Avaliação da relação entre o inflamassoma NLRP3 e as propriedades tumorais no câncer de mama

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013.O câncer de mama é o tipo de câncer mais prevalente entre as mulheres em todo o mundo e o responsável pelo maior índice de morte feminina por câncer. Em modelos experimentais, a inflamação crônica foi descrita como indutora, porém alguns dados não são reproduzidos na clínica. Os inflamassomas, complexos multiprotéicos de sinalização intracelular atuantes na imunidade inata e adaptativa, vem sendo associados a funções celulares contrastantes dependendo do tipo de célula cancerígena analisada, o que também é verdade para os receptores do tipo Toll. Porém, a relação do inflamassoma NLRP3 e o câncer de mama é pouco conhecida. Considerando ainda a presença dos receptores NLRs e TLRs nas células não hematopoiéticas e, logo, a possibilidade de modulação do microambiente inflamatório pela própria célula tumoral, propôs-se analisar a presença e função do receptor NLRP3 e seu inflamassoma em células tumorais da mama in vitro. Foi observado que os componentes NLRP3 e ASC estão presentes em MCF7, porém há baixa expressão de ASC em MDA-MB-231. Ainda, houve ativação de caspase-1, indicando ativação do complexo, e diminuição das quantidades de proteínas NLRP3 e ASC na presença de Nigericina. A utilização de LPS e Nigericina induziu elevada morte celular em ambas as linhagens, com características como fragmentação nuclear, rompimento da membrana plasmática e PARP1 não clivado, eventos típicos da piroptose, a morte celular induzida pela ativação dos inflamassomas. Apenas a MDA-MB-231 secretou TNFα após as estimulações, e nenhuma das células secretou IL1β e IL6. Além disso, a utilização dos estímulos alterou os padrões de ciclo celular e diminuiu a taxa de proliferação em ambas as linhagens, mas não alterou o fenótipo CD24/CD44 de forma geral. O uso de sobrenadantes de monócitos estimulados para o inflamassoma NLRP3 na cultura das células de câncer de mama demonstrou efeitos fenotípicos semelhantes ao uso dos agonistas, indicando um direcionamento tumoricida dos monócitos ativados, atuando por meio de seus fatores secretados. Estes resultados sugerem que o inflamassoma NLRP3 não só está presente em células tumorais da mama, mas que sua ativação possui um efeito tumoricida, quando ocorre na própria célula tumoral ou por fatores secretados de monócitos. Essa via pode representar um novo aspecto de modulação, o qual pode ser explorado para o desenvolvimento de novas terapias contra o câncer de mama. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTBreast cancer is the most prevalent type of cancer among women worldwide and the one responsible for their major cause of cancer death. In experimental models for this cancer, chronic inflammation is particularly described as an inducer; however there is some inconsistency in the clinic. The inflammasomes, intracellular multiprotein signaling complexes related to adaptative and innate immunity, are associated with contrasting roles regarding cancer immunity, depending on the cancer analyzed, which is also true for Toll-like Receptors. However, the relationship between the NLRP3 inflammasome and breast cancer is not completely understood. Considering the non-hematopoietic presence of TLRs and NLRs and, therefore, the possible generation of an inflammatory microenvironment by the tumor cells itself, we proposed to study the presence and function of the NLRP3 receptor and its inflammasome in breast tumor cells in vitro. We observed that the components NRLP3 and ASC are present in MCF7 cell line, but ASC is in low amounts in MDA-MB-231. Our data suggest caspase-1 activation, indicating activation of the complex, and diminished protein amounts of NLRP3 and ASC in the presence of Nigericin. When we used LPS and Nigericin, there was cell death induction in both cell lines, with nuclear fragmentation, plasma membrane rupture and non-cleaved PARP1, typical features of pyroptosis, the inflammasome mediated cell death. Only the MDA-MB-231 cell line secreted TNFα after stimulation, and neither of cells secreted IL1β nor IL6. Also, in the presence of the stimulus, there was alteration in the cell cycle pattern and decrease in the proliferation index of both cell lines, but not in the phenotype CD24/CD44 globally. The use of supernatants from NLRP3 stimulated monocytes in the culture of breast cancer cells induced similar phenotypic events to the presence of the agonists, which indicate an antitumoral activity of the activated monocytes, functioning through its secreted factors. Ours results suggest that the NLRP3 inflammasome is not only present in breast cancer cells, but its activation has a tumoricidal effect when occurring in the cancer cell or through secreted factors from monocytes. This pathway may represent a new modulation aspect, which may be further studied for the development of therapies against breast cancer

Single-cell analysis of pyroptosis dynamics reveals conserved GSDMD-mediated subcellular events that precede plasma membrane rupture

Pyroptosis is rapidly emerging as a mechanism of anti-microbial host defense, and of extracellular release of the inflammasome-dependent cytokines interleukin (IL)-1 beta and IL-18, which contributes to autoinflammatory pathology. Caspases 1, 4, 5 and 11 trigger this regulated form of necrosis by cleaving the pyroptosis effector gasdermin D (GSDMD), causing its pore-forming amino-terminal domain to oligomerize and perforate the plasma membrane. However, the subcellular events that precede pyroptotic cell lysis are ill defined. In this study, we triggered primary macrophages to undergo pyroptosis from three inflammasome types and recorded their dynamics and morphology using high-resolution live-cell spinning disk confocal laser microscopy. Based on quantitative analysis of single-cell subcellular events, we propose a model of pyroptotic cell disintegration that is initiated by opening of GSDMD-dependent ion channels or pores that are more restrictive than recently proposed GSDMD pores, followed by osmotic cell swelling, commitment of mitochondria and other membrane-bound organelles prior to sudden rupture of the plasma membrane and full permeability to intracellular proteins. This study provides a dynamic framework for understanding cellular changes that occur during pyroptosis, and charts a chronological sequence of GSDMD-mediated subcellular events that define pyroptotic cell death at the single-cell level

O CONTROLE DE CONVENCIONALIDADE NO ORDENAMENTO JURÍDICO BRASILEIRO

Considerando as atrocidades cometidas durante a Segunda Guerra Mundial a sociedade internacional reconheceu e passou a priorizar a proteção dos direitos humanos. A pessoa humana passa a ser como o protagonista de uma proteção abrangente advinda do Direito Internacional. Com isso, Os tratados de direitos humanos passam a transcender o domínio reservado de cada Estado, sendo tido como de interesse mundial, bem como deaplicação necessária e imediata por cada nação. Nesse sentido, faz-se necessário compreender de que forma o Direito Internacional interferirá no direito interno de cada país e como as determinações internacionais serão incorporadas no ordenamento jurídico brasileiro. Este trabalho tem por objetivo abordar o chamado controle de convencionalidade, que representauma maneira de garantir a aplicação, no direito interno, das instruções criadas pelas convenções internacionais das quais os países são signatários. Através do controle, perfaz-se possível assegurar que as normas domésticas estejam de acordo com os tratados internacionais de direitos humanos, que, uma vez o Brasil sendo signatário, deverá respeitar o rito previsto no art. 5º, § 3º, CF, atingindo o status de emenda constitucional.Palavras-chave: Controle de convencionalidade; Tratados internacionais; Direitos humanos

An apoptotic caspase network safeguards cell death induction in pyroptotic macrophages

Pyroptosis has emerged as a key mechanism by which inflammasomes promote host defense against microbial pathogens and sterile inflammation. Gasdermin D (GSDMD)-mediated cell lysis is a hallmark of pyroptosis, but our understanding of cell death signaling during pyroptosis is fragmented. Here, we show that independently of GSDMD-mediated plasma membrane permeabilization, inflammasome receptors engage caspase-1 and caspase-8, both of which redundantly promote activation of apoptotic executioner caspase-3 and caspase-7 in pyroptotic macrophages. Impaired GSDMD pore formation downstream of caspase-1 and caspase-8 activation suffices to unmask the apoptotic phenotype of pyroptotic macrophages. Combined inactivation of initiator caspase-1 and caspase-8, or executioner caspase-3 and caspase-7, is required to abolish inflammasome-induced DEVDase activity during pyroptosis and in apoptotic Gsdmd(-/-) cells. Collectively, these results unveil a robust apoptotic caspase network that is activated in parallel to GSDMD-mediated plasma membrane permeabilization and safeguards cell death induction in pyroptotic macrophages

COMMUNITY OF CULTIVABLE ENDOPHYTIC FUNGI OF CASSAVA Manihot esculenta CRANTZ

The objective of this work was to characterize the community of endophytic fungi of cassava Manihot esculenta cultivated in the state of Acre, Brazil. For that, M. esculenta root, stem and leaf were collected, washed and disinfected by immersion in 70% ethanol (1 min), sodium hypochlorite 2% (5 min), 70% alcohol (30 sec) and washing in water sterile distilled (1 min) three times. The samples were fragmented and inoculated in BDA and Oat culture media and incubated at 28 º C for 30 days. The isolated fungi were characterized by morphology and grouped into morphospecies. There was isolated a total of 39 endophytic fungi M. esculenta, 19 (48.7%) of stem 13 (33.3%) of leaf and 7 (18%) root. On culture medium, 23 (59%) fungi were isolated in BDA medium and 16 (41%) in Oat medium. Eight fungal genera were identified, Penicillium and Phomopsis the most frequent, with 30.8% relative frequency each, and Fusarium (10.2%) Aspergillus (5.1%), Guignardia (5.1%), Acremonium (2.6%), Colletotrichum (2.6%), Phoma (2.63%), and unidentified (10.2%). M. esculenta showed dominance by fungi of the genera Penicillium and Phomopsis. This is the first study report of the endophytic fungi community of Manihot esculenta

PRINCIPAIS ÓBICES NA AMAMENTAÇÃO E REPERCUSSÕES DO DESMAME PRECOCE: REVISÃO SISTEMÁTICA

Background: Although breastfeeding is essential for human development, early weaning has occurred with great frequency due to several barriers encountered by the mother at that time. Aims: To identify the main barriers to breastfeeding and complications associated with early weaning. Methods: This is a literature review with search for articles in the databases of MEDLINE/PubMed, SciELO, Virtual Health Library (VHL) and Brazilian Society of Pediatrics (SBP). The MeSH descriptors were used: “breastfeeding”; “breastfeeding difficulties”; “importance of breastfeeding”; “early weaning”. Inclusion criteria covered articles published between January 2015 and December 2022, with no language restriction. Duplicate articles, or those whose content was not relevant to the theme, were excluded. The search resulted in 405 publications and of these, 30 were selected. The search, exclusion and selection strategy followed the PRISMA recommendations. Results: The benefits of breastfeeding for the baby mainly include the prevention of future illnesses, while for the mother there is a reduction in the risk of developing breast and uterine cancer, in addition to strengthening the mother-child bond, with reciprocal benefit. The main causes found for early weaning were nipple trauma caused by inadequate handling, lack of information about the use of teats and pacifiers, need to return to work and lack of family support, in addition to lack of knowledge about the early introduction of other foods. Conclusions: An educational investment is necessary for the effective guidance of pregnant women, especially in primary care, aiming at mother-infant promotion and protection.   Si bien la lactancia materna es fundamental, el destete precoz se ha dado con mucha frecuencia debido a las diversas barreras que encuentra la madre en este momento. Metas: Identificar las principales barreras para la lactancia materna y las complicaciones asociadas al destete precoz. Métodos: Esta es una revisión bibliográfica que buscó artículos en las bases de datos de MEDLINE/PubMed, SciELO, la Biblioteca Virtual en Salud y la Sociedad Brasileña de Pediatría. Se utilizaron los siguientes descriptores: “lactancia materna”; "dificultades en la lactancia"; "importancia de la lactancia materna"; "destete temprano". Los criterios de inclusión incluyeron artículos publicados entre enero de 2015 y diciembre de 2022, sin restricción de idioma. Se excluyeron artículos duplicados o cuyo contenido no era relevante. La búsqueda resultó en 405 publicaciones, de las cuales se seleccionaron 30. La estrategia de búsqueda, exclusión y selección siguió las recomendaciones PRISMA. Resultados: Los beneficios de la lactancia materna para el bebé incluyen principalmente la prevención de futuras enfermedades. Para la madre, reduce el riesgo de desarrollar mama y cáncer de útero, además de fortalecer el vínculo madre-hijo, con beneficios recíprocos de reincorporación al trabajo y falta de apoyo familiar, además del desconocimiento sobre la introducción temprana de otros alimentos. Conclusiones: Es necesaria una orientación eficaz de las gestaciones principalmente en la atención primaria, con el objetivo de la promoción y protección de las madres y los niños.  Embora o aleitamento materno seja primordial para o desenvolvimento humano, o desmame precoce tem ocorrido com grande frequência devido a diversas barreiras encontradas pela mãe nesse momento. Objetivos: Identificar as principais barreiras na amamentação e complicações associadas ao desmame precoce. Métodos: Trata-se de uma revisão de literatura com busca de artigos nas bases do MEDLINE/PubMed, SciELO, Biblioteca Virtual em Saúde (BVS) e Sociedade Brasileira de Pediatria (SBP). Utilizou-se os descritores MeSH:“breastfeeding”; “breastfeeding difficulties”; “importance of breastfeeding”; “early weaning”. Os critérios de inclusão abrangeram artigos publicados entre janeiro de 2015 e dezembro de 2022, sem restrição de idioma. Foram excluídos os artigos duplicados, ou cujo conteúdo não apresentava pertinência com o tema. A busca resultou em 405 publicações e destas, foram selecionadas 30. A estratégia de busca, exclusão e seleção seguiu as recomendações do PRISMA. Resultados: Os benefícios do aleitamento materno para o bebê compreendem principalmente a prevenção de doenças futuras, enquanto para a mãe há redução no risco para desenvolvimento do câncer de mama e de útero, além de fortalecer o vínculo mãe-filho, com benefício recíproco. As principais causas encontradas do desmame precoce foram traumas mamilares ocorridos por pega inadequada, falta de informações sobre uso de bicos e chupetas, necessidade de retorno ao trabalho e o não apoio familiar, além do desconhecimento sobre a introdução precoce de outros alimentos. Conclusões: Torna-se necessário um investimento educacional para a efetiva orientação de mulheres gestantes, principalmente na atenção primária, visando promoção e proteção materno-infantil.  Introdução: Embora o aleitamento materno seja primordial para o desenvolvimento humano, o desmame precoce tem ocorrido com grande frequência devido a diversas barreiras encontradas pela mãe nesse momento. Objetivos: Identificar as principais barreiras na amamentação e complicações associadas ao desmame precoce. Métodos: Trata-se de uma revisão de literatura com busca de artigos nas bases do MEDLINE/PubMed, SciELO, Biblioteca Virtual em Saúde (BVS) e Sociedade Brasileira de Pediatria (SBP). Utilizou-se os descritores MeSH:“breastfeeding”; “breastfeeding difficulties”; “importance of breastfeeding”; “early weaning”. Os critérios de inclusão abrangeram artigos publicados entre janeiro de 2015 e dezembro de 2022, sem restrição de idioma. Foram excluídos os artigos duplicados, ou cujo conteúdo não apresentava pertinência com o tema. A busca resultou em 405 publicações e destas, foram selecionadas 30. A estratégia de busca, exclusão e seleção seguiu as recomendações do PRISMA. Resultados: Os benefícios do aleitamento materno para o bebê compreendem principalmente a prevenção de doenças futuras, enquanto para a mãe há redução no risco para desenvolvimento do câncer de mama e de útero, além de fortalecer o vínculo mãe-filho, com benefício recíproco. As principais causas encontradas do desmame precoce foram traumas mamilares ocorridos por pega inadequada, falta de informações sobre uso de bicos e chupetas, necessidade de retorno ao trabalho e o não apoio familiar, além do desconhecimento sobre a introdução precoce de outros alimentos. Conclusões: Torna-se necessário um investimento educacional para a efetiva orientação de mulheres gestantes, principalmente na atenção primária, visando promoção e proteção materno-infantil. Palavras-chave: aleitamento materno; dificuldades da amamentação; desmame precoce

Caspase-1 engagement and TLR-induced c-FLIP expression suppress ASC/caspase-8-dependent apoptosis by inflammasome sensors NLRP1b and NLRC4

The caspase activation and recruitment domain (CARD)-based inflammasome sensors NLRP1b and NLRC4 induce caspase-1-dependent pyroptosis independent of the inflammasome adaptor ASC. Here, we show that NLRP1b and NLRC4 trigger caspase-8-mediated apoptosis as an alternative cell death program in caspase-1(-/-) macrophages and intestinal epithelial organoids (IECs). The caspase-8 adaptor FADD was recruited to ASC specks, which served as cytosolic platforms for caspase-8 activation and NLRP1b/NLRC4-induced apoptosis. We further found that caspase-1 protease activity dominated over scaffolding functions in suppressing caspase-8 activation and induction of apoptosis of macrophages and IECs. Moreover, TLR-induced c-FLIP expression inhibited caspase-8-mediated apoptosis downstream of ASC speck assembly, but did not affect pyroptosis induction by NLRP1b and NLRC4. Moreover, unlike during pyroptosis, NLRP1b- and NLRC4-elicited apoptosis retained alarmins and the inflammasome-matured cytokines interleukin 1 beta (IL-1 beta) and IL-18 intracellularly. This work identifies critical mechanisms regulating apoptosis induction by the inflammasome sensors NLRP1b and NLRC4 and suggests converting pyroptosis into apoptosis as a paradigm for suppressing inflammation

EXPERIÊNCIA DE INTEGRAÇÃO NA FORMAÇÃO EM ENFERMAGEM: ESTÁGIO CURRICULAR SUPERVISIONADO, SAÚDE DO ESCOLAR E EXTENSÃO UNIVERSITÁRIA

Objetivo: Relatar prática educativa sobre gravidez na adolescência realizada com escolares, desenvolvida por meio de integração de Estágio Curricular Supervisionado (ECS) em saúde coletiva, de ações do Programa Saúde na Escola (PSE) e de projeto de extensão universitária. Atividades desenvolvidas em escola pública da região norte do município de Cascavel/Pr. Métodos: Realização de diagnóstico da realidade; elaboração e realização de prática educativa com escolares, os quais foram divididos em grupos de meninas e de meninos, estratégia metodológica que objetivou promover o diálogo e envolver os sujeitos a partir das dúvidas mais singulares. Registro das ações em diário de campo. Resultados: Realizadas oficinas educativas abordando o tema sexualidade e prevenção da gravidez na adolescência, com seis turmas do 7o ano (180 escolares). Os assuntos foram: mudanças no corpo na adolescência; gravidez: fecundação; reflexão sobre a gravidez na adolescência; métodos contraceptivos; principais Infecções Sexualmente Transmissíveis (IST) e Projeto de vida. Os escolares participaram das atividades, fizeram questões e tiraram dúvidas. A atividade sobre o Projeto de vida instigou a reflexão sobre o futuro e muitos dos escolares revelaram que desejam estabilidade financeira e afetiva. Conclusão: A experiência de integração do ECS do curso de Enfermagem, de ações do PSE e de projeto de extensão universitária possibilitou o contato com a realidade e problemas vivenciados por escolares sobre sexualidade/gravidez na adolescência. Percebeu-se que adolescentes possuíam dúvidas quanto à gravidez e suas formas de prevenção e sobre o contágio com IST. Evidenciou-se que adolescentes possuem valores/perspectivas de uma vida futura segura e feliz

PRÁTICAS EDUCATIVAS DE PROMOÇÃO AO USO RACIONAL DE MEDICAMENTOS NA ATENÇÃO PRIMÁRIA À SAÚDE

The rational use of medicines (RUM) is provided for in the National Pharmaceutical Assistance Policy (NPAP) and the National Medicines Policy (NMP), in guaranteeing safe, effective, and quality products. To promote the URM, actions are needed with the population and health professionals in Primary Health Care (PHC) that can have a positive impact on the understanding of these public health policies. This study analyzed health education practices and demands of PHC professionals aimed at promoting RUM. Data collection took place through the application of a self-administered questionnaire to higher education professionals working in PHC in 12 municipalities belonging to the 27th Health Region of 27th Health Region of Rio Grande do Sul (RS). The study included 67 out of a total of 288 health professionals of higher level, from April to July 2022. There was the identification of successful actions aimed at self-medication, custody, correct disposal of medicines, and the insertion of the pharmaceutical care in PHC care and as weaknesses, the non-recognition of the NPAP and NMP was observed by 39% of the respondents, all from other different professions than pharmacy. It was observed that health professionals participating in this study receive demands related to medications in their work routine, which requires recognition of these public health policies. Of the research participants, 57% declared that they had never participated in Permanent Health Education (PHE) actions on the promotion of URM. The research showed there is a need to insert the RUM theme in the PHE agenda of the surveyed places, aiming at building the qualification of health care for the implementation of the NPAP and the NMP and, in a transversal way, the RUM. It is proposed that investigations continue in other locations, considering different social actors to expand analyzes on this topic.O uso racional de medicamentos (URM) está previsto na Política Nacional de Assistência Farmacêutica (PNAF) e na Política Nacional de Medicamentos (PNM), na garantia de produtos seguros, eficazes e com qualidade. Para promover o URM são necessárias ações com a população e profissionais de saúde da Atenção Primária à Saúde (APS) que possam repercutir positivamente na compreensão destas políticas públicas de saúde. Este estudo analisou práticas e demandas de educação em saúde dos profissionais da APS voltadas à promoção do URM. A coleta de dados ocorreu por meio de aplicação de questionário autoaplicável a profissionais de nível superior que atuam na APS em 12 municípios pertencentes à 27ª Região de Saúde do Rio Grande do Sul. Participaram do estudo 67 de um total de 288 profissionais de nível superior, no período de abril a julho de dois mil e vinte e dois. Houve identificação da realização de ações exitosas voltadas à automedicação, guarda, descarte correto de medicamentos e inserção do farmacêutico no cuidado na APS. Como fragilidades identificou-se o não reconhecimento da PNAF e da PNM por 39% dos respondentes, todos de áreas distintas da farmácia. Os profissionais de saúde participantes deste estudo recebem demandas relacionadas a medicamentos em sua rotina de trabalho, o que requer o reconhecimento dessas políticas públicas de saúde. Dos participantes da pesquisa, 57% declararam nunca ter participado de ações de Educação Permante em Saúde (EPS) sobre a promoção do URM. O estudo mostrou a necessidade da inserção do tema do URM na agenda de EPS dos municípios pesquisados, objetivando a construção da qualificação do cuidado em saúde para implantação da PNAF e da PNM e de forma transversal o URM. Sugere-se a continuidade das investigações em outros locais, considerando diferentes atores sociais para ampliar as análises sobre esta temática