Application of a novel domestic hypersensitive HBsAg reagent in blood screening

目的对1种新型国产超敏HbSAg试剂在血液筛查中的应用进行评估。方法用考核试剂WT ClEIA分别检测WHO标准品、HbV阴性的血清、各种HbV亚型及HbSAg突变株标本以及无偿献血者标本,并与参比试剂做比较。结果 WT ClEIA对HbSAg阴性标本的检测特异性为99.81%(95%CI:99.57%~99.93%);对WHO标准品检测的分析灵敏度可达0.012 Iu/Ml,高于参比试剂HEPAnOSTIkA HbSAg ulTrA的0.05 Iu/Ml和AbbOTT MurEX V3的0.1 Iu/Ml;对HbSAg突变株及不同亚型的检出率也高于2种参比试剂;对近5 000份标本的检测结果与参比试剂AbbOTT MurEX V3有高度的符合率(99.60%)。结论该试剂检测性能良好,在血液筛查中有较好的应用前景。Objective To study the application of a novel domestic hypersensitive HBsAg reagent in blood screening.Methods The reagent for evaluation named WT CLEIA together with reference reagents were used to test WHO standard,HBV negative samples and specimens with various HBV subtypes and HBsAg mutants.Results The specificity of WT CLEIA was 99.81%(95% CI: 99.57% ～ 99.93%).The analytical sensitivity of WT CLEIA was 0.012 IU / ml,which was higher than Hepanostika HBsAg Ultra(0.05 IU / mL) and Abbott Murex V3(0.1 IU / mL);WT CLEIA also had a higher detection rate of HBsAg mutants and subtypes than these 2 reference reagents.In addition,WT CLEIA had a high accordant rate with Murex V3 in blood donors HBsAg screening.Conclusion WT CLEIA has a good performance in HBsAg screening and would have a good prospect of application in blood screening.福建省自然科学基金面上项目(2011D007); 厦门市输血医学重点专科建设项目(2012-2014

重组痘苗病毒对不同哺乳动物细胞株的感染效率及EGFP表达水平研究

研究重组痘苗病毒对不同哺乳动物细胞的感染效率及表达水平,可为痘苗病毒表达系统宿主细胞的正确选择提供依据.本研究利用重组绿色荧光蛋白基因的痘苗病毒WR-EGFP同时感染不同的哺乳动物细胞株,利用流式细胞仪检测EGFP的表达强度.共使用20种哺乳动物细胞株,其中10种人类组织细胞,2种猴组织细胞,8种小鼠组织细胞.结果表明,重组痘苗病毒WR-EGFP对鼠细胞系BHK21和人细胞系A-549的感染效率和表达效率最佳;整体看,痘苗病毒对多数灵长类动物细胞的感染效率和表达效率优于鼠细胞;对贴壁细胞的感染效率和表达效率明显优于悬浮细胞;但没有特别的组织偏嗜性

荧光素标记检测乙型肝炎病毒表面抗原特异性杀伤性T淋巴细胞方法的探讨

用绿色荧光前体化合物CalceinAM标记靶细胞,经过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)效应细胞数小时的孵育,通过分析培养上清中的荧光强度检测CTL效应。通过对一系列标记条件的研究:不同浓度CalceinAM标记靶细胞、不同洗涤缓冲液、不同标记细胞浓度、不同洗涤次数、不同裂解液配方,确定CalceinAM荧光素标记法的最佳条件。用该方法检测乙型肝炎病毒表面抗原的DNA疫苗免疫Balb/c小鼠对P815S细胞的CTL效应,E/T比为10时,杀伤效率接近饱和,达到65%。通过荧光显微镜直接观察杀伤后的P815S细胞,细胞破裂程度与计算出的杀伤效率有一定相关性

不同HBsAg疫苗联合免疫后诱导小鼠细胞和体液免疫应答的研究

目的:了解HBsAg的蛋白疫苗(P)、痘苗病毒疫苗(V)、DNA疫苗(D)联合免疫小鼠诱导的特异性体液和细胞免疫应答。方法:以P、V或D疫苗中的一种疫苗初次免疫BALB/c小鼠后,于第2、5、8、11周再用另一种疫苗加强,共产生9种免疫组合:即PP、PV、PD、VP、VV、VD、DP、DV及DD。于初免后第2、5、8、11周采血检测血清中抗HBsAgIgG的总滴度及其IgG1和IgG2a亚类,并于每次加强免疫后第7天,检测小鼠脾脏的CTL对P815S细胞的特异性杀伤率。结果:在P、V、D3种疫苗中,V疫苗诱导产生抗HBsAg抗体的速度最快,P疫苗诱导的体液免疫回忆反应最强,D疫苗诱导产生的抗体最弱。除PP疫苗组合诱导的抗体明显倾向于IgG1外,其他均无明显的倾向性。各种免疫组合中,VD和DV疫苗组诱导的CTL应答最强,对P815S的特异性杀伤率分别为71%和64%。结论:在各种联合免疫组合中,PV、PD、VP和VD疫苗组的抗体应答较好;而DV和VD疫苗组诱导的CTL杀伤效应最强

一个包含HCVIRES的高效真核双顺反子表达载体的构建

In this paper, a new eukaryotic bi-cistronic expression vector containing Hepatitis C Virus(HCV) internal ribosome entry site (IRES) expressing two foreign genes from one mRNA was constructed. The sequence starting from the 5' untranslated region of 18nt to 32nt in HCV core coding region was cloned and then the encephalomyocarditis virus (ECMV) IRES sequence in the commercial vector pIRES was substituted to construct a new vector pCVIR. Green fluorescent protein (GFP) and Hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) coding genes were inserted up-stream and down-stream of IRES sequence. The fluorescence intensity of GFP and HBsAg were determined by flow cytometry and ELISA respectively., thus, the expression efficiency of the two vectors, pCVIR and pIRES could be compared. The experimental results showed that the vector pCVIR could translate the GFP and HBsAg genes down-stream of its HCV IRES sequence more efficiently without impairing the expression of genes up-stream of IRES sequence than the vector pIRES.It is..

鳞片状细胞癌抗原Ⅰ与乙型肝炎病毒的结合受反应位点环域疏水性的影响

鳞片状细胞癌抗原Ⅰ (SCCA1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂 (serpin)超家族的成员 ,具有多种变异体。有报道其中的两种(BP和AJ5 15 70 6 )能通过乙型肝炎病毒 (HBV)的前S1抗原促进表达SCCA1的细胞与HBV的结合。本研究从HepG2细胞中扩增出的一株SCCA1(A1)却不具备HBV结合能力。将A1的C末端与BP的C末端互换 ,获得的A1 BP能够结合HBV ,而BP A1却不能。A1与BP的C末端仅有 3个氨基酸的差异 ,其中 2个位于反应位点环域。一级结构分析发现在该区域内 ,A1的疏水性较弱 ,而BP和AJ5 15 70 6的疏水性较强。将A1的aa349位的弱疏水性的谷氨酸突变为强疏水性的缬氨酸 ,则可获得HBV结合能力。反之 ,将BP同一位点的缬氨酸突变为谷氨酸 ,则会丧失HBV结合能力。这些结果提示SCCA1与HBV的结合受反应位点环域的疏水性的影响

戊型肝炎病毒核酸阳性血浆经输血传播感染恒河猴的研究

目的 了解戊型肝炎病毒(HEV)核酸阳性血浆对灵长类动物的感染性和致病性。 方法 对抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆进行HEV RNA检测,并将存在病毒血症献血员的10ml血浆静脉输入健康恒河猴,观察其对恒河猴的感染性和致病性。 结果 从1份抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆中分离出HEV基因IV型RNA片段。该份血浆输入恒河猴后,恒河猴出现典型急性肝炎生物化学和病理表现,病毒血症,血清抗-HEV IgM和IgG抗体阳转。 结论 HEV病毒血症献血员血浆输入可以引起灵长类动物的HEV感染以及急性肝炎,提示HEV经输血传播的可能性

戊型肝炎病毒重组颗粒性蛋白疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答研究

HEV 239是福建省医学分子病毒学研究中心实验室研制的一种戊型肝炎病毒(HEV)重组颗粒性蛋白疫苗,该文旨在研究HEV239蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况。将5μg HEV 239蛋白疫苗(239-Pro)、加铝佐剂疫苗(239-Vac)或加弗氏佐剂疫苗(239-CFA)肌肉注射免疫BALB/c鼠3次,第8周检测鼠血清抗HEV抗体及其亚类,同时用ELISPOT方法检测细胞毒性T细胞(CTL)应答。结果显示:239-Vac诱导的抗体滴度与239-CFA相当,高于无佐剂的239-Pro。239-Vac诱导的抗体中,IgG1/IgG2a比值显著高于239-CFA和239-Pro,主要为Th2型应答。除239-CFA之外,239-Vac和239-Pro也可诱导出一定的HEV抗原特异性I型Tc应答。提示:重组抗原HEV 239能诱导良好的抗体应答及一定的Tc1应答

厦门地区无偿献血者HEV隐性感染情况及基因型分析

目的了解厦门地区无偿献血者中戊型肝炎的感染情况。方法对2005年3月—2007年4月厦门地区20389人(次)无偿献血者做整群抽样,捕获法ElISA检测IgM抗-HEV、并对IgM抗-HEV阳性样本做HEVrT-PCr检测,经测序后分析其基因型及序列同源性。结果20389份无偿献血者血样本中,IgM抗-HEV阳性率为0.91%(186/20389);186例IgM抗-HEV阳性中有4例经rT-PCr检测为HEV阳性。献血者中病毒血症总阳性率为2/10000(4/20389),4例病毒血症中Ⅰ型与Ⅳ型感染各2例。结论厦门地区无偿献血者中,存在HEV隐性感染者。厦门市卫生局医学科研项目资助课题(编号:WSK0516

戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导

重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在