Isolation of the Six-Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate 1 (STEAP1) using Gellan Gum Microspheres

Prostate cancer is one of the most frequent cancers diagnosed in males, predicted to become the most prevalent malignancy in upcoming years. Current therapies have limited efficacy and are not suitable to mitigate the alarming incidence and mortality rates, especially in later hormone-refractory stages. In this manner, it is crucial the development of novel approaches. Six-Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate 1 (STEAP1) is a protein highly overexpressed in PCa predicted to function as a transmembrane transporter and ionic channel, to play a role in intercellular communication between tumor cells and has been associated with the generation and propagation of high levels of reactive oxygen species. Consequently, STEAP1 leads to increased cellular proliferation and tumor aggressiveness. Furthermore, STEAP1 is mostly absent from normal tissues, suggesting a specificity for the cancer microenvironment, indicating that STEAP1 could have potential as a biomarker and therapeutic target. However, to explore this potential it is first necessary to isolate stable, bioactive and pure protein fractions of high concentration. Thus, we prepared calciumand nickel-crosslinked gellan gum microspheres through a water-in-oil emulsion with 1.41% (w/v) gellan at 750 rpm and 100ºC. The microspheres were characterized trough FTIR, SEM and EDX, ensuring adequate size, morphology, and crosslinking. The microspheres were used to capture STEAP1 solubilized in 0.1% (v/v) DM derived from Komagataella pastoris X33 Mut+ mini-bioreactor lysates using two different approaches, exploring ionic and affinity interactions. The ionic strategy presented the best results and consisted of STEAP1 capture in 10 mM MES buffer at pH 6.2. The target was then eluted by electrostatic repulsion with 10 mM Tris supplemented with 500 mM NaCl at pH 11. These optimized conditions allowed the recovery of STEAP1 in a single step, eliminating heterologous proteins in intermediary steps. The clarified fraction was polished by coupling with a Co-immunoprecipitation step. This technique was able to decomplex STEAP1-gellan gum complexes formed during the batch clarification. This innovative integration results in a monomeric STEAP1 fraction with high purity degree.O cancro da próstata é um dos cancros mais frequentemente diagnosticados no sexo masculino, prevendo tornar-se a neoplasia maligna mais prevalente nos próximos anos. As terapias atuais têm eficácia limitada e não são suficientemente adequadas para mitigar as alarmantes taxas de incidência e mortalidade (aproximadamente 1.4 e 0.38 milhões, respetivamente) especialmente em fases mais avançadas não responsivas a tratamento hormonal. Desta forma, é crucial o desenvolvimento de novas abordagens de diagnóstico e terapêuticas. A Six-Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate 1 (STEAP1) é uma proteína sobre-expressa no cancro da próstata, funcionando como um transportador transmembranar e canal iónico e desempenhando um papel na comunicação intercelular entre células tumorais. Adicionalmente, esta proteína foi associada com elevados níveis celulares de espécies reativas de oxigénio. Consequentemente, a sobre-expressão de STEAP1 leva ao aumento da proliferação celular e agressividade do tumor. Além disso, a STEAP1 está maioritariamente ausente em tecidos normais e órgãos vitais, sugerindo uma especificidade para o microambiente tumoral, indicando que esta proteína membranar pode ser considerada um potencial biomarcador e alvo terapêutico. No entanto, para explorar esse potencial, é necessário isolar frações de STEAP1 estáveis, bioativas e puras em concentrações elevadas. Atualmente, a principal limitação dos bioprocessos de natureza recombinante está relacionada com a fase de downstream, sendo que estas etapas contabilizam aproximadamente 80% dos custos totais. As etapas cromatográficas efetuadas em modo sequencial na purificação de STEAP1 não produzem rendimentos apropriados para a cristalização desta proteína e consequentemente promover a determinação da estrutura 3D e o desenvolvimento estudos de biointeração com antagonistas emergentes. Assim, o método batch surge como uma alternativa, considerando que é um método largamente aplicado na indústria, sendo capaz de combinar as etapas de clarificação, concentração e purificação primária de proteínas numa única etapa. Paralelamente, este método é simples, rápido e de baixo custo. A goma gelana é um exopolissacarídeo aniónico que tem a capacidade de formar géis termorreversíveis na presença de catiões divalentes. Desde a sua descoberta, este polímero foi aplicado com sucesso na indústria alimentar, farmacêutica e biotecnológica. Recentemente, foi demonstrada a aplicabilidade da gelana como matriz cromatográfica, devido a ser um polímero poroso, hidrofílico e possuir elevada capacidade de ligação. Este conceito foi também aplicado na formulação de microesferas de gelana para a captura de proteínas solúveis e pDNA. Assim, o principal objetivo deste trabalho foi desenvolver e otimizar um método de batch utilizando microesferas de gelana para a captura de STEAP1, uma proteína transmembranar, diretamente de um lisado bruto de Komagataella pastoris X33 Mut+. Para atingir este objetivo, as microesferas de gelana foram preparadas através do método de emulsão água-em-óleo pela extrusão de uma solução de 1.41% de gelana previamente aquecida a 90ºC sobre uma solução de óleo a 750 rpm e 100ºC. As microesferas foram reticuladas com cálcio e níquel, correspondendo aos tipos de estratégias iónica e de afinidade exploradas no batch, respetivamente. As microesferas foram caracterizadas relativamente ao diâmetro médio (microscopia semiótica), à morfologia (SEM) e composição química (FTIR e EDX). Os resultados obtidos demonstram que as microesferas apresentam uma morfologia esférica com uma estrutura uniforme e consistente, com tamanhos médio de 239.06 µm (níquel) e 330.37 µm (cálcio). O EDX demonstrou uma maior percentagem de integração de níquel, quando comparado com microesferas de gelana reticuladas com cálcio, justificando o menor tamanho destas microesferas pela formação de uma rede tridimensional mais compacta. Os espectros de FTIR juntamente com as percentagens iónicas obtidas por EDX demonstram o sucesso da etapa de reticulação. Em relação ao batch, várias otimizações foram realizadas visto que a STEAP1 apresentou alguma tendência de formar complexos estáveis com a gelana. Inicialmente, foi demonstrado que o detergente DM, a uma concentração de 0.1% (v/v), permitiu a solubilização mais eficaz e, por conseguinte, maior grau de recuperação de STEAP1. Posteriormente, a concentração ideal de lisado a injetar na matriz de gelana, correspondeu a ~7 mg de proteína total/mL, ou seja, uma diluição de 1:6 (concentração de lisado bruto de ~43 mg/mL) por cada produção de batch. Por último, verificou-se que 35 mL de microesferas de gelana para 6 mL de tampão é o rácio ideal a utilizar no método de captura em modo batch. As microesferas reticuladas com níquel foram utilizadas para a estratégia de afinidade. Surpreendentemente, a pH 9.2 foi possível ligar a totalidade de STEAP1 explorando a afinidade da sua cauda de histidinas aos iões de níquel presentes na superfície das microesferas de gelana. No entanto, no método de batch a STEAP1 provou ser sensível mesmo a modestas concentrações de imidazole e não foi possível recuperar a proteína alvo numa única fração. Contrariamente, as microesferas de cálcio utilizadas na estratégia iónica produziram resultados mais encorajadores. De facto, a STEAP1 liga totalmente a pH 6.2 em 10 mM MES e elui numa única fração na presença de 500 mM NaCl a pH 11 em 10 mM Tris. No entanto, não foi possível eliminar totalmente a formação de complexos STEAP1-gelana, mesmo com a implementação de várias etapas de otimização, nomeadamente, solubilização, concentração de lisado, rácio de microesferas e nas etapas do batch, bem como das suas respetivas concentrações de NaCl. Para descomplexar a STEAP1 da gelana, as frações recuperadas do batch iónico foram acopladas a uma etapa de polimento de co-imunoprecipitação, descomplexando os agregados STEAP1-gelana que resultaram numa fração de STEAP1 na forma monomérica (~35 kDa) de elevado grau de pureza. Desta forma, demonstramos uma integração inovativa baseada no método de batch de gelana com uma etapa de coimunoprecipitação que resulta na captura, clarificação e purificação de STEAP1

PESQUISA EM EDUCAÇÃO: o contributo da pesquisa epistemológica para construção do objeto de pesquisa

Silvio Sánchez Gamboa é graduado em Filosofia pela Universidade de San Buaventura, possui mestrado em Educação pela Universidade de Brasília e doutorado em Educação pela Universidade Estadual de Campinas. Publicado pela editora Argos em 2018 com um volume de 187 páginas, seu livro “Pesquisa em educação: métodos e epistemologias” reúne uma série de publicações produzidas ao longo da trajetória científica e acadêmica do autor. Em suma, a obra é direcionada para aqueles leitores que pretendem se aventurar pelo uso da “pesquisa epistêmica”, ou “pesquisa das pesquisas”. Este tipo de pesquisa transcende a mera visão reducionista e técnica das produções cientificas para se aprofundar nas lógicas implícitas na articulação dos diversos elementos constitutivos da investigação científica, tais como: técnicas, métodos, teorias, e pressupostos epistemológicos, gnosiológicos e ontológicos

GAMIFICAÇÃO NA SALA DE AULA: AVALIAÇÃO DA MOTIVAÇÃO UTILIZANDO O QUESTIONÁRIO ARCS

Resumo: Este artigo apresenta um recorte de uma pesquisa de pós-graduação stricto sensu. Seu objetivo é investigar a qualidade da motivação proporcionada pela gamificação nas aulas de óptica geométrica, um ramo da Física. Com relação aos aspectos metodológicos, foi realizado um estudo de caso com 16 alunos. Para avaliar a motivação, foi utilizada a Escala de Motivação de Materiais Instrucionais (IMMS), proposta por John Keller no modelo de motivação ARCS (Atenção, Relevância, Confiança e Satisfação). Os resultados mostraram uma alta porcentagem de concordância nas quatro categorias, revelando que os alunos se mostraram mais autoconfiantes, por perceber que estavam progredindo pelo seu próprio esforço, e se sentiram satisfeitos por concluírem as missões propostas. Isto posto, é possível concluir que a gamificação da sala de aula forneceu evidências empíricas suficientes para atestar que sua implementação motivou os alunos.Palavras-chave: Gamificação; Motivação; ARCS; Ensino de Física. Abstract: This article presents a research cut of a stricto sensu postgraduate. Its purpose is to investigate the quality of motivation provided by gamification in geometric optics classes, a branch of Physics. Regarding the methodological aspects, a case study was carried out with 16 students. In assessing motivation, the Instructional Materials Motivation Scale (IMMS), proposed by John Keller in the ARCS motivation model (Attention, Relevance, Confidence, Satisfaction), was used. The results showed a high percentage of agreement in the four categories, revealing that the students were more self-confident, as they realized that they were progressing through their own effort, and were satisfied with completing the proposed missions. That said, it is possible to conclude that the gamification of the classroom provided sufficient empirical evidence to attest that its implementation motivated the students.Keywords: Gamification; Motivation; ARCS; Physics education

A INFLUÊNCIA DE JEAN PIAGET NAS PESQUISAS DE PÓS-GRADUAÇÃO EM EDUCAÇÃO: UM ESTUDO BIBLIOMÉTRICO

A teoria de Jean Piaget não é, necessariamente, uma teoria nova, mas, indubitavelmente, é uma teoria atual. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar a influência da teoria de Piaget nas pesquisas de pós-graduação strictu sensu na área de Educação. Para isso, foi realizado um estudo bibliométrico a partir das teses de doutorado e dissertações de mestrado publicadas no Catálogo de Teses e Dissertações da Capes nos últimos dez anos (2010-2019). Os resultados evidenciaram que, apesar de uma tendência descendente da quantidade de publicações nos últimos anos, sua influência ainda é bastante relevante no Brasil. Não obstante, essa influência não está igualmente distribuída por todo o território brasileiro, visto que as regiões Sul e Sudeste do Brasil concentram a maior parte da produção acadêmica. Por fim, a área de Ciências Humanas foi a mais influenciada pela teoria piagetiana, principalmente, a Educação e a Psicologia

ESTUDANTES NEGROS E NEGRAS NO ENSINO SUPERIOR E A RELAÇÃO COM QUESTÕES ÉTNICO-RACIAIS VIVENCIADAS NA UNIVERSIDADE

Este texto traz recortes de um estudo resultado de Trabalho de Conclusão de Curso que teve como objetivo principal analisar percepções de estudantes negros e negras sobre questões étnico-raciais vivenciadas no processo de inclusão e permanência no ensino superior. Os estudos feitos na formação inicial dão ênfase à inclusão de questões étnico-raciais e culturais nos currículos das escolas e expressam o direito de pertencimento a essas instituições sem restrições da cor da pele, de cultura ou por ser diferente do outro. Diante deste contexto, as análises da conjuntura atual suscitaram inquietações sobre a temática proposta na pesquisa, por isso emergiu a necessidade de buscar resposta para o problema: Como os estudantes negros e negras lidam com questões étnico-raciais vivenciadas por eles no processo de sua inclusão na universidade? A pesquisa trilhou os caminhos da abordagem qualitativa pela convicção de trabalhar em uma perspectiva que a realidade não contempla a característica da quantitativa. A análise e interpretação dos dados, através de entrevista e questionário evidenciou que os sujeitos lidam naturalmente com questões étnico-raciais, pois não sofreram preconceito racial nos espaços da universidade e se sentem respeitados pelos colegas e professores. Apesar disso, emergiu dos relatos a existência de preconceito racial, não de maneira declarada ou explícita, mas sutil e velada. Todos os sujeitos se identificam como negros e jamais pensam em negar suas identidades. Evidenciam que o número de negros com pouca expressividade nas universidades é a oportunidade de acesso à educação, em especial nas universidades públicas federais. Palavras-chaves: Ensino Superior.Estudantes negros e negras. Identidade. &nbsp

Ensino médio: as orientações dos documentos oficiais e o sistema de avaliação sobre a aprendizagem dos alunos relativa a área tratamento da informação.

This monograph aims present the high school in Brazil. We also show the problems and difficulties faced by high school in Brazil and how our students are being evaluated by observing the results of the third grade of secondary school. We present a characterization ofthe high school in Brazil and Paraíba showing official documents that guide the educationalproposals, like the National Curriculum, National Curriculum Guidelines, Law of Directivesand Bases of National Education System and Assessment of Basic Education. Issues wereseen on the topic of Treatment of Information conducted by SAEB examinations in 2001 and2009. This was possible to evaluate this final stage of basic education and indicate the statusof the degree of knowledge of our students on the subject. We evidenced that the studentsleave high school unable to build basic math skills to read and interpret graphs and tables ofdouble entry, and gather information on them presented a correct solution to the issues thatdeal with the issue of Information Processing. We observed according SAEB results that highschool students showed no improvement between the years 2001 and 2009, remaining tight,presented different degrees of complexity. Fundamental concepts at this level of educationthat should already be present in the lives of students because they are attending the finalseries of the last stage of basic education, few were built, many were not built, and others are under construction. We see that a low percentage of our students, or approximately 6%, are atthe appropriate level at which graduates are expected for this level of education. Thus,education professionals, parents, students, end-all of society must seek solutions aimed atimproving the education system in Brazil.A presente monografia tem por objetivo apresentar a situação do Ensino Médio brasileiro. Mostraremos ainda os problemas e dificuldades enfrentados pelo Ensino Médio no Brasil e como nossos alunos estão sendo avaliados observando os resultados da 3ª série do Ensino Médio. Apresentamos uma caracterização do Ensino Médio no Brasil e na Paraíba de forma abrangente, mostrando os documentos oficiais que orientam as propostas educativas do Ensino Médio, a exemplo dos Parâmetros Curriculares Nacionais, Orientações Curriculares Nacionais, Lei de Diretrizes e Bases da Educação Nacional e Sistema de Avaliação da Educação Básica. Foram observadas as questões que abordam o tema Tratamento da Informação dos exames realizados pelo SAEB nos anos de 2001 e 2009. Dessa foi possível avaliar esta etapa final da Educação Básica e indicar a situação do grau de conhecimento de nossos alunos sobre o tema. Ficou evidenciado neste trabalho que os alunos ao saírem do Ensino Médio não conseguiram construir competências básicas matemáticas para ler e interpretar gráficos e tabelas de dupla entrada, reunir informações nelas apresentadas e dar uma correta solução as questões que versam sobre o tema Tratamento da Informação. Observamos de acordo com relatórios do SAEB que os alunos do Ensino Médio não apresentaram melhoras entre os anos de 2001 e 2009, permanecendo estanques, apresentado graus de complexidade diferenciados. Conceitos fundamentais a este nível de escolaridade que já deveriam estar presentes na vida dos alunos, pois estão cursando o ano final da última etapa da Educação Básica, poucos foram construídos, muitos não foram construídos, e outros estão em processo de construção, veremos que uma baixa porcentagem de nossos alunos, ou seja, aproximadamente 6%, estão no nível adequado ao qual se espera para os concluintes desse nível de ensino. Destarte, os profissionais da educação, os pais, os alunos, em fim toda a sociedade deve buscar soluções que visem uma melhoria no sistema de educação brasileiro

Como os professores do Colégio Estadual Paranaense percebem o processi de avaliação e qual o impacto dessa percepção em suas práticas pedagógicas

Orientadora : Professora Mestra Clarice Martins de Souza BatistaMonografia (especialização) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Educação, Curso de Especialização em Coordenação PedagógicaInclui referênciasResumo : A pesquisa tem por finalidade investigar como os professores do Colégio Estadual Paranaense percebem o processo de avaliação e qual o impacto dessa percepção em suas práticas pedagógicas, os diferentes olhares e percepções que estes profissionais têm sobe suas próprias práticas e vivência no exercício da docência. A proposta metodológica aplicada foi a pesquisa através de questionário com perguntas abertas e fechadas de caráter investigativo por uma abordagem qualitativa, a partir da análise dos dados coletados e comparando com as fontes bibliográficas, onde buscou-se fundamentalmente na bibliografia artigos que pudessem dar conta de esclarecer e fomentar as ideias sobre o tema proposto. Observou-se que a pesquisa aponta diferentes posicionamentos e consequentemente diferentes conceitos por parte dos professores acerca do tema. Os pressupostos que nortearão nossa análise dizem respeito à avaliação formativa, diagnóstica e sobretudo mediadora, durante a tabulação. A consulta feita nos referenciais bibliográficos selecionados, reforçam a percepção, de que, o processo de avaliação nos mais diversos espaços educacionais tem se mantido ao longo dos anos, como um processo que ocorre eminentemente ao final do processo de produção do conhecimento, sem considerar os aspectos gerais do ato de ensinar e aprender, como se a aprendizagem pudesse ser limitada a um único momento

Impactos ecológicos no cerrado goiano mediante a teoria das estruturas dissipativas

Tem como tema as interações entre sistema capitalista e meio ambiente. Situa no âmbito da economia e complexidade e possui como objetivo geral caracterizar a economia goiana como um sistema aberto, possível de ser tratada pela teoria das estruturas dissipativas. A metodologia trata-se de uma revisão teórica de autores ligados ao paradigma emergente como  Fritjof  Capra, Ylia  Prigogine, Humberto R. Maturana e Francisco Varela Garcia, James Lovelock e na revisão teórica da obra “Trajetórias e reestruturação da indústria brasileira após a abertura e a estabilização” de David Kupfer. Apresenta a economia goiana, o padrão de concorrência vigente em suas cadeias agroindustriais e ainda, como este padrão de concorrência dependente de recursos naturais, intensifica os fluxos de materiais e energia e os impactos ambientais no Cerrado goiano. Dentre os principais resultados, nota que as principais cadeias agroindustriais possuem uma estrutura que é inerentemente deletéria por se tratar de setores maduros onde os processos de inovações são mínimos. Tais setores possuem a característica de no presente e no futuro elevar a desordem no meio. A principal conclusão a que se chega é de que as principais cadeias agroindustriais do Estado de Goiás não podem ou poderão vir a ser sustentáveis

MARIA ERNESTO: DAS RUÍNAS À IMAGEM

Resum