais, Universidade do Algarve, 2014Encontra-se descrito na literatura que episódios de traição, ou seja, situações onde um sujeito sente estar a ser, intencionalmente, prejudicado ou alvo de omissões, por parte de alguém que havia sido considerado como confiável e leal, podem constituir um trauma e desenvolver nos sujeitos pensamentos e sentimentos de contaminação mental e compulsões de lavagem. A grande maioria dos estudos nesta área têm-se centrado sobretudo nas vítimas de traição, contudo, os perpetradores deste tipo de actos têm vindo a ser, gradualmente, alvo de interesse no seio da comunidade científica. Apesar de ainda existir um número limitado de estudos acerca do tema, tem vindo a ser sugerida a possibilidade de os perpetradores de traição poderem sentir efeitos de contaminação mental e compulsões aquando a recordação de um episódio em que tenham sido eles os protagonistas de traição. Neste contexto, tivemos como principal objetivo induzir a contaminação mental em perpetradores de traição, com o intuito de perceber o efeito desta no surgimento de comportamentos de neutralização, de sentimentos de nojo e de emoções negativas. Para o efeito, foram avaliados 40 participantes, divididos em dois grupos (Grupo Experimental e Grupo de Controlo), cada um constituído por 20 participantes. Ambos os grupos responderam a um questionário de informação sociodemográfica e a três questionários de informação psicológica e psicopatológica, nomeadamente The Vancouver Obsessional Compulsive Inventory, Contamination Sensitive Scale e Marlowe-Crowne Social Desirability Scale. Posteriormente procedeu-se ao paradigma experimental, onde ambos os grupos responderam à escala Positive and Negative Affect Schedule e realizaram uma experiência de caráter narrativo. Para terminar, todos os participantes realizaram uma pausa de 5 minutos, após a qual responderam a uma entrevista final. Os principais resultados sugerem que os perpetradores de traição desenvolveram sentimentos de contaminação mental, de nojo e emoções negativas, contudo estes sentimentos não pareceram ser suficientes para desenvolver compulsões de lavagem significativas. Os resultados serão discutidos à luz dos modelos cognitivo-comportamentais atuais que tentam compreeder a origem da contaminação mental

Why adopt these scales?: a systematic review of the most used scales on expatriation studies in the past ten years

Systematic review of scales used in the expatriation field following the PRISMA guidelines. Through multiple correspondence analysis, to disclose choices of criteria, a typology of measurement scales in the past ten years (2006-2016) in terms of psychometric properties, and other descriptive criteria, was created, with the aim of assist in operational decisions of future studies, contribute to reduce the number of new scales and allow the comparison of the existing ones, besides contributing to the overall enlargement of the expatriation field. Through multiple hierarchical regression, the psychometric properties that allowed to predict a greater number of citations (total and when comparing subsequent periods) were investigated. This paper aims to identify the common constructs used on Expatriation, what are the most used scales to measure used constructs, changes in the use of scales on a time range, and to understand what are the tendencies in the thematic. It follows the protocol of previous peer-reviewed studies and adopts conceptual topics from prior expatriation studies. Its contribution is both methodological, as the first systematic review of scales in this field, but also for future researchers, in the moment of decision, answering the question “why adopt these scales?”.Revisão sistemática das escalas utilizadas no campo de expatriação seguindo as diretrizes PRISMA. Através de análise de correspondências múltiplas, para identificar as escolhas de critérios, foi criada uma tipologia de escalas de medição nos últimos dez anos (2006- 2016) ao nível de propriedades psicométricas e de outros critérios descritivos, com o objetivo de auxiliar nas decisões operacionais de futuros estudos, contribuir para reduzir o número de novas escalas e permitir a comparação das existentes, além de contribuir para a expansão do campo da expatriação. Através de regressão hierárquica múltipla foram investigadas quais as propriedades psicométricas que permitem prever maior número de citações (totais e por comparação entre períodos subsequentes). Este estudo tem como objetivo identificar os constructos mais comuns utilizados na Expatriação, quais são as escalas mais utilizadas para medir os constructos utilizados, e as mudanças no uso de escalas num intervalo de tempo, de forma a clarificar quais as tendências da área. Segue o protocolo de estudos anteriores, revistos por pares, e adota tópicos conceptuais de estudos passados da área de expatriação. A contribuição deste estudo é tanto metodológica, sendo a primeira revisão sistemática de escalas neste campo, mas também para futuros investigadores, no momento da decisão, respondendo à pergunta “porquê adotar essas escalas?”

Public Procurement As A Policy Tool For Growth

Dissertation presented as the partial requirement for obtaining a Master's degree in Data Science and Advanced Analytics, specialization in Business AnalyticsAs we know Public Procurement is when there is the spending of public money to deliver services, goods and works to the population. So, how can the State use it as a tool of economic growth? And is it in fact an effective measure for both sides (public and private sector)? We may think in fact that it is a useful tool for a country as public procurement has a big share of OECD countries expenditures. Besides, how can we analyze it in quantitively methods? To do our analyze we are not going to scale the data as the companies are not all equal and use Difference-in-Differences as to conclude regarding our previous questions. This is an analytical technique that helps to draw causal conclusions even when we cannot randomize the process. To do that we have to have the control group that refers to companies that are not involved in contracts with the State and we also have the treatment group which are the companies involved in contracts with the State. With this method we can compare companies that are different and have more than two periods. By doing this, we get an objective characterization of how public procurement impacts the companies and if it is beneficial for the private sector to enroll in such contracts. To do this analysis we will use data that was extracted from the Portuguese Database regarding Public Contracts and data from Orbis database to have more information regarding the Portuguese companies. To compute it graphically we will resort to the event-study design. Moreover, we can say that Public Procurement can be used as a policy for economic growth, but we cannot state it with precision. There is the need to have more information to obtain a better confidence interval on the results and to be able to truly trust them.Contratação Pública é uma forma de gasto público para possibilitar o acesso e a entrega de serviços e outros meios necessários à população para ter o mínimo de conforto. Então como é que o Estado pode usar a Contratação Pública como uma ferramenta para o crescimento económico? Se pensarmos bem será que é uma medida eficiente para o setor público e para o setor privado? Como é uma parte significativa dos gastos dos países da OECD pode-se pensar que seja uma ferramenta útil para um país. No entanto como é que é possível analisar o proposto em cima de forma quantitativa? Na nossa análise não iremos normalizar a data já que as empresas têm estruturas muito diferentes umas das outras. Para a analise iremos usar a técnica Difference-in-Difference para conseguirmos obter alguma resposta às questões anteriormente feitas. Isto é uma técnica analítica que ajuda na obtenção de conclusões causais, mesmo quando não conseguimos ter um processo aleatório. Para criarmos esta operação é necessário ter o grupo de controlo que se refere as empresas que não fazem contratos com o Estado e o grupo de tratamento que se refere as empresas que estão envolvidas em contratos com o Estado. Usando este método podemos comparar empresas que são diferentes na sua estrutura orgânica e podemos fazer a analise para mais do que dois períodos. Com isto é possível obter informação mais objetiva em como é que a Contratação Pública interfere com as empresas privadas e se, isto é, de facto benéfico ou não para o setor privado. Para esta análise vamos usar dada extraída da base de dados Portuguesa relativa à Contratação Publica e da base da Orbis que contém a informação relativa as empresas portuguesas. Alem disso, podemos afirmar que a Contratação Pública pode ser usada como uma política para fomentar o crescimento económico para se atingir um maior bem-estar geral. Contudo não se pode afirmar com precisão tal suposição devido à falta de significqdo estatístico nos dados. É necessário o acesso a mais informação para se obter resultados mais concretos e mais fiáveis

Caracterização física de preparações líquidas não estéreis: aparência

The present dissertation consists in the development of a visual and instrumental method for the evaluation of the color of a non-sterile liquid formulation. The color of the formulation was analyzed at different time intervals, after being subjected to different conditions of temperature and relative humidity in its pre-stability period. The evaluation occurred by comparing the formulation with different color scales reproduced based on the European Pharmacopoeia 9.7. Due to the fact that the visual assessment could be subjective, an instrumental color evaluation was performed from three- and two-dimensional color spaces, namely the CIELAB color space. Since the two-dimensional representation used to the instrumental specification of color does not consider all the attributes associated with color (does not include brightness), the CIELAB Difference (ΔE∗) between the color of the standard solutions of the scales and the formulation analyzed under different conditions was determined. The CIELAB Difference between two colors considers all the parameters that influence the color sensation and allows determining which of the standard solution has the most similar color to the formulation under analysis. Finally, using the standard solution with the most intense color of one of the scales reproduced, a rectangular color tolerance box was established to limit the acceptable tolerance for the coordinates of the formulation under analysis: all the formulations with the color coordinates outside the tolerance limits should be potentially rejected and investigated. However, the tolerance defined with the most intense color of one of the scales is merely representative: the main objective is, over time, to obtain a history of the coordinates of the color of the formulation and establish as tolerance limit the coordinates of the color associated with a formulation that is at the limit of the specifications associated with itA presente dissertação tem como objetivo o desenvolvimento e implementação de um método de avaliação da cor de uma preparação líquida não estéril analisada em diferentes intervalos de tempo, após estar sujeita a diferentes condições de temperatura e humidade relativa no seu período de pré-estabilidade. A avaliação ocorreu através da comparação entre a formulação e diferentes escalas da cor reproduzidas com base na Farmacopeia Europeia 9.7. Devido ao facto de a avaliação visual poder ser subjetiva, procedeu-se a uma avaliação instrumental da cor a partir de espaços de cor tridimensionais e bidimensionais, nomeadamente o espaço de cor CIELAB. Dado que a representação bidimensional utilizada para a especificação instrumental da cor não considera todos os atributos associados à mesma (não inclui a luminosidade), determinou-se a Diferença CIELAB (Δ"∗) entre a cor das amostras de referência das escalas e a cor da formulação em análise. A Diferença CIELAB considera todos os parâmetros que influenciam a sensação da cor e permite determinar qual das amostras de referência tem a cor mais semelhante à formulação em análise. Por fim, recorrendo à amostra de referência com a cor mais intensa de uma das escalas, estabeleceu-se uma caixa retangular de tolerância para a cor da formulação em avaliação: todas as formulações com coordenadas fora do limite da caixa devem ser rejeitadas e investigadas. No entanto, a tolerância definida com as coordenadas da cor mais intensa de uma das escalas é meramente representativa: o objetivo é, através de histórico de coordenadas da cor da formulação ao longo do tempo, estabelecer o limite de tolerância com as coordenadas associadas a uma formulação que se encontre no limite das especificações associadas à mesmaMestrado em Engenharia Químic

Metabolic remodeling of endothelial cells upon hypoxia and β-blockers as anti-angiogenic drugs

Tese de mestrado, Biologia Molecular e Genética, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2019Angiogenesis occurs when new blood vessels sprout from pre-existing ones through proliferation of endothelial cells (ECs). This process plays a major role in several physiological and pathophysiological processes, including atherosclerosis, chronic inflammation and cancer. The tumor associated neovasculature is responsible for the supply of nutrients and oxygen, promoting tumor growth and metastasis, even though these blood vessels are structurally and functionally abnormal. During tumor progression, rapid and uncontrolled proliferation of tumor cells occurs, leading to a hypoxic microenvironment with insufficient blood supply. Therefore, tumor cells start to release pro-angiogenic factors, such as VEGF (vascular endothelial growth factor), and hypoxia leads to the stabilization of HIF-1α (hypoxia-inducible factor 1 α), inducing the expression of genes that will stimulate the formation of a new vessel. The first objective of this thesis was to unravel the hypoxia effect in metabolic remodeling during the endothelial cell activation. An NMR (nuclear magnetic resonance) analysis of HUVECs (human umbilical vein endothelial cells) exposed to CoCl2-mimicked hypoxia showed decreased lactate and 2-hydroxyisobutyrate extracellular levels in hypoxia. In addition, an increase of intracellular formate levels was detected in hypoxia, which suggests a proliferating phenotype due to formate involvement in purine synthesis. On the other hand, there was a decrease in the intracellular levels of glucose, lactate and acetate upon exposure to hypoxia, precursors of pyruvate. Concerning endothelial activation upon hypoxia, an in vitro tube forming assay was performed and indicated a promotion of vessel-like structures formation by hypoxia. However, in an ex vivo rat aortic ring assay the exposition to CoCl2 resulted in sprouting inhibition. Besides, a wound healing assay demonstrated a migration inhibition on cells exposed to CoCl2. This makes us wonder if the concentration of CoCl2 used is actually mimicking hypoxia. Cysteine (Cys) is an important ROS (reactive oxygen species) scavenger, showed to have an involvement in cancer cell remodeling. Since ROS act as pro-angiogenic molecules, we had the intent to investigate the effect of Cys in endothelial activation. An aortic ring assay showed a tendency for a sprouting increase when exposed to Cys and higher branch points density when exposed to H2O2. However, these levels decreased when exposed to Cys and H2O2, what suggests that ROS may play a role in inducing angiogenesis, being Cys able to somehow revert this process. Many anti-angiogenic strategies were developed over the years, but they have failed mostly because the mechanisms involved in neoangiogenesis are not fully understood. Propranolol (a nonselective β-blocker) has emerged as an effective treatment for infantile hemangiomas, leading to its regression. Hence, our second objective was to determine the effect of propranolol in neo-angiogenesis. A tube forming assay was performed and showed that propranolol inhibited the formation and destroyed the already formed vessel-like structures. Its inhibitory effects extended to migration, without affecting cell viability. Besides, an immunofluorescence assay showed that propranolol affected the expression of some EC markers, particularly when the exposure was shorter. The effect was also accessed ex vivo, in which propranolol inhibited the sprout of endothelial cells from the aortic ring, corroborating the in vitro results. The metabolic remodeling involved during aortic ring sprouting was also accessed by NMR spectroscopy, showing the differential expression of metabolites from different pathways, glycolysis, aminoacyl-tRNA biosynthesis, valine, leucine and isoleucine biosynthesis and degradation. This study gives some insights into the metabolic remodeling induced by hypoxia in endothelial cells, opening new cues on the metabolic adaptation underlying angiogenesis which, despite being a process involving non-cancerous cells it accounts for cancer progression. The results on the effect of propranolol in angiogenesis reinforces its use as a therapeutic alternative to target angiogenesis and treat cancer not only vascular tumors, being a starting point to further investigations on the mechanisms underlying its action.A angiogenese ocorre quando novos vasos sanguíneos se formam a partir dos já existentes devido a proliferação de células endoteliais (ECs). Estas células que compõem o revestimento do lúmen do coração (endocárdio) e dos vasos sanguíneos e linfáticos, tem a capacidade de permanecer quiescentes por anos e rapidamente mudar para um estado de ativação em resposta a estímulos. E o equilíbrio entre fatores pro e anti-angiogénicos que determina o nível de angiogenese em curso. Quando as ECs são estimuladas por fatores pro-antigénicos, como o VEGF-A (fator de crescimento endotelial vascular), há um aumento na proliferação, migração e diferenciação de ECs, levando a formação de um novo vaso. A angiogenese desempenha um papel importante em vários processos fisiológicos, como durante o reparo de tecidos e o ciclo reprodutivo feminino, sendo também temporariamente ativada em processos fisiopatológicos, incluindo aterosclerose, inflamação cronica e cancro. Durante a progressão tumoral, ocorre uma proliferação rápida e descontrolada de células tumorais, levando a um microambiente hipóxido com fornecimento insuficiente de sangue contendo nutrientes e oxigénio. Como tal, as células tumorais começam a libertar fatores pró-angiogénicos. Alem disso, a hipoxia leva a estabilização do HIF-1α (HIF: fator induzido por hipoxia), que dimeriza com o HIF-1β no núcleo e atua como fator de transcrição de genes com elementos responsivos a hipoxia (HRE), tal como o VEGF. Portanto, a hipoxia tem um impacto na função das células endoteliais e na angiogenese, dado o aumento da taxa glicolítica e a proliferação de ECs devido a indução da expressão de genes envolvidos na glicólise. Descobertas recentes sugerem que a comunicação entre as células presentes no microambiente tumoral e simbiótica, de modo a suportar a remodelação metabólica do tumor. Como tal, há partilha de moléculas orgânicas e de sinalização entre os diferentes tipos de células, cooperando para a sobrevivência do sistema. Esta relação e ainda mais importante para as células tumorais quando o acesso a nutrientes e muito baixo, contribuindo com novas fontes de energia e biomassa. Deste modo, o conhecimento das interações metabólicas poderá auxiliar na identificação de novos candidatos a alvos terapêuticos para o tratamento do cancro. O primeiro objetivo desta tese foi investigar o efeito da hipoxia na remodelação metabólica durante a ativação das células endoteliais que poderá ocorrer no microambiente tumoral. Uma analise por espetroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) de HUVECs (células endoteliais da veia umbilical humana) expostas a hipoxia mimetizada por CoCl2 mostrou níveis reduzidos de lactato em hipoxia, tanto intra- quanto extracelulares. No meio extracelular também foi detetado um nível inferior de 2-hidroxi-isobutirato em hipoxia em comparação a normoxia, um metabolito associado a via de degradação de valina, leucina e isoleucina. Alem disso, em hipoxia foi detetado um aumento nos níveis de formato intracelular, o que pode indicar um fenótipo proliferativo devido ao envolvimento do formato na síntese de purinas. Pelo contrario, houve uma diminuição dos níveis intracelulares de glucose, lactato e acetato apos exposição a hipoxia. Em relação a ativação endotelial apos hipoxia, foi realizado um ensaio de tube forming no qual HUVECs embutidas em matrigel são estimuladas a formar estruturas semelhantes a vasos, criando uma rede que simula o que ocorre in vivo. Assim, as HUVECs foram expostas a normoxia e a CoCl2 para mimetizar a hipoxia, observando-se uma estimulação da formação de estruturas semelhantes a vasos por hipoxia. No entanto, foi realizado um ensaio ex vivo, o rat aortic ring assay, no qual a exposição a CoCl2 resultou numa inibição da formação de ramificações de células endoteliais (sprouting) a partir do anel. Alem disso, um ensaio de wound healing demonstrou inibição da migração em células expostas a hipoxia induzida por CoCl2. Tal faz-nos questionar se as concentrações de CoCl2 utilizadas constituem um modelo eficiente para estudo dos efeitos da hipoxia em células ECs. A cisteina e um importante scavenger de reactive oxygen species (ROS), estando já demonstrado o seu papel na remodelação metabólica de células tumorais. Visto que as ROS atuam como moléculas pro-angiogenicas, decidimos investigar o efeito da cisteína na ativacao endotelial. Um ensaio do aortic ring mostrou uma tendência para um aumento de sprouting quando exposto a cisteína, em normoxia e hipoxia, o que vai contra o esperado, visto que a eliminação dos ROS estaria associada a uma inibição da angiogenese. Para assegurar a existência de stress oxidativo, o ensaio foi também realizado na presença de H2O2, sendo que este induziu uma maior densidade de branching points comparando com o controlo. Porem estes níveis decresceram quando as células foram expostas a cisteína e H2O2, o que confirmou que os ROS poderão ter um papel na estimulação da angiogenese, sendo que a cisteína e capaz de reverter esse processo. Em relação a migração endotelial, num ensaio de wound healing observou-se que nem a cisteína nem o H2O2 afetaram a migração das ECs. Deste modo, e necessário verificar o papel da eliminação de ROS na angiogenese, de modo a determinar se uma estratégia terapêutica anti-ROS sera uma boa aposta para perturbar a angiogenese tumoral. Muitas estratégias terapêuticas anti-angiogenicas foram desenvolvidas ao longo dos anos, mas falharam principalmente porque os mecanismos envolvidos na neoangiogenese ainda não são totalmente compreendidos. Algumas estratégias objetivam a destruição da vasculatura, afetando a sobrevivência do tumor. Contudo, ao contrario do que seria pretendido, um microambiente tumoral mais pobre em O2 (hipoxia) pode servir de estimulo a neoangiogenese. Portanto, o desenvolvimento de novas terapias antiangiogenicas eficazes e urgente. O propranolol e um β-bloqueador não seletivo, isto e, bloqueia os recetores adrenérgicos β1 e β2 com igual afinidade. Estes recetores são ativados pela epinefrina e norepinefrina, estando o seu bloqueio associado ao tratamento de hipertensão, miocardites, enxaquecas, transtornos de ansiedade e tremores. Nos últimos anos o propranolol surgiu como um tratamento para os hemangiomas pediátricos, mostrando-se eficaz na regressão destes tumores por vasoconstrição. No entanto, o seu mecanismo de ação sobre as ECs e funcionamento dos vasos permanece sob investigação. Assim, o nosso segundo objetivo foi estudar o efeito do propranolol na neoangiogenese, uma vez que os β-bloqueadores poderão ser uma estratégia potencialmente eficaz para perturbar a angiogenese tumoral. Foi realizado um ensaio de tube forming no qual o propranolol inibiu a formação de novas estruturas semelhantes a vasos e destruiu as ja formadas. Os seus efeitos inibitorios estenderam-se a migração, conforme observado num ensaio de wound healing no qual HUVECs foram expostas a este fármaco, na presença e ausência de ROS (H2O2). Uma analise de morte celular por citometria de fluxo indicou que o propranolol não afetou a viabilidade celular. Alem disso, um ensaio de imunofluorescência mostrou que o propranolol afetava a expressão de alguns marcadores endoteliais (ICAM, VCAM, CD146, vWF), principalmente em tempos de exposição mais curtos. O efeito também foi avaliado ex vivo através de um aortic ring sprouting assay, no qual o propranolol inibiu a formação de estruturas a partir do anel, corroborando os resultados in vitro. Estes resultados sugerem que o propranolol podera perturbar a angiogenese in vitro, sendo necessários mais estudos de modo a investigar o mecanismo envolvido e qual e o recetor adrenérgico, β1 ou β2, responsável pela ativação das vias de sinalização envolvidas na inibição da angiogenese. A remodelação metabólica envolvida durante o sprouting do anel aórtico também foi avaliada por espetroscopia de NMR, mostrando a expressão diferencial de metabolitos de diferentes vias metabólicas, incluindo glicólise, biossíntese de purinas, biossíntese e degradação de valina, leucina e isoleucina. Este estudo fornece algumas ideias sobre a remodelação metabólica induzida pela hipoxia nas ECs, abrindo novas perspetivas sobre a adaptação metabólica subjacente a angiogenese que, apesar de ser um processo que envolve células não-malignas, e responsável pela progressão do cancro. Os resultados do efeito do propranolol na angiogenese reforçam a sua aplicação como alternativa terapêutica anti-angiogenica no tratamento do cancro, não apenas dos tumores vasculares, sendo um ponto de partida para novas investigações sobre os mecanismos subjacentes a sua ação

Caracterização da expressão genética da via do folato em carraças

Ticks and tick-borne diseases have a high impact in human and animal health worldwide, being also responsible for a great economic burden in the livestock industry. As such, there is need to increase and improve our understanding of the tick vectors and the pathogens they transmit for the development of cost-effective measures of control and eradication. Vaccines with the capacity to target several tick species and/or capable to block pathogen transmission are a promising approach for this problem. However, vaccine development is highly dependent on the selection of appropriate antigens. The folate pathway is one of the targets in the control and treatment of malaria being interesting for its broad but essential roles in organism survival, including biosynthesis of purines, pyrimidines, tetrahydrobiopterin, between many others. Here, we study how parasites/bacteria interactions modulate the expression of the folate pathway in the tick vector and the potential of these targets as candidate antigens for vaccine development. Folate pathway gene identification was performed by PCR and qPCR in three Rhipicephalus tick species (Rhipicephalus annulatus, Rhipicephalus bursa and Rhipicephalus sanguineus) and also in the Ixodes scapularis tick cell line (IDE8). Differential expression of these genes was analysed between uninfected and pathogen infected samples in four biological systems (R. annulatus – Babesia bigemina, R. bursa – Babesia ovis, R. sanguineus – Ehrlichia canis, IDE8 – E. canis) followed by target selection for in vitro functional analysis by RNA interference. For the silencing assay, double stranded RNA was inoculated in uninfected and E. canis - infected IDE8 cells. Samples were collected in three time points to evaluate gene knockdown effect on cell morphology and bacterial invasion and replication in tick cells. It was possible to identity five genes in R. annulatus and only three in the other biological systems. Overall, an increase in gene expression was observed in response to infection, however not always statistically significative. The gene encoding for GTP cyclohydrolase I (GCH-I) was selected for the silencing assay for showing the largest fold-change (p < 0.01) in the majority of the tested biological systems. Silencing of this gene in the IDE8 cell line showed no alteration in tick cell morphology and no effect on the invasion and multiplication of the bacteria in the cells. These results suggest gene expression modulation of folate pathway either as a tick response to an invader or manipulation of the tick cell machinery by the pathogens to their advantage, being interesting targets for further studies.As doenças transmitidas por carraças têm um grande impacto mundial na saúde humana e animal, sendo também responsáveis por um grande fardo económico nas indústrias pecuárias. Desta forma, há uma necessidade de aumentar e melhorar a nossa compressão das carraças como vetores e dos agentes patogénicos que estas transmitem para o desenvolvimento de medidas economicamente viáveis para o seu controlo e erradicação. Vacinas com a capacidade de afetar várias espécies de carraças ou capazes de bloquear a transmissão dos agentes patogénicos são uma abordagem promissora para este problema. No entanto, o desenvolvimento de vacinas é altamente dependente da seleção de antigénios apropriados. A via do folato é um dos alvos para o controlo e tratamento da malária, sendo interessante pelos seus amplos, mas essenciais papeis na sobrevivência dos organismos, incluindo a biossíntese de purinas, pirimidinas, tetrahidrobiopterina, entre muitos outros. Aqui, é estudado como as interações com os parasitas/bactérias modelam a expressão da via do folato nas carraças e o potencial destes alvos como antigénios candidatos para o desenvolvimento de vacinas. A identificação de genes da via do folato foi realizada através de PCR e qPCR em três espécies de carraça do género Rhipicephalus (Rhipicephalus annulatus, Rhipicephalus bursa e Rhipicephalus sanguineus) e também na linha celular de Ixodes scapularis (IDE8). A expressão diferencial destes genes foi analisada entre amostras não infetadas e infetadas em quatro sistemas biológicos (R. annulatus – Babesia bigemina, R. bursa – Babesia ovis, R. sanguineus – Ehrlichia canis, IDE8 – E. canis) seguida da seleção de alvos para análise funcional in vitro através de RNA de interferência. Para o ensaio de silenciamento, RNA em cadeia dupla foi inoculado em células IDE8 não infectas e infetadas com E. canis. Amostras foram coletadas em três tempos para avaliar o efeito do silenciamento do gene na morfologia das células e na invasão e replicação das bactérias nas células de carraça. Foi possível identificar cinco genes em R. annulatus e apenas três nos restantes sistemas biológicos. No geral, foi observado um aumento da expressão dos genes em resposta a infeção, apesar de nem sempre ser estatisticamente significativo. O gene que codifica para a enzima GTP cyclohydrolase I (GCH-I) foi selecionado para o ensaio de silenciamento por apresentar a maior diferença de expressão (p < 0.01) na maioria dos sistemas biológicos testados. Silenciamento deste gene na linha celular IDE8 não mostrou nenhuma alteração na morfologia das células e nenhum efeito na invasão e multiplicação da bactéria nas células. Estes resultados sugerem uma modulação da expressão génica da via do folato seja como resposta da carraça ao organismo invasor ou como manipulação da maquinaria celular da carraça pelo patogénio para sua vantagem, sendo alvos interessantes para mais estudos.Mestrado em Microbiologi

Fighting bacteria using selective drugs for membranes

Tese de mestrado em Bioquímica Médica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2015Os antibióticos são fármacos utilizados no tratamento e prevenção de infeções causadas por bactérias ou fungos. Devido à sua elevada eficácia, baixo custo e fácil acesso, as últimas décadas foram marcadas pelo uso excessivo destes fármacos. Como consequência, bactérias e fungos acabaram por desenvolver resistência aos antibióticos convencionais. O desenvolvimento de mecanismos de resistência e a propagação de estirpes resistentes a nível mundial ameaçam a saúde pública de todo o mundo. De acordo com a Organização Mundial da Saúde (WHO), a estirpe de Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) foi, em 2005, a principal causa das 94 000 infeções hospitalares nos Estados Unidos da América, de que resultaram 19 000 mortes. Mais recentemente, em 2013, foram identificados 480 000 novos casos de infeção pela estirpe multi-resistente Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB) em 100 países. Assim sendo, existe uma necessidade crescente de desenvolver novos e eficazes agentes antimicrobianos, sobretudo com mecanismos de ação diferentes dos usados pelos antibióticos convencionais. Só desta forma será possível garantir que, num futuro próximo, existirão alternativas eficazes para curar infeções graves e evitar, por exemplo, que intervenções médico-cirúrgicas, mesmo as mais simples, se tornem procedimentos de alto risco. De acordo com o seu mecanismo de ação, os antibióticos podem ser classificados como bacteriostáticos, quando inibem o crescimento bacteriano, ou bactericidas, quando causam a morte das bactérias. Os péptidos antimicrobianos (AMPs) têm ganho bastante visibilidade nas últimas décadas. Este grupo de péptidos está presentes em grande parte dos organismos vivos, desde bactérias, fungos, plantas e diversos animais. Além disso, são elementos fundamentais da imunidade inata da maioria dos organismos multicelulares. Ao contrário dos antibióticos convencionais, os péptidos antimicrobianos têm um largo espetro de ação contra bactérias, fungos e vírus, atuando através de mecanismos frequentemente relacionados com a disrupção de membranas, ao contrário dos antibióticos convencionais cujos alvos principais são processos metabólicos intracelulares. Vários estudos indicam que o desenvolvimento de resistência bacteriana contra AMPs é muito difícil porque as lesões nas membranas lipídicas são dificilmente reparáveis. Desta forma, os péptidos antimicrobianos têm sido propostos como solução para contornar a problemática associada à crescente resistência bacteriana. Em termos gerais, os péptidos antimicrobianos são caracterizados por serem pequenos (11 a 50 resíduos de aminoácidos), possuírem carga global positiva devido à presença de aminoácidos carregados positivamente, tais como lisinas e argininas, e por adquirirem uma estrutura anfipática que os torna solúveis em ambientes aquosos sem impedir a sua interação com membranas. Os péptidos translocadores de membranas (CPPs) são, tal como os AMPs, um grupo de péptidos bioativos em membranas. Estas moléculas são capazes de translocar membranas biológicas sem as destruir, e por isso têm sido utilizados como vetores de transporte de outras moléculas para o interior das células. Os CPPs partilham várias características estruturais com os AMPs, como a presença de cargas positivas em excesso e o facto de ambos serem moléculas anfipáticas, o que tem impulsionado o estudo de CPPs como possíveis AMPs, e vice-versa. O principal objetivo deste trabalho foi validar experimentalmente a hipótese de que as proteínas estruturais de vírus são uma fonte rica em sequências de potenciais péptidos antibacterianos. A atividade antibacteriana de dezasseis AMPs e sete CPPs obtidos a partir de proteínas estruturais de diferentes vírus, foi determinada em quatro estirpes bacterianas, duas Gram-positivas, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Methicillin-resistant Staphylococcus aureus ATCC 33591 (MRSA), e duas Gram-negativas, Escherichia coli ATCC 25922 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. As estirpes Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Escherichia coli ATCC 25922 foram selecionadas para este estudo pois são frequentemente utilizadas como estirpes de referência para Gram-positiva e Gram-negativa, respetivamente. A estirpe Methicillin-resistant Staphylococcus aureus ATCC 33591 foi selecionada pois, além de representar uma estirpe cujas infeções têm taxas de mortalidade muito elevadas, permite introduzir uma bactéria resistente no estudo. A estirpe Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 foi testada uma vez que representa a principal bactéria Gram-negativa causadora de infeções em ambientes hospitalares. Através da determinação da concentração mínima inibitória (MIC), três péptidos revelaram elevada atividade antibacteriana contra todas as estirpes testadas: o vAMP 059, com valores de MIC entre 0.78 μM e 6.25 μM; o vCPP 0769, com valores de MIC entre 3.13 μM e 25 μM; e o vCPP 2319, com valores de MIC entre 1.56 μM e 3.13 μM. Para os três péptidos mais ativos foi determinada a concentração mínima bactericida (MBC). O péptido vCPP 2319 revelou ser bactericida contra todas as estirpes testadas, com um valor de MBC de 3.13 μM. O péptido vAMP 059 mostrou ter uma ação bacteriostática contra Escherichia coli ATCC 25922, com um valor de MBC igual a 25 μM, mas bactericida para as restantes bactérias testadas, com valores de MBC entre 1.56 μM e 6.25 μM. Por fim, o péptido vCPP 0769 revelou ser bactericida contra as duas estirpes Gram-negativas testadas, com valores de MBC entre 50 μM e 6.25 μM, mas bacteriostático contra as duas estirpes Gram-positivas, com um valor de MBC superior a 100 μM. Para os péptidos vAMP 059 e vCPP 2319, com ação bactericida contra Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, determinou-se a cinética de morte. Para tal, foram realizados dois métodos distintos: 1) Um método convencional baseado na contagem de colónias bacterianas obtidas após diferentes tempos de atuação de cada péptido. Para este ensaio, testou-se as bactérias Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC; 2) Um método inovador que permite seguir a cinética de morte bacteriana em tempo real por citometria de fluxo através da marcação de bactérias com o kit de viabilidade celular “live/dead”. Uma vez que as sondas que constituem o kit “live/dead” permitem distinguir rapidamente bactérias vivas, com a membrana intacta, de bactérias mortas, com a membrana permeabilizada, este método também permite determinar se os péptidos têm capacidade de permeabilizar a membrana bacteriana. Para este ensaio testou-se o efeito dos péptidos na bactéria Gram-positiva Staphylococcus aureus ATCC 25923. De acordo com os resultados obtidos pelo método convencional, o péptido vAMP 059 revelou atuar por um mecanismo de morte rápido para Staphylococcus aureus ATCC 25923, conseguindo matar 99.9% das bactérias em 5 minutos, e para Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, conseguindo matar 99.4% das bactérias em 2 horas. O ensaio da citometria de fluxo confirmou uma cinética de morte rápida contra Staphylococcus aureus ATCC 25923, e além disso, provou que o péptido vAMP 059 causa permeabilização da membrana celular desta estirpe. Relativamente ao péptido vCPP 2319, e de acordo com o método baseado na contagem de colónias, a sua cinética de morte também revelou ser rápida para as duas estirpes testadas, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, conseguindo matar 98.8% e 99.5% da população bacteriana, respetivamente, ao fim de 4 horas de atuação. O ensaio de citometria confirmou uma cinética de morte rápida para Staphylococcus aureus ATCC 25923, e estabeleceu que o péptido vCPP 2319 atua por um mecanismo de morte baseado na permeabilização da membrana desta estirpe. Os dados obtidos permitem concluir que os vírus são fontes de péptidos antibacterianos, sendo que se encontrou um AMP com elevada atividade antibacteriana. Também se confirmou que a dicotomia entre CPPs e AMPs é ténue; de uma biblioteca de sete CPPs, dois CPPs revelaram elevada atividade antibacteriana. Os três AMPs encontrados têm atividade elevada e um espetro de ação alargado, embora com modos de atuação diferentes

Generation and characterization of novel adenoviral vectors for hybrid nuclease-mediated gene targeting

Tese de mestrado [versão pública]. Biologia (Biologia Humana e Ambiente). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2013Adenovirus-based vectors are among the most efficient and disseminated gene transfer vehicles currently in use in a broad range of basic and applied research applications including the testing of gene therapy. As a gene therapy modality, gene targeting relies on the site-specific genome modification based on “integrases” or on the error-free homologous recombination pathway of the cell. Here, by deploying engineered nucleases together with targeting donor DNA delivered by adenoviral vectors, was tested the influence of the homologous donor topology on the specificity and the accuracy of gene targeting. Was shown clear evidence for the susceptibility of adenoviral vector DNA to the catalytic activities of FLPe recombinase and TALEN proteins. Also, the excision of donor DNA from the context of AdV genomes leads to an increase in stable transduction levels with the majority of integrants having precise HR-derived junctions at both ends, indicating that the vector topology greatly impacts the outcome of the genomic editing process.O domínio científico da terapia genética tem, nos últimos anos, sido alvo de grande expansão e desenvolvimento, sendo descrita como a introdução de nova informação genética, por meio de vetores, em células de um indivíduo com a finalidade de corrigir um defeito no genoma. Muitas dessas correções têm como alvo genes implicados em doenças, como na distrofia muscular de Duchenne, uma doença ligada ao cromossoma X. A ambição de uma cura genética tem impulsionado a descoberta e aperfeiçoamento de ferramentas úteis a essa ciência, tanto na área dos vetores utilizados (nomeadamente os sistemas víricos), como em endonucleases de restrição como as nucleases ZFNs e TALENs. Vetores baseados em adenovírus estão entre os veículos de transferência de genes mais eficientes e são, atualmente, de utilização disseminada. São utilizados numa grande variedade de aplicações de pesquisa básica e aplicada e apresentam características que os distinguem dos restantes sistemas utilizados, como uma eficiente transdução da maioria dos tecidos, uma grande capacidade de acomodação de transgenes e a forma episomal em que o seu genoma permanece na célula, impedindo indesejáveis integrações aleatórias no genoma. Com o consecutivo melhoramento da ciência, também os vetores baseados em adenovírus foram sucessivamente aperfeiçoados, tendo a remoção total ou parcial de genes virais não essenciais, aumentado o tamanho de acomodação do transgene e diminuindo as respostas imunitárias ao vector. Atualmente são descritos essencialmente três tipos de vetores adenovíricos: primeira-geração, segunda- e terceira-geração e high-capacity, com deleções nos genes virais E1, E2/E4 e em todos os genes, respectivamente. Uma das modalidades da terapia genética, a terapia genética targeted, baseia-se na modificação, através de "integrases" ou na via de recombinação homóloga da célula, do genoma numa localização específica, como o locus humano AAVS1, no cromossoma 19, um local largamente utilizado para integração de genes exógenos. A recombinação homóloga é uma via, isenta de erros, de reparação de quebras de ADN utilizada pela célula e é dependente da existência de uma sequência dadora (ADN dador), homóloga em parte com a sequência onde a quebra se deu. Por recombinação entre as duas sequências dá-se troca de informação genética complementar e a correção da quebra. Este sistema é muito utilizado em terapia genética, nomeadamente em sistemas de correção de mutações, mutagénese ou de inserção genética específica. Apesar de ser uma via de reparação eficiente, a célula utiliza mais prontamente uma outra via de reparação: a “non-homologous end joining”, em que, como o nome indica, liga as duas pontas livres, produzindo erros no processo. Para uma terapia genética eficiente e livre de erros, a recombinação homóloga deve ser induzida preferencialmente. Sabe-se que este sistema é recrutado preferencialmente em quebras duplas de ADN e a introdução exógena destas lesões por endonuclases de restrição, como as ZFNs e TALENs, pode aumentar a frequência de ocorrência da recombinação homóloga. Transcription activator-like effectors (TALEs) são proteínas encontradas na bactéria fitopatogénica do género Xanthomonas e que funcionam essencialmente como activadores transcripcionais. A estrutura modular e a sua capacidade de ligação ao ADN numa relação de um-para-um (resíduo-nucleótido) altamente específica fazem com que, associadas à enzima de restrição FokI, tenham dado origem às nucleases TALENs que, após dimerização dos domínios FokI, produzem uma quebra dupla na sequência desejada. As proteínas TALEN podem ser introduzidas na célula eficientemente através de vetores víricos como os vetores adenovíricos. No presente trabalho, através da transferência de TALENs (específicas para o locus AAVS1 humano) e de ADN dador, por vetores adenovíricos de segunda-geração, foi testada a influência da topologia do ADN dador homólogo sobre a especificidade e a precisão da terapia genética targeted. Os dadores homólogos foram construídos numa base genómica adenovírica, com duas sequências homólogas ao locus AAVS1, flanqueando o transgene eGFP direcionado por um promotor PGK. As topologias finais dos dadores foram produzidas a partir de reacções em sequências clonadas: flipase recognitition target (FRT), TALEN-target site (T-TS) e adeno-associated virus inverted terminal repeat (AAV-ITR). Pela recombinação das sequências FRT, mediada pela recombinase flipase, resultou um dador circular; pela libertação do dador do contexto adenovírico, mediado pela quebra dupla por TALENs nas sequências T-TS, foi produzido um dador linear e pelas sequências AAV-ITR, foi produzido um dador com estruturas secundárias terminais com recrutamento de fatores de reparação. Após aquisição da topologia final, e por quebra dupla específica no locus AAVS1 mediada pelas TALENs, a via de recombinação homóloga será recrutada, levando à recombinação entre as sequências homólogas no locus e no ADN dador e, consequentemente, à integração do transgene. Após a caracterização dos vetores por análise enzimática de restrição, demonstrou-se evidências da suscetibilidade do ADN vetor dador para as atividades catalíticas da flipase e das proteínas TALEN através de técnicas de PCR. A atividade de transferência dos dadores pelos vetores adenovirais foi determinada por titulações em células Hela, após as quais se procedeu às experiências de transdução, tanto em células HeLa como em mioblastos derivados de pacientes com distrofia muscular de Duchenne. No sentido de investigar a especificidade e precisão da recombinação, mediada por TALENs, dos diferentes dadores no locus-alvo AAVS1, a frequência de células positivas para eGFP foi monitorizada por citometria de fluxo ao longo do período de tempo em que as células transduzidas foram mantidas em cultura. Observou-se na primeira experiência de transdução, em células HeLa, que apesar dos elevados níveis iniciais de células positivas para eGFP, essas frequências rapidamente diminuiram e, após 28 dias, foram consideradas como níveis basais em todas as condições à excepção das células transduzidas com o dador linear (com sequências T-TS) em combinação com as TALEN. Esta condição apresentou 1.7 vezes maior frequência de células positivas para eGFP que o dador controlo. O período da experiência foi suficiente para diluir as formas episomais do vetor, sendo este valor final resultado da integração genómica do transgene. Uma segunda experiência de transdução em células HeLa, neste caso utilizando somente o dador linear (T-TS) e as TALENs, confirmou os resultados da experiência inicial. Uma última experiência de transdução foi feita, utilizando mioblastos derivados de pacientes de Duchenne e, para além do dador linear T-TS, um dador normal para comparação. Igualmente nesta experiência, o dador linear em combinação com as TALEN revelou uma frequência de células positivas para eGFP mais elevada que o dador controlo. Porque um aumento nos níveis de eficiência de integração do transgene não demonstra directamente um equivalente aumento na especificidade, procedeu-se a uma avaliação desse parâmetro por experiências de PCR. Para isso, isolaram-se clones de células HeLa da primeira experiência, positivos para eGFP, da condição do dador linear T-TS em combinação com as TALEN. Primers foram desenhados de forma a ser avaliada a integração do transgene, tanto na extremidade 5’ como na 3’ do locus-alvo AAVS1, assim como primers para o gene eGFP como controlo interno. Em 30 clones isolados, somente 22 clones (73%) revelaram junções do locus provenientes de recombinação homóloga. Com base nos resultados deste trabalho pode-se afirmar que o contexto do vetor influencia a especificidade e a precisão do processo de edição genético. Comparação com outros sistemas víricos poderá levar ao desenvolvimento de ferramentas e sistemas mais eficientes e seguros para o campo da terapia genética

Pupillary Dilation and EEG Response to Erotica

Atualmente, ainda não está claro quais regiões e bandas de frequência do cérebro são ativadas durante a exposição de um estímulo sexual visual (Visual Sexual Stimulus - VSS). O presente estudo visa contribuir para uma melhor compreensão da conexão entre um estímulo sexual e os fenómenos de atividade cortical desencadeados pela visualização de um clipe erótico complexo de 15 minutos. Para avaliar a excitação dos participantes durante a VSS, utilizamos como medida inespecífica a dilatação pupilar em vez de genital. A amostra é composta por 10 sujeitos do sexo feminino, que foram recrutados utilizando o método bola de neve. O principal resultado foi uma diferença significativa dos valores das ondas alfa e beta nas áreas parietal e occipital durante a VSS. Algumas correlações revelaram-se significativas entre a resposta pupilométrica e Beta nas regiões temporal, parietal superior e occipital e Alfa nos lobos temporais. Assim, enfatizou-se o papel do Beta em áreas parietais e occipitais do cérebro na resposta da excitação sexual das mulheres.Currently, it's not yet clear which brain regions and frequency bands activate during the exposure of a visual sexual stimulus (VSS). The present study aims to contribute to a better understanding of the connection between a sexual stimulus and the phenomena of cortical activity triggered by visualization of a 15-minute complex erotic clip. To assess the arousal of participants during VSS, we used as a non-specific measure the pupil dilation instead of a genital one. The sample is composed by 10 female subjects, which were recruited using the snowball method. The main result was a significant difference of alpha and beta wave values in parietal and occipital areas during the VSS. Some correlations revealed to be significant between the pupillometry response and Beta in temporal, superior parietal and occipital regions and Alpha in the temporal lobes. Thus, it has emphasized the role of Beta in parietal and occipital areas of the brain in the response of sexual arousal of women