Production of a genomic CFTR construct inserted into a human artificial chromosome (HAC) and characterization of its expression

Tese de doutoramento, Bioquímica (Genética Molecular), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010.Cystic Fibrosis is an autosomal recessive disorder, which makes it a good candidate for gene therapy. Thus cystic fibrosis became one of the first targets for gene therapy since apparently it is sufficient to deliver a normal copy of the gene encoding the CFTR protein to the affected cells. Although promising at first, classical gene therapy to cystic fibrosis has not met expectations due to immune response against viral vectors and synthetic vectors, as well as short-term expression of cDNA based transgenes. These hurdles can be overcome by delivering the complete genomic CFTR gene on non-integrating human artificial chromosomes (HACs). Here, we describe the reconstruction of the genomic CFTR locus into one P1-based artificial chromosome (PAC), CF225. This is a nonselectable PAC of 225.3 kb (running from -60.7 kb to +9.8 kb) which resulted from the ligation of two PACs, CF1-Met and CF6, with an optimized M470V codon and a silent XmaI restriction variant to discriminate transgene from endogenous expression. CF225 was shown to be stably maintained and propagated in the E. coli DH10B host. After co-transfection of CF225 with the telomerized, blasticidin-S selectable, centromere-proficient alpha satellite (cen 5) TTE1 construct into HT1080 fibrosarcoma lung cells, CF225 was not incorporated into a de novo HAC in 122 lines analyzed, but five integrants formed, four of which expressed the transgene, as detected by RT-PCR and XmaI restriction analyses. Stability analyses suggest feasibility to pre-fabricate a large, tagged CFTR transgene that stably replicates in the proximity of a functional centromere. Although definite conclusions about HAC proficient construct configurations cannot be drawn at this stage, an important transfer resource was generated and characterized, demonstrating promise of de novo HACs as potentially ideal gene-therapy vector systems.A terapia génica pode ser definida como a introdução de um gene exógeno numa célula receptora para a obtenção de benefícios terapêuticos. Os objectivos a longo prazo dos estudos relacionados com a terapia génica são o desenvolvimento de vectores como ferramentas para o estudo do genoma e da função cromossómica e para transferir genes para as células com fins terapêuticos. A Fibrose Quística é uma doença autossómica recessiva, o que implica que uma única cópia normal do gene CFTR, que codifica a proteína do mesmo nome, é suficiente para restaurar a função CFTR de canal de cloreto ausente em caso de mutação em ambos os alelos CFTR. Estas características tornam a Fibrose Quística um candidato atraente para a terapia génica, visto bastar transferir uma cópia do gene normal para as células afectadas para se obter a cura da doença. Assim, pouco tempo após a descoberta do gene CFTR, em 1989, tiveram início os primeiros esforços no sentido de tornar a terapia génica da Fibrose Quística uma realidade. Contudo, a terapia génica da Fibrose Quística tem como requisitos que o gene terapêutico deva ser expresso em todas as células epiteliais onde normalmente ocorre expressão, de preferência a níveis comparáveis aos do gene endógeno. Além disso, a expressão deverá ser estável e persistente, a fim de ser evitada a readministração repetida do gene terapêutico. A maioria dos vectores utilizados actualmente em terapia génica consiste em cassetes de expressão controlada por promotores heterólogos fortes, frequentemente derivados de vírus. Contudo, descobriu-se que muitos destes transgenes são expressos apenas durante um período de tempo limitado. A capacidade dos vírus para infectar as vias respiratórias fez deles a escolha natural inicial para a terapia génica da Fibrose Quística e muitos dos primeiros estudos foram efectuados com vectores virais derivados de adenovírus. A expressão do gene CFTR é regulada espaciotemporalmente, pelo que a sua estabilidade a longo prazo e expressão regulada de forma tecido-específica requerem não só o promotor e as porções codificantes do gene como também elementos cromossómicos reguladores, tais como os estimuladores e silenciadores, associados aos locais hipersensíveis à DNase I (DHS, na terminologia inglesa). Estes requisitos exigem a utilização de vectores de grande capacidade, como é o caso de vectores cromossómicos, tais como os cromossomas artificiais bacterianos (BACs), os cromossomas artificiais baseados no fago P1 (PACs) e os cromossomas artificias humanos (HACs). Há duas vantagens essenciais dos sistemas baseados em vectores cromossómicos em relação à maior parte dos vectores convencionais usados para transferência génica. Em primeiro lugar, o DNA transferido pode ser mantido estavelmente sem os riscos associados à inserção e, em segundo lugar, podem ser introduzidos grandes segmentos de DNA englobando os genes e os seus elementos reguladores, conduzindo à expressão do transgene mais fiável e fisiológica, mais próxima da do gene normal. Além disso, os vectores cromossómicos constituídos apenas por DNA humano não deverão ser imunogénicos. Tratando-se da Fibrose Quística, o epitélio das vias respiratórias é o alvo mais importante, uma vez que a doença pulmonar é a que contribui principalmente para a morbilidade e a mortalidade. Dado que esta doença, pelo menos nas etapas iniciais, afecta essencialmente as vias respiratórias inferiores, é provável que as células epiteliais destas vias sejam importantes, sendo consideradas por muitos autores como as células alvo apropriadas para a terapia génica da Fibrose Quística. Após a produção do constructo genómico CGT21 que contém aproximadamente metade do locus do gene CFTR e o último exão e da demonstração de que ele era propagado estavelmente em células de sarcoma do pulmão, onde era expresso e sofria splicing correcto (Laner et al., 2005), o passo lógico seguinte era gerar um constructo CFTR genómico portador dos 27 exões e das sequências reguladoras flanqueantes para incorporação num HAC. O objectivo consistia na reconstituição do gene CFTR completo clonado num PAC [o PAC usado neste trabalho foi o pCYPAC2 (Ioannou et al., 1994)] adequado para a preparação em grande escala de DNA de elevada qualidade. Nós descrevemos aqui a construção de um locus CFTR contendo os 27 exões e a maior parte das potenciais regiões reguladoras num só CF PAC. Partindo de preparações de DNA armazenadas em plugs de agarose e previamente caracterizadas (Ramalho et al., 2004), contendo parte do gene CFTR em PACs, nós construímos o PAC CF225, portador do gene CFTR humano com todos os exões e intrões mais sequências reguladoras, ligando dois PACs, CF1-Met e CF6, contendo cada um aproximadamente metade do gene CFTR e regiões flanqueantes: o PAC CF1-Met é portador de um inserto que vai de -60,7 kb a montante do início da tradução no exão 1 até ao intrão 10, e o PAC CF6 é portador de um inserto que vai do intrão 10 até +9,8 kb a jusante (relativamente ao fim da tradução). Devido à escolha dos PACs originais, os intrões 9 e 10 estão substancialmente encurtados em 5,1 kb e 27,1 kb, respectivamente. Como consequência, os locais hipersensíveis à DNase I (DHS) descritos no intrão 10 (McCarthy and Harris, 2005) estão excluídos do locus CF225. Contudo, este clone tem a vantagem de conter o codão da metionina (M) optimizado no locus polimórfico M470V, em comparação com os clones wild type, e uma variante de um local de restrição XmaI silencioso sintético, o qual é adequado para discriminar entre os produtos de RT-PCR do transgene e os provenientes dos loci CFTR endógenos de qualquer célula alvo. A fim de concretizar um dos objectivos do presente trabalho, partimos de três clones PAC, CF1-Met10-43/-44/-54, cujo exão 10 tinha sido modificado para conter metionina (M) em lugar da valina (V) na posição 470, bem como um local de restrição para a enzima XmaI, introduzido por uma mutação silenciosa. O conteúdo destes clones foi sujeito a diferentes análises antes da construção de CF225: 1) amplificações por PCR cujos produtos abarcavam toda a região do exão 10 clonada bem como sequências wild-type localizadas a montante e a jusante, as quais mostraram que os tamanhos dos produtos de PCR estavam de acordo com o esperado nos três clones; 2) sequenciação do exão 10 clonado, que confirmou a orientação correcta, a presença do polimorfismo corrigido V470M e que a sequência nos três clones não possuía qualquer mutação derivada de PCR; 3) análise de restrição, tendo revelado que as bandas esperadas correspondiam aos locais de restrição sintéticos XmaI e NotI; 4) digestão de 1/10 de uma plug de agarose dos três clones CF1-Met com as enzimas de restrição NotI e/ou BssHII também mostrou os tamanhos esperados para os fragmentos obtidos; 5) os tamanhos esperados para as bandas foram demonstrados para os três clones por reacções de PCR de longo alcance (LR-PCR, segundo a terminologia inglesa) de baixo número de ciclos, cobrindo toda a sequência CFTR clonada nos PACs CF1-Met, incluindo a redução de 5,1 kb no intrão 9. Estes dados indicam que os clones continham o inserto completo sem rearranjos. Como a banda de 31,8 kb do subclone CF1-Met10-43 era muito fraca em comparação com os produtos dos outros subclones bacterianos, indicando possivelmente uma alteração em algumas das bactérias usadas na preparação das plugs, o clone correspondente não foi mais usado. Depois de confirmar que a sequência CFTR clonada no PAC CF1-Met tinha a mesma estrutura que a clonada no PAC CF1 original, o passo seguinte era fundir o PAC CF1-Met com o inserto do PAC CF6, o qual é portador do resto da sequência genómica de CFTR com as sequências dos exões e das junções exão/intrão correctas. A estratégia de clonagem foi a seguinte: 1) digestão parcial do PAC CF1- Met (clone 44) com NotI, digestão total de CF6 com NotI seguido por desfosforilação para impedir a recircularização do vector; 2) separação dos produtos de digestão por electroforese em gel de campo pulsado (PFGE, de acordo com a terminologia inglesa) e excisão das bandas do gel sem exposição a UV; 3) electroeluição dos fragmentos de DNA existentes nos pedaços do gel e sua mistura numa razão de ~1/1 (CF1-Met/CF6); ligação do DNA pela ligase T4; 5) electroporação do produto de ligação em E. coli DH10B; 6) selecção, por PCR, das colónias resistentes à kanamicina com os primers CFi10fus/R7, específicos da região de fusão entre os dois PACs. Foi identificado um clone, mais tarde designado por CF225, positivo para a reacção de PCR relativa à região de fusão e para STSs dos exões 4 e 12, presentes nos dois PACs que foram ligados. Após a identificação do clone positivo, o passo seguinte deveria ser a análise da sua estabilidade enquanto clone. Assim, durante o crescimento inicial da cultura mãe das bactérias portadoras do PAC CF225, foram plaqueados doze subclones individuais e analisados por PCR para avaliação da estabilidade da clonagem. Nove dos doze subclones continham os oito STSs testados por PCR e que cobriam o locus em diferentes posições ao longo do gene CFTR, incluindo sequências localizadas a montante do início da transcrição, a região da fusão entre os dois PACs e a região poli (A). Para analisar mais detalhadamente a estabilidade de clonagem, três culturas derivadas de clones individuais do PAC CF225 foram crescidas durante vários períodos de tempo, simulando um rendimento final potencial de 1015, 1021 e 1027 células de E. coli, contendo cada uma até ~10 cópias totalmente replicadas do constructo. A digestão do material contido em plugs de agarose, proveniente das colónias derivadas dos três subclones individuais, mostrou a presença, em todos os casos, de um inserto com o tamanho de 225 kb (SalI) e fragmentos idênticos e com os tamanhos previstos (BssHII), indicando uma estabilidade de clonagem global elevada para o locus. Os dados indicavam também a propagação fiel e estável do locus CFTR no PAC CF225 (inserto de 225,3 kb), demonstrando que o gene CFTR pode ser clonado de forma estável em E. coli. Ainda continuando a análise estrutural do constructo, seguiu-se a sequenciação das suas extremidades, em que o inserto CFTR se liga ao vector. Assim, para determinar os extremos de CF225, foram efectuadas reacções de LRPCR com primers que se ligam nas extremidades 5’ e 3’ da junção inserto/vector. Os fragmentos amplificados foram sequenciados e comparados por meio do programa BLAST com o hg built 37.1 no site NCBI. O locus CFTR reconstruído vai do nucleótido -60651 relativamente ao início da tradução ao nucleótido +9767 relativamente ao final da tradução. Ambas as extremidades coincidem com um local de restrição para Sau3AI, o que está de acordo com o facto de, para a preparação da biblioteca RPCIP704, para a qual foi utilizado o PAC pCYPAC2, que serviu de fonte para a construção de CF225, o DNA genómico ter sido parcialmente digerido e clonado no local BamHI do vector. Como resultado do procedimento da clonagem, CF225 tem duas deleções nos intrões 9 e 10 as quais representam regiões que não estavam incluídas nos PACs originais CF1 (intrão 9) e CF6 (intrão 10) e que foram omitidas pela reconstrução do exão 10 e das suas sequências intrónicas flanqueantes. Para localizar com precisão e determinar a extensão daquelas deleções, foram realizadas reacções de PCR com primers que hibridam em regiões que flanqueiam as duas deleções. Os produtos de PCR foram sequenciados e comparados por meio do programa BLAST com BACs portadores de sequências genómicas humanas publicadas. Ambas as deleções foram localizadas com precisão, tendo a deleção no intrão 9 5058 pb, ao passo que a deleção no intrão 10 tem 27128 pb. Para conseguir a incorporação do locus CFTR num cromossoma humano artificial (HAC, na terminologia inglesa) formado de novo, foram efectuadas experiências de co-transfecção do locus CFTR clonado com um constructo linearizado portador de sequência de DNA alfa-satélite do centrómero e a expressão dos clones celulares obtidos analisada. Quatro ensaios independentes de colipofecção do inserto de 225 kb do PAC CF225 com o constructo TTE1 (fragmento de 133 kb) contendo um gene marcador de resistência à blasticidina S (BS) duplicado e o marcador EGFP, bem como sequências centroméricas, resultaram em 185 clones celulares, 122 dos quais foram expandidos e analisados por PCR com primers específicos para CF225. Cinco clones celulares individuais, BW24, BG32, CG13, DG27 e DG5 eram positivos para a reacção de PCR específica, indicando que apenas 1 em ~25 clones foram co-transfectados em simultâneo com CF225 e TTE1. Foram realizadas reacções de RT-PCR com primers que geram um produto entre os exões 8 e 10 que, após splicing, tem 391 pb e representa uma mistura de produtos dos genes CFTR endógenos da linha celular HT1080 e do locus transgénico. Como resultado destas experiências, verificou-se que quatro (BG32, CG13, DG27 e DG5) das cinco linhas co-transfectadas expressavam o locus transgénico. Todas as linhas que expressavam evidenciavam níveis variáveis de expressão CFTR após 30 dias de crescimento sem selecção. Para distinguir entre a expressão endógena e a do transgene, os produtos de RT-PCR foram clivados com XmaI que digere o exão 10 modificado de CF225 em dois fragmentos de 310 pb e 81 pb. Nas quatro linhas celulares, proporções variáveis do transcripto CFTR resultavam do transgene, o que demonstrava, em muitos casos, níveis de expressão do transgene acima dos dos genes endógenos (cujos produtos de RT-PCR não eram clivados por XmaI) e mostravam a ocorrência de splicing correcto. As linhas celulares que expressavam e as células HT1080 parentais foram analisadas por sequenciação dos produtos de RT-PCR obtidos com os mesmos primers e também com o primer CFc3F (exão 3), demonstrando que todas as linhas continham tanto o polimorfismo 470M como a variante sintética XmaI no exão 10, confirmando que tinham origem no transgene. Para verificar a integridade do constructo CF225 nas linhas celulares clonais, foram realizadas reacções de PCR com primers para a junção vector/CFTR a 5’ e para a junção vector/CFTR a 3’. Das cinco linhas celulares derivadas de HT1080 apenas DG27 manteve a extremidade 5’ de CF225, confirmada pela sequenciação do produto de PCR. Todas as 5 linhas foram negativas para a reacção de PCR relativa à extremidade 3’, bem como para duas outras reacções de LR-PCR que abrangiam aproximadamente 2 kb e 3 kb desde a extremidade 3’ do vector até ao locus CFTR, sugerindo que o DNA de CF225 a 3’ foi perdido em todas as quatro linhas que expressavam. A fim de averiguar se se tinha formado um cromossoma de novo ou se havia ocorrido integração no genoma da célula, foram efectuados ensaios de FISH de tripla cor nestas linhas celulares após 30 dias de crescimento com e sem selecção por BS. Estas análises revelaram ou integração do locus CF225 num cromossoma do hospedeiro ou integração e truncação em todas as cinco linhas celulares clonais. Não se observaram HACs portadores do locus CFTR. A linha clonal DG27 mostrou co-integração estável próximo do gene CFTR endógeno no cromossoma 7. A linha BG32 revelou uma integração distal/telomérica num cromossoma que não o 7. A linha celular DG5 mostrou a integração de sinais de CF1, CF6 e E1 (centrómero) numa posição distal do cr19q e a linha CG13 mostrou integração de porções de CF1 e CF6 no braço p de um cromossoma metacêntrico que não o 7, acompanhada por truncação. Na linha celular BW24 apenas foram detectadas sequências de CF6 num pequeno cromossoma truncado. No geral, podemos concluir que CF225 e o centrómero E1 não formaram eficientemente em conjunto uma estrutura de replicação estável. Em vez disso, foram seleccionados raros clones estáveis que continham pelo menos o marcador BS e várias porções do locus CF225 sem a extremidade 3’, que todavia mostraram expressão e splicing correcto da sequência do exão 10 em 4 das 5 linhas obtidas. No presente trabalho foram também feitas tentativas de construção de um HAC de novo (pré-fabricado) por uma abordagem de recombinação in vitro por meio de digestão enzimática e ligação, seguida de electroporação em E. coli, de um constructo portador do locus CF225 e de TTE1, contendo sequências de DNA centromérico. Escolheu-se uma abordagem de recombinação in vitro para a construção porque esta técnica é mais reprodutível e menos propensa a rearranjos do que as abordagens de recombinação in vivo. Não foi possível obter o HAC préfabricado e é sugerida uma estratégia para uma futura obtenção do mesmo. A produção de um HAC de novo, com todas as vantagens que este tem sobre os vectores virais, é muito importante para o desenvolvimento de uma terapia génica de sucesso para o tratamento da Fibrose Quística. Este trabalho representa mais um passo em frente no sentido de tornar a terapia génica para a Fibrose Quística uma realidade e os resultados obtidos aqui deixam antever a possibilidade de criação de um cromossoma artificial humano portador do gene CFTR e respectivas sequências reguladoras o qual representaria um vector ideal e uma promessa de cura para a Fibrose Quística, independentemente da mutação causadora de doença.Fundação para a Ciência e Tecnologia do Ministério da Ciência, Tecnologia e Ensino Superior (FCT), (SFRH/BD/17912/2004); Centro de Investigação BioFIG (Center for Biodiversity, Functional & Integrative Genomic

Relacionamento com fornecedores de materiais e prestadores de serviços importantes para o sistema de gestão da qualidade

Orientador: Joel Souza e SilvaMonografia (Especialização) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Sociais Aplicadas, Curso de Especialização em Gestão da Qualidad

A adoção das IPSAS pela 1ª vez no Setor Público Português: estudo de caso: distrito de Lisboa

Dissertação apresentada para cumprimento dos requisitos necessários à obtenção do grau de Mestre em Contabilidade e FinançasPara que possa existir harmonização dos sistemas contabilísticos, de acordo com as International Public Sector Accounting Standards (IPSAS), torna-se necessária a adoção de um conjunto de normas de contabilidade com base no acréscimo em todos os níveis da Administração Pública. O International Public Sector Accounting Standards Board (IPSASB) tem vindo a desenvolver esforços com vista à harmonização mundial da contabilidade para o setor público. A União Europeia (UE) tem manifestado o apoio a esta iniciativa, tendo já emitido orientações para que os Estados membros adaptem a contabilidade do setor público às IPSAS. O objetivo do presente estudo consiste na verificação do eventual impacto da aplicação das IPSAS no Setor Público Português. Analisa-se as alterações ao nível dos ativos fixos tangíveis, especificamente, dos Bens de Domino Público (BDP) pelo peso significativo que detêm no ativo da maioria das entidades públicas. Aborda-se as alterações que advêm desta implementação e os reflexos nas demonstrações financeiras dos organismos. Adota-se o método do estudo de caso descritivo, uma vez que são descritas e analisadas as demonstrações financeiras da entidade em estudo. Utiliza-se como técnica de investigação a entrevista semiestruturada. Verifica-se que os resultados obtidos coincidem com a literatura (por exemplo, Teixeira e Mata, 2013) analisada, onde se verifica que os BDP detêm um peso muito significativo na maioria dos organismos públicos em Portugal, apontam ainda para o facto de as IPSAS não poderem ser simplesmente aplicadas tal como estão a toda a Administração Pública e que, no entanto, constituem uma referência incontornável para o estabelecimento das contas harmonizadas no Setor Público.Abstract: In order to accomplish the harmonization of accounting systems, according to the Public Sector Accounting Standards, it is necessary to adopt a set of accounting standards accrual based in all levels of public administration. The International Public Sector Accounting Standards Board (IPSASB) has been developing efforts towards global harmonization of accounting for the public sector. The European Union (EU) has expressed support to this initiative, and has already issued guidelines for member states to adapt public sector accounting to International Public Sector Accounting Standards (IPSAS). The aim of this study is to evaluate the possible impact of the application of (IPSAS) in the Portuguese Public Sector. We analyze changes at tangible fixed assets level, specifically at the heritage assets level, because of the significant weight they hold in the assets of most public entities. We address changes that come from this implementation and the reflections in financial statements of public entities. We adopt the descriptive case study method as we describe and analyze the financial statements of the entity under study. We use the semi-structured interview as a research technique. We notice that the results obtained coincided with those found in the performed literature review, as they pointed out that IPSAS cannot be simply applied as they are to all public administration, and that, however, they are a major reference for the establishment of harmonized accounts in the Public Sector

Satisfação do cuidador/Educação para a Saúde

Dissertação de Mestrado, Gerontologia Social, 27 de abril de 2012, Universidade dos Açores.Numa população cada vez mais envelhecida, em que há um aumento da necessidade de apoio às pessoas idosas surge a interrogação se o apoio prestado pelos enfermeiros de Cuidados de Saúde Primários está a promover a Educação para a Saúde dos cuidadores informais. Pretendeu-se com este trabalho avaliar o grau de satisfação dos cuidadores informais quando sujeitos a Educação para a Saúde em contexto domiciliário, bem como verificar a existência de relação entre esta e as características sócio demográficas dos mesmos e dos idosos, descrever os focos mais abordados nas sessões de Educação para a Saúde, e analisar a relação destes com a satisfação. Os enfermeiros são os profissionais de saúde que estão em melhores condições para desempenhar o papel de educadores para a saúde porque conhecem bem a problemática dos cuidadores de pessoas idosas dependentes pois lidam diariamente com eles e são muitas vezes vistos como o primeiro recurso para estes cuidadores em situações de necessidade de cuidados de saúde. Este tipo de relação é, por sua vez, um veículo da afectividade gerada entre o enfermeiro e a díade pessoa idosa dependente/ cuidador informal, imprescindível numa relação pedagógica (já que a construção do conhecimento de cada indivíduo se faz com base na afectividade/emoções que estabelece com os outros). Este estudo situa-se no paradigma quantitativo, sendo de natureza descritiva exploratório. Para a recolha de dados foi utilizada uma amostra não probabilística constituída por 113 cuidadores informais de idosos dependentes. Utilizou-se como instrumento de colheita de dados, o formulário. Das conclusões emergiu que a maioria dos cuidadores está satisfeito ou muito satisfeito com os cuidados de enfermagem, apresentando valores muito elevados de satisfação, no entanto, não existe relação com a Educação para a Saúde pois esta por si só não é motivo de visita domiciliária, ou seja, nenhum caso ocorre efectivamente com o objectivo de ensino. O ensino surge em alguns casos como complemento de um cuidado técnico realizado pelos enfermeiros. Relativamente à satisfação com os cuidados de enfermagem, podemos constatar que a qualidade na assistência, envolvimento do utente e promoção do elo de ligação são os itens em que os cuidadores estão mais satisfeitos. Havendo uma grande lacuna na informação dos recursos e formalização da informação.ABSTRACT: In a population each aged time more, where it has an increase of the necessity of support to the aged people appears the interrogation if the support given for the nurses of Primary Cares of Health is to promote the Education for the Health of the informal caregivers. The Education for the Health in home context was intended with this work to evaluate the degree of satisfaction of the informal caregivers when citizens, as well as verifying the demographic existence of relation between this and characteristics partner of the same ones and the aged ones, describing the focus most boarded in the sessions of Education for the Health, and to analyze the relation of these with the satisfaction. The nurses are the health professionals who are in better conditions to play the role of educators for the health because they know the problematic one of the informal caregivers of dependent aged people well therefore deal daily with them and are many seen times as the first resource for these informal caregivers in situations of necessity of cares of health. This type of relation is, in turn, a vehicle of the affectivity between the nurse and dyad elderly dependent informal, essential informal caregivers in a pedagogical relation (since the construction of the knowledge of each individual if makes the affectivity on the basis of/emotions that establish with the others). This study it is placed in the quantitative paradigm, being of exploratory descriptive nature. For the retraction of data a not probabilistic sample consisting by 113 informal caregivers of aged dependents was used. It was used as instrument of harvest of data, the form. Of the conclusions it very emerged that the majority of the informal caregivers is satisfied or very satisfied with the cares of nursing, presenting raised values of satisfaction, however, does not exist relation with the Education for the Health therefore this by itself is not reason of home nursing that is, none in case that it occurs effectively with the objective of education. Education appears in some cases as complement of a care technician carried through for the nurses. Relatively to the satisfaction with the cares of nursing, we can evidence that the quality in the assistance, involvement of the usury and promotion of the connector link are the item where the informal caregivers are more satisfied. Having a great gap in the information of the resources and formalization of the information

A abordagem de conteúdos programáticos na disciplina e inglês através da internet: estudo de caso

Mestrado em Multimédia em EducaçãoTomando como ponto de partida uma reflexão inicial sobre a utilização das TIC em contexto educativo e sobre as razões mais frequentes para justificar o seu fraco uso, pretende-se defender a ideia de que a sua efectiva inserção no trabalho escolar é fundamentalmente uma questão pedagógica e que pode ser melhorada através da mudança de atitude dos professores relativamente à utilização da Internet na abordagem de conteúdos programáticos na disciplina de Inglês. Uma questão que passa sobretudo pela sensibilização dos professores de forma a usufruírem destas novas ferramentas de aprendizagem, fazendo delas uma autêntica mais valia na prossecução dos objectivos perseguidos pelos alunos, ou seja, o sucesso escolar. Para isso, optámos por focalizar a nossa investigação num estudo de caso a decorrer na escola onde leccionamos, através de um questionário realizado a 23 professores de Inglês do ensino secundário e pela observação directa dos alunos. Os resultados parecem indicar que os professores consideram as TIC vantajosas para o ensino do Inglês mas pouco as utilizam com os alunos. Frequentam bastantes acções de formação nesta área, mas de âmbito generalista. Poucos têm formação na utilização das TIC na aula de Inglês. Sugere-se, por isso, a realização de acções de formação que permitam aos professores planificar as suas actividades pedagógicas com recurso à Internet.Building on a discussion on the use of ICT in educational contexts and the most frequent reasons to justify its low use, it is intended to defend the idea that their effective integration into the school work is fundamentally a pedagogical issue that can be improved by the change in teachers’ attitudes on the use of the Internet in addressing programmatic contents in the English subject. It is an issuethat asks for the teachers’ awareness in order to enjoy these new learning tools, making them a more authentic value in pursuing the students’ aims, namely their success. For this, we have decided to focus our investigation in a case study taking place in our school, conducted through a questionnaire to 23 secondary education teachers of English, and the direct observation of students. The results suggest that teachers consider ICT advantageous to teach English but they do not use them regularly with students. They attend numerous training courses in this area, but in a general context. Few have been trained in the use of ICT in English lessons. It is suggested, therefore, the offer of teacher education programmes to enable teachers to plan their educational activities using the Internet

The role of management accounting systems in public hospitals and the construction of budgets

The role of management accounting systems (MAS) in the construction of budgets in the public health sector has been one of the least studied topics in the international literature. Furthermore, several studies have confirmed the loss of relevance of traditional approaches to budgeting due to the need to implement techniques that are more output and performance-oriented. Since public hospitals are organisations that depend significantly on public funds, with substantial impacts on governments’ budgets, the pressure for reducing expenditures is strong, causing increased difficulties in hospital management, which is becoming more and more complex every day. In order to analyse the role of MAS in the preparation of budgets in public hospitals, this chapter presents a literature review on this topic. This review allows to conclude that the implementation of different kinds of budgeting is heavily influenced by governments and professionals. Nevertheless, the research on this topic is still very scarce, evidencing the need to continue studying.(undefined

Educar (n)a conjugalidade : variáveis psicossociais na promoção do ajustamento diádico, da qualidade relacional e do bem-estar pessoal

Tese de doutoramento, Psicologia (Psicologia da Educação), Universidade de Lisboa, Faculdade de Psicologia, 2015The central theme in this dissertation consists of a number of psychosocial variables which have a potential impact on the personal and relational well-being of individuals in a couple relationship. Considering that a successful couple relationship is a significant component of most individuals' life plans, the main goal of this thesis was to expand the knowledge on the promotion of optimal dyadic functioning, from a proactive perspective, deeming the latter as intrinsically important, and not merely an adjunct to disturbance and rupture prevention. Considering a vast body of scientific research and literature on the effects of family stability versus family fragmentation, a growing public and private interest has emerged in other countries, particularly over the last decade, in helping couples construct and maintain strong and healthy conjugal relationships. Such is not the case in Portugal, hence, through an innovative approach, we set out to identify a set of pro-relationship processes and to enable the development of a marriage education program, as a theoretical and empirically based intervention. The conceptual perspectives of Marriage Education and Positive Psychology underlie the seven empirical studies presented herein, and the final proposal of a range of guidelines regarding proactive and preventive intervention with couples. By means of a mixed exploratory approach (document analysis, qualitative and quantitative data) and based on the perspectives of both married and cohabiting individuals, the main focus of analysis was on conjugal relationships in their first ten years, precisely those considered to be the most difficult and demanding years in love committed relationships. The results highlight several dimensions that are relevant to couples’ relational experience, which are consistent with existing research, but also innovative in some cases. Commitment, conjugal prospective coping (as a way of coping based on resourcefulness, responsibility and vision regarding the relationship), savoring strategies (as emotion regulation processes moderating the effect of positive events on positive feelings) and dyadic coping (referring to the interplay between the stress signals of one partner and the coping reactions of the other) may be deemed important dimensions within the couplehood context. As a result of this reflection on the data and literature, the marriage education program “Ties that bind us” [Nós e os laços, in the original xvi version] aims to be a useful resource in contributing to the development of stable and satisfying couple relationships.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, SFRH/BD/70789/2010); Fundo Social Europeu (FSE), QREN (Quadro de Referência Estratégico Nacional 2007-2013), POPH (Programa Operacional Potencial Humano

(Os) nós e os laços : vinculação, suporte social e bem-estar em jovens adultos

Tese de mestrado em Psicologia (Stress e Bem-Estar: intervenção na família, na escola e no trabalho), apresentada à Universidade de Lisboa através da Faculdade de Psicologia e de Ciências da Educação, 2008Enquadrados pelo Modelo Ecológico de Desenvolvimento Humano (Bronfenbrenner, 1979, 2000) e partindo da Teoria da Vinculação (Bowlby, 1969, 1980), alargada a todo o ciclo de vida, quisemos compreender as relações entre a vinculação aos pais, a vinculação aos pares, o suporte social percebido e os níveis de bem-estar psicológico e subjectivo numa população de jovens adultos. A amostra é constituída por 200 sujeitos com idades entre 18 e 25 anos de ambos os sexos. Os instrumentos utilizados são: Questionário de Vinculação ao Pai e à Mãe (versão revista; Matos & Costa, 2001), Escala de Vinculação do Adulto (Canavarro, 1995), Escala de Provisões Sociais (Moreira, 1996), Escala de Bem-estar Psicológico (Novo, Duarte Silva & Peralta, 2004), Escala de Satisfação com a Vida (Diener et al, 1985; Neto, 1993) e Inventário de Afectividade Positiva e Negativa (Moreira, 1998). Todos os instrumentos se encontravam, à partida, devidamente estudados e adaptados para a população portuguesa, tendo os resultados provenientes da análise da sua fiabilidade na presente investigação (alphas de Cronbach, correlações inter-itens e item-total) oferecido garantias para a utilização dos dados. Os resultados indicam que a dimensão da inibição da exploração e individualidade é, relativamente a ambos os progenitores, a que mais fortemente se relaciona com o estabelecimento da vinculação na idade adulta. Observamos correlações, embora baixas, da qualidade do laço emocional à Mãe com as dimensões positivas da vinculação adulta, assim como da vinculação a ambos os pais (com excepção para a ansiedade de separação e dependência) com a percepção do suporte social. Esta correlaciona-se negativamente com uma vinculação ansiosa aos pares. Exceptuando a dimensão ansiedade de separação e dependência, verificamos que a vinculação aos pais, a vinculação aos pares e a percepção do suporte social se correlacionam de modo significBased on Bronfenbrenner's Ecological Model of Human Development (1979, 2000), and beginning with Attachment Theory (Bowlby, 1969, 1980) widespread to the entire life cycle,we intended to understand the relations among attachment to parents, attachment to peers, the perceived social support and the levels of psychological and subjective wellbeing in a population of young adults. The sample consisted in 200 subjects aged from 18 to 25 years old from both genders. The instruments used were: Questionário de Vinculação ao Paie à Mãe The Father/Mother Attachment Questionnaire (revised version; Matos & Costa,2001), Escala de Vinculação do Adulto Adult Attachment Scale (Canavarro, 2005), Escala de Provisões Sociais Social Provisions Scale (Moreira, 1996), Escala de Bem-estar Psicológico Psychological Well-Being Scale (Novo, Duarte Silva & Peralta), Escala de Satisfação com a Vida Satisfaction With Life Scale (Diener et al, 1985; Neto, 1993) and Inventário de Afectividade Positiva e Negativa Positive and Negative Affect Inventory (Moreira, 1998). All instruments had been studied and are adapted to the Portuguese population, having the outcomes of the assessment of their reliability in the present investigation (Cronbach's alphas, inter items and item-total correlations) offered guarantees for the use of the obtained data. The results evidenced that individuality and exploration inhibition is, in both parents, the most strongly related with the establishment of attachment in adulthood. We observed positive correlations, although small, between quality of the emotional bond to the mother and the positive dimensions of adult attachment as well as between attachment to both parents (with the exception of separation anxiety and dependency) and social support perception. This one correlates negatively with an anxious attachment to peers. With the exception of dimension separation anxiety and dependency, we verify that attachment t

Auto-conceito / auto-estima e vinculação nas relações de namoro em estudantes do ensino secundário

Comunicação apresentada no VII Simpósio Nacional de Investigação em Psicologia realizado na Universidade do Minho em Fev. 2010.As relações de namoro, enquanto relações de vinculação, assumem uma importância fulcral no processo de desenvolvimento, com implicações no auto-conceito e na auto-estima. Este estudo visa avaliar o auto-conceito e auto-estima dos adolescentes, bem como a sua relação amorosa numa perspectiva de vinculação. Pretendemos igualmente analisar a relação entre estas variáveis e dados de caracterização sócio-demográfica e da relação de namoro. A amostra é constituída por 149 estudantes do 10.º, 11.º e 12.º anos. Recorreu-se à Escala de Auto-Conceito e Auto-Estima (Peixoto & Almeida, 1999) para a avaliação do auto-conceito e da auto-estima. Para estudar as representações da vinculação de adolescentes ao par romântico utilizou-se o Questionário de Vinculação Amorosa (QVA) (Matos & Costa, 2001). Os dados obtidos permitiram constatar a existência de diferenças em dimensões específicas do auto-conceito em função do sexo dos estudantes. Verificaram-se associações significativas entre aspectos específicos do auto-conceito e a vinculação ao par romântico